Fungos potencialmente toxigênicos em amostras de amendoim disponível para o consumo humano / Potentially toxigenic fungi in peanut samples available for human consumption

Avaliou-se a contaminação por fungos potencialmente toxigênicos em amendoim in natura disponível para consumo humano e comercializado em supermercados de Juiz de Fora, MG. Foram adquiridas 31 amostras de sete diferentes marcas de amendoim em grãos cru; amendoim torrado em grãos e amendoim torrado e triturado (moído), em embalagens originais e invioladas, em cinco estabelecimentos comerciais. A análise da presença de fungos potencialmente toxigênicos nos grãos de amendoim foi realizada por meio da técnica de plaqueamento direto em placas de Petri, contendo os meios de cultura Ágar Batata Dextrose (ABD) e Ágar Dicloran Rosa de Bengala Cloranfenicol (ADRBC). Das 31 amostras analisadas, 17 (54,84%) estavam contaminadas por fungos potencialmente toxigênicos (Aspergillus niger, Aspergillus flavus e/ou Aspergillus parasiticus, Aspergillus fumigatus e Penicillium spp) além de outros não toxigênicos (Rhizopus spp. e leveduras). O índice de contaminação nas diferentes amostras de amendoim avaliadas foi expressivo, sendo que as espécies encontradas foram de fungos potencialmente toxigênicos produtores de micotoxinas importantes como as aflatoxinas.

Identification of toxigenic Aspergillus species from diet dairy goat using a polyphasic approach / Identificação de espécies toxigênicas de Aspergillus isoladas da dieta de cabras leiteiras utilizando uma abordagem polifásica

Some species of filamentous fungi that infest agricultural commodities are able to produce mycotoxins, contaminating feed and animal products. The aim of this research was to identify the mycoflora present in the feed and forage for dairy goat and to isolate and characterize the Aspergillus flavus and A. parasiticus strains based on a morphological and molecular characterization and mycotoxigenic ability. The goat dairy diets were collected monthly from 11 goat milk farms, totaling 129 and 106 samples of concentrate and forage, respectively. For the isolation of the mycobiota the surface plating method was used. Aspergillus, Penicillium, and Fusarium were the main fungi producing mycotoxins isolated. The morphological and molecular characterization and mycotoxigenic ability were used for A. flavus and A. parasiticus identification. The Aspergillus spp. from feed 39% produced aflatoxins B1 and B2, 17% produced cyclopiazonic acid (CPA), 18% produced both toxins, and 42% had no toxigenic ability. Only 2.0% of the strains produced aflatoxins B1, B2, G1, and G2, but no CPA. The strains from forage were producers of aflatoxins B1 and B2 (37%), CPA (14%), 14% of both mycotoxins, whereas 49% have shown no toxigenic ability. The aflD and aflR genes were used by PCR and PCR-RFLP, respectively. The presence of toxigenic species in samples of feed for lactating goats indicates a potential risk of contamination of dairy products, if they are exposed to environmental conditions favorable to fungal growth and mycotoxin production.

Algumas espécies de fungos filamentosos que infestam os produtos agrícolas e ração são capazes de produzir micotoxinas. O objetivo deste trabalho foi identificar a micoflora presente nos concentrados e volumosos utilizados na dieta de cabras leiteiras e isolar as espécies Aspergillus flavus e A. parasiticus, com base em uma caracterização morfológica e molecular e capacidade micotoxigênica. Os alimentos foram coletados mensalmente em 11 fazendas produtoras de leite de cabra, totalizando 129 e 106 amostras de concentrado e volumoso, respectivamente. Para o isolamento da micobiota, foi utilizado o método de plaqueamento de superfície. Aspergillus, Penicillium e Fusarium foram os principais gêneros de fungos produtores de micotoxinas isolados das amostras. A caracterização morfológica e molecular e capacidade micotoxigênica foram utilizadas para identificação de A. flavus e A. parasiticus. Das cepas Aspergillus spp isoladas do concentrado, 39% produziram aflatoxinas B1 e B2, 17% produziram ácido ciclopiazônico (ACP), 18% produziram ambas as toxinas e 42% não tinham capacidade toxigênica. Apenas 2,0% das cepas produziram aflatoxinas B1, B2, G1 e G2. As cepas de Aspergillus spp. isoladas do volumoso foram produtores de aflatoxinas B1 e B2 (37%), ACP (14%), sendo que 14% produziram ambas toxinas e 49% não foram produtoras. Os genes aflD e aflR foram utilizados para a PCR e a PCR-RFLP, respectivamente. A presença de espécies toxigênicas em amostras de alimentos destinados a caprinos em lactação indica um risco potencial de contaminação dos produtos lácteos por aflatoxinas e ACP, caso estes sejam expostos a condições ambientais favoráveis ao crescimento de fungos e produção de micotoxinas.

Toxigenic mycobiota and mycotoxins in shrimp feed / Micobiota toxígena e micotoxinas em ração de camarão

The objective of this study was to identify the toxigenic mycobiota and the occurrence of aflatoxins in shrimp feed products intended for shrimp cultivated in the coastal area of the state of Piauí, Brazil, in three farms ("A", "B" and "C"). The toxigenic capacity of the fungal species isolated was tested for aflatoxins (AF) and ochratoxin A production. The fungal counts of shrimp feed were similar for the "A" and "B" farms at all cultivation phases, collection sites, in closed and opened packages (1.33 to 2.66CFU g-1 log10 -1). The lowest fungal counts were found in feed from "C" farm (0.65CFU g-1 log10 -1) from closed packages. Thirty-four strains of Aspergillus were detected with a greater prevalence of A. flavus. Two strains produced B1, B2, G1 and G2 aflatoxins at concentrations from 0.39 to 0.42ng g-1; 0.18 to 0.27ng g-1; 1.78ng g-1 and 0.09ng g-1 respectively and were classified as atypical A. flavus. Two strains of A. niger aggregate were OTA producers. Fifteen samples (13.88%) presented AFB1 contamination at levels ranging from 0.25ng to 360ng g-1. This study demonstrates the presence of toxigenic fungi in shrimp feed used at different phases of cultivation and farms. Atypical strains of A. flavus were isolated which produced AF B1, B2, G1 and G2 in shrimp feeds. Only AFB1 was detected in the analyzed feed.

O objetivo deste estudo foi identificar a micobiota toxigênica e a incidência de aflatoxinas em rações comerciais para camarão cultivado no litoral do Estado do Piauí, Brasil, em três fazendas ("A", "B" e "C"). Foi realizada a capacidade toxigênica das espécies de fungos isolados e a produção de aflatoxinas (AF) e ocratoxina A (OTA). As contagens fúngicas da ração foram semelhantes nas fazendas "A" e "B" e em todas as fases de cultivo, locais de coleta e de embalagens fechadas e abertas (1,33-2,66UFC g-1 log10 -1). As mais baixas contagens de fungos foram encontradas nas rações de embalagens fechadas da fazenda "C" (0,65UFC g-1 log10 -1). Foram isoladas trinta e quatro cepas de Aspergillus com maior prevalência de A. flavus e duas linhagens eram produtoras de aflatoxinas B1, B2, G1 e G2 em concentrações 0,39-0,42ng g-1; 0,18-0,27ng g-1; 1,78ng g-1, e 0,09ng g-1, respectivamente, e foi classificado como A. flavus atípico, sendo necessária posteriormente a classificação filogenética desta cepa. Duas cepas de A. niger agregados eram produtoras de OTA. Quinze amostras de ração (13,88%) apresentaram contaminação AFB1 em níveis que variam de 0,25ng a 360ng g-1. Este estudo demonstra a presença de fungos toxigênicos em rações de camarão nas fazendas analisadas e nas diferentes fases de cultivo. Foram isoladas, em rações de camarões, cepas atípicas de A. flavus, produzindo AF B1, B2, G1 e G2. Apenas AFB1 foi detectada na ração analisada.

Fungos toxigênicos em camarões marinhos cultivados e potenciais toxigênicos das cepas isoladas de Aspergillus seção Flavi e seção Nigri / Toxigenic fungi in cultivated marine shrimp and the toxigenic potential of Aspergillus sections Flavi and Nigri strains

O objetivo do presente estudo foi quantificar, isolar e identificar a micobiota toxigênica em camarões marinhos cultivados no litoral do Piauí. Foram selecionadas, randomicamente, quatro propriedades (“A”,“B”, “C” e “D”), de onde foram coletadas 84 amostras de camarão de três fases de cultivo: “I”, “II” e “III”. A contagem de fungos foi realizada em ágar dicloran rosa de bengala cloranfenicol. As colônias isoladas de Aspergillus e Penicillium spp foram transferidas para tubos contendo ágar extrato de malte. As contagens de fungos nas amostras de camarões coletadas variaram de 1,85 a 2,73 UFC/g log10 e não diferiram entre si em todas as fases de cultivo. Foram isoladas 64 cepas de fungos, e os gêneros mais prevalentes foram Aspergillus (34,4 por cento) e Penicillium (25,0 por cento). Foram identificadas dezoito cepas do gênero Aspergillus. Duas cepas de A. ochraceus e cinco cepas de A. agregados niger foram produtoras de ocratoxina A. Uma cepa de A. flavus produziu aflatoxina B1, B2, G1 e G2, respectivamente, nas concentrações de 14,8 ng/g, 4,3 ng/g,2,6 ng/g e 1,1 ng/g, e foi classificada como A. flavus atípico. Os camarões cultivados no litoral piauiense, quando recentemente capturados, apresentaram baixas contagens fúngicas em todas as fases de cultivo.

Qualidade microbiológica de castanhas de caju (Anacardium occidentale, L) industrializadas e processadas artesanalmente / Study on the microbiological quality of industrialized and handmade cashew nuts (Anacardium occidentale L)

O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade microbiológica de castanhas industrializadas e das castanhas artesanalmente processadas, comercializadas por ambulantes em Teresina (PI). Foram coletadas 40 amostras de castanhas, sendo 21 amostras de castanhas industrializadas de três marcas (“A”, “B” e “C”) e 19 amostras de castanhas processadas artesanalmente (“D”), nas quais foram realizadas a determinação de coliformes a 35 °C e a 45 °C (NMP/g), a pesquisa de Salmonella spp. e a contagem de fungos. As amostras da marca “D” apresentaram maiores valores de coliformes a 35 °C (1,16 × 101 NMP/g); para coliformes a 45 °C, foram detectados valores de 7,0 NMP/g, e de 1,22 × 102 UFC/g para fungos e leveduras. Nas amostras da marca “A”, os valores para coliformes a 35 °C e 45 °C foram de 4,0 NMP/g e, para fungos e leveduras,de 1,0 × 102 UFC/g. Foram isoladas 43 cepas fúngicas. Do gênero Aspergillus, houve maior prevalência da espécie Aspergillus niger agregados (64,7%), e as espécies P. corylophillum (33,3%) e P. citrinum (29,2%) do gênero Penicillium. As amostras de castanhas industrializadas e processadas artesanalmente apresentaram condições higiênico-sanitárias satisfatórias e de acordo com a legislação vigente.

Efeito da irradiação na microbiota fúngica de plantas medicinais / Irradiation effect on mycoflora of medicinal plants

O aumento do consumo de produtos de origem natural tem ocasionado problemas de saúde pública devido ao risco da contaminação fúngica e a possível presença de micotoxinas. Objetivou-se, neste estudo, identificar as espécies fúngicas com potencial micotoxigênico e avaliar o efeito da irradiação gama (60Co) na destruição da microbiota fúngica natural de cinco plantas medicinais: Alcachofra (Cynara scolymus L.), Boldo (Peumusboldus Molina), Camomila (Matricaria recutita L.), Chapéu de couro (Echinodorusgrandiflorus Micheli) e Sene (Cassia acutifolia Delile). A quantificação de fungos filamentosos e leveduras foi efetuada pela Técnica de Diluição Seriada em meio DRBC. Em Camomila foram identificados 8 isolados de Aspergillus flavus, sendo 2 (25 por cento) produtores de aflatoxina B1 e B2 e 5 isolados de Aspergillus ochraceus, sendo 2 (40 por cento) produtores de ocratoxina A. Em Alcachofra foi identificado 1 isolado de Aspergillus ostianus produtor de ocratoxina A. Observou-se redução total da contagem de fungos em Boldo a partir de 3 kGy e em Chapéu de couro e Sene a partir de 5 kGy. Em Alcachofra, a contagem inicial de 5,0 x 10(6) UFC/g foi reduzida para 3,5 x 10² UFC com dose de 10 kGy. Nessa mesma dose a contagem fúngica em Camomila foi reduzida de 3,0 x 10(5) UFC/g para 2,2 x 10³ UFC/g.

The increasing consumption of natural products has brought about problems related to public health due to the risk of fungi contamination and the considerable possibility of mycotoxin presence. The aim of this work was to identify the fungi species with mycotoxigenic potential and to evaluate the effect of gamma irradiation (60Co) on killing the natural fungi microbiota of five medicinal plants: artichoke (Cynara scolymus L.), boldo (Peumusboldus Molina), chamomile (Matricaria recutita L.), burhead (Echinodorusgrandiflorus Micheli), and senna (Cassia acutifolia Delile). The qualification of filamentous fungi and yeast was carried out utilizing the Technique of Serial Dilutions on DRBC medium. Eight isolates of Aspergillus flavus were identified onchamomile, two (25 percent) beingproducers of aflatoxins B1 and B2 as well as five isolates of Aspergillus ochraceus, two (40 percent) being producers of ocratoxin. On artichoke, one isolate of Aspergillus ostianus was identified as ocratoxin A producer. A reduction on the total counting of fungi was observed in boldo with irradiation higher than 3 kGy, and in both burhead and senna with irradiation higher than 5 kGy. The initial counting on artichoke of 5.0 x 10(6) CFU/g experienced a reduction to 3.5 x 10² with doses of 10 kGy. With this same dose the fungi counting on chamomile was reduced from 3.0 x 10(5) CFU/g to 2.2 x 10³ CFU/g.

Incidence and distribution of filamentous fungi during fermentation, drying and storage of coffee (Coffea arabica L. ) beans / Incidência e distribuição de fungos filamentosos durante a fermentação, secagem e armazenamento de frutos e grãos de café (Coffea arabica L. )

The objective of this work was to isolate and characterize filamentous fungi present in different stages of harvest, fermentation, drying and storage of coffee beans processed by natural method. The cherries were hand-picked and then placed on a cement drying platform where they remained until reached 11 percent of humidity. Microbial counts were found in all samples during fermentation and drying of the coffee beans. Counts of fungi in the coffee cherries collected from the tree (time 0) were around 1.5 x 10³ CFU/g. This number increased slowly during the fermentation and drying reaching values of 2 x 10(5) CFU/g within 22 days of processing. Two hundred and sixty three isolates of filamentous fungi were identified. The distribution of species during fermentation and drying was very varied while there was a predominance of Aspergillus species during storage period. The genera found were Pestalotia (4), Paecelomyces (4), Cladosporium (26), Fusarium (34), Penicillium (81) and Aspergillus (112) and comprised 38 different species.

O objetivo deste estudo foi isolar e caracterizar fungos filamentosos presentes em diferentes estágios de beneficiamento de café processado pelo método natural, incluindo: colheita, fermentação, secagem e armazenamento. O café cereja foi colhido manualmente e então colocado em uma plataforma de cimento, onde permaneceu até atingir 11 por cento de umidade. A contagem microbiana foi realizada em todas as amostras durante a fermentação e secagem do café. A população de fungos filamentosos no café cereja ainda nos pés (tempo 0) foi em torno de 1,5 x 10³ UFC/g. Este número aumentou vagarosamente durante a fermentação e secagem, alcançando valores de 2 x 10(5) UFC/g em 22 dias do processamento. Duzentos e sessenta e três isolados de fungos filamentosos foram identificados. A distribuição das espécies durante fermentação e secagem foi bastante variada, mas no armazenamento dos grãos ocorreu o predomínio de espécies de Aspergillus. Foram encontradas 38 espécies de fungos distribuídas nos seguintes gêneros: Pestalotia (4), Paecelomyces (4), Cladosporium (26), Fusarium (34), Penicillium (81) e Aspergillus (112).

Avaliação dos fatores de risco no processamento de café verde para o aparecimento de ocratoxina A (OTA) / Evaluation of the risk factors in the processing of green coffee for the appearance of ochratoxin A (OTA)

Dentre os perigos relacionados com a produção de café verde, a ocratoxina A (OTA) é considerada significativa nesse produto. Com o objetivo de estudar a origem da OTA no processamento de café verde e avaliar os possíveis fatores de risco (região, etapas do processamento, fungos, insetos e ácaros) que poderiam contribuir na presença de OTA, foram amostradas três fazendas nos seguintes municípios: Bom Jardim (RJ), Espírito Santo do Pinhal (SP) e Cornélio Procópio (PR), onde havia a produção de café verde pela via seca e úmida. Foram coletadas 109 amostras de grãos de café, em diversas etapas do processamento, no período de maio a agosto de 2002. As amostras foram colhidas de acordo com fluxograma estabelecido e as etapas estudadas foram: cereja (campo), via seca, via úmida, armazém e café de varrição. Dessas amostras, 10 apresentaram OTA, que variou na sua quantificação de 3 a 101 ng.g –1. A maior prevalência de OTA foi a do café de varrição 57%, a via úmida apresentou uma prevalência de 10,3% e a via seca 7%. Na etapa cereja o fungo potencialmente toxigênico mais encontrado foi Penicillium spp, e quanto aos insetos, as larvas de Diptera e os Homoptera; na via úmida foram encontradas linhagens do Aspergillus seção Nigri e Circundatti e Penicillium spp, a infestação predominante foi a broca do café e os ácaros da família Acaridae; na etapa via seca registrou-se o isolamento de fungos do gênero Penicillium spp e Asperigillus seção Nigri, a broca do cadê foi a infestação predominante junto com os ácaros da família Acaridae, na etapa de armazém foram isolados Penicillium spp e Aspergillus seção Nigri, o inseto predominante foi a boca do café e os ácaros da família Acaridae; no café de varrição foram isolados Penicillium spp e Asperigillus seção Nigri e a broca do café estava presente junto com insetos da Ordem Díptera...

The ochratoxin A (OTA) is considered to be among the most significant coffee contaminants with related hazards. With the purpose to study the origin of the OTA in the processing of green coffee and to evaluate the possible risk factors (region, step of processing, fungi, insects and mites) that could contribute in the OTA presence, had been selected three regions (states) of Brazil: Bom Jardim/RJ, Espírito Santo do Pinhal/SP and Cornélio Procópio/PR. A total of 109 samples of coffee beans were collected in conformity with flow chart established at different stages of ripening and processing: cherry (field), dry method, wet method, and warehouse and varrição coffee, from May to August of 2002. Of these samples 10 had presented OTA, which varied in its quantification from 3 to 101 ng.g-1. The biggest prevalence of OTA was the varrição coffee 57%, the wet method presented a prevalence of 10,3% and dry way 7%. In the stage cherry fungi potentially toxigenic was more found Penicillium spp, the insects had been the larvae of Diptera and the Homoptera; in the wet way it was found Aspergillus section Nigri and Circundatti and Penicillium spp, the predominant infestation was the coffee berry borer and the mite of the Acaridae family; in the stage wet methods spp was registered the isolation the Penicillium spp and Aspergillus section Nigri, the predominant infestation was the coffee berry borer together with the mites of the Acaridae family; in the stage of warehouse had been isolated Penicillium spp and Aspergillus section Nigri, and the predominant insect was the coffee berry borer and mites of the family Acaridae; in the varrição coffee had been isolated Penicillium spp and Aspergillus section Nigri the coffee berry borer was the most present insects together of Diptera. The results of each step had been with compared by Analysis of Variance. In the analysis of risk factors the varrição coffee" was the factor most strongly related to the risk of the presence of OTA (p<0,001 ).

Imunoensaios: uma alternativa para a detecção de fungos toxigênicos em alimentos / alimentosImmunoassays: an alternative for toxigenicfungi detection in foods

O monitoramento constante da contaminação fúngica é imprescindível para assegurar a qualidade e segurança dos alimentos, reduzindo as perdas econômicas, assim como os riscos à saúde humana e animal. Os métodos tradicionais de identificação e detecção de fungos (cultivo em diversos meios, exame microscópico e análises bioquímicas) geralmente consomem muito tempo e exigem pessoal com experiência. Os imunoensaios, particularmente os ensaios imunoenzimáticos, constituem uma alternativa promissora aos métodos tradicionais devido à alta sensibilidade, especificidade, reprodutibilidade e potencial como método rápido de controle de qualidade. Dentre os ensaios imunoenzimáticos, aqueles baseados em exoantígenos são os mais empregados na resolução de problemas taxonômicos, detecção e identificação de fungos toxigênicos. Nesta revisão serão abordados conceitos básicos de imunoensaios, métodos de detecção de fungos, assim como diversos ensaios imunoenzimáticos para a detecção de fungos toxigênicos em alimentos.

Constant monitoring of mould contamination is essential in order to assure the food quality and safetyand reduce the economic losses, as well as to minimize the potential hazards to human and animal health.The traditional methods for mould identification and detection (culture in several media, microscopicexamination and chemical analysis) are usually time-consuming and require trained staff. Immunoassays,particularly enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) could be a promising alternative to the traditionalmethods due to high sensitivity, specificity, reproducibility and potential for use in rapid quality control.Among ELISAs, those based on exoantigens are the most employed in the resolution of taxonomicproblems, detection and identification of toxigenic fungi. This review discusses the basic principles ofimmunoassays, methods of mould detection and the several ELISAs developed for toxigenic fungidetection in food