ABSTRACT
El síndrome Freemartin es un estado de intersexualidad de muchas de las hembras bovinas provenientes de parto múltiple heterosexual (macho - hembra). Éste se origina en la vida fetal entre los 30 y 40 días de gestación producto del intercambio transplacentario de células mediante anastomosis vasculares, presentándose fenómenos de quimerismo 60XX/XY en varios tejidos, y esterilidad consecuente. En el presente trabajo se tomaron 106 muestras de sangre de terneras provenientes de parto múltiple heterosexual, se realizó extracción de ADN de leucocitos y se buscó la amplificación del gen SRY asociado al cromosoma "Y" mediante PCR y lectura en gel de agarosa. 90 terneras (84.9%) de las 106 amplificaron SRY, verificando el quimerismo 60XX/XY, y 16 terneras (15.1%) que no amplificaron el gen, libres del síndrome quimérico y por lo tanto, aptas reproductivamente. El análisis citogenético realizado mediante cultivo de linfocitos demostró la presencia del cromosoma "Y" en linfocitos de hembras positivas a SRY y la ausencia del quimerismo en hembras SRY negativas. El análisis anatómico post mortem de tractos reproductivos de hembras positivas a SRY detectó anormalidades características del síndrome tales como, clítoris hipertrofiados y atresias ductales cervicales. El análisis histopatológico de placas de gónadas de estos animales evidenció la presencia de ovotestículos. El presente estudio confirma la utilidad de las técnicas de biología molecular como herramientas diagnósticas del síndrome, para el aprovechamiento de hembras de reemplazo al servicio del hato bovino.
Freemartin syndrome is a intersexuality condition developed in many of the female calfs born from heterosexual multiple calvings (male female). This originates in the fetal development between 30 and 40 days of gestation with transplacental exchange of cells through vascular anastomosis, occurring 60XX/XY chimerism in various tissues, and consequent sterility. In this paper was took blood samples from 106 female calves born from a multiple heterosexual calving. DNA was extracted from leucocytes and searched the SRY gene amplification associated with the Y chromosome by PCR and reading in agarose gel. 90 of 106 samples (84.9%) was amplified the SRY gene, verifying the 60XX/XY chimerism, and 16 samples (15.1%) that did not amplify the gene. Cytogenetic analysis using lymphocytes cell cultures showed the presence of Y chromosome in samples positive for SRY and absence of chimerism in SRY negative samples. The postmortem analysis of female reproductive tracts of SRY positive calves, shows anatomical abnormalities such as clitoris hypertrophia and cervical atresia. Histological examination of gonads of these animals confirmed the presence of ovotestis. This study confirms the usefulness of molecular biology techniques as diagnostic tools of the syndrome, for the use of replacement females in cattle.
ABSTRACT
Las técnicas de genotipificación tienen un rol fundamental en el estudio de las infecciones nosocomiales. Las infecciones nosocomiales son producidas principalmente por microorganismos que son resistentes a los antimicrobianos, que por lo general han sido seleccionados por el uso inadecuado de la terapia antimicrobiana. Entre las especies que causan frecuentemente este tipo de infecciones se encuentra A. baumannii multi-resistente. En esta investigación se planteó genotipificar mediante las técnicas ERIC-PCR y REP-PCR 19 cepas de A. baumannii multi-resistente aisladas en el hospital Dr. Domingo Luciani de Caracas. La confirmación molecular de la especie A. baumannii se realizó mediante la detección de la oxacilinasa OXA 51 por PCR, el 100% de los aislados incluidos en el estudio resultaron positivos para la detección del gen blaOXA-51-Like. La susceptibilidad antimicrobiana y la detección fenotípica de mecanismos de resistencia se efectuaron de acuerdo a las normas de la CLSI 2009. Se determinó policlonalidad en los 19 aislados de A. baumannii, con el predominio de cuatro clones en la Unidad de Terapia Intensiva de Adultos y el área de Hospitalización del Hospital Dr. Domingo Luciani de Caracas. La correlación de los datos epidemiológicos con las características de la resistencia y la información molecular de cada una de las muestras permitió identificar dos patrones de infección: infecciones de origen endógeno, las cuales se caracterizaron por la diversidad genética de los aislamientos, e infecciones cruzadas, debido al hallazgo de cepas estrechamente relacionadas en espacios cercano o distantes del centro de salud. Se demostró que ERIC-PCR y REP-PCR bajo las condiciones estandarizadas en este estudio son técnicas confiables desde el punto de vista de la estabilidad de los marcadores moleculares y la reproducibilidad para caracterizar brotes ocasionados por A. baumannii, considerándose la técnica REP-PCR más adecuada para estudios de genotipificación...
The genotypification techniques have a fundamental role in the study of nosocomial infections. These infections are produced principally by microorganisms that are antimicrobial resistant, that have benn selected by the inadequate use of antimicrobial therapy. Between the species that frequently cause these type of infections is the A baumannii multi-resistant. In this investigation we established to genotypificate by ERIC-PCR y REP-PCR techniques 19 strains of A baumannii multi-resitant isolated in the Dr. Domingo Luciani Hospital of Caracas. The molecular confirmation of the species was realized by the detection of the oxacilianse OXA 51 by PCR. 100% of the isolates included in the study resulted positive for the gen bla OXA-51-Like. The antimocrobial susceptibility and the phenotypic detection of resistance mechanism were done according the CLSI 2009 normative. We determined policlonality on the 19 isolates of A. baumannii, with the predominance of 4 clones in the Intensive Therapy unit and the hospitalization area of the hospital. The correlation of the epidemiological data with the resistance characteristics and the molecular information of each sample allowed us to identificate two patterns of infections: endogen origin infection, which was charaterized by the genetic diversity of the isolates and cross infections, due to the finding of strains closely related in spaces near o distant ffrom the health center. We demostrated that ERIC-PCR and REP-PCR under standarized conditions in this study are good techiques fron the point of view of the stability of the molecular markers and the reproducibility to characterize outbreaks occasioned by A. baumannii, consideratin the REP-PCR technique, the most adequate for genotypification of this strain.
Subject(s)
Acinetobacter baumannii/genetics , Acinetobacter baumannii/chemistry , Acinetobacter baumannii/virology , Drug Resistance, Microbial , Cross Infection/diagnosis , Cross Infection/microbiology , Cross Infection/blood , Blood Chemical Analysis , Hematology , Patient CareABSTRACT
La resistencia a antirretrovirales constituye un factor de fracaso terapéutico importante en el manejo clínico del paciente infectado por VIH. Se han descrito dos tipos de pruebas de laboratorio que permiten determinar sí un paciente bajo terapia antirretroviral ha desarrollado cepas del VIH resistentes: las pruebas fenotípicas y las pruebas genotípicas. Se sospecha de resistencia farmacológica cuando los niveles de carga viral aumentan (0,5 log), o permanecen detectables en mediciones repetidas. Las pruebas fenotípicas se basan en un análisis cuantitativo de la concentración de droga antirretroviral necesaria para la inhibición de la replicación del VIH in vitro, cuantificando así el grado de resistencia. Las pruebas genotípicas detectan la presencia de mutaciones en el genoma del VIH asociadas a resistencia a antirretrovirales. No existe una pauta sobre la interpretación de los resultados obtenidos de estas pruebas analíticas. La realización de análisis de resistencia como herramienta molecular de avanzada, aunado al análisis de la carga viral y el inmunofenotipaje constituye un importante aporte en el manejo y control del paciente infectado por VIH.
Resistance to antiretroviral constitutes an important therapy failure factor in HIV infected patient clinic managing. Two laboratory tests have been described to determine HIV resistant isolates: phenotypic assays and genotypic assays. Pharmacologic resistance is suspected when HIV load viral levels increase (log 0.5) or remain detectable in repeated tests. Phenotypic tests are based in a quantitative assay of antiretroviral drug concentration required to inhibit HIV replication in vitro, quantifying also resistance levels. Genotypic tests detect the presence of HIV genomic mutations associated to antiretroviral resistance. No does exist a role about result interpretation obtained to these analytic tests. Resistance tests like advanced molecular instrument joined to load viral levels and immunophenotype assays in both constitute an important contribution in control and managing of HIV infected patients.