Primer aislamiento de Leptospira borgpetersenii serovar Hardjo tipo Hardjo Bovis a partir de un caso clínico en Argentina / First isolation of Leptospira borgpetersenii serovar Hardjo type Hardjo Bovis from aclinical case in cattle in Argentina

Resumen Se describe el primer aislamiento y la tipificación molecular de Leptospira borgpetersenii serovar Hardjo Bovis en Argentina, obtenido a partir de orina de vacas abortadas de unrodeo de cría ubicado en Saladillo, provincia de Buenos Aires. Los abortos coincidieron con unperíodo de importantes inundaciones, en el que varios animales presentaron títulos serológicossospechosos y posterior seroconversión. El porcentaje de abortos alcanzó el 3,5% del total delrodeo, compuesto por 1700 vacas, y se aisló el microorganismo en 7 de 20 muestras de orinaobtenidas.

Abstract We here describe the first isolation and molecular typing of Leptospira borgpe-tersenii serovar Hardjo Bovis in Argentina, obtained from urine of aborted cows from abreeding herd located in Saladillo, Buenos Aires Province. The abortions occurred in coincidence with important floods with many cows presenting suspicious serological titers and subsequentseroconversion. The percentage of abortions was 3.5% of a herd of 1700 cows and the microor-ganism was isolated from 7 of the 20 urine samples obtained.

Controle da leptospirose em bovinos de leite com vacina autógena em Santo Antônio do Monte, Minas Gerais / Control of leptospirosis in dairy cattle with autogenous vaccine in Santo Antônio do Monte, MG, Brazil

Um surto de leptospirose foi observado em bovinos leiteiros em Santo Antônio do Monte, Minas Gerais. O rebanho apresentava reações positivas anti-leptospira sorovar Hardjo no teste de microaglutinação (MAT) e havia sido vacinado anteriormente com vacina experimental contendo a sorovariedade Hardjo. O MAT revelou 48,06% dos bovinos positivos para sorovariedade Hardjo genótipo Hardjobovis, 36,82% para sorovariedade Hardjo genótipo Hardjoprajitno. Os animais apresentavam aborto e mastite com presença de sangue no leite. A presente pesquisa teve como objetivos isolar as sorovariedades existentes a partir da urina de vacas sorologicamente positivas, elaborar uma vacina experimental com as sorovariedades isoladas no rebanho, avaliar a eficiência do programa de vacinação por um período de dois anos por meio da sorologia do rebanho. Foi isolada Leptospira spp. a partir da urina de duas vacas com sinais sugestivos da doença. As amostras isoladas foram identificadas pela sorologia com anticorpos monoclonais e seqüenciamento do gene 16S rRNA como pertencentes à espécie Leptospira interrogans, sorogrupo Sejroe, sorovariedade Hardjo e genótipo Hardjoprajitno. O uso da vacina autógena foi eficaz no controle da leptospirose no rebanho no período de dois anos. Os resultados da sorologia revelaram ausência de animais positivos na última prova realizada no rebanho.

An outbreak of leptospirosis in dairy cattle was observed in Santo Antonio do Monte, Minas Gerais. The herd had positive reactions in anti-Leptospira serovar Hardjo agglutination test (MAT) and had been previously vaccinated with a vaccine containing serovars Hardjo. The MAT showed 48.06% of cattle positive for serovars Hardjo genotype Hardjobovis, 36.82% for serovars Hardjo genotype Hardjoprajitno. The animals had abortions and mastitis with blood in the milk. This study aimed to isolate the existing serovars from the urine of serologically positive cows, produce an experimental vaccine with the serovars isolated in the herd, evaluating the effectiveness of the vaccination program for a period of two years through the herd serology. Leptospira spp. was isolated from the urine of two cows with signs suggestive of the disease. The strains were identified by serology with monoclonal antibodies and 16S rRNA gene sequencing as belonging to the Leptospira interrogans species Sejroe serogroup Hardjo serovars and Hardjoprajitno genotype. Use of the autochthonous vaccine was effective in leptospirosis controlling in the herd in two years. The serology results showed the absence of positive animals in the last race held in the herd.

Serological investigation and PCR in detection of pathogenic leptospires in snakes / Investigação sorológica e PCR na detecção de leptospiras patogênicas em serpentes

Detection of Leptospira by PCR had not yet been described in snakes. This study investigated, by microscopic agglutination test (MAT) and PCR, the presence of antibodies to Leptospira spp. and Leptospira spp., respectively, in venomous and non-venomous wildlife and captivity snakes. All snakes were divided into three groups to be compared: Group 1 (wildlife snakes - WS); Group 2 (snakes in intensive captivity - IC), and Group 3 (collective semi-extensive captivity -CC). Of the 147 snakes studied, 52 (35.4 percent) were positive for leptospirosis by MAT, 8 (15.4 percent) belonging to Group 1 (WS), 34 (65.4 percent) to Group 2 (IC) and 10 (19.2 percent) to Group 3 (CC). Jararaca (Bothrops jararaca) presented the highest average titer (66.7 percent, N=22/33) among the three group studied, and Hardjo prajtino was the most prevalent serovar (88.5 percent, N=46/52), with titers varying from 100 to 3200. Leptospira interrogans was revealed by PCR in kidney and liver of caiçaca (Bothrops moojeni) and jararaca-pintada (Bothrops pauloensis), showing 100 percent and 93 percent identity respectively. Future studies should be carried out for better understanding of the role of snakes as a reservoir of Leptospira in nature.

A detecção de Leptospira pela técnica de PCR não havia sido descrita em serpentes. Este estudo investigou pelo teste de aglutinação microscópica (MAT) e PCR, a presença de anticorpos anti-Leptospira spp. e Leptospira spp., respectivamente, em serpentes peçonhentas e não peçonhentas de vida livre e de cativeiro. As serpentes foram divididas em três grupos para comparação: Grupo 1 (serpentes recém-chegadas da natureza - WS); Grupo 2 (serpentes em regime de cativeiro intensivo -IC) e Grupo 3 (serpentes em regime de cativeiro coletivo semi-extensivo - CC). Do total de 147 serpentes estudadas, 52 (35,4 por cento) foram positivas para leptospirose pelo MAT, as quais 8 (15,4 por cento) pertenciam ao Grupo 1 (WS), 34 (65,4 por cento) ao Grupo 2 (IC) e 10 (19,2 por cento) ao Grupo 3 (CC). Das espécies estudadas, a jararaca (Bothrops jararaca) apresentou maior soropositividade (66,7 por cento, N=22/33). O sorovar mais prevalente foi o Hardjo prajtino (88,5 por cento, N=46/52) e os títulos variaram de 100 a 3200. Leptospira interrogans foi revelada por PCR nos rins e no fígado de caiçaca (Bothrops moojeni) e de jararaca-pintada (Bothrops pauloensis), mostrando 100 por cento e 93 por cento de identidade, respectivamente. Futuros estudos devem ser realizados para melhor compreensão do papel das serpentes como reservatório de leptospiras na natureza.

Caracterização das proteínas de superfície de membrana externa da sorovariedade Hardjo isolada de bovinos em Minas Gerais / Characterization of outer membrane proteins of serovar Hardjo isolated from cattle in Minas Gerais, Brazil

Foram identificadas diferenças no perfil protéico das amostras de Sponselee, Norma e Hardjoprajitno, com bandas protéicas entre 175, 47 kDA e 12,10 kDa. A amostra Sponselee foi a que apresentou maior número de bandas (12), seguida da Norma que apresentou 11 bandas e de Hardjoprajitno que apresentou 9 bandas. Todas as bandas observadas na amostra Sponselee possuíam correspondentes nas outras duas amostras. A amostra Norma não apresentou uma banda em torno de 35,77 kDa e a Hardjoprajitno não apresentou bandas em torno de 89,59 kDa, 35,77 kDa e 12,10 kDa. O reconhecimento dessas proteínas por soros hiperimunes contra cada uma das amostras também mostrou diferenças, sendo que o maior número de proteínas reconhecido em todas as amostras por todos os soros se encontrou entre 35,83 kDa e 29,19 kDa. Os soros contra bovino na amostra Norma só reconheceu proteínas de baixa massa molecular nas amostras Norma (6,80 kDa) e Hardjoprajitno (6,80 kDa e 5,30 kDa). Soro bovino contra a amostra Hardjoprajitno reconheceu uma proteína de 44,33 kDa todas às amostras e proteínas de 4,22 kDa nas amostras Sponselee e Norma e de 10,49 kDa e 6,16 kDa na Hardjoprajitno. As diferentes proteínas identificadas poderiam se constituir em alvos específicos para o desenvolvimento de testes diagnósticos e vacinas contra leptospirose bovina.

Differences in the protein profile of Leptospira sp. strains Sponselee, Norma and Hardjoprajitno were observed, with bands ranging from 175.47 kDa to 12.10 kDa. Strain Sponselee presented a 12-band profile, while strain Norma showed 11 and strain Hardjoprajitno showed 9 bands in the profile. All bands observed in Sponselee strain profile could match bands in the other two strains. Strain Norma lacks a band at 35.77 kDa and strain Hardjoprajitno lacks the bands at 89.59 kDa, 35.77 kDa and 12.10 kDa. The recognition profile from hyperimmune sera was also different for the studied serovar Hadjo strains. The majority of recognized proteins was in the range of 35.83 kDa to 29.19 kDa. Cattle sera against strain Norma only recognized low molecular mass proteins in strains Norma (6.80 kDa) and Hardjoprajitno (6.80 kDa and 5.30 kDa). Bovine sera against strain Hardjoprajitno recognized a 44.33 kDa protein in all studied strains and proteins of 4.22 kDa in strains Sponselee and Norma and of 10.49 kDa and 6.16 kDa in strain Hadjoprajitno. The different identified proteins could become specific targets to the development of diagnostic tests and vaccines against bovine leptospirosis.

Avaliação do desempenho reprodutivo de um rebanho bovino de corte naturalmente infectado com o BoHV-1, BVDV e Leptospira hardjo1 / Reproductive performance evaluation of a beef cattle herd naturally infected with the BoHV-1, BVDV and Leptospira hardjo

O objetivo desse trabalho foi avaliar a performance reprodutiva de um rebanho bovino de corte, criado extensivamente, naturalmente infectado pelo herpes vírus bovino 1 (BoHV-1), pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) e pela Leptospira hardjo. No rebanho, constituído por 1.331 fêmeas, foram selecionados aleatoriamente 208 animais que foram subdivididos em três grupos: i) 60 novilhas virgens; ii) 60 vacas de primeira cria; iii) 88 vacas com duas ou mais crias. No período correspondente a uma estação de reprodução, obtida por inseminação artificial (IA) seguida por repasse com touro, foram avaliados o desempenho reprodutivo e os perfis sorológicos para a rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR), a diarréia viral bovina (BVD) e a leptospirose. As taxas de animais soropositivos para IBR, BVD e leptospirose nos grupos avaliados foram de 68,3, 98,0 e 78,8, respectivamente. O grupo de animais com duas ou mais crias apresentaram baixo desempenho reprodutivo com 35,6 de repetições de cio; 18,6 de abortamentos; 2,3 doses de sêmen por bezerro nascido e 35,6 de animais nascidos de IA. A mais baixa performance reprodutiva foi observada no grupo de novilhas. A análise do perfil sorológico anterior à estação de monta, em associação com os resultados de alguns parâmetros de eficiência reprodutiva sugere a provável participação do BoHV-1 e da L. hardjo no baixo desempenho reprodutivo do rebanho avaliado.

The aim of this study was the evaluation of some reproductive rates of a beef cattle herd that werenaturally infected by the bovine herpesvirus 1 (BoHV-1), bovine viral diarrhea virus (BVDV) andLeptospirahardjo. In a herd with 1331 females, we randomly selected 208 animals that were distributedin three groups: i) 60 virgin heifers; ii) 60 first suckling cows; iii) 88 cows with two or more sucklings. Allgroups were evaluated for infectious bovine rinothracheitis (IBR), bovine viral diarrhea (BVD), andleptospirosis serological profile, and the reproductive performance in a breeding station that had artificialinsemination (AI) followed by bull repass. The IBR, BVD and leptospirosis seropositive rates in thethree groups were 68.3%, 98.0% and 78.8%, respectively. The highest seropositives rates for the threeinfections simultaneously were obtained in the cows with two or more sucklings. The three groupspresented low reproductive performance with 35.6% of repeat breeding; 18.6% of abortions, 2.3 semendoses by born calf, and 35.6% of born calves by AI. The lowest reproductive performance was observedin the virgin heifers group. The serological profile analysis before the breeding time with associationwith the results of some reproductive efficiency rates suggest the BoHV-1 and L. hardjo participation inthe low reproductive performance observed in the beef cattle herd studied