Aislamiento de una cepa genotipo 3 del virus de la hepatitis E obtenida de heces humanas / Cell culture isolation of hepatitis e virus genotype 3 strain obtained from human feces

ABSTRACT Hepatitis E virus (HEV) is considered one of the leading causes of acute viral hepatitis worldwide, and about 20 million infections and approximately 57 000 deaths occurred every year. However, little is known about the replicative virus cycle due to the absence of a consensus cell culture model. A549 cell line is considered susceptible to HEV genotype 3, however, both viral strain and cell culture conditions could affect the viral isolation in vitro. The objective of this work was to isolate in vitro an HEV-3 strain obtained from human feces. To this, a genotype 3 HEV strain previously identified by genetic characterization was inoculated in A549 monolayers, and incubated for two hours at 37 °C. Five days post-infection, cells were passaged (subcultured) for the first time, and serial passages were done on average every four days during 41 days. HEV replication was evaluated through RT-qPCR in each passage, and reinfection of the cell line with the viral progeny derived from A549 infected monolayers was assessed through immunofluorescence and RT-qPCR. Viral RNA was detected in each passage from infected monolayers, and the highest amount was found after 26 days (2 x 106 copies/µL). In reinfection assay, capsid antigen was detected perinuclearly and forming foci, and 1x104 copies/µL of viral RNA was detected after 96 hours post infection. This shows that HEV recovered from the cell lysate monolayers was infectious. This viral isolate offers a critical tool to study the unknown aspect of HEV infection.

RESUMEN El virus de la hepatitis E (HEV) se considera como una de las principales causas de hepatitis viral aguda en el mundo; cada año ocurren aproximadamente 20 millones de infecciones y 57 000 muertes. Debido a la ausencia de un modelo de cultivo celular consenso, se sabe poco sobre el ciclo replicativo del virus. La línea celular A549 se considera susceptible al genotipo 3 de HEV, pero tanto la cepa viral como las condiciones del cultivo celular podrían afectar el aislamiento viral in vitro. Por tanto nos propusimos aislar in vitro una cepa genotipo 3 del HEV. Para ello, se inocularon células A549 con una cepa HEV-3 identificada previamente por caracterización genética, y se incubó durante dos horas a 37 °C. Cinco días después de la infección, las células se pasaron (subcultivaron) por primera vez, y se realizaron pases seriados cada cuatro días en promedio, durante 41 días. En cada pase se evalúo la replicación del HEV mediante RT-qPCR. La reinfección de la línea celular con progenie viral derivada de monocapas de A549 infectadas se evaluó mediante inmunofluorescencia y RT-qPCR. Se detectó ARN viral en cada pase a partir de monocapas, y el pico máximo se alcanzó a los 26 días post infección (2 x 106 copias/µL). En el ensayo de reinfección, se detectó antígeno de cápside perinuclearmente y formando focos, y se detectaron 1 x 104 copias/µL de RNA viral a las 96 horas post infección. El HEV recuperado de lisado de monocapas fue infeccioso. Este aislado viral ofrece una herramienta importante para estudiar aspectos desconocidos de la infección por HEV.

Serological evidence of Hepatitis E Virus infection in Antioquia, Colombia slaughtered pigs / Evidencia serológica de infección por el Virus de Hepatitis E en cerdos faenados en Antioquia, Colombia

Objective. To detect the presence of specific antibodies against Hepatitis E virus (HEV) in pigs slaughtered in Antioquia, the department where the greatest amount of pork is produced and consumed in Colombia. Materials and methods. Between September 2011 and May 2012, blood samples from pigs were obtained in five slaughterhouses of Antioquia, four of them located in the Aburrá Valley subregion and other located in northern subregión. Serum were evaluated with a commercial ELISA kit for diagnosing HEV in humans but adapted to detect IgG and IgM antibodies in pigs. Results. A 100.0% seropositivity for IgG antibodies was found in 1000 samples evaluated, and 82.06% for IgM antibodies were found in 740 samples. Conclusions. These results indicate that pigs in slaughter age in Antioquia, and possibly in Colombia, have been exposed to HEV at some point in their production process and a high percentage of them can arrive to slaughterhouses with recent infection.

Objetivo. Detectar la presencia de anticuerpos específicos contra el virus de la Hepatitis E (HEV) en cerdos faenados en Antioquia, departamento donde se produce y consume la mayor cantidad de carne de cerdo en Colombia. Materiales y métodos. Entre septiembre de 2011 y mayo de 2012, se obtuvieron muestras de sangre de cerdos en cinco plantas de faenado, cuatro de ellas ubicadas en el Valle de Aburrá y una en la subregión Norte del departamento de Antioquia, las cuales fueron evaluadas mediante un kit de ELISA comercial para diagnóstico de HEV en humanos pero adaptado para la detección de anticuerpos tipo IgG e IgM en cerdos. Resultados. Se encontró una seropositividad de 100.0% para anticuerpos tipo IgG en 1000 muestras evaluadas y de 82.06% para anticuerpos tipo IgM en 740 muestras. Una muestra de heces positiva para la detección del genoma HEV es similar al genotipo 3 encontrada en Estados Unidos. Conclusiones. Estos resultados indican que los cerdos en edad de faenado en Antioquia y posiblemente en Colombia, han tenido exposición a HEV del, un virus zoonótico emergente a nivel mundial, en algún momento de su proceso productivo.