ABSTRACT
Abstract Candida albicans is a most common cause of fungal infections in animals and birds. Understanding the increasing resistance of C. albicans to various antifungal therapeutic agents is important to discover new anti-candidal alternatives. The present study investigated the anti-candidal potential of five endophytic fungi extracts, isolated from the tropical ethnoveterinary plant, Calotropis gigantea. We firstly evaluated the in vitro antifungal activities of endophytic fungi extracts by the well diffusion method. Secondly, the cells of C. albicans were treated with the potent extract to observe significant ultrastructural changes. To further investigate the in vivo antifungal activity of the extract, some laboratory experiments with mice were undertaken, and posteriourly, the different organs were studied under the electron microscope for any deformities. Phomopsis asparagi showed the best anti-candidal activitywith a minimum inhibitory concentration (MIC) of 46.9 µg/mL. The fungal test pathogen (C. albicans) exhibited various cell deformities when treated with the extract of P. asparagi. Histopathological studies of the vital organs of mice treated with the potent fungal extract did not show any significant pathological conditions when viewed under scanning electron microscope. Thus, P. asparagi can be a potential candidate for anti-candidal agents against C. albicans. Future studies will focus on the isolation of the bioactive components of the extract.
Resumen Candida albicans es la causa más común de infecciones fúngicas en animales y aves. La comprensión de la creciente resistencia de C. albicans a varios agentes terapéuticos antifúngicos es importante para descubrir nuevas alternativas anti-candida. El presente estudio investigó el potencial anti-candida de cinco extractos de hongos endofíticos, aislados de la planta etnoveterinaria tropical, Calotropis gigantea. En primer lugar se evaluaron las actividades antifúngicas in vitro de los extractos de hongos endofíticos por el método de difusión de pozos. En segundo lugar, las células de C. albicans se trataron con un potente extracto para observar cambios ultrastructurales significativos. Para investigar más a fondo la actividad antifúngica in vivo del extracto, se realizaron algunos experimentos de laboratorio con ratones, y posteriormente, los diferentes órganos se estudiaron bajo microscopio electrónico para cualquier deformidad. Phomopsis asparagi mostró la mejor actividad anti-candida con una concentración inhibitoria mínima (MIC) de 46.9 μg/mL. El patógeno de prueba fúngico (C. albicans) presentó diversas deformidades celulares al ser tratado con el extracto de P. asparagi. Los estudios histopatológicos de los órganos vitales de los ratones tratados con el potente extracto fúngico no mostraron ninguna condición patológica significativa cuando se observaron con un microscopio electrónico de barrido. Por lo tanto, P. asparagi puede ser un candidato potencial para agentes anti-candida contra C. albicans. Los estudios futuros se centrarán en el aislamiento de los componentes bioactivos del extracto.
ABSTRACT
Una de las estrategias alternativas utilizadas para encontrar nuevas moléculas bioactivas es investigar otros organismos que habitan en los biotopos, y se presta especial atención a las interacciones ambientales entre sí y las plantas que podrían producir aún una mayor cantidad de metabolitos secundarios. Dentro de estos microorganismos, los endófitos son considerados una importante fuente de nuevos metabolitos secundarios de explotación potencial para usos médicos, agrícolas o por otras áreas industriales. En este trabajo la investigación se centró en la búsqueda de compuestos bioactivos de Erythrina crista-galli infectada con un hongo endofítico. Se recolectaron muestras de E. crista-galli de los alrededores de la Provincia de Buenos Aires y de todas estas muestras se aisló e identificó al endófito como perteneciente al género Phomopsis. Se estudiaron las actividades antimicrobiana y antiinflamatoria de los extractos de E. crista-galli relacionadas con algunos de sus usos tradicionales. El extracto acetónico de las ramas jóvenes presentó actividad antibacteriana sobre Bacillus brevis y B. subtilis y antiinflamatoria in vivo (en edema de oreja de ratón) e in vitro (en macrófagos activados por lipopolisacáridos). Del extracto acetónico con actividad antimicrobiana se aislaron e identificaron dos compuestos, daidzeína y coumestrol, y se identificó genisteína por cromatografía contra testigos. La concentración inhibitoria mínima de daidzeína, coumestrol y genisteína frente a B. brevis fue de 137,81, 16,33 y 64,81 µM, respectivamente. En el extracto acetónico con actividad antiinflamatoria se identificaron, por cromatografía contra testigos, daidzeína, genisteína, coumestrol, biochanina A y formononetina. Genisteína, coumestrol y biochanina A presentaron una dosis efectiva 50, de 0,14, 0,54 y 0.75 µg/ml, respectivamente, en el modelo de edema en oreja de ratón. Para evaluar la influencia del endófito en el metabolismo secundario de E. crista-galli se obtuvieron plantines de cultivo. No se pudieron obtener plantines libres de hongo con los tratamientos aplicados. Se sobreinfectó un lote de plantines con Phomopsis sp. y se cuantificó su contenido de coumestrol (0,04 %) y daidzeína (0,05 %) en comparación con el de un grupo control (0,01 % y 0,02 %, respectivamente). Del extracto acetónico de los plantines sobreinfectados se aisló e identificó un glicósido de isorhamnetina. (AU)