Identificação, caracterização e determinação de padrões da resposta imune de epítopos imunogênicos de Plasmodium vivax / Identification, characterization and determination of immune response patterns of immunogenic epitopes of Plasmodium vivax

O Plasmodium vivax representa um grande desafio no controle da malária devido a sua vasta distribuição ao redor do globo, grande frequência de infecções sub microscópicas e habilidade de induzir recaídas em consequência das formas evolutivas que podem ficar latentes no fígado por longos períodos (hipnozoítos). O recente aumento de cepas de P. vivax resistentes aos fármacos disponíveis, a evolução de formas mais virulentas do parasito e a produção precoce de gametócitos, característica desta espécie, contribuem para classificar a malária vivax como um problema de saúde pública que merece atenção. Ainda que reconhecido por suas características biológicas peculiares e pelo agravamento recente de sua virulência, poucos investimentos têm sido feitos no desenvolvimento de ferramentas de controle para vivax. Portanto, o presente estudo teve como objetivo identificar e caracterizar novos alvos potenciais utilizando amostras de diferentes áreas endêmicas ao redor do mundo (Brasil, Mali, Camboja e Estados Unidos da América). Para tanto, investigamos e caracterizamos uma proteína recém descoberta na urina de pacientes naturalmente infectados (PvVir14); e descrevemos o potencial imunogênico de epítopos de células B de uma das proteínas mais bem caracterizadas de P. vivax, a PvAMA-1. Anti-IgG circulantes contra PvVir14 apareceram em 61% e 34.5% dos indivíduos do Brasil e Camboja, respectivamente, enquanto que indivíduos de Mali (infectados com falciparum e não expostos a vivax), tiveram 0% de reconhecimento. Ainda, os níveis de anti-PvVir14 correlacionaram-se com aqueles contra outros antígenos de vivax já bem caracterizados, como a PvCSP e a PvDBP, que foram reconhecidos por 7.6% e 42% dos indivíduos respectivamente. Com relação ao perfil celular, indivíduos sororreativos para PvVir14 apresentaram níveis significativamente maiores de células B atípicas circulantes (CD 21- CD 27-), sugerindo que tal tipo celular possa estar ligado à resposta anti-PvVir14. Entre as células T, os níveis de CD4+ e CD8+ diferiram entre indivíduos com e sem anticorpos contra PvVir14 (menor e maior expressão, respectivamente), enquanto que os níveis de células NKT foram mais expressivos em indivíduos sem anti-PvVir14. Se tratando da PvAMA-1, a antigenicidade dos peptídeos com epítopos para células B previamente selecionados foi avaliada através de múltiplos ensaios sorológicos utilizando amostras de indivíduos com infecção aguda por P.vivax do norte do Brasil. Os peptídeos sintéticos foram reconhecidos por 45.5%, 48.7% e 31.2% (PI, PII e PII, respectivamente) dos indivíduos selecionados para o estudo. Quando sintetizados em conjunto (tripeptídeo), a reatividade aumentou para 62%, porcentagem comparável àquela obtida pela proteína em sua forma e tamanho originais (57%). Além disso, a reatividade anti-IgG conta o tripeptídeo foi reduzida em 42% pós-depleção, indicando que tais epítopos podem ser responsáveis por parte considerável da imunogenicidade da proteína. Esses resultados representam uma excelente perspectiva na identificação de novos alvos com potencial imunogênico para compor uma vacina, ou auxiliar no desenvolvimento de outras medidas de controle, como testes diagnósticos, já que contemplar diversos alvos do ciclo de vida do parasito parece ser a chave para alcançar a resposta robusta e protetora que uma vacina contra a malária vivax precisa para ter sucesso.

Plasmodium vivax is a major challenge for malaria control due to its wide geographic distribution, high frequency of submicroscopic infections, and ability to induce relapses due to the latent forms present in the liver (hypnozoites). The recent increase in drug-resistant P. vivax strains, the evolution toward more virulent forms and the early production of gametocytes adds up to make P. vivax malaria a public health issue of increasing importance. Besides its tricky biological features and new awareness of its virulence, minimal investments have been made in vaccine discovery for P. vivax. Given that, this study aimed to discover and characterize potential new targets for future vaccine development using samples from different endemic areas around the world (Brazil, Mali, Cambodia and United States of America). For this purpose, we investigated and characterized a novel protein recently discovered in the urine of naturally infected subjects (PvVir14) and described the immunogenic potential of peptides from a well-known vivax protein (PvAMA-1), which has been proved to have important B cell epitopes that can induce specific immune response. Circulating antibodies against PvVir14 appeared in 61% and 34.5% of subjects from Brazil and Cambodia, respectively, versus none (0%) of the P. falciparum-infected subjects from Mali who have no exposure to P. vivax. PvVir14 antibody levels correlated with those against other well-characterized sporozoite/liver (PvCSP) and blood stage (PvDBP-RII) antigens, which were recognized by 7.6% and 42% of Brazilians, respectively. Concerning the cellular immune profiling of Brazilian subjects, PvVir14 seroreactive individuals displayed significantly higher levels of circulating atypical (CD21− CD27−) B cells, raising the possibility that atypical B cells may be contribute to the PvVir14 antibody response. Among T cells, CD4+ and CD8+ levels differed (lower and higher, respectively) between subjects with versus without antibodies to PvVir14, while NKT cell levels were higher in those without antibodies. As for PvAMA-1, the antigenicity of the selected B-cell peptides was assessed by multiple serological assays using sera from acute P.vivax infected subjects. The synthetic peptides were recognized by 45.5%, 48.7% and 32.2% of infected subjects for peptides I, II and III respectively. Moreover, when synthetized together (tripeptide), the reactivity increases up to 62%, which is comparable to the reactivity found against the whole protein PvAMA-1 (57%). Furthermore, IgG reactivity against the tripeptide after depletion was reduced by 42%, indicating that these epitopes may be responsible for a considerable part of the protein immunogenicity. These results represent an excellent perspective on discovering new targets with immunogenic potential to compose a vaccine, or even to assist the development of other control measures, such as diagnostic tools, since contemplating several targets seems to be the key to achieving a robust and protective response that a malaria vaccine needs to be successful.

Effect of nabumetone on humoral immune responses in mice / Efeito da nabumetona nas respostas imunes humorais em camundongos

Nabumetone is used to reduce the pain and inflammation in rheumatoid arthritis. In the current study, immunomodulatory effect of Nabumetone is investigated in mice. The control group was administered normal saline orally as placebo. Nabumetone was administered orally via gavage in two treatment groups at 14mg/kg.b.w. doses and 28mg/kgb.w., respectively. Haemagglutination (HA) assay, Jerne hemolytic plaque and mice lethality assays were applied. In HA assay, the titer was significantly decreased in Nabumetone treatment groups (P< 0.001). In Jerne hemolytic plaque formation assay, there was a significant reduction (P< 0.001) in number of plaques in Nabumetone treated groups when compared with control. In mice lethality assay, there was a significant difference in mortality ratio of mice in control and Nabumetone treated groups (P< 0.001). Therefore, it is concluded that Nabumetone suppresses the humoral immune response in mice.(AU)

A nabumetona é usada na redução da dor e inflamação da artrite reumática. No presente estudo, o efeito imunomodulador é investigado em camundongos. O grupo de controle recebeu solução salina via oral como placebo. Nabumetona foi administrada oralmente via gavagem em dois grupos de tratamentos com doses de 14mg/kg.b.w. e 28mg/kgb.w., respectivamente. Foram realizados ensaios de hemaglutinação (HA), placa hemolítica de Jerne e letalidade dos camundongos. No ensaio HA, o grau foi significativamente menor nos grupos de tratamento com nabumetoma (P< 0.001). No ensaio de formação de placa hemolítica de Jerne houve redução significativa (P< 0.001) no número de placas em grupos tratados com nabumetoma comparado ao controle. No ensaio de letalidade dos camundongos houve diferença significativa no grau de mortalidade de camundongos no grupo de controle e grupos tratados com nabumetoma (P< 0.001). Portanto, conclui-se que a Nabumetoma suprime a resposta imune humoral em camundongos.(AU)

Dynamics of humoral immune response in pregnant mares and foals vaccinated with Theileria equi recombinant EMA-2 / Dinâmica da resposta imune humoral em éguas gestantes e potros vacinados com EMA-2 recombinante de Theileria equi

Theileria equi is an infectious hemoprotozoan agent of equine piroplasmosis, a disease that has severe economic and sanitary impact internationally. In addition to its common clinical features, piroplasmosis can cause gestational losses and neonatal damage, which makes neonates susceptible to this disease. The aim of this study was to evaluate the dynamics of humoral immune response to recombinant EMA-2 of T. equi in pregnant mares and foals, as well as the transfer of vaccine antibodies through the colostrum ingested by sucking foals. For vaccine production, the EMA-2 expression gene was cloned and expressed in the yeast species, Pichia pastoris. Thirty-six horses were used, of which 18 were pregnant mares and 18 were foals. The mares were divided into control and vaccinated groups, and the vaccinated group received three doses of rEMA-2 every 21 days starting at 300 days of gestation. Foals from vaccinated and control groups were evaluated until the sixth month of life. The production of antibodies by foals on the rEMA-2 vaccination schedule was also evaluated from the second month of life. Foals in the vaccinated group had received three doses of the vaccine every 21 days. The method used to evaluate serum and colostrum samples was indirect ELISA, and plates were sensitized with the rEMA-2 protein. At the end of the vaccination schedule, vaccinated mares showed a 2.3-fold increase in antibody levels when compared to baseline values. The colostrum of vaccinated mares presented antibody levels of 1.0432±0.33. Foals delivered by vaccinated mares presented levels of antibodies greater than those of foals delivered by control mares after their first time sucking (at about twelve hours after birth). Foals vaccinated in the second month of life showed an 8.3-fold increase in antibody levels when compared to baseline values. The vaccination schedule with rEMA-2 was able to stimulate humoral immunity in pregnant mares. Vaccine immunoglobins were concentrated in the colostrum of vaccinated mares and foals delivered by these mares showed an increase in serum levels of vaccine antibodies after the first-time sucking.(AU)

Theileria equi é um hemoprotozoário, agente da piroplasmose equina, doença de impacto sanitário e econômico internacional. Em éguas gestantes além da doença clínica, podem ocorrer abortos e danos ao neonato, caracterizando grande susceptibilidade à doença no período neonatal. O objetivo deste estudo foi avaliar a dinâmica da resposta imune humoral à EMA-2 recombinante de T. equi em éguas gestantes e potros, bem como a transferência de anticorpos vacinais no colostro. Foram utilizados 36 equinos, sendo 18 éguas gestantes e 18 potros. As éguas foram divididas em grupo controle e vacinado, que receberam rEMA-2 a partir dos 300 dias de gestação em três doses com intervalos de 21 dias. Para produção da vacina, o gene de expressão de EMA-2 foi clonado e a proteína expressa em Pichia pastoris. Os potros provenientes de éguas dos grupos vacinado e controle foram avaliados até o 6º mês de vida. Avaliou-se também a produção de anticorpos em potros submetidos ao esquema vacinal com rEMA-2 a partir do 2º mês de vida, que receberam três doses da vacina em intervalos de 21 dias. O método escolhido para a avaliação das amostras de soro e colostro foi ELISA indireto, com sensibilização pela proteína rEMA-2. Nas éguas gestantes vacinadas com rEMA-2 ocorreu o incremento de 2,3 vezes o valor basal ao final do esquema vacinal. O colostro de éguas vacinadas apresentou título médio de anticorpos de 1,0432±0,33, e potros provenientes de éguas vacinadas apresentaram média maior que os provenientes de éguas controle após a primeira mamada (12 horas). Os potros que passaram por esquema vacinal a partir do 2º mês de vida obtiveram incremento de 8,3 vezes o valor basal de anticorpos. O esquema vacinal com rEMA-2 foi capaz de estimular a imunidade humoral em éguas gestantes. Éguas gestantes vacinadas concentraram imunoglobulinas vacinais no colostro, e os potros provenientes destas obtiveram incremento nos níveis séricos de anticorpos vacinais após a primeira mamada.(AU)

Perfil imunogênico de vacinas inativadas contra agalaxia contagiosa em ovinos / Immunogenic profile of inactivated vaccines against contagious agalactia in sheep

Este trabalho teve como objetivo avaliar o perfil imunogênico em ovinos de três vacinas produzidas com linhagens brasileiras de Mycoplasma agalactiae. O perfil proteico do antígeno vacinal foi avaliado por SDS-PAGE e a imunogenicidade da vacina pela técnica de Western blot. A vacina foi inativada com formol, adsorvida em hidróxido de alumínio (Vacina 1), Montanide IMS-2215 (Vacina 2), Montanide Gel-01 (Vacina 3) e administradas em três doses. Entre a primeira e a segunda dose houve um intervalo de 21 dias, e entre a segunda e a terceira de 180 dias. O pool de soros de dez ovinos coletados nos períodos 0, 21, 35, 90, 150, 210, 270 e 360 dias pós-vacinação foram testados pela técnica de Western blot. A vacina 2 foi mais antigênica, com detecção de anticorpos 21 dias após a primeira dose. Para as vacinas 1 e 3, os anticorpos são verificados após 35 dias, com queda acentuada aos 90 dias; apenas anticorpos contra a proteína de 48 kDa apareceram após a terceira dose de forma discreta. Contra a vacina 2, ainda persistiram anticorpos contra as proteínas de 48, 55 e 80 kDa nos períodos 90, 150 e 210, que aumentaram após a terceira dose. Conclui-se que a vacina 2 induziu a resposta humoral de forma estável contra proteínas de M. agalactiae.

This study aimed to evaluate the immunogenic profile in sheep of three vaccines produced with a field Brazilian strains of Mycoplasma agalactiae. The vaccine protein profile was evaluated by SDS-PAGE and vaccine immunogenicity by Western blot. The vaccine was inactivated with formaldehyde and adsorbed onto three different adjuvants: with aluminum hydroxide (Vaccine 1), Montanide IMS 2215 (Vaccine 2), and Gel Montanide-01 (Vaccine 3). The vaccine was administered in three doses. Between the first and second dose there was an interval of 21 days, and between the second and the third one of 180 days. A pool of ten sera collected in 0, 21, 35, 90, 150, 210, 270 and 360 days after first vaccination were tested by Western blot techniques. The second vaccine was more antigenic with antibody detection 21 days after first dose. For both vaccines 1 and 3, antibodies were present 35 days after first dose, with a significant drop at 90 days; only antibodies against 48 kDa protein discreetly appeared after the third dose. Stimulation induced by vaccine 2 produced antibodies against 48, 55 and 80 kDa proteins that persisted until 90, 150 and 210 days after first dose, which rose again after third dose. It was concluded that the vaccine 2 induced stable humoral immunity against M. agalactiae proteins.

Perfil de imunoglobulinas, cura clínica e bacteriológica após diferentes tratamentos para a mastite clínica bovina / Profile of immunoglobulins, clinical and bacteriological cure after different treatment routes of clinical bovine mastitis

O presente estudo objetivou avaliar o perfil das Ig durante os diferentes tratamentos de vacas com mastite clínica. Para isso, 30 vacas com mastite clínica em um quarto mamário foram utilizadas e divididas em três grupos. O primeiro grupo foi composto por 10 animais submetidos ao tratamento combinado com infusão intramamária de 8,5mg de sulfato de cefquinoma após cada ordenha, totalizando três aplicações e administração intramuscular de 2,5mg/kg de enrofloxacina por três dias. O segundo grupo foi composto por 10 animais submetidos ao tratamento intramamário, com infusão intramamária de 8,5mg de sulfato de cefquinoma, após cada ordenha, totalizando três aplicações. O terceiro grupo foi composto por 10 animais submetidos ao tratamento sistêmico, com 2,5mg/kg de enrofloxacina, durante três dias. As amostras de leite foram coletadas de todos os animais antes dos tratamentos (momento 0), no segundo (momento 1), no quinto (momento 2) e no 12º dia (momento 3) após o término dos tratamentos. Estas foram submetidas à contagem de células somáticas, ao California Mastitis Test (CMT), ao exame bacteriológico e à quantificação das IgG1, IgG2, IgA e IgM. O tratamento combinado foi mais eficaz e precoce na taxa de cura clínica, na redução dos escores de CMT e da contagem de células somáticas. Além disso, os resultados do presente estudo demonstraram que as concentrações lácteas das diferentes classes de Ig, apesar de sua importância biológica, não estão relacionadas ao prognóstico da mastite clínica bovina, ou seja, não podem ser consideradas marcadores robustos associados à cura clínica e/ou bacteriológica da infecção intramamária.(AU)

The present study aimed to evaluate the profile of immunoglobins profile, clinical and bacteriological cure after different treatment routes of clinical bovine mastitis. Here, 30 Holstein cows with clinical mastitis in one quarter were uniformly divided into: 10 dairy cows that received 8.5mg of cefquinome sulphate administrated intramammarily during three consecutive milkings and 2.5mg/kg of enrofloxacin administrated parenterally during three consecutive days (Group 1); 10 dairy cows that received 8.5mg of cefquinome sulphate administrated intramammarily during three consecutive milkings (Group 2); and 10 dairy cows that received 2.5mg/kg of enrofloxacin administrated parenterally during three consecutive days (Group 3). Milk samples for somatic cell count, California Mastitis Test (CMT), bacteriological culture and quantification of IgG1, IgG2, IgM and IgA were collected before antimicrobial treatment, and after two, five and 12 days after the antimicrobial treatment. The combined treatment was more effective in the clinical cure rate, reduction of somatic cell count and CMT scores. Furthermore, the results demonstrated that milk concentration of different Igs classes were not related to prognosis of bovine clinical mastitis, and then cannot be considered as robust markers associated with clinical and bacteriological cures.(AU)

Estudo da resposta imune celular e humoral desencadeada por toxoplasma gondii em camundogos A/Sn imunossuprimidos / Study of cellular and humoral immune response triggered by toxoplasma gondii in immunosuppressed A / Sn mice

Toxoplasma gondii é um protozoário intracelular com alta prevalência em humanos. Em indivíduos imunocomprometidos a infecção é reativada em estados mais severos da doença, como a toxoplasmose cerebral. As vias de ação da resposta imune não estão totalmente esclarecidas, especialmente em modelos experimentais imunossuprimidos. No presente estudo, foi estabelecido um modelo experimental de toxoplasmose em animais imunossuprimidos empregando-se camundongos A/Sn fêmeas infectadas com 10 cistos da cepa ME 49 de T. gondii. O tratamento imunossupressor foi iniciado 30 dias após o inóculo parasitário e foi constituído da administração subcutânea de Ciclosporina A (CsA) ou de Dexametasona (Dex) diluída em água destilada acondicionada em bebedouros distribuídos em gaiolas. CsA e Dex induziram imunossupressão significativa (p<0.05) e subsequente reativação do parasita em animais infectados. Por meio da contagem de leucócitos, observou-se que o efeito imunossupressor da Dex foi superior à CsA. A avaliação dos padrões de resposta imune celular e humoral foi realizada com o uso de Dex, via oral, na concentração de 10 mg/L, em camundongos A/Sn fêmeas pelo período de 7 a 56 dias de tratamento. Os camundongos imunossuprimidos por Dex apresentaram redução significativa (p<0.05) na dosagem de citocinas Interleucina 5 (IL-5), Interleucina 10 (IL10), Fator de Necrose Tumoral  (TNF-) e Interferon  (IFN-). Os camundongos imunossuprimidos por Dex apresentaram níveis de anticorpos reduzidos quando analisados frente aos Antígenos Lisados de Taquizoítos (ALT), no entanto, quando analisados em relação aos Antígenos Excretados e Secretados (ESA), apresentaram aumento da concentração de anticorpos. O perfil de anticorpos e citocinas nesses animais sugeriu uma tendência da resposta celular do tipo Th2 em relação à resposta celular do tipo Th1. Os resultados indicaram que o modelo murino de imunosupressão por Dex desenvolvido no presente trabalho mostrou-se útil para a investigação da resposta imune celular e humoral frente à infecção por T. gondii e este modelo poderá ser aplicado em futuros experimentos que visem à compreensão da relação parasito-hospedeiro. (AU)

Toxoplasma gondii is an intracellular protozoan with high prevalence in humans. In immunocompromised individuals the infection is reactivated in more severe states of the disease, such as cerebral toxoplasmosis. The pathways of action of the immune response are not fully understood, especially in immunosuppressed experimental models. In the present study, an experimental model of toxoplasmosis was established in immunosuppressed animals using female A/Sn mice infected with 10 cysts of T. gondii ME49 strain. Immunosuppressive treatment was initiated 30 days after the parasitic inoculum and consisted of the subcutaneous administration of Cyclosporin A (CsA) or Dexamethasone (Dex) diluted in distilled water conditioned in cage flasks. CsA and Dex induced significant immunosuppression (p<0.05) and subsequent reactivation of the parasite in infected animals. By means of the leukocyte count, it was observed that the immunosuppressive effect of Dex was higher than CsA. The evaluation of the cellular and humoral immune response patterns was performed using oral Dex at 10 mg/L in female A/Sn mice for 7 to 56 days of treatment. Deximmunosuppressed mice showed a significant (p<0.05) reduction in the cytokines dosage of Interleukin 5 (IL-5), Interleukin 10 (IL-10), Tumor Necrosis Factor  (TNF-) and Interferon  (IFN-). Mice immunized with Dex showed reduced antibody levels when analyzed against Tachyzoite Lysed Antigens (TLA); however, when analyzed for Excreted/Secreted Antigens (ESA), they showed an increase in the concentration of antibodies. The antibody and cytokine profile in these animals suggested a trend of Th2-type cellular response over the Th1-type cellular response. The results indicated that the murine model of Dex immunosuppression developed in the present study was useful for investigating the cellular and humoral immune response to T. gondii infection and this model can be applied in future experiments aiming to understand the relationship between host and parasite. (AU)

Proposed method for agglutinating antibody titer analysis and its use as indicator of acquired immunity in pacu, Piaractus mesopotamicus / Aglutinante de anticorpos como indicador de imunidade adquirida de pacu Piaractus mesopotamicus

Antibody can be assessed by agglutinating antibody titer which is a quantitative measure of circulating antibodies in serum from fish previously immunized. The antibody evaluation has been performed with different fish species, and is considered a reliable method that can be applied to confirm several hypothesis regarding acquired immunity, even in conjunction with precise methods to describe immune mechanisms. In order to provide appropriate analytical methods for future studies on the specific immune system of native fish, the present study standardized on assay to measure the serum agglutinating antibody titer produced after immunization with inactivated A. hydrophila and levamisole administration in pacu. It was possible to determine the agglutinating antibodies titer in a satisfactorily way in pacu immunized with inactive A. hydrophila, and the highest titers were observed on fish fed with levamisole.

Os anticorpos podem ser avaliados pelo título aglutinante de anticorpos, que é uma medida quantitativa de anticorpos no soro de peixe previamente imunizados. A determinação do título de anticorpos foi realizada com diversas espécies de peixes e é considerado um método confiável que pode ser aplicado para confirmar diversas hipóteses que envolvam o sistema adquirido de defesa, mesmo em conjunto com métodos precisos, para descrever mecanismos imunes. A fim de prover métodos analíticos adequados para futuros estudos sobre o sistema imune específico de peixes nativos, o presente estudo aperfeiçoou o ensaio para avaliar o título aglutinante de anticorpos em soro de pacu imunizados com A. hydrophila e alimentados com levamisol. Foi possível determinar o título aglutinante de anticorpos de forma satisfatória, em pacus imunizados com A. hydrophila inativa, e os maiores títulos foram observados em peixes alimentados com levamisol.

Serum bactericidal activity as indicator of innate immunity in pacu Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887) / Atividade bactericida do soro como indicador de imunidade inata de pacu Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887)

The immune system of teleost fish has mechanisms responsible for the defense against bacteria through protective proteins in several tissues. The protein action can be evaluated by serum bactericidal activity and this is an important tool to analyze the immune system. Pacu, Piaractus mesopotamicus, is one of the most important fish in national aquaculture. However there is a lack of studies on its immune responses. In order to standardize and assess the accuracy of the serum bactericidal activity assay, fish were briefly challenged with Aeromonas hydrophila and sampled one week after the challenge. The bacterial infection increased the concentration of protective proteins, resulting in a decrease of colony-forming unit values expressed as well as an enhanced serum bactericidal activity. The protocol showed a reliable assay, appropriate to determine the serum bactericidal activity of pacu in the present experimental conditions.

O sistema imune de peixes teleósteos tem mecanismos responsáveis pela defesa contra bactérias e atua através de proteínas presentes em diversos tecidos. A ação destas proteínas pode ser avaliada pela atividade bactericida do soro, sendo esta uma importante ferramenta para analisar o sistema imune. O pacu, Piaractus mesopotamicus, é um peixe nativo muito importante para aquicultura nacional, entretanto há pouco conhecimento sobre o funcionamento de seu sistema imune. Assim foi realizado experimento para padronizar e avaliar a eficiência do ensaio de atividade bactericida. Resumidamente, peixes foram desafiados por Aeromonas hydrophila e amostradas uma semana após o desafio. A infecção bacteriana promoveu um aumento na concentração de proteínas protetoras, resultando em diminuição dos valores de unidades formadoras de colônias ou expressos também como aumento da atividade bactericida do soro. O protocolo se mostrou confiável, sendo apropriado para determinar a atividade bactericida do soro de pacu nas condições experimentais.

Equivalência e avaliação da necessidade de sorologia de controle entre esquemas de pré-exposição à raiva humana / Equivalencia y evaluación de la necesidad de serología de control entre esquemas de pre-exposición a la rabia humana / Equivalence between pre-exposure schemes for human rabies and evaluation of the need for serological monitoring

OBJETIVO: Avaliar a resposta imune humoral do esquema de pré-exposição da raiva humana realizado pelas vias intramuscular e intradérmica e a necessidade de sorologia de controle. MÉTODOS: Estudo de intervenção controlado e randomizado, realizado em São Paulo, SP, em 2004-2005. Foram recrutados 149 voluntários, dos quais 127 (65 intradérmica e 62 intramuscular) completaram o esquema de vacinação e realizaram avaliação da resposta imune humoral dez, 90 e 180 dias após o término da vacinação. Foram considerados dois desfechos para a comparação entre as duas vias de aplicação: a média geométrica do título de anticorpos neutralizantes e a proporção de indivíduos com títulos satisfatórios (> 0,5 UI/mL) em cada momento de avaliação. Foi analisada a associação da resposta humoral com dados antropométricos e demográficos por meio de teste de médias e qui-quadrado com correção de Yates. Após a conclusão do esquema foram feitas a comparação da proporção de soropositivos pelo teste de Kruskall Wallis e a comparação dos títulos médios por análise de variância. RESULTADOS: Os títulos médios de anticorpos foram maiores nos indivíduos que receberam as vacinas por via intramuscular. A percentagem de voluntários com títulos satisfatórios (> 0,5 UI/mL) diminuiu com o tempo em ambos os grupos, porém, no grupo que recebeu as vacinas por via intradérmica, a proporção de títulos satisfatórios no dia 180 variou de 20 por cento a 25 por cento, enquanto pela via intramuscular variou de 63 por cento a 65 por cento. Não se observou associação da resposta imune humoral com as variáveis demográficas ou antropométricas. CONCLUSÕES: A sorologia após a terceira dose pode ser considerada desnecessária em indivíduos sob controle quanto à exposição, uma vez que 97 por cento e 100 por cento dos voluntários vacinados, respectivamente por via intradérmica e pela via intramuscular, apresentaram níveis de anticorpos satisfatórios (> 0,5 UI/mL).

OBJECTIVE: To evaluate the humoral immune response to the pre-exposure schedule of human rabies vaccination through intradermal and intramuscular routes, as well as the need for serological monitoring. METHODS: A randomized and controlled intervention study was carried out in São Paulo, Southeastern Brazil, from 2004-2005. There were 149 volunteers, of which 127 completed the vaccination schedule (65 intradermal and 62 intramuscular) and underwent humoral immune response evaluation at ten, 90 and 180 days post-vaccination. Two outcomes were considered for comparing the two routes of administration: the geometric average of neutralizing antibody titers and the proportion of individuals with satisfactory titers (> 0.5 IU/mL) at each evaluation point. The association of the humoral immune response with anthropometric and demographic data was analyzed through a normal distribution test and a chi-square test with a Yates correction. After completion of the vaccination schedule, the proportion of seropositive results was compared by the Kruskall Wallis test, and the average titers were compared by variance analysis. RESULTS: the average antibody titers were higher in patients who were vaccinated intramuscularly. The percentage of volunteers with satisfactory titers (> 0.5 percent IU/mL) decreased over time in both groups. However, in the group vaccinated intradermally the rate of satisfactory titers on day 180 ranged from 20 percent to 25 percent, while the intramuscular route varied from 63 percent to 65 percent. An association between the humoral immune response and the demographic and anthropometric variables was not observed. CONCLUSIONS: Serology after the third dose can be considered unnecessary in unexposed patients, since 97 percent and 100 percent of volunteers respectively vaccinated by the intradermal and intramuscular route presented satisfactory antibody levels (> 0.5 percent IU/mL).

OBJETIVO: Evaluar la respuesta inmune humoral del esquema de pre-exposición de la rabia humana realizado por las vías intramuscular e intradérmica y la necesidad de serología de control. MÉTODOS: Estudio de intervención controlado y aleatorio, realizado en Sao Paulo, Sureste de Brasil, en 2004-2005. Fueron reclutados 149 voluntarios, de los cuales 127 (65 intradérmica y 62 intramuscular) completaron el esquema de vacunación y realizaron evaluación de la respuesta inmune humoral 10, 90 y 180 días posterior al término de la vacunación. Fueron considerados dos resultados para la comparación entre las dos vías de aplicación: el promedio geométrico del título de anticuerpos neutralizantes y la proporción de individuos con títulos satisfactorios (> 0,5 UI/mL) en cada momento de la evaluación. Fue analizada la asociación de la respuesta humoral con datos antropométricos y demográficos por medio de prueba de medias y chi-cuadrado con corrección de Yates. Posterior a la conclusión del esquema fueron realizadas la comparación de la proporción de seropositivos por la prueba de Kruskall Wallis y la comparación de los títulos promedios por análisis de varianza. RESULTADOS: Los títulos promedios de anticuerpos fueron mayores en los individuos que recibieron las vacunas por vía intramuscular. El porcentaje de voluntarios con títulos satisfactorios (> 0,5 UI/mL) disminuyó con el tiempo en ambos grupos, sin embargo, en el grupo que recibió vacuna por vía intradérmica la proporción de títulos satisfactorios en el día 180 varió de 20 por ciento a 25 por ciento, mientras que por la vía intramuscular varió de 63 por ciento a 65 por ciento. No se observó asociación de la respuesta inmune humoral con las variables demográficas o antropométricas. CONCLUSIONES: La serología posterior a la tercera dosis puede ser considerada innecesaria en individuos bajo control con respecto a la exposición, una vez que 97 por ciento y 100 por ciento de los voluntarios vacunados...