Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica / Evolution of diagnostic techniques in clinical microbiology

Introdução: A identificação microbiana é importante por gerar impacto tanto no tratamento do paciente quanto na saúde pública, pois o diagnóstico rápido e preciso propicia o direcionamento adequado da terapia antibiótica e o rápido controle da infecção. Por conta disso, atualmente, os laboratórios de microbiologia clínica estão passando por mudanças significativas, com o desenvolvimento de sistemas de automação que aceleram o diagnóstico. Esses avanços foram possíveis devido ao progresso tecnológico e à busca de novas estratégias que reduziram os custos dessas ferramentas, tornando-as mais acessíveis. Objetivo: Este estudo buscou ressaltar a importância da implantação de novas e avançadas tecnologias nos laboratórios de microbiologia. Metodologia: Realizou-se revisão de literatura em bases de dados científicas. Desenvolvimento: As técnicas tradicionais de diagnóstico microbiológico incluem desde métodos diretos como coloração e microscopia ótica até métodos indiretos como, por exemplo, cultura e testes bioquímicos. O principal problema é o fato de que essas técnicas demandam tempo para fornecer uma resposta ao clínico e, em muitos casos, necessita de técnicos bem treinados para a interpretação correta dos resultados. Por isso, torna-se cada vez mais importante o desenvolvimento de técnicas rápidas e precisas. As principais técnicas inovadoras incluem a Biologia Molecular, os Imunoensaios e a Espectrometria de Massa. Considerações finais: O acesso às novas tecnologias permite resolver questões diagnósticas que estão cada vez mais desafiadoras e também contribuem para a melhoria do cenário clínico e a saúde pública.

Introduction: Microbial identification is important due to its impact on both the patient and public health, because the rapid and accurate diagnosis allows of correct antibiotic treatment and control of infection. Currently, clinical microbiology laboratories are undergoing significant changes due to the development of automation systems, which enables faster and more accurate diagnosis. These advances were possible due to technological progress and the search for new strategies that reduced the costs of these tools, making them more accessible. Objective: This study aimed to highlight the importance of the implantation of new and advanced technologies in microbiology laboratories. Methodology: A review of scientific literature was carried out in scientific databases. Development: Traditional techniques of microbiological diagnosis include direct methods such as staining methods and optical microscopy to indirect methods such as culture and biochemical tests. The main problem is the fact that these techniques take time to provide a response to the clinician and, in many cases, need well-trained technicians for the correct interpretation of the results. It is, therefore, becoming increasingly important to develop rapid and accurate techniques. The innovative techniques include molecular biology, immunoassays, and mass spectrometry. Final considerations: Access to new technologies makes it possible to solve diagnostic issues that are increasingly challenging and also contribute to the improvement of the clinical setting and public health.

Dosagem de hormônios por métodos imunobiológicos / Hormone measurement by immunobiological methods

A determinação da concentração circulante de hormônios por meio de imunoensaios deu início à era moderna da Endocrinologia e, desde então, esses ensaios vêm sendo aprimorados em praticamente todos os seus aspectos. Os imunoensaios são classificados como competitivos ou não competitivos. Nos métodos competitivos, o hormônio endógeno compete com um hormônio marcado pela ligação a quantidades limitadas de anticorpos específicos. Nos imunoensaios não competitivos, são utilizados pares de anticorpos complementares para capturar e detectar o hormônio de interesse. Esses ensaios são também conhecidos como ensaios sanduíche e denominados de acordo com o sistema de detecção que utilizam. Diante do aprimoramento contínuo das técnicas de imunoensaio, é importante ressaltar que o clínico não deve considerar seu resultado como evidência de diagnóstico definitivo, mas como ferramenta para auxiliar a confirmação ou excluir uma impressão clínica.

The description of immunoassays for measurement of circulating concentrations of hormones initiated the modern endocrine era. Since its initial description, immunoassay methodology has been continuously improved. Immunoassay techniques are described as either competitive or noncompetitive assays. In competitive methods the endogenous hormone competes with radiolabeled hormone for binding with limited amount of specific antibodies. Noncompetitive immunoassays use complementary pairs of antibodies to capture and detect the hormone of interest. These assays are also known as sandwich methods and are named based on the detection method used. As immunoassay techniques continues to advance it must be emphasized that clinicians should not consider their results as evidence of a definite diagnosis, but as a tool to confirm or refute a clinical impression.

Imunoensaios: uma alternativa para a detecção de fungos toxigênicos em alimentos / alimentosImmunoassays: an alternative for toxigenicfungi detection in foods

O monitoramento constante da contaminação fúngica é imprescindível para assegurar a qualidade e segurança dos alimentos, reduzindo as perdas econômicas, assim como os riscos à saúde humana e animal. Os métodos tradicionais de identificação e detecção de fungos (cultivo em diversos meios, exame microscópico e análises bioquímicas) geralmente consomem muito tempo e exigem pessoal com experiência. Os imunoensaios, particularmente os ensaios imunoenzimáticos, constituem uma alternativa promissora aos métodos tradicionais devido à alta sensibilidade, especificidade, reprodutibilidade e potencial como método rápido de controle de qualidade. Dentre os ensaios imunoenzimáticos, aqueles baseados em exoantígenos são os mais empregados na resolução de problemas taxonômicos, detecção e identificação de fungos toxigênicos. Nesta revisão serão abordados conceitos básicos de imunoensaios, métodos de detecção de fungos, assim como diversos ensaios imunoenzimáticos para a detecção de fungos toxigênicos em alimentos.

Constant monitoring of mould contamination is essential in order to assure the food quality and safetyand reduce the economic losses, as well as to minimize the potential hazards to human and animal health.The traditional methods for mould identification and detection (culture in several media, microscopicexamination and chemical analysis) are usually time-consuming and require trained staff. Immunoassays,particularly enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) could be a promising alternative to the traditionalmethods due to high sensitivity, specificity, reproducibility and potential for use in rapid quality control.Among ELISAs, those based on exoantigens are the most employed in the resolution of taxonomicproblems, detection and identification of toxigenic fungi. This review discusses the basic principles ofimmunoassays, methods of mould detection and the several ELISAs developed for toxigenic fungidetection in food

Avaliação de um imunoensaio cromatográfico rápido na detecção de anticorpos contra o vírus da imunodeficiência humana / Evaluation of a rapid immunochromatographic assay for the detection of antibodies against the human immunodeficiency virus

Visando atender situações de urgência para o diagnóstico da infecção pelo HIV (ex: acidentes de trabalho) foram criados os chamados "testes rápidos". Objetivando avaliar o desempenho do teste rápido Determine HIV 1/2 - Abbott, comparou-se este imunoensaio cromatográfico qualitativo, de execução simples, rápida e de leitura visual, com uma combinação de testes sorológicos padronizada pelo Ministério da Saúde (dois testes de triagem seguidos por teste confirmatório - Immunoblot ou Imunofluorescência Indireta - nas amostras positivas ou duvidosas). Utilizamos dois imunoensaios seguidos por Western Blot/Line Immunoassay. Foram analisadas 105 amostras de soro humano, das quais 50 se apresentaram positivas, 54 negativas e 01 indeterminada - as custas de uma banda não viral - para a presença de anticorpos anti-HIV quando analisadas pela combinação de testes acima citada. A técnica proposta foi 100% concordante com a padronização do Ministério da Saúde para os resultados positivos e negativos (sensibilidade e especificidade de 100%), mostrando-se, assim, útil e confiável no diagnóstico da infecção pelo HIV em situações nas quais o indivíduo pode beneficiar-se da terapêutica anti-retroviral imediata.

The HIV rapid tests were created to facilitate the diagnosis of HIV infection in cases of emergency (exposure to a potentially contaminated infected biological source, transplantation, labour when the serological status of the mother is unknown). In order to evaluate the performance of the rapid test Determine - Abbott, we compared this rapid immunochromatographic assay, simple to manage, fast and easy to read by simple visual inspection, with a combination of serological tests as established by the Ministry of Health, Brazil (two different screening tests followed by a confirmatory one whenever reactivity was detected). We analyzed 105 samples of human serum by two different enzyme immunoassays and performed the Western Blot/Line-Immunoassay on those reactive. We observed 50 positive, 54 negative and one indeterminate sample (with a non-vital band). Then, we analyzed these samples with the Determine rapid test. The results showed an agreement of 100% if compared with the combination of tests as proposed by the Ministry of Health. Our results show that this test is an useful and accurate tool for the diagnosis of HIV in individuals who may benefit from immediate therapeutic intervention.