Influenza aviar H5N1. ¿Debemos preocuparnos?

Desde la segunda mitad de 2022 se ha reportado un aumento de casos de influenza en aves migratorias en Latinoamérica. Los virus influenza A y B son los principales agentes asociados a influenza estacional epidémica en humanos. Los virus influenza A circulan no solo en humanos sino también en animales, incluyendo aves migratorias. El intercambio de segmentos de ARN genómico entre dos virus del mismo tipo aumenta la diversidad de los subtipos circulantes e incluso puede facilitar la generación de progenie viral potencialmente pandémica. La naturaleza zoonótica del virus influenza A puede generar infecciones en humanos con virus de origen animal. El virus influenza A de origen aviar ha ocasionado transmisiones en humanos, incluyendo casos graves y muertes, siendo la influenza A H5N1 la más destacada. Es importante tomar medidas de prevención y control en caso de aumento de casos de influenza en aves migratorias para prevenir posibles pandemias en Chile y el mundo.

Since the second half of 2022, an increase in influenza cases in migratory birds has been reported in Latin America. Influenza A and B viruses are the main agents associated with seasonal epidemic influenza in humans. Influenza A viruses circulate not only in humans but also in animals, including migratory birds. The exchange of genomic RNA segments among two viruses increases the diversity of circulating subtypes and may even facilitate the generation of potentially pandemic viral progeny. The zoonotic nature of influenza A virus can generate infections in humans with animal-origin viruses. Avian-origin influenza A virus has caused transmissions in humans, including severe cases and deaths, with influenza A H5N1 being the most prominent. It is important to take preventive and control measures in case of an increase in influenza cases in migratory birds to prevent possible pandemics in Chile and the world.

Efficacy of some avian influenza H5 vaccines against local highly pathogenic avian influenza viruses subtype H5N8 isolated in 2018 and 2020 in Egypt

Commercial inactivated avian influenza H5 vaccine is used as an essential control strategy for avian influenza disease in Egypt. Since the initial outbreaks of highly pathogenic avian influenza H5N8, the virus has diverged with new genotypes and variant viruses continuing to emerge which mainly stand behind vaccination failure. In the present work, four different commercial avian influenza vaccines were inoculated in specific pathogenic free chickens for assessing its efficacy against local highly pathogenic avian influenza H5N8 virus isolated in 2018 and 2020. Two hundred and forty specific pathogenic free chickens were clustered into four groups; each group was inoculated with the corresponding vaccine (60 specific pathogenic free chickens/vaccine). Sixty specific pathogenic free chicks were kept as control unvaccinated group. Sera collected from vaccinated chicken groups at 3rd and 4th week post vaccination were examined for calculating neutralizing antibodies using heterologous highly pathogenic avian influenza H5N8 2018 and 2020. At 4th week post vaccination, vaccinated chickens were challenged; moreover, oropharyngeal swabs were collected from challenged vaccinated chickens to calculate the viral shedding. Our findings revealed the groups vaccinated with vaccine code no 1 and 2 that contains two vaccine strains (H5N1 and H5N8) of local origin exhibited the highest hemagglutination inhibition titer, protection (percent) and reduction in viral shedding titer when examined by highly pathogenic avian influenza H5N8 2018 while, vaccine code no 3 induced lower antibody response, protection (percent) and reduction in viral shedding, but still within satisfactory level when compared to previous groups. When highly pathogenic avian influenza H5N8 2020 was used, it was found the seroconversion rate, protection (percent) and mean titer of reduction of viral shedding decreased in comparison to those recorded for highly pathogenic avian influenza H5N8 2018. Vaccine code no 4 was impotent to either highly pathogenic avian influenza 2018 or 2020. Accordingly, it was recommended to update vaccine strain according to epidemiological condition and used the predominant circulating strain isolate in challenge test(AU)

La vacuna comercial inactivada H5 se utiliza como estrategia esencial de control de la enfermedad de la gripe aviar en Egipto. Desde los brotes iniciales de la gripe aviar altamente patógena H5N8, el virus ha variado al aparecer continuamente nuevos genotipos y variantes virales, que son los principales responsables del fracaso de la vacunación. En el presente trabajo, cuatro vacunas comerciales diferentes contra la gripe aviar se inocularon en pollos libres de patógenos específicos para evaluar su eficacia contra cepas del virus local de la gripe aviar altamente patógeno H5N8 aisladas en 2018 y 2020. Se agruparon 240 pollos pollos libres de patógenos específicos en cuatro grupos, cada uno fue inoculado con la vacuna correspondiente (60 pollos pollos libres de patógenos específicos/vacuna). Sesenta pollos SPF se mantuvieron como grupo control sin vacunar. Los sueros de los pollos vacunados recogidos en la 3ª y 4ª semana después de la vacunación se examinaron para calcular los anticuerpos neutralizantes contra la gripe aviar heteróloga H5N8 2018 y 2020. En la cuarta semana después de la vacunación, los pollos vacunados fueron retados; además, se recogieron hisopados orofaríngeos de los pollos vacunados retados para calcular la diseminación viral. Nuestros resultados revelaron que los grupos vacunados con las vacunas con códigos nº 1 y 2, que contienen dos cepas vacunales (H5N1 y H5N8) de origen local, mostraron el mayor título de inhibición de la hemaglutinación, protección (por ciento) y reducción del título de excreción viral cuando se evaluaron contra la gripe aviar altamente patógena H5N8 2018, mientras que la vacuna con código nº 3 indujo menor respuesta de anticuerpos, protección (por ciento) y reducción de la excreción viral, pero todavía dentro de un nivel satisfactorio en comparación con los grupos anteriores. Al utilizar la vacuna contra la gripe aviar altamente patógena H5N8 2020, se observó que la tasa de seronconversión, la protección (por ciento) y el título medio de reducción de la excreción viral disminuyeron en comparación con los registrados para la gripe aviar altamente patógena H5N8 2018. La vacuna con código nº 4 no fue potente para la gripe aviar altamente patógena de 2018 o de 2020. Por consiguiente, se recomendó actualizar la cepa de la vacuna de acuerdo con las condiciones epidemiológicas y utilizar el aislamiento de la cepa circulante predominante en la prueba de reto(AU)

Impact of H5N8 duck and chicken viral isolates on the immunological profile of vaccinated specific pathogen free chickens

Nowadays, there is a global concern about outbreaks caused by the highly pathogenic avian influenza virus H5N8 clade 2.3.4.4 which caused devastating losses in the poultry industry sector. This clade was subdivided into two waves: clade 2.3.4.4A from 2014 to 2015 and clade 2.3.4.4b from 2016 until now. In this literature we aimed to evaluate the efficacy of recently used inactivated commercial avian influenza vaccines against two new Egyptian highly pathogenic avian influenza virus H5N8 isolates of clade 2.3.4.4b, A/chicken/Egypt/1526v/2020/H5N8 (H5N8-CH) and A/Duck/Egypt/Qalubia321/2021 (H5N8-D). Three-week-old specific pathogen free chickens were vaccinated with eight types of the most recently used inactivated avian influenza vaccines containing homologous and heterologous virus to the circulating H5N8 isolates. All specific pathogen free chicken groups were bled weekly post vaccination for antibody analysis using two H5N8 isolates of chicken and duck origin as antigen in hemagglutination inhibition test. Also, all vaccinated chicken groups were challenged 4 weeks post vaccination against the H5N8 duck isolate with a dose of 109 EID50/0.1 mL per chicken to measure the protection percentage of the commercial vaccines used. The results showed that vaccines with homologous and heterologous virus showed variable degrees of accepted protection percentage ranged from 90percent to 100percent, thus it was concluded that not only the genetic and antigenic match of the vaccine strains with the circulating highly pathogenic avian influenza viruses influences vaccine efficiency; other factors, such as manufacturing procedures, adjuvant, antigen content, vaccine dose and administration factors could affect vaccine efficacy, therefore, further vaccine development studies are needed to improve the percentage of protection and prevention of viral shedding against local highly pathogenic avian influenza H5 viruses in Egypt(AU)

En la actualidad, existe una preocupación mundial por los brotes causados por el virus de la gripe aviar altamente patógena H5N8 clado 2.3.4.4 que causó pérdidas devastadoras en el sector de la industria avícola. Este clado se subdividió en dos oleadas: clado 2.3.4.4A de 2014 a 2015 y clado 2.3.4.4b de 2016 hasta ahora. En el presente trabajo, dos aislamientos egipcios de la gripe aviar altamente patógena H5N8 del clado 2.3.4.4b, A/chicken/Egypt/1526v/2020/H5N8 (H5N8_CH) y A/Duck/Egypt/Qalubia321/2021 (H5N8_D), se utilizaron para evaluar la eficacia de vacunas comerciales inactivadas contra la gripe aviar de reciente utilización. Pollos libres de patógenos específicos de tres semanas de edad fueron vacunados con ocho vacunas inactivadas contra la influenza aviar, de uso reciente, que contenían virus homólogos y heterólogos a los aislamientos circulantes de H5N8. Todos los grupos de pollos libres de patógenos específicos fueron sangrados semanalmente tras la vacunación para el análisis de anticuerpos; dos virus H5N8 aislados de pollo y pato se utilizaron como antígeno en la prueba de inhibición de la hemaglutinación. Además, todos los grupos de pollos vacunados fueron retados 4 semanas después de la vacunación con el virus H5N8 aislado de pato, con una dosis de 109 EID50/0,1 mL por pollo, para medir el porcentaje de protección de las vacunas comerciales utilizadas. Los resultados mostraron que las vacunas con virus homólogos y heterólogos presentaron grados variables de aceptada protección, la que osciló entre el 90 por ciento y el 100 por ciento, por lo que se concluyó que no sólo la coincidencia genética y antigénica de las cepas vacunales con los virus circulantes de la influenza aviar altamente patógena influye en la eficacia de la vacuna; otros factores, como los procedimientos de fabricación, el adyuvante, el contenido en antígenos, la dosis de la vacuna y los factores de administración podrían afectar a la eficacia de la vacuna, por lo que es necesario seguir estudiando el desarrollo de vacunas para mejorar la protección y la prevención de la excreción viral contra los virus H5 de la influenza aviar altamente patógena locales en Egipto(AU)

Exploratory serosurvey for antibodies to avian pathogens in backyard chickens from a satellite community of Jalapa City, Guatemala

An exploratory serosurvey was conducted to determine the presence of circulating antibodies to avian patho-gens in backyard chickens from Los Achiotes (LAC), a satellite community of Jalapa City, located in eastern Guatemala. Blood samples from 51 adult chickens belonging to 51 households were taken and investigated for the presence of antibodies to Avian Influenza (AI), Newcastle Disease (ND), Infectious Bronchitis (IB), Infectious Bursal Disease (IBD), Mycoplasma gallisepticum (MG) and M. synoviae (MS). Antibodies for AI, ND, were investigated by Hemagglutination Inhibition, for IB and IBD by ELISA (BioChek®) and for MG and MS by a rapid serum plate agglutination test. The cut-off point for positive titers was 1:4 for AI and ND and a 0.2 S/P ratio for IB and IBD. All sampled chickens were positive for concomitant antibodies to various pathogens. Over half of the chickens were positive reactors to antibodies to all six tested pathogens; about a third carried antibodies to five and the rest to four or three. The frequencies of positive reactors were: AI = 27 (53%); ND = 49 (96.1%); IB = 50 (98%); IBD = 51 (100%); MG = 45 (88%) and MS = 48 (94%). The results show that the dynamic population of backyard chickens in LAC could be a potential threat to backyard poultry, farm poultry, wild birds and human population. The need to develop interventions and policies following the One Health approach (animal health to achieve human health) is stressed.

Se realizó un estudio serológico exploratorio buscando anticuerpos contra patógenos aviares en gallinas de traspatio de la comunidad Los Achiotes –una comunidad satélite de la Ciudad de Jalapa, en el oriente de Guatemala−. Se tomaron muestras de sangre de 51 gallinas provenientes de sendas casas. Se buscaron anticuerpos contra influenza aviar (IA), enfermedad de Newcastle (ENC), bronquitis infecciosa (BI), enfermedad de Gumboro (EG), Mycoplasma gallisepticum (MG) y M. synoviae (MS). Para investigar la presencia de anticuerpos contra IA y ENC se utilizó la prueba de inhibición de hemoaglutinación; para los anticuerpos contra BI la prueba de ELISA BioChek® y para los anticuerpos contra MG y MS la prueba rápida en placa. El punto de corte para títulos positivos fue de 1:4 para IA y ENC y de una razón S/P de 0.2 para BI y EG. Todas las gallinas muestreadas portaban concomitantemente anticuerpos contra varios patógenos aviares. Más de la mitad de las gallinas portaban anticuerpos contra los seis patógenos estudiados. Las frecuencias de reactores positivos a anticuerpos fueron: IA = 27 (53%); ENC = 49 (96.1%); BI = 50 (98%); EG = 51 (100%); MG = 45 (88%) y MS = 48 (94%). Se concluye que la población dinámica de gallinas de traspatio de Los Achiotes podría ser una potencial amenaza para la avicultura artesanal, la avicultura tecnificada, las aves silvestres y la población humana. Se señala la necesidad de generar intervenciones y políticas desde la corriente denominada Una salud (salud animal para lograr la salud humana).

Factores de riesgo asociados a mortalidad por nueva influenza A (H1N1) en la región Cusco-Perú / Risk factors associated to mortality by novel Influenza A (H1N1) in Cusco-Peru

Introducción: En la Región Cusco durante el 2009, se reportaron 395 casos confirmados de nueva influenza A(H1N1) y 15 defunciones. La tasa de letalidad del 3.8%, estuvo muy por encima de reportes nacionales e internacionales, constituyéndose en serio problema de salud pública. Objetivo: Determinar los factores de riesgo asociados a mortalidad por nueva influenza A(H1N1). Material y metodo: Se realizo un estudio de Casos y Controles en 3 Hospitales de la ciudad del Cusco, entre las Semanas Epidemiológicas 18-34, 2009. Se identificaron 15 casos y 45 controles confirmados por PCRtr. Considerándose “caso” todo caso confirmado de nueva influenza A(H1N1), hospitalizado y fallecido y “control”, todo caso confirmado de nueva influenza A(H1N1), hospitalizado y dado de alta vivo. Resultados: De 24 factores de riesgo asociados a mortalidad por Nueva influenza A(H1N1) estudiados, se identificaron los siguientes: Tiempo de inicio de tratamiento antiviral mayor de 3 días (p=0.001); tiempo de terapia corticoide mayor de 5 días (p=0.00001); tiempo de (p=0.0003) hospitalización mayor de 7 días (p=0.0003); tiempo de terapia antibiótica mayor de 10 días (p=0.0001); tiempo de medidas de soporte mayor de 10 días (p=0.001); compromiso de conciencia moderadograve según Score APACHE II (p=0.0000000); hipertensión arterial (p=0.001); anemia (p=0.01); hipokalemia (p=0.01); hipoxia (p=0.0005) y leucocitosis (p=0.01). El análisis de regresión logística mostró que un sujeto incluido en el estudio con terapia antibiótica mayor de 10 días (p<0.007), tiempo de terapia corticoide mayor de 5 días (p<0.05) e inicio del tratamiento antiviral mayor de 3 días (p<0.05) tuvo elevada probabilidad de morir del 84%...

Introduction: 395 confirmed cases of new influenza A (H1N1) cases and 15 deaths were reported in the Cusco Region during 2009. The case fatality rate of 3.8%, was well above national and international reports, becoming serious public health problem. Objective: To determine the risk factors associated with mortality novel influenza A (H1N1). Material and methods: a study of cases and controls was conducted in 3 hospitals in the city of Cusco, between Epidemiological Weeks 18-34, 2009. 15 confirmed cases and 45 controls were identified PCRtr. Considering "case" all confirmed case of novel influenza A (H1N1) hospitalized and died and "control" means a confirmed case of novel influenza A (H1N1) hospitalized and discharged alive. Results: Of 24 risk factors associated with mortality from New influenza A (H1N1) studied, the following were identified: start time greater antiviral treatment of 3 days (p = 0.001), while higher corticosteroid therapy 5 days (p = 0.00001), time (p = 0.0003) increased hospitalization of 7 days (p = 0.0003), time of antibiotic therapy greater than 10 days (p = 0.0001), time measures more support 10 days (p = 0.001) , moderate to severe commitment consciousness as APACHE II Score (p = 0.0000000), hypertension (p = 0.001), anemia (p = 0.01), hypokalemia (p = 0.01), hypoxia (p = 0.0005) and leukocytosis (p = 0.01). The logistic regression analysis showed that a subject included in the study more than 10 days antibiotic therapy (p <0.007), while higher corticosteroid therapy 5 days (p <0.05) and initiation of antiviral treatment more than 3 days (p <0.05) had high probability of death of 84%...

Anticuerpos séricos contra la enfermedad de Newcastle e Influenza Aviar en aves rapaces de Chile / Serum antibodies against Newcastle disease and Avian Influenza in birds of pley in Chile

Objetivo. Detectar la presencia de anticuerpos séricos sanguíneos contra los virus de la Enfermedad de Newcastle (ENC) e Influenza aviar (IA), para comprender la contribución de las aves silvestres en la transmisión de estos virus en Chile. Materiales y métodos. Se analizaron 63 aves pertenecientes a los órdenes Falconiformes y Strigiformes desde centros de rehabilitación de aves de las zonas central y sur de Chile. Se realizaron las pruebas de inhibición de la hemoaglutinación (IHA) para detectar anticuerpos contra el virus ENC e inmunodifusión en gel agar (IDGA) y ELISA para IA. Resultados. Se detectaron 14 aves positivas (22.2%) para anticuerpos séricos contra el virus de la ENC. En cambio, no se registraron anticuerpos séricos sanguíneos para el virus de la IA. Conclusiones. La presencia de aves rapaces positivas en los centros de rescate a los anticuerpos séricos contra el virus de la ENC puede ser explicada por el consumo de carne de pollos que han sido vacunados contra ENC o consumo de aves que han adquirido directamente el virus vacunal a través de los distintos procedimientos de administración (aerosoles, bebederos) de la vacuna o por el ingreso a los centros de rescate de aves rapaces migratorias, las que podrían facilitar la diseminación de la infección desde los países de origen, hecho que debe ser investigado.

Objective. To detect the presence of blood serum antibodies against Newcastle disease (ND) and Avian influenza (AI) viruses, to understand the contribution of wild birds in transmission of these viruses in Chile. Materials and methods. Sixty-three birds belonging to orders Falconiformes and Strigiformes were analyzed from bird rehabilitation centers in central and south-central Chile. Hemagglutination inhibition (HIA) was used to detect antibodies against the ND virus and further AI virus typing was done by agar gel immune-diffusion (AGID) and ELISA. Results. 14 birds we found (22.2%) with serum antibodies against ND virus; however, there were no blood serum antibodies to AI virus. Conclusions. Birds of prey from rescue centers have been detected positive for serum antibodies against ND virus. Birds of prey could have become positive via direct consumption of chickens vaccinated against ND or from chickens indirectly exposed to the vaccine through different administrative procedures (aerosols, water troughs) or after the admission of migratory birds to rescue centers, which could facilitate the spread of ND from their countries of origin, and should be investigated.

Estandarización de un método de detección molecular del virus influenza (H5N1) de alta patogenicidad / Standardization of a molecular detection method of highly pathogenic avian influenza virus (H5N1)

El virus de la influenza aviar H5N1 de alta patogenicidad mantiene el alerta mundial debido a su potencial zoonótico y pandémico. Surge entonces la necesidad de contar con herramientas para la detección temprana y de esta forma reducir el impacto potencial a la salud humana y animal. En este estudio se estandarizó un método de detección molecular de los genes de la matriz (M), hemaglutinina (H5) y neuraminidasa (N1) del virus de la influenza aviar H5N1 de alta patogenicidad de linaje asiático, mediante transcripción-reversa y reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RRT-PCR). A partir de un ARN viral de referencia cepa A/Vietnam/1203/2004 (H5N1) se construyeron controles positivos mediante clonación de productos de PCR. Los estándares de naturaleza plasmídica se emplearon en la obtención de curvas estándar para determinar los límites de detección de la técnica. La sensibilidad observada para todos los genes analizados fue de 10² copias de ADN/μL. Las curvas mostraron una eficiencia superior al 90%, y R²>0,99. Este método puede ser útil en las campañas de monitoreo del virus en aves migratorias, así como para el tamizaje de muestras clínicas de humanos, en una emergencia de salud.

Highly pathogenic avian influenza virus (HPAI) H5N1 is a global threat due to its zoonotic and pandemic potential. Then, concern arises and the need to have early detection tools to minimize the impact on human and animal health. In this work, a molecular detection method was implemented to detect matrix (M), hemagglutinin (H5) and neuraminidase (N1) genes of HPAI avian influenza virus H5N1, based on real time RT-PCR (RRT-PCR). Positive controls were constructed from reference RNA viral A/Vietnam/1203/2004 (H5N1), cloned into plasmidic vectors and sequenced. Assay detection sensitivity was assessed with standard curves for each gene. Assay sensitivity was 10² DNA copies/μl in all cases. Curves showed amplification efficiency higher than 90% and R²>0.99. This method could be useful for bird monitoring campaigns and as a screening procedure for clinical samples.