ABSTRACT
ABSTRACT Objectives: to describe the use of affinity chromatographies and laboratory serologies in the evaluation of immunodiagnoses during prenatal. Methods: quantitative study, characterized as a descriptive observational research. Data was collected from the records of 46 pregnant women who were in prenatal follow up in the Primary Health Care in a capital in the South of Brazil. The data found was codified and analyzed using descriptive statistics. Results: a mean of 43.1 days was found to take place between the request of laboratory serology and the evaluation by a professional. It was also found that 21.7% of pregnant women did not collect the serologies requested during the first prenatal consultation, and that the affinity chromatographies were only applied in 10.8% of the participants. Conclusions: in spite of the studies for the improvement of prenatal consultations, for the provision of new technologies and for the permanent education offered to the professionals, there are still questions that make the actual implementation of affinity chromatographies more difficult.
RESUMEN Objetivos: describir la utilización de los inmunocromatográficos y de las serologías laboratoriales en la evaluación de inmunodiagnósticos durante el prenatal. Métodos: estudio de abordaje cuantitativo, caracterizado como una investigación observacional del tipo descriptiva. Recogidos datos de los prontuarios de 46 gestantes que realizan acompañamiento prenatal en la Atención Primaria de Salud del Sur de Brasil. Datos obtenidos tuvieron su contenido codificado y analizados mediante estadística descriptiva. Resultados: identificada una mediana de 43,1 días desde la solicitud de las serologías laboratoriales hasta la evaluación profesional. Así, también se verificó que 21,7% de las gestantes no recogieron las serologías solicitadas durante la primera consulta prenatal y que aplicaron inmunocromatográficos en solo 10,8% de los participantes. Conclusiones: sin embargo los estudios para perfeccionamiento de consulta prenatal, provisión de nuevas tecnologías y educación permanente ofertada a los profesionales, aún persisten cuestiones que dificultan la concreta implementación de inmunocromatográficos.
RESUMO Objetivos: descrever a utilização dos testes imunocromatográficos e das sorologias laboratoriais na avaliação de imunodiagnósticos durante o pré-natal. Métodos: estudo de abordagem quantitativa, caracterizado como uma pesquisa observacional do tipo descritiva. Foram coletados dados dos prontuários de 46 gestantes que realizam acompanhamento pré-natal na Atenção Primária à Saúde de uma capital do Sul do Brasil. Os dados obtidos tiveram seu conteúdo codificado e analisados mediante estatística descritiva. Resultados: foi identificada uma média de 43,1 dias desde a solicitação das sorologias laboratoriais até a avalição profissional. Nesse sentido, também foi verificado que 21,7% das gestantes não coletaram as sorologias solicitadas durante a primeira consulta pré-natal e que foram aplicados testes imunocromatográficos em apenas 10,8% dos participantes. Conclusões: apesar dos estudos para o aprimoramento da consulta pré-natal, do fornecimento de novas tecnologias e da educação permanente ofertada aos profissionais, ainda persistem questões que dificultam a concreta implementação dos testes imunocromatográficos.
ABSTRACT
RESUMEN Este estudio evaluó la validez y desempeño del inmunodiagnóstico del virus de la hepatitis C (VHC), con base en estudios publicados en la literatura científica mundial. Se diseñó y validó un protocolo de búsqueda y selección de investigaciones en las fases de la guía PRISMA, se analizaron los parámetros de sensibilidad, especificidad, cocientes de probabilidad, razón de odds y curva ROC, en MetaDisc. Se tamizaron 4602 estudios, de los cuales sólo 545 se realizaron en bancos de sangre y 18 evaluaron la validez diagnóstica de las pruebas para el VHC. La mayoría de los estudios fueron de Europa y Asia, con un 78 % basados en determinación de anticuerpos. Los estudios con detección de anticuerpos se realizaron en 21 483 donantes sanos y 3 145 infectados en quienes se halló una sensibilidad de 97,8 % (IC 95 % = 97,3 - 98,2), especificidad 99,0 % (IC 95 % = 98,9 - 99,2), cociente de probabilidad positivo 75,4 (IC 95 % = 27,2 - 209,2) y negativo de 0,02 (IC 95 % = 0,01 - 0,07) y área bajo la curva de 99,8 %. Se concluye que la detección de anticuerpos presenta excelente validez, desempeño y utilidad diagnóstica para la detección del VHC en donantes de sangre y población general.
ABSTRACT This study evaluated the validity and performance of the immunodiagnosis of the Hepatitis C Virus (HCV), based on studies published in the worldwide scientific literature. A search and selection research protocol was designed and validated in the phases of the PRISMA guide, the parameters of sensitivity, specificity, likelihood ratios, odds ratio, and ROC curve were analyzed in MetaDisc. 4602 studies were screened, of which only 545 were performed in blood banks and 18 evaluated the diagnostic validity of the tests for HCV. Most studies were from Europe and Asia, with 78 % based on antibody determination. Studies with antibody detection were carried out in 21483 healthy donors and 3145 infected patients in whom a sensitivity of 97.8 % (95 % CI = 97.3 - 98.2) was found, 99.0 % specificity (95 % CI = 98.9 - 99.2), positive likelihood ratio 75.4 (95 % CI = 27.2 - 209.2) and negative of 0.02 (95% CI = 0.01 - 0.07) and area under the curve 99.8 %. It is concluded that the detection of antibodies presents excellent validity, performance, and diagnostic utility for the detection of HCV in blood donors and the general population.
ABSTRACT
Resumen Introducción. La malaria continúa siendo una de las enfermedades que causa mayor morbi-mortalidad a nivel mundial. Por esta razón es importante desarrollar herramientas diagnósticas eficaces que se implementen como estrategias para el control de la enfermedad. Objetivos. Estandarizar las condiciones del inmunoensayo enzimático (ELISA), para la detección de IgG específica contra Plasmodium falciparum en sueros de pacientes diagnosticados por gota gruesa con malaria no complicada por P. falciparum, empleando como antígeno un extracto proteico obtenido a partir de cultivo de P. falciparum o un péptido sintético derivado de la proteína de superficie de merozoito GLURP (del inglés: glutamate rich protein). Materiales y métodos. Para la estandarización de la técnica, se utilizaron 22 sueros de pacientes positivos para malaria por P. falciparum y 11 diagnosticados positivos para malaria por P. vivax utilizando la técnica de gota gruesa. Como controles negativos se utilizaron 44 sueros de individuos sanos. Los sueros fueron probados contra extracto de proteínas del parásito y el péptido sintético IMT 94 derivado de la proteína GLURP, para evaluar las concentraciones y las diluciones óptimas de cada componente del sistema. Para la validación de la técnica se utilizaron 251 sueros de pacientes positivos para P. falciparum y 44 sueros de individuos sanos, diagnosticados utilizando la técnica de gota gruesa. Resultados. La técnica estandarizada con el péptido sintético permitió observar diferencia significativa en el reconocimiento de sueros de pacientes, controles positivos y negativos por los antígenos (extracto de proteínas y péptidos sintéticos). Conclusiones. La metodología usada permite identificar la respuestas inmune específica contra P. falciparum.
Abstract Introduction. Malaria continues being one of the diseases causing the greatest morbi-mortality around the world. For that reason, effective diagnostic tools must thus be developed which can be used in strategies for controlling the disease. Objectives. To standardise enzyme- linked immunosorbent assay (ELISA) conditions for detecting Plasmodium falciparum specific IgG in sera from patients diagnosed by thick smear as suffering non-complicated malaria caused by P. falciparum. A protein extract obtained from P. falciparum culture or a synthetic peptide derived from glutamate rich protein (GLURP) merozoite surface protein would be used as antigen. Materials and Methods. 22 serum samples from patients diagnosed as suffering from P. falciparum malaria, 11 serum samples from patients diagnosed as suffering from P. vivax and 44 from healthy donors, diagnosed by using the thick smear tecnique were used for standarising the technique. Serum samples were tested against parasite protein extract and GLURP- derived IMT 94 synthetic peptide for standardisign optimum dilutions and concentrations for each component in the system. 251 serum samples from patients diagnosed as suffering from P. falciparum malaria and 44 from healthy donors diagnosed by using the thick smear tecnique were used to validate the technique. Results. The technique led to significant differences being observed in antigens (protein extract and synthetic peptides) recognising serum from positive and negative patients and controls. Conclusions. The methodology used led to identifying specific immune response against P. falciparum.
Subject(s)
Humans , Malaria , Plasmodium falciparum , AntibodiesABSTRACT
Brucellosis is a zoonose produced by bacterial species from the Brucella genus. Its isolation and identification in food using classical microbiological techniques is not practical due to its slow growth rate. Therefore, it is necessary to establish fast and specific methods for the detection of the bacteria in food. The goal of this work was the production and characterization of monospecific polyclonal antibodies in chicken (IgY) against synthetic peptides from Brucella abortus OMP25 and BP26 proteins, suitable for an antigen-capture assay. Conformational as well as antigenic predictions were performed using the ANTHEPROT package. Chemical synthesis was carried out by the multiple manual synthesis using the t-boc strategy. The peptides were used as antigens for the preparation of polyclonal antibodies in chicken. Experimental animals produced specific antibodies against the OMP25 and BP26 peptides constructs determined by ELISA and MABA assays showing correspondence between the predictive study and the immunogenicity obtained in chicken. The IgY proved to be able to recognize B. abortus by MABA assays. The binding activity and specificity of antibodies was determined by Western blot with cell extract from B. abortus. In this study, we demonstrated that OMP25 and BP26 peptides constructs are good candidates for production of specific IgY antipeptide antibodies capable of recognizing proteins from sonicated B. abortus strain S19, indicating the potential usefulness of the IgY antibody for development of immunoassays for detection of Brucella abortus.
La brucelosis es una zoonosis producida por especies del género Brucella. El aislamiento e identificación de la bacteria en alimentos usando las técnicas clásicas de microbiología no es práctico debido a su lenta tasa de crecimiento. Por lo tanto, es necesario establecer métodos rápidos para la detección de la bacteria en alimentos. En el presente trabajo se desarrollaron y caracterizaron anticuerpos policlonales monoespecíficos en gallinas (IgY) contra péptidos sintéticos de las proteínas OMP25 y BP26 de Brucella abortus, que puedan ser utilizados en un ensayo de captura. Para ello, se realizaron estudios conformacionales y de predicción de epítopes en la selección de los péptidos, los cuales se utilizaron como antígenos para la producción de las IgY. Los animales desarrollaron anticuerpos específicos contra los péptidos, mostrando correspondencia entre los estudios predictivos y la inmunogenicidad obtenida. Las IgY reconocieron a B. abortus en un ensayo de MABA y la actividad de unión y especificidad fue determinada por western blot con extracto celular de B. abortus. En este estudio, demostramos que los péptidos de las proteínas OMP25 y BP26 de B. abortus son buenos candidatos para la producción de anticuerpos IgY especificos capaces de reconocer proteínas de extracto de B. abortus cepa S19, indicando el potencial uso de anticuerpos IgY para el desarrollo de inmunoensayos para la detección de Brucella abortus.
ABSTRACT
La fasciolosis es una parasitosis cosmopolita de importancia médico-veterinaria ocasionada por Fasciola hepatica, que afecta al ganado ovino, caprino y vacuno; y accidentalmente al hombre ocasionando una infección endemo-epidémica de difícil diagnóstico. El objetivo fue desarrollar un ELISA sándwich indirecto, empleando 3 anticuerpos, para identificar antígenos de secreción-excreción de Fasciola hepatica (ESFh). Para el ELISA se emplearon anticuerpos policlonales de ratón anti ESFh como anticuerpos de captura, anticuerpos policlonales de conejo anti ESFh como anticuerpos de detección, a las concentraciones de 10 y 5 μg/mL, respectivamente. Como conjugado se emplearon anticuerpos monoclonales de ratón anti-inmunoglobulinas totales de conejo ligado a peroxidasa 1/1000). Se analizaron 31 muestras de heces de ganado ovino y los resultados se compararon con los obtenidos por el examen coproparasitológico directo (CD) y contrainmunoelectroforesis (CIEF). El límite de detección obtenido para ELISA sándwich indirecto fue 100 ng/mL. La prueba presentó una sensibilidad de 100%, especificidad de 96.6% y valores predictivos positivos y negativos de 50% y 96.6% respectivamente; con relación al examen CD. Al comparar ELISA tipo sándwich indirecto con CIEF se obtuvo una especificidad de 93.5% y un valor predictivo negativo del 100%. Se concluye que la prueba de ELISA sándwich indirecto diseñada es capaz de detectar antígenos metabólicos en muestras de heces de ovino y se puede utilizar para el diagnóstico Fasciola hepatica.
Fasciolosis is a cosmopolitan parasitosis medical-veterinary importance caused by Fasciola hepatica, which affects sheep, goats and cattle; and it affects man accidentally causing an epidemic-endemic infection difficult to diagnose. The aim was to develop an indirect sandwich ELISA with 3 antibodies for detecting excretory-secretory antigens of Fasciola hepatica (ESFh). For the development of indirect sandwich ELISA were used, as capture antibody, mouse polyclonal antibodies anti ESFh and polyclonal antibodies rabbit anti-ESFh as detection antibody, at the concentrations of 10 and 5 μg/mL respectively. The conjugate used was mouse monoclonal anti- total immunoglobulins rabbit linked to peroxidase (1/1000). Were analized 31 sheep fecal samples, and the results were compared with those obtained by direct coproparasitological examination (DC) and counterimmunoelectrophoresis (CIEP). The detection limit obtained for indirect sandwich ELISA was 100 ng/mL. The test had a 100% sensitivity, 96.6% specificity, positive and negative predictive values of 50% and 96.6% respectively, in relation to DC test. Comparing with CIEP the specificity obtained for indirect sandwich ELISA was 93.5% and a negative predictive value of 100%. We concluded that indirect sandwich ELISA designed is able to detect metabolic antigens in ovine feces samples and can be used for Fasciola hepatica diagnosis.
ABSTRACT
Resumen Se estandarizó una prueba de ELISA para la detección de anticuerpos anti-F. hepatica en leche de bovinos. Se emplearon 80 muestras, de las cuales 44 se usaron como control positivo y 36 como control negativo. Como control de reactividad cruzada se utilizaron muestras de bovinos que presentaron en las heces huevos de un paramphistomido. La sensibilidad y especificidad diagnóstica de la prueba fueron del 80% y del 72,2% respectivamente, con un intervalo de confianza del 95%. Los resultados obtenidos son comparables con los reportados en estudios realizados en otros países. Se propone la prueba estandarizada como herramienta diagnóstica alternativa y de tamizaje en estudios epidemiológicos de fasciolosis.
Abstract We standardized an ELISA test for the detection of anti-F. hepatica antibodies in bovine milk. A total of 80 samples were used, of which 44 were used as positive controls and 36 as negative controls. Milk samples from bovines presenting paramphistomidae eggs in feces were used as cross-reactivity controls. Sensitivity and specificity of the diagnostic test were 80 and 72,2%, respectively, with 95% confidence interval. These results are comparable with those reported in studies conducted in other countries. We propose this standardized test as an alternative diagnostic and screening tool in epidemiological studies of fasciolosis.
Resumo Estandardizou-se um teste de ELISA para a detecção de anticorpos anti Fasciola hepatica no leite de bovinos. Empregaram-se 80 amostras, das quais 44 usaram-se como controle positivo e 36 como controle negativo. Como controle da reatividade cruzada utilizaram-se amostras de bovinos que apresentaram ovos de um paramphistomido nas fezes. A sensibilidade e especificidade diagnosticam do teste foi de 80 e 72% respectivamente, com um intervalo de confiança de 95%. Os resultados obtidos são comparáveis com os reportados em estudos realizados em outros países. Propõe-se o teste estandardizado como ferramenta diagnostica alternativa e de tamisado em estudos epidemiológicos de fasciolíase.
ABSTRACT
La toxocariasis o síndrome de larva migrans visceral es causada por un nemátode del género Toxocara, parásito de animales domésticos (perros y gatos). El hombre es un hospedador accidental, al contaminarse con huevos embrionados del parásito. Las larvas invaden la pared intestinal y son transportadas a vísceras, musculatura o globo ocular, donde son atacadas por una reacción granulomatosa del hospedador. El diagnóstico de la enfermedad es complicado debido a la sintomatología inespecífica y que las larvas solo pueden ser evidenciadas por biopsias, que es un método invasivo. Los métodos inmunológicos son una alternativa, en tal sentido en esta investigación se planteó como objetivo estandarizar una técnica inmunológica para la determinación de anticuerpos anti-T.canis para el diagnóstico de toxocariasis humana. Los parásitos adultos expulsados por cachorros infectados se identificaron por microscopia óptica y electrónica, se obtuvieron los huevos, los cuales se hicieron embrionar para la liberación de las larvas, y éstas se mantuvieron en cultivo, para luego obtener y purificar los antígenos de excreción/secreción. Se estandarizaron las condiciones de reacción de la ELISA, obteniéndose como concentraciones óptimas 2 μg/mL de antígeno, dilución de suero y conjugado fueron de 1/400 y 1/20000 respectivamente. Los índices diagnósticos fueron: sensibilidad 100%, especificidad 98,9%, valor predictivo positivo 94,4% y valor predictivo negativo 100%. Con la técnica estandarizada se pudieron diferenciar los sueros de pacientes con Toxocariasis, con respecto a los de pacientes con otras helmintiasis y muestras de suero de individuos sanos, logrando el diagnóstico de Toxocariasis humana.
The toxocariasis or visceral larva migrans syndrome is caused by a nematode of the genus Toxocara, a parasite of domestic animals (dogs and cats). Man is an accidental host, by oral contamination with embryonated eggs of the parasite. The larvae invade the intestinal wall and are transported to the viscera, muscle or eyeball, where they are attacked by a granulomatous reaction of the host. The diagnosis of the disease is complicated by nonspecific symptoms and the larvae can only be demonstrated by biopsy which is an invasive method. Immunological methods are an alternative. The objective of this study was standardizing an immunological technique for the determination of anti-T. canis antibodies for diagnosis of human Toxocariasis. We identified by optical and electron microscopy, adult worms expelled by infected pups and we obtained eggs, which became embryos that released the larvae. These were maintained in culture. Excretion/secretion antigens (E/S) were purified from the culture. Subsequently, we standardized reaction conditions of the ELISA technique, obtaining as optimal concentrations 2 mg/mL of antigen, serum dilution and conjugate 1/400 and 1/20000 respectively. With the standard technique we evaluated 17 serum samples from patients with confirmed Toxocariasis, 50 patients with other helminth infections and 40 healthy individuals. The diagnostic indexes were sensitivity 100%, specificity 99%, 94% positive predictive value and negative predictive value 100%. The diagnostic indexes obtained show that the ELISA using excretion/secretion antigen of the parasite is suitable for immunodiagnosis of human Toxocariasis.
Subject(s)
Humans , Cats , Animals , Dogs , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Toxocariasis/immunology , Toxocariasis/parasitology , Toxocariasis/transmission , Hypodermyiasis , Immunologic TestsABSTRACT
A fin de evaluar la utilidad de la prueba de avidez de los anticuerpos IgG para el reconocimiento de la fase de infección de la toxocariosis en individuos con alto nivel de exposición al parásito, se estudiaron 142 niños asintomáticos de ambos sexos, de 1-6 años de edad, residentes en la ciudad de Resistencia (NE de Argentina), con eosinofilia > 10% y con exámenes coproparasitológicos negativos para helmintos. Se realizó la prueba de ELISA-IgG en todos los casos y en aquellos con títulos > 1/80 se determinó el índice de avidez de IgG. De los 142 niños estudiados, 82 (57,7%) resultaron positivos a la prueba de ELISA-IgG pero sólo 6 (7.3%) tuvieron Índice de avidez menor al 50%, cinco tenían entre 1 y 2 años de edad y el restante 5 años (mediana: 1,5 años). Cuatro tuvieron títulos moderados de IgG (entre 1/80 y 1/640) y 2 títulos altos (entre 1/1280 y 1/10240). Los otros 76 niños con índice de avidez mayor al 50% tenían entre 18 meses y 5,5 años de edad (mediana: 4 años), 44 tuvieron títulos serológicos moderados y 32, títulos altos. Los resultados hallados en este trabajo reafirman que la población de la ciudad de Resistencia presenta altos niveles de exposición a T. canis y que la determinación del índice de avidez de IgG resulta útil para el diagnóstico diferencial entre toxocariosis reciente o tardía, aunque es más efectiva para descartar una infección reciente que para confirmarla.
In order to evaluate the usefulness of the IgG avidity test to recognize the phase of T. canis human infection in individuals highly exposed to the parasite, 142 asymptomatic children of both sexes, 1-6 years old, living in Resistencia (Northeastern Argentina), with eosinophilia > 10% and without helminthic intestinal infestation were studied. ELISA-IgG test was performed in all cases, and in those with serological titers > 1/80 IgG avidity was also measured. Out of 142 children studied, 82 (57.7%) were positive to ELISA test, but only 6 (7.3%) had an IgG avidity index < 50%. Five of them were aged between 1 to 2 years and the other was 5 years old (median 1.5 years). Four had moderate serological titers (between 1/80 and 1/640) and two had high titers (between 1/1280 and 1/10240). The other 76 children with IgG avidity indexes > 50% were between 18 months and 5.5 years old (median 4 years), 44 had moderate serological titers and 32 had high titers. The results found in this study reaffirm that the population in Resistencia city is highly exposed to T. canis infection and that the IgG avidity test may be helpful in differential diagnosis of recent and past toxocariosis, though it would be more effective to rule out a recently acquired infection than to confirm it.
Com o fim de avaliar a utilidade da prova de avidez dos Acs IgG para o reconhecimento da fase de infecção de toxocaríase em indivíduos com alto nível de exposição ao parasita, foram estudadas 142 crianças assintomáticas de ambos os sexos de 1 a 6 anos de idade, residentes na cidade de Resistencia (noreste argentino) com eosinofilia > 10% e com exames coproparasitológicos negativos para helmintos. Foi realizada a prova Elisa-IgG em todos os casos e naqueles com títulos > 1/80 foi determinado o índice de avidez de IgG. Das 142 crianças estudadas, 82 (57,7%) resultaram positivas à prova de Elisa-IgG porém só 6 (7,3%) tiveram índice de avidez < a 50%, 5 tinham entre 1 e 2 anos de idade e as outras 5 anos (média: 1,5 anos). Quatro tiveram títulos moderados de IgG (entre 1/80 e 1/640) e 2 títulos altos (entre 1/1280 e 1/10240). As outras 76 crianças com índice de avidez maior a 50% tinham entre 18 meses e 5,5 anos de idade (média: 4 anos), 44 tiveram títulos sorológicos moderados e 32 títulos altos. Os resultados encontrados neste trabalho reafirmam que a população da cidade de Resistencia apresenta altos níveis de exposição à T. canis e que a determinação do índice de avidez de IgG resulta útil para o diagnostico diferencial entre toxocaríase recente ou tardia, embora seja mais efetiva para descartar uma infecção recente que para confirmá-la.
Subject(s)
Humans , Male , Female , Infant , Child, Preschool , Child , Immunoglobulin G , Immunologic Tests , Larva Migrans, Visceral , Toxocariasis , Zoonoses , Parasitology , Toxocariasis/parasitologyABSTRACT
Los Paragonimus son trematodos que habitualmente viven en los pulmones de mamíferos carnívoros y omnívoros, entre ellos el hombre. En el oriente venezolano se encuentra el único foco de Paragonimus sp. donde Didelphis marsupialis es el único reservorio demostrado hasta ahora. Con el fin de tener herramientas de inmunodiagnóstico que detecten la presencia de Paragonimus sp. en esta especie, se elaboraron varios reactivos para realizar un ensayo inmunoenzimático ELISA. Entre ellos se obtuvo un antígeno crudo soluble de vermes adultos de Paragonimus y una inmunoglobulina de gallina anti-IgG de Didelphis marsupialis. Los mismos se capturaron en la localidad de Aguas Blancas, municipio Montes, estado Sucre, Venezuela, y se obtuvieron muestras sanguíneas; en el caso de estar infectados, los vermes adultos se extrajeron del pulmón. Los parásitos se homogenizaron y ultracentrifugaron para obtener la fracción soluble del parásito (FSPA) como antígeno para el ELISA y Western blot y detectar los anticuerpos en los Didelphis marsupialis. El análisis electroforético mostró 22 moléculas entre 6 y 82 kDa; por Western blot se presentó un reconocimiento antigénico de 8 moléculas siendo las de 112 kDa y 268 kDa las más reconocidas por los sueros positivos. Los sueros negativos no reconocieron ninguna proteína. La producción de IgY en gallinas permitió desarrollar las técnicas de inmunodiagnóstico para la búsqueda de anticuerpos específicos anti-Paragonimus sp. en Didelphis, cuya aplicación permitirá establecer la vigilancia epidemiológica de estos reservorios en áreas endémicas sin sacrificio de los mismos.
Paragonimus are trematodes that normally live in the lungs of carnivorous and omnivorous mammals such as humans. An outbreak of Paragonimus sp. in which Didelphis marsupialis was the only wild reservoir incriminated was described in eastern Venezuela. In order to have immunological tools to detect the presence of Paragonimus sp. in this reservoir, a whole antigen of the adult worm of this parasite was elaborated. Didelphis marsupialis were captured in the locality of Aguas Blancas, Montes municipality, Sucre state, Venezuela, from which blood samples were obtained and a search for worms was performed in lungs. Worms were homogenized and ultracentrifugated to obtain FSPA to perform immunoassay (ELISA) to detect antibodies in opossums. The electrophoresis analysis showed a pattern of 22 molecules between 6 and 82 kDa; by western blot, the antigenic recognition of 8 antigenic molecules appeared,112 kDa and 268 kDa molecules being the most strongly recognized by positive sera. The negative sera did not recognize any band. The production of IgY in chicken enabled the development of reagents capable of performing a standard immunodiagnosis technique to find specific anti-Paragonimus sp. in Didelphis marsupialis in order to establish epidemiological surveillance of these reservoirs in endemic areas.
Subject(s)
Antigens , Didelphis , Immunologic Tests , Paragonimus , Venezuela , Allergy and Immunology , Didelphis/immunologyABSTRACT
La baja sensibilidad de la coprología en el diagnóstico de la fasciolosis humana ha motivado el desarrollo del inmunodiagnóstico. El antígeno de excreción-secreción de adultos de Fasciola hepatica (AFhES) en ELISA es adecuado para el screening, aunque sobrestima la prevalencia; cuando se utiliza en Western blot (WB) no muestra un buen reconocimiento de sus componentes. Para lograr una mejor preparación, se ultrafiltró el antígeno a través de membranas YM de 10, 30 y 50 kDa. Los retenidos (R) se usaron en ELISA y WB. La mayor discriminación entre positivos y negativos en ELISA y la mejor resolución en el reconocimiento al antígeno en WB, se logró con la fracción R50. Se destacan las moléculas de 9, 14, 65 kDa y la región alrededor de 27 kDa, detectadas con alta sensibilidad (90 al 100% de los sueros positivos) y especificidad (por ningún negativo). Al ensayar 29 sueros con otras parasitosis, sólo el de una persona con Paragonimus sp. reaccionó a la molécula de 65 kDa. ELISA-AFhES con todas las fracciones filtradas fue útil, facilitando el screening de la infección, aunque con R50 se obtuvieron los mejores resultados. La comprobación de los casos positivos se logra eficientemente utilizando la fracción R50 del AFhES en WB.
Low sensitivity in the coprologic diagnosis of human fasciolosis has motivated the development of immunodiagnosis. The excretion-secretion antigen from Fasciola hepatica adult worms (ESAFh) with ELISA is suitable for screening, although it overestimates its prevalence. However, when tested by Western blot (WB) it does not show any optimal recognition of its components. In order to obtain a better preparation, the antigen was ultrafiltered by YM 10, 30 and 50 kDa membranes. Retentates (R) were used by ELISA and WB. A higher discrimination between positives and negatives by ELISA and a better resolution in the antigen recognition in WB was achieved with the R50 fraction. Molecules of 9, 14, 65 kDa, and region about 27 kDa were detected with high sensitivity (90 to 100% of positive sera) and specificity (none of the negative sera). Among the 29 sera with other parasitic diseases, only one with Paragonimus sp. reacted to the 65 kDa molecule. ELISA-ESAFh with all filtrated fractions was useful, facilitating the infection screening even though the best results were obtained with R50. The verification of positive cases is efficiently achieved using the R50 of the ESAFh fraction by WB.
Subject(s)
Humans , Fasciola hepatica/immunology , Antigens, Helminth/immunology , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Ultrafiltration , Blotting, WesternABSTRACT
Resumen El objetivo de este estudio fue determinar la frecuencia diagnóstica de las micosis sistémicas en el Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel (INHRR) durante 5 años (2002-2006). Se revisaron retrospectivamente las historias micológicas en el período señalado y sólo se tomaron en cuenta los diagnósticos iniciales de las micosis detectadas, descartando los controles sucesivos. Las muestras (suero y líquido cefalorraquídeo) fueron procesadas por las técnicas de inmunodifusión doble y aglutinación con látex. De 7653 muestras, 409 (5,3%) resultaron positivas para el diagnóstico de micosis sistémicas. 39% (2990/7653) procedían de pacientes con VIH/SIDA, con 203/2990 (6,8%) casos positivos y 4663/7653 (61%) procedían de pacientes sin VIH/SIDA, con una positividad general de 4,4% (206/4663 casos). La histoplasmosis fue la micosis más frecuente en los pacientes con SIDA (67%), seguida de la criptococosis con 26,6%. La paracoccidioidomicosis se diagnosticó con mayor frecuencia en pacientes sin VIH/SIDA (54,4%), seguida de la histoplasmosis (32%) y la criptococosis (11,2%). La vigilancia epidemiológica de las micosis es esencial para fomentar los conocimientos sobre las mismas. El Departamento de Micología del INHRR funciona como centro de referencia para el diagnóstico micológico y realiza una parte importante de los estudios de estas enfermedades a escala nacional. La presentación de las revisiones de casuística en forma sistemática contribuye con el conocimiento de estas patologías en nuestro país.
Abstract The purpose of this study was to determine the diagnostic frequency of systemic mycoses at the Mycology Department of the Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel (INHRR) during a five-year period (2002-2006). Mycology case histories during the mentioned period were revised retrospectively and only the initial diagnoses of the mycoses detected were considered, discarding successive controls. Samples (serum and spinal fluid) were processed by double immunodiffusion and latex agglutination techniques. Of 7653 samples, 409 (5,3%) were positive for systemic mycoses. Thirty nine percent (2990/7653) came from HIV/AIDS patients, with 203/2990 (6,8%) positives, and 4663/7653 (61%) from non HIV/AIDS patients, with a 4,4% (206/4663) general positivity. Histoplasmosis was the most frequent mycosis in AIDS patients (67%), followed by cryptococcosis with 26,6%. Paracoccidioidomycosis was diagnosed more frequently in non HIV/AIDS patients (54,4%), followed by histoplasmosis (32%) and cryptococcosis (11,2%). Epidemiological surveillance of mycoses is essential to improve knowledge regarding them. The Mycology Department of the INHRR functions as a reference center for mycological diagnosis and performs an important part of these studies at a national scale. The systematic presentation of case revisions contributes to the knowledge of these pathologies in our country.
ABSTRACT
La fasciolosis humana es una entidad poco frecuente reportada previamente 8 veces en Venezuela, de personas provenientes del centro y los estados occidentales. Se presenta el caso de un paciente masculino de 25 años, natural y procedente del Estado Bolívar, donde practica equitación y supervisa tareas de corral del ganado equino y bovino. La enfermedad actual se inicia con diarreas desde los 14 años, acompañada de persistente eosinofilia. ELISA e "Immunoblot", resultaron francamente positivos al antígeno de excreción- secreción de Fasciola hepática. Ante persistente dolor epigástrico, se practicó eco-endoscopia, resultando en la visualización de dilatación quística del ducto pancreático con una estructura interna probablemente correspondiente a un parásito. El examen parasitológico del contenido duodenal y heces reportó huevos de Fasciola hepática en este último material. Se administró tratamiento con Bithionol luego de lo cual disminuyó la eosinofilia y hubo franca mejoría clínica. Es el primer caso de fasciolosis humana proveniente del sureste del país, donde la fasciolosis bovina o humana no había sido descrita y en el cual además, ocurrió una localización ectópica pancreática de difícil diagnóstico clínico.
Human fasciolosis in Venezuela is an infrequent disease, reported only 8 times previously in persons coming from the center and the western states of the country. The case of a 25 years old masculine patient from Bolivar State, where he practices equitation and supervises tasks of corral of equine and bovine cattle is reported. The disease began with diarrhea at 14 years old, accompanied by persistent eosinofilia. ELISA and "Immunoblot" were strongly positive to excretion-secretion Fasciola hepatica antigen. Given the presence of persistent epigastric pain, echo-endoscopy was practiced, resulting in the visualization of cyst expansion of the pancreatic duct with an internal structure probably corresponding to a parasite. The parasitologic examination of the duodenal content and feces reported Fasciola hepatica eggs this last material. After treatment with Bithionol, eosinofilia diminished and there was frank clinical improvement. It is the first case of human fasciolosis of the southeastern part of the country, where bovine or human fasciolosis had not been described in which additionally, an ectopic pancreatic location of difficult clinical diagnosis occurred.
ABSTRACT
El Trasudado Mucoso Oral (TMO) es un fluido biológico que puede obtenerse mediante una almohadilla absorbente colocada entre la encía y la mejilla inferior y que contiene 20% de IgG, 40% de IgA y 10% de IgM en relación al suero. El objetivo del trabajo fue analizar la confiabilidad del TMO como muestra biológica para la detección de anticuerpos en Chagas y Toxoplasmosis. Sueros de pacientes ambulatorios, embarazadas y voluntarios sanos fueron estudiados para Chagas y Toxoplasmosis empleando Inmunofluorescencia, ELISA y Hemaglutinación. Las muestras de TMO fueron estudiadas por ELISA y los resultados comparados con los métodos de referencia para determinar sensibilidad (S), especificidad (E), valor predictivo positivo (VPP) y valor predictivo negativo (VPN). En Chagas, la sensibilidad osciló entre 91% y 100% con tres diferentes equipos ensayados, mientras la especificidad varió entre 90 y 100%, el VPP entre 95% y 96% y el VPN entre 97% y 99%. En Toxoplasmosis no se detectaron resultados falsos positivos (S 95%, E 100%, VPP 100% y VPN 98%). Estos resultados sugieren que el TMO puede ser un fluido biológico alternativo adecuado para estudios inmunoepidemiológicos y también servir como screening en el diagnóstico y prevención de la transmisión vertical de enfermedades infecciosas.
Oral mucosal transudate (OMT) is a biological fluid that can be obtained by an absorbent pad placed between lower cheek and gum, and contains20% IgG, 40% IgA and 10% IgM comparing with serum. The aim of this work was to analyse the performance of OMT as biological material to detect antibodies in Chagas' disease and Toxoplasmosis. Sera of ambulatory patients, pregnant women and healthyvolunteers were tested for Chagas and Toxoplasmosis employingImmunofluorescence, ELISA andHemagglutination.OMT of the same patients were assayed by ELISA, and the results compared to determinate sensibility, specificity and predictive value. In Chagas serology, three different commercial kits were assayed. The sensibility ranged from 91 to 100%,specificitybetween 90 and 100%. The predictive values oscillate between 95% and 99%. The studies in Toxoplasmosis did not shown false positive results. The sensibility was 95%, specificity 100% and the predictive values between 98% and100%. Sera from neonates born from Toxoplasmosis infected mothers were also studied, and the results were in agreement with reference tests. These results suggest that OMT could be a suitable alternative biological fluid in immunoepidemio-logical surveys, and also as screening test in the diagnosis and prevention of materno-fetal transmission of infectious diseases.