ABSTRACT
Un paso crucial en el desarrollo de un inmunosensor piezoeléctrico para la detección de tuberculosis (TB), es la selección y obtención de los inmunoreactivos empleados en el inmunoensayo y la estrategia para la biofuncionalización del transductor. Diversos estudios han reportado el uso del antígeno proteico 38kDa (Ag38kDa) de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) como un buen biomarcador de la enfermedad y el cumplimiento de las características físicas y bioquímicas para ser inmovilizado por monocapas autoensambladas (SAMs), en la superficie del electrodo de oro de cristales piezoeléctricos. Un inmunosensor piezoeléctrico desarrollado a partir de un antígeno nativo purificado de Mtb podría ser un método alternativo simple para la detección de Mtb con ventajas de rapidez y reusabilidad, contribuyendo al control y el tratamiento oportuno de la enfermedad. En este estudio se presenta el proceso de purificación del Ag38kDa a partir de proteínas de secreción filtradas de cultivo (CFP) de Mtb para ser usado como inmunoreactivo con potencial aplicación en la detección de Mtb con inmunosensores piezoeléctricos. Se obtuvieron cristales funcionalizados mediante la técnica modificada de monocapas autoensambladas (SAMs), con el antígeno nativo purificado y CFP. Las superficies biofuncionalizadas fueron caracterizadas cualitativamente con microscopía de fuerza atómica (AFM) para validar las condiciones de optimización del protocolo de inmovilización con antígenos de secreción de Mtb. Estos cristales modificados pueden ser acoplados a un sistema de caracterización de un inmunosensor piezoeléctrico para la detección de Mtb mediante un inmunoensayo competitivo directo.
The selection and procurance of the immunoreagents used in the immunoassay and biofunctionalisation transducer strategy, are a key in the piezoelectric immunosensor development for the detection of tuberculosis (TB). Many have reported the use of 38kDa protein antigen (Ag38kDa) from Mycobacterium tuberculosis (Mtb) such as good biomarker of TB disease and compliance with physical and biochemical characteristics to be immobilized by self-assembled monolayers (SAMs), in the gold electrode of piezoelectrics crystals surfaces. A piezoelectric immunosensor developed from purified native antigens of Mtb may be an alternative simple method for detection of Mtb with speed and reusable advantages, contributing to the control and early treatment of disease. In this paper, the purification process of Ag38kDa Mtb from secretory proteins filtered culture (CFP) from Mtb is presented as an immunoreactive with potential application in the detection of Mtb by piezoelectric immunosensors. Functionalized crystals were obtained by using the modified self-assembled monolayers (SAMs) technique, with purified native antigen and CFP. The functionalized surfaces were qualitatively characterized using atomic force microscopy (AFM) in order to validate the immobilization protocol optimal conditions for secretion antigens from Mtb. These modified crystals may be coupled to piezoelectric immunosensor characterization system for detecting of Mtb by a direct competition immunoassay.
ABSTRACT
Introducción: Para la determinación de 25 hidroxivitamina D, (25OHD) existen varias opciones metodológicas. La falta de estandarización entre las mismas puede arrojar resultados disímiles que podría acentuarse en el caso de pacientes suplementados con distintas formas de la vitamina D. Objetivo: comparar tres metodologías para la cuantificación de 25OHD y evaluar los resultados de 25OHD de sujetos sin tratar con los que reciben ergocalciferol (D2), colecalciferol (D3), o ambos. Materiales y métodos: Se analizaron 82 muestras por QLIA de Abbott Diagnostics (Architect i1000), EQLIA de Roche Diagnostics (Cobas 601) y RIA DiaSorin. Las muestras se distribuyeron en cuatro grupos: G1: sin tratamiento previo; G2: tratados con D2; G3: tratados con D3 y G4: tratados con D2 + D3. Resultados: En el total de las muestras se observó una diferencia significativa entre las medias de 25OHD evaluadas por los tres métodos (F: 14,80, p < 0,0001), siendo similares entre RIA y EQLIA, pero menores con QLIA (p < 0,05). En los cuatro grupos estudiados las medias con RIA y EQLIA fueron comparables en presencia o no de tratamiento. En G2 se observó una tendencia significativa a niveles más bajos con QLIA, respecto de los otros dos métodos (p = 0,0003), y en G4 también (p < 0,02). En G3 dicha diferencia, aunque significativa (p < 0,05), fue menos marcada. En los gráficos de diferencias, Bland y Altman, QLIA subestimó las concentraciones medidas en comparación con EQLIA, ? media de RIA: - 5,69 a - 14 ng/mL). Esto no se visualizó en la comparación de EQLIA y RIA (?: - 3,45 a 0,47 ng/mL). Conclusiones: Existen diferencias metodológicas en el diseño y especificidad de los inmunoensayos que reconocen en distinta proporción la 25OHD y sus metabolitos. Se podría clasificar de manera diferente la suficiencia o insuficiencia de vit D, dependiendo de la metodología utilizada. Los resultados sugieren que RIA y EQLIA arrojan mediciones comparables en pacientes sin tratamiento, tratados con vitamina D2, D3 o ambas. Rev Argent Endocrinol Metab 51:15-24, 2014 Los autores declaran no poseer conflictos de interés.
Introduction: There are several methodological options for 25 hydroxyvitamin D (25OHD) measurement. The lack of standardization across methods can lead to discrepant results, which could be accentuated in the case of patients supplemented with different forms of vitamin D. Objective: To compare three methods for 25OHD quantification and to compare the 25OHD results from untreated subjects with those obtained from subjects receiving ergocalciferol (D2), cholecalciferol (D3), or both. Materials and Methods: We analyzed 82 samples by QLIA of Abbott Diagnostics (Architect i1000), EQLIA Roche Diagnostics (Cobas 601) and RIA DiaSorin. Samples were divided into four groups: G1: untreated; G2: treated with D2, G3 treated with D3 and G4: treated with D2 + D3. Results: Considering all samples, there was a significant difference between mean 25OHD results obtained by the three methods (F: 14.80, p < 0.0001), being similar with RIA and EQLIA but lower with QLIA (p < 0.05). In the four groups studied, RIA and EQLIA results were similar in the presence or absence of treatment. In G2, there was a significant trend to lower levels with QLIA, compared to the other two methods (p = 0.0003), and the same trend was observed in G4 (p < 0.02). This difference in G3, albeit significant (p < 0.05), was less marked. Bland and Altman showed that QLIA underestimated the measured concentrations compared with EQLIA, average ? RIA: - 5.69 to - 14 ng/mL). This was not observed when comparing EQLIA vs. RIA (?: - 3.45 to 0.47 ng/mL). Conclusions: There are methodological differences in the design and specificity of immunoassays, which recognize 25OHD and its metabolites in different proportions. Therefore, patients might be classified as 25OHD sufficient or insufficient depending on the methodology used. Results suggest that RIA and EQLIA measurements are comparable in untreated patients and in patients treated with vitamin D2, D3 or both. Rev Argent Endocrinol Metab 51:15-24, 2014 No financial conflicts of interest exist.
ABSTRACT
Las enfermedades autoinmunes (EA) son provocadas por un daño intrínseco del sistema inmunológico como consecuencia de la pérdida de la autotolerancia que condiciona respuestas anormales frente estructuras propias, lo que genera un daño tisular que perdura en el tiempo. Las causas son multifactoriales y la predisposición genética es poligénica, lo que provoca proteínas diferentes en las células inmunológicamente activas o en las orgánicas. Puesto que el espectro de enfermedades es muy amplio, se clasifican en sistémicas cuando los anticuerpos atacan antígenos presentes en más de un órgano o tejido, y en órgano-específicas cuando el daño involucra a un tejido en particular. Para un diagnóstico correcto de laboratorio de las EA, hay que partir de la identificación de los síntomas clínicos del paciente, su asociación con cada enfermedad y su correspondencia con la detección de los autoanticuerpos. Eso hace que los exámenes de laboratorio sean de gran importancia en la evaluación de los pacientes ya que pueden confirmar el diagnóstico, estimar la gravedad de la enfermedad, ayudar a establecer un pronóstico y ser útiles para dar seguimiento a su evolución. Los componentes del estudio en el laboratorio deben incluir un hemograma completo con recuento diferencial de leucocitos, un panel metabólico completo, marcadores inflamatorios, el estudio de los autoanticuerpos por diversos métodos, las nuevas tecnologías Multiplex y la citometría de flujo. En esta mirada al diagnóstico se comentan algunos de los componentes y se abordan elementos de juicio sobre su utilidad clínica
Autoimmune diseases (AD) are caused by an intrinsic damage of the immune system as a consequence of the loss of autotolerance, conditioning abnormal responses against proper structures giving a lasting in time tissue damage. Causes are multifactorial and the genetic predisposition is polygenic, provoking protein differences in immunological active cells or in organic cells. Although, there is a great diseases spectrum, they have been classified in systemic when antibodies attack antigens present in more than one organ or tissue; and organ-specific when the damage is involving a particular tissue. For a proper laboratory diagnosis of AD, identification of patient's symptoms is the starting point, as well as its association with each disease and the correspondence with autoantibody detection. It makes laboratory exams of great importance in the evaluation of patients, as they can be used to confirm the diagnosis, to estimate severity of the disease, and for the follow up of its evolution. Components of the laboratory study should include a complete hemogram with differential cellular count, a complete metabolic panel, inflammatory markers, the study of auto antibodies by several methods, as well as new Multiplex technologies and flow cytometry. In this look to the diagnosis, comments about some components and elements of judge about their clinical usefulness are pointed out
Subject(s)
Humans , Male , Female , Autoantibodies/immunology , Autoimmune Diseases/diagnosis , Symptom Assessment/methods , Clinical Laboratory Techniques/methodsABSTRACT
Introducción: la prevalencia de amebiasis ha tenido que ser reevaluada desde que fue demostrada la existencia de dos especies de Entamoeba indistinguibles morfológicamente, pero diferentes en cuanto a su capacidad de producir enfermedad: Entamoeba histolytica (patógena) y Entamoeba dispar (no patógena). Con el empleo de procedimientos capaces de identificar características antigénicas específicas es posible hacer la diferenciación y evaluar la prevalencia real de amebiasis (es decir, de infecciones producidas por Entamoeba histolytica). Objetivo: determinar la prevalencia de infección por el complejo E. histolytica/E. dispar y, más tarde, de infección por la especie Entamoeba histolytica en muestras fecales de estudiantes de escuelas públicas de Maceió, Alagoas, Brasil. Métodos: primero se realizó la detección microscópica de infección por el complejo E. histolytica/E. dispar en muestras fecales de 1 798 estudiantes (para ello, se empleó la técnica de concentración en formol-éter). A continuación, se confirmó la infección por el mencionado complejo mediante el empleo del ensayo inmunoenzimático ENZYMEBA. Posteriormente, a las muestras confirmadas positivas al complejo E. histolytica/E. dispar se les aplicó el procedimiento inmunoenzimático E. histolytica II®, que detecta de modo específico una adhesina de la especie Entamoeba histolytica. Resultados: el empleo de la observación microscópica de heces y del ensayo ENZYMEBApermitió demostrar una prevalencia de infección por el complejo E. histolytica/E. dispar de 3,8 %. La utilización del procedimiento E. histolytica II® condujo al hallazgo de una prevalencia de infección por la especie Entamoeba histolytica de 1,0 %. La observación microscópica de heces presentó un bajo valor predictivo positivo (26,4 %) para la detección de Entamoeba histolytica respecto al ensayo E. histolytica II®. Conclusiones: aunque las cifras de prevalencia encontradas son bajas, este estudio demuestra por primera vez la ocurrencia de infección por Entamoeba histolytica en Maceió, Alagoas, Brasil. A pesar de que el examen microscópico de heces no es un procedimiento apropiado para el diagnóstico de amebiasis, puede ser utilizado como prueba de descarte en estudios epidemiológicos. La demostración de infección por Entamoeba histolytica en muestras positivas a infección por el complejo E. histolytica/E. dispar puede ser realizada mediante ensayos para la detección específica de coproantígenos del parásito, como Entamoeba histolytica II®.
Introduction: distribution of amebiasis has been reevaluated since it was demonstrated that two morphologically indistinguishable species of Entamoeba exist, but they differ in their capacity to cause disease: Entamoeba histolytica (pathogenic) and Entamoeba dispar (nonpathogenic). The use of techniques to identify specific antigenic characteristics makes it possible to establish differential diagnosis and to assess the actual prevalence of amebiasis cases (caused only by Entamoeba histolytica). Objective: to determine the prevalence of infection by Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar complex and, in a second phase, the prevalence of infection by Entamoeba histolytica in stool samples of students from public schools in Maceió, Alagoas, Brazil. Methods: screening of Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar complex infection cases was carried out by formol-ether concentration technique on stool samples of 1 798 students. The infection caused by this complex was confirmed with an enzyme linked immunosorbent assay (ENZYMEBA). Positive samples were then analyzed with a specific ELISA (Entamoeba histolytica II®) in order to detect an adesin only present in Entamoeba histolytica. Results: the microscopic observation of feces and the Enzymeba test allowed demonstrating the prevalence of Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar infection amounting to 3.8 %. The Entamoeba histolytica II procedure showed the prevalence of infection by Entamoeba histolytica of 1.0%. Therefore, the microscopy presented a low predictive positivity value (26.4%) for detection of Entamoeba histolytica compared to Entamoeba histolytica II® method. Conclusions: although the prevalence figures are not high, the study shows for the first time the occurrence of Entamoeba histolytica in Maceió, Alagoas, Brazil. In spite of the fact that the optical microscopic test of feces is not the appropriate technique for amebiasis diagnosis, it can be used as a screening method in epidemiological studies. Cases of Entamoeba histolytica infection in positive samples by microscopy can be confirmed by using a specific test for detection of the parasite coproantigen like Entamoeba histolytica II®.
ABSTRACT
Entre las enfermedades relacionadas con el agua según su uso se encuentran las causadas por sustancias químicas y por agentes biológicos. Dentro de estas últimas, las ocasionadas por bacterias y protozoarios patógenos incrementan cada día la lista de enfermedades emergentes y reemergentes. Los métodos de ensayo para la determinación de microorganismos patógenos en el agua no han variado mucho en los últimos años, principalmente para los indicadores bacterianos de contaminación fecal, y por lo general se realizan por métodos convencionales. Sin embargo, existen situaciones, sobre todo en la aparición de brotes de enfermedades, en las que se hace necesario detectar el microorganismo patógeno en agua como posible agente causal, por lo que se ha recomendado el uso de métodos rápidos y confiables. Dentro de estos se encuentran los inmunoensayos, de los cuales los métodos por precipitación y aglutinación, los enzimoinmunoensayos, las técnicas de inmunofluorescencia directa e indirecta y la citometría de flujo son muy útiles en la detección de microorganismos en agua. Mención aparte merece la separación inmunomagnética o inmunocaptura como paso previo a otras técnicas avanzadas. Nos proponemos con este trabajo exponer las ventajas y desventajas de estos métodos, los principios en los cuales se basan y ejemplificar algunos de los más utilizados en microbiología de aguas, así como recalcar su importancia
Diseases related to the use of water may be caused by chemical substances or biological agents. Among the latter, a prominent role is played by pathogenic bacteria and protozoa, which constantly add to the list of emerging and re-emerging diseases. Assay methods to identify pathogenic microorganisms in water have not changed much in recent years, particularly with respect to bacterial indicators of fecal contamination, and tests are usually conducted by conventional methods. However, in certain situations, especially when a disease outbreak occurs, it is necessary to determine what pathogenic microorganism is the possible causal agent, and quick, reliable methods have been recommended to achieve this aim. These include immunoassays, among which precipitation and agglutination methods, enzyme immunoassays, direct and indirect immunofluorescence techniques and flow cytometry have proven very useful to detect microorganisms in water. Special mention should be made of immunomagnetic separation or immunocapture as a step preceding other advanced techniques. The present paper is aimed at presenting the advantages and disadvantages of these methods, as well as the principles on which they are based. Examples are provided of the methods most commonly used in water microbiology, highlighting their importance
Subject(s)
Bacteria/immunology , Water Quality/standards , Water Pollution/analysis , Eukaryota/immunology , Immunoassay/methods , Aquatic Microorganisms/adverse effects , Water Microbiology , Waterborne Diseases , Disease OutbreaksABSTRACT
Se hizo una valoración del impacto de los ensayos inmunoenzimáticos en la analítica de base inmunoquímica en las últimas 4 décadas, en la detección de agentes infecciosos o los productos asociado a su presencia y(o) actividad patogénica. Además se hace una incursión en algunos diseños y formatos que han tenido estos inmunoensayos desde los métodos electroquímicos de detección, los ensayos para detectar actividad proteolítica de origen microbiano y sus inhibidores como posibles blancos terapéuticos, los inmunoensayos directos de triple anticuerpo para lograr mayor sensibilidad, reveladores alternativos de la actividad enzimática, ensayos para el estudio de la serología viral con un mínimo de determinaciones, así como ensayos de competencia para evaluar la efectividad de candidatos vacunales basados en combinaciones peptídicas seleccionadas. Se concluyó con una rápida visión del futuro inmediato de este tipo de inmunoensayos a la luz de las tecnologías analíticas emergentes de detección.
This paper assessed the impact of the immunoenzymatic assays on the field of the immunochemistry-based analytics for the last 40 years, and on the detection of infectious agents or the products related to their presence and/or pathogenic activity. It also addressed some designs and formats of these immunoassays from electrochemical methods of detection, assays to determine proteolytic microbial activity and their inhibitors as possible therapeutical targets, more sensitive direct triple antibody systems, alternative enzymatic activity detectors, assays for viral serology of minimal determinations to competitive assays for evaluation of vaccinal candidate effectiveness based on selected peptide combinations. Finally, it provided a rapid overview of the near future of this type of immunoassays in the light of the emerging detection analytical technologies.
Subject(s)
Humans , Immunoenzyme Techniques/methods , Infections/microbiologyABSTRACT
La concentración sérica de 25-hidroxivitamina D (25-OHD) es utilizada como indicador del estado nutricional de Vitamina D (VD). El método más utilizado para medirla es el RIA. El desarrollo reciente de métodos automatizados no radiactivos facilitaría la práctica diaria de laboratorio y el diagnóstico de necesidad de suplementación. Objetivos: Comparar los datos de 25-OHD obtenidos usando un RIA y un método de quimioluminiscencia (QLIA) automatizado disponible en nuestro medio. Materiales y métodos: Concentraciones de 25-OHD se midieron en suero de 45 pacientes: 8 hombres y 37 mujeres; 18 no suplementados y 27 suplementados con VD (n=5 con VD2 y n=22 con VD3). Las mediciones de 25-OHD se realizaron con un RIA y un QLIA automatizado (LIAISON), ambos DiaSorin. Se calcularon los coeficientes de variación intraensayo (CV intra) e interensayo (CV inter) para ambos métodos. Análisis estadístico: la comparación entre métodos se realizó con los programas Analyse-it y Med Calc Se consideró significativa una p<0.05. Resultados: Los CV% intra e inter fueron: para RIA menores de 10,6 y 19,9 vs QLIA menores de 8,0 y 13.2, respectivamente. En la población total y en el subgrupo no suplementado con VD los datos de RIA vs QLIA fueron: coeficiente de correlación de Pearson (0,9259 vs 0,9412), Bias%: (6.1 vs 2.7), coeficiente de concordancia (0,9244 vs 0,9329). Conclusiones: 1) Ambas metodologías son adecuadas para mediciones de 25OHD, especialmente en casos no medicados con VD, 2) La tendencia hacia un mayor bias% observado en pacientes suplementados con VD no parecería ser atribuible a variabilidad metodológica, y sugeriría que la VD exógena o alguno de sus metabolitos interactuaría en forma diferente en la medición de 25-OHD por cada una de las metodologías utilizadas. Mayor número de casos es necesario a fin de confirmar esta hipótesis.
Serum concentration of 25-hydroxyvitamin D (25OHD) is used as an indicator of nutritional status of Vitamin D (VD). The methodolgy more frequently used for its measurement is RIA. The recent development of automated non-radioactive methodologies would help the laboratory daily practice to diagnose the need for supplementation. Objectives: To compare the data of 25-OHD obtained using a RIA and an automated chemiluminescence method (CLIA) automated available in our country. Materials and methods: Concentrations of 25-OHD were measured in serum of 45 patients: 8 men and 37 women, 18 unsupplemented and 27 supplemented with VD (n=5 with VD2 and n=22 with VD3). For 25-OHD measurements we used a RIA and a QLIA under an automated platform (LIAISON), both DiaSorin. We calculated intra-assay (intra) and interassay (inter) coefficients of variation (CV%) for both methods. Statistical analysis: comparison between methods was conducted with Analyse-it and Med Calc softwares; p <0.05 was considered significant. Results: The intra and inter CV% were below 19.9 and 10.6 for RIA vs 8.0 and 13.2 for CLIA, respectively. In the overall population and in the subgroup never supplemented with VD, data for RIA vs CLIA were: Pearson correlation coefficient (0.9259 vs 0.9412), Bias% (6.1 vs. 2.7), concordance coefficient (0.9244 vs 0.9329). Conclusions: 1) Both methods are suitable for measurements of 25OHD, particularly in cases not medicated with VD, 2) The trend toward greater bias% observed in patients supplemented with VD does not appear to be attributable to methodological variability, and suggests that exogenous VD or its metabolites interact differently in the measurement of 25-OHD by each of the methodologies used. A higher number of cases is needed to confirm this hypothesis.
Subject(s)
Humans , Male , Female , Immunoassay/methods , 24,25-Dihydroxyvitamin D 3/analysis , Vitamin D/analysisABSTRACT
Introducción: La determinación de IGF-I en suero o plasma es una herramienta esencial en el diagnóstico y seguimiento de la acromegalia. Sin embargo, se deben tener presentes algunos inconvenientes en su medición por diferentes inmunoensayos. Objetivos: Evaluar dos inmunoensayos para la determinación de IGF-I y su correlación con el nadir de GH en el TTOG en pacientes acromegalicos. Materiales y métodos: Se analizaron 37 pacientes acromegálicos, 20 mujeres y 17 hombres. IGF-I fue determinada por Immulite 1000, (IMM) y por IRMA (DSL). Se realizó el TTOG y se determinó glucosa y GH en todos los tiempos (basal, 30, 60, 90 y 120min). Se consideró respuesta normal un nadir de GH <1ng/ml. Nueve pacientes se encontraban bajo tratamiento y 28 sin tratamiento. Análisis estadístico: se utilizaron el test de Wilcoxon, de Bland y Altman y curvas ROC. Se consideró significativa una p<0,05. Resultados: Las concentraciones basales de glucosa fueron 97,86±10,91 mg/dl, de GH 2,8 (1,59-14,4) ng/ml, de IGF-I por IMM 602±318 ng/ml y por DSL 1006±596 ng/ml. IGF-I por IMM y DSL mostró una diferencia significativa con p <0,01 y un bias de - 403,2 ng/ml con valores menores por IMM. IGF-I elevada por IMM y DSL, se encontró en el 84% y en el 97% respectivamente. IGF-I elevada con nadir de GH >1ng/ml se encontró en el 70%, con nadir de GH normal en el 13,5%. IGF-I normal con nadir >1ng/ml en el 2,7% y con nadir de GH normal en el 13,5%. El área bajo las curvas ROC no mostró diferencias significativas. Conclusiones: Los niveles de IGF-I determinados por IMM y DSL fueron significativamente diferentes mostrando un bias negativo para IMM. La mayoría de los valores del nadir de GH fueron consistentes con los niveles de IGF-I observándose una discrepancia en el 30% de los pacientes, estuvieran o no bajo tratamiento.
Introduction: IGF-I determination in serum or plasma is an essential tool in the diagnosis and follow-up of acromegaly. Hepatic production of IGF-I is regulated by GH and circulates bound to several IGF-I binding proteins which extends its half life. IGF-I is not released in a pulsatile pattern and has no significant variability in 24 h. Objective: To evaluate two different methodologies in IGF-I levels determination and their correlation with GH nadir in OGTT in acromegalic patients. Material and methods: We analyzed 37 acromegalic patients, 20 women and 17 men, mean age was 45±12 years. IGF-I levels were assayed by Immulite 1000, DPC (IMM) and DSL-5600 ACTIVE® IGF-I Coated-Tube IRMA (DSL) and OGTTs (at baseline and at 30, 60, 90 and 120 minutes) were performed by measuring plasma glucose and GH assay by immunochemiluminometric assay (Access); we considered a nadir <1ng/ml as normal response. Nine patients were under medical treatment (cabergoline: 4, octeotride: 4, and cabergoline plus octeotrite: 1) and 28 without treatment. Statistical analysis: Wilcoxon and, Bland and Altman tests and ROC curves. Differences were considered significant at p< 0.05. Results: Basal glucose levels were 97.86±10.91 mg/dl and mean GH was 2.8 (1.59-14.4) ng/ml. Mean IGF-I levels performed by IMM were 602±318 ng/ml and 1006±596 ng/ml by DSL. There was a statistically significant difference between both methodologies (p<0.01). Bland and Altman test showed a bias of - 403.2 ng/ml with lower values by IMM. We observed elevated IGF-I levels in 84% by IMM and in 97% by DSL, and only one patient had normal levels with both methodologies. Elevated IGF-I levels and GH nadir >1ng/ml were observed in 70% of the patients, increased IGF-I with normal GH nadir in 13.5%, normal IGF-I with GH nadir >1ng/ml in 2.7% and normal IGF-I with normal GH nadir in 13.5%. Patients under treatment: 3 showed normal GH nadir with elevated IGF-I levels, in 2 of them by both methodologies, and in the other one it was normal by IMM and elevated by DSL; the other 6 showed GH nadir > 1ng/ml, 5 of them presented elevated IGF-I by both methodologies and the other one showed discrepancy in IGF-I levels. The under ROC curve area and confidence interval (CI) of 95% for IGF-I IMM and DSL were 0.96 (0.90-1.00) and 0.91 (0.82-1.00) respectively. Differences between the ROC curves areas were not significant Conclusions: IGF-I levels determined by IMM and DSL were statistically significantly different. IGF-I levels showed a negative bias by IMM. Most of the results of GH nadir were consistent with IGF-I levels but we observed discrepancy in 30% of the patients, regardless of whether they were under treatment or not.
Subject(s)
Humans , Male , Female , Child , Adolescent , Adult , Middle Aged , Acromegaly/blood , Insulin-Like Growth Factor I/analysis , Glucose Tolerance Test/statistics & numerical data , Immunoassay/methods , Data Interpretation, Statistical , Human Growth Hormone/analysisABSTRACT
En este trabajo se presentó la historia y evolución, desde el descubrimiento, de los anticuerpos, así como la elucidación de su compleja estructura y función que ha servido de base metodológica para crear paradigmas inimaginables en su momento, como la fina especificidad de reconocimiento; también derrumbar otros, aparentemente inamovibles, como la invariabilidad y universalidad del genoma celular. Se revisó la evolución de los sistemas analíticos basados en la reacción antígeno-anticuerpos para llegar al estado actual y problemática de las enfermedades infecciosas y el determinante papel que desempeñan en su control la detección y el monitoreo de agentes infecciosos. La extraordinaria capacidad de los anticuerpos para discriminar estructuras antigénicamente similares, les permite ser parte fundamental de los inmunoensayos como herramientas básicas de lo que es hoy día una disciplina productiva muy bien establecida: la inmunotecnología.
This paper presented the history and evolution of the antibodies since their discovery. It also elucidated their complex structure and function that have served at a given time as methodological basis for creating unimaginable paradigms such as fine recognition specificity, and also for destroying other apparently immutable ones as invariability and universality of the cellular genome. A review was made of the evolution of antigen-antibody reaction-based analytical systems up to the present, the situation of infectious diseases and the determining role that detection and monitoring of infectious agents play in their control. The extraordinary capability of antibodies to discriminate antigenically similar structures allows them to be fundamental tools in immunoassays and also in a well-established discipline at present, that is, immunotechnology.
Subject(s)
Humans , Antibodies/analysis , Infections/immunology , Infections/microbiology , Immunoenzyme TechniquesABSTRACT
La transmisión del virus de la hepatitis C (VHC) a través de la sangre constituye un problema de salud en Cuba y el mundo. Varios tipos de inmunoensayos diagnosticadores se han desarrollado para la certificación de sangre y generalmente cuentan con una elevada sensibilidad y especificidad diagnóstica en donantes sanos. Sin embargo, su comportamiento en muestras de pacientes multitransfundidos podría ser menos eficaz. Para evaluar la eficacia diagnóstica del inmunoensayo cubano UMELISA HCV 3er Gen. (TecnoSUMA SA, La Habana, Cuba) en muestras de pacientes multitransfundidos, se procesaron en paralelo 335 sueros de pacientes por los sistemas UBI® HCV EIA 4.0 (United Biomedical, EE.UU.) y UMELISA HCV 3er Gen., y las muestras con resultados incongruentes se confirmaron por el sistema de PCR COBAS AmpliScreen HCV Test, v2. (Roche, EE.UU.). Cuando se comparó el sistema UMELISA HCV 3er Gen. con el UBI® HCV EIA 4.0 se obtuvo una Sd de 95,8 % IC (95 %): 92,599,15 y Ed de 100 % IC (95 %): 99,7-100, con IY: 0,96 (0,93-0,99). k: 0,9582 ID (95 %): 0,9276-0,9888, p=0,000. Ambos sistemas de inmunoensayos fueron satisfactorios para el inmunodiagnóstico de pacientes multitransfundidos.
Hepatitis C virus (CHV) blood-transmission is a health problem in Cuba and in the world. Some types of diagnostic immunoassays have been developed for the blood certification and in general have a high diagnostic sensitivity and specificity in healthy donors. However, its behavior in samples from multi-transfusion patients could by less effective. To assess the diagnostic effectiveness of the UMELISA HCV third generation Cuban immunoassay (TecnoSUMA, S.A. La Habana), Cuba) in samples from multi-transfusion patients, in parallel, 335 sera from patients were processed by UBI® HCV EIA 4.0 (United Biomedical, EE.UU) and UMELISA HCV third generation, and the samples with incongruous results were verified by PCR COBAS AmpliScreen HCV Test, v2 system (Roche, EE.UU.) Comparing the UMELISA HCV third generation system with the UBI® HCV EIA 4.0 it was achieved a Sd of 95,8% CI(95%): 92,5-99,15 and a Ed of 100% CI (95%): 99,7-100, with IY: 0,96 (0,93-0,99) with k: 0,0582 ID (95%): 0,9276-0,9888, p = 0,000. Both immunoassay systems were satisfactory for immunodiagnosis of multi-transfusion patients.