Neutralización del virus SARS-CoV-2 (linaje B.1.1) por suero hiperinmune de llama (Lama glama) en cultivo de células Vero / Neutralization of SARS-CoV-2 (lineage B.1.1) by hyperimmune llama (Lama glama) serum in Vero cell culture

Objetivo. Evaluar la respuesta serológica de anticuerpos de una llama (Lama glama) a la inmunización del virus SARS-CoV-2 (linaje B.1.1) y la capacidad neutralizante del suero de llama hiperinmune frente al virus SARS-CoV-2 (linaje B.1.1) en células Vero. Materiales y métodos. Se inmunizó una llama con el virus SARS-CoV-2 inactivado (Linaje B.1.1) y se analizaron muestras de suero para evaluar el nivel de anticuerpos mediante ELISA, así como la reactividad a antígenos de SARS-CoV-2 mediante Western Blot. Además, se evaluó la neutralización viral en cultivos celulares por la Prueba de Neutralización por Reducción de Placas (PRNT, por sus siglas en inglés). Resultados. Se observó un aumento en la serorreactividad en la llama inmunizada desde la semana 4 en adelante. Los títulos de anticuerpos fueron más elevados en el séptimo refuerzo de inmunización. Los resultados de Western Blot confirmaron los hallazgos positivos del ELISA, y los anticuerpos del suero inmune reconocieron varias proteínas virales. El ensayo de neutralización (PRNT) mostró una neutralización viral visible, concordante con los resultados de ELISA y Western Blot. Conclusiones. Los hallazgos sugieren que el suero hiperinmune de llama podría constituir una fuente de anticuerpos terapéuticos contra las infecciones por el virus SARS-CoV-2 (linaje B.1.1) y que deberá ser evaluado en estudios posteriores.

Objective. To evaluate the serological antibody response of a llama (Lama glama) to SARS-CoV-2 (B.1.1 lineage) immunization and the neutralizing capacity of hyperimmune llama serum against SARS-CoV-2 virus (B.1.1 lineage) in Vero cells. Materials and methods. A llama was immunized with inactivated SARS-CoV-2 (B.1.1 lineage). Serum samples were analyzed to evaluate the level of antibodies by ELISA, as well as reactivity to SARS-CoV-2 antigens by Western Blot. In addition, viral neutralization in cell cultures was assessed by the Plate Reduction Neutralization Test (PRNT). Results . Seroreactivity increased in the immunized llama from week 4 onwards. Antibody titers were the highest after the seventh immunization booster. Western blot results confirmed the positive ELISA findings, and immune serum antibodies recognized several viral proteins. The neutralization assay (PRNT) showed visible viral neutralization, which was in accordance with the ELISA and Western Blot results. Conclusions. The findings suggest that hyperimmune llama serum could constitute a source of therapeutic antibodies against SARS-CoV-2 infections (lineage B.1.1), and should be studied in further research.

Neutralización de la actividad letal del veneno de serpiente Bothrops atrox por suero hiperinmune de llama (Lama glama) / Neutralization of the lethal activity from Bothrops atrox venom by hyperimune llama serum (Lama glama)

RESUMEN Objetivos: Evaluar la capacidad del suero hiperinmune de llama (Lama glama) para neutralizar la letalidad del veneno de la serpiente Bothrops atrox en ratones de laboratorio. Materiales y métodos: Se calculó la dosis letal media (DL50) de un pool de venenos de serpientes de Bothrops atrox de Perú, y se midieron los títulos de anticuerpos por ensayo ELISA; así como la potencia de neutralización del suero inmune por el cálculo de la dosis efectiva media (DE50) durante el periodo de inmunización. Resultados: La DL50 del veneno fue de 3,96 µg/g, similar a otros trabajos realizados en Bothrops atrox en Perú. Los títulos de anticuerpos contra el veneno se incrementan rápidamente en la llama mostrando una rápida respuesta inmune; sin embargo, la capacidad de neutralización se incrementa más lentamente y requiere de varias dosis y refuerzos de las inmunizaciones alcanzado una DE50 de 3,30 µL/g ratón y una potencia de neutralización 3,6 mg/mL después de 15 inmunizaciones. Conclusiones: El suero hiperinmune de llama es capaz de neutralizar la letalidad del veneno de la serpiente Bothrops atrox de Perú en ratones de laboratorio.

ABSTRACT Objectives: To evaluate the capacity of the hyperimmune llama serum (Lama glama) to neutralize the lethal activity of Bothrops atrox venom in laboratory mice. Materials and methods: Mean lethal dose (LD50) was calculated from a Bothrops atrox venom sample pool from Peru. The antibody titers were measured by ELISA assay; and the immune serum neutralization potency was measured by calculating the mean effective dose (ED50) during the immunization period. Results: The venom's LD50 was 3.96 μg/g; similar to what was found in other studies about Bothrops atrox carried out in Peru. The titers of antibodies against the venom increased rapidly in the llama, demonstrating a fast immune response; however, the neutralization capacity increased slowly and required several doses and immunization reinforcements, obtaining a ED50 of 3.30 μL/g mouse and a neutralization potency of 3.6 mg/mL after 15 immunizations. Conclusions: The hyperimmune llama serum is able to neutralize the lethality of the Bothrops atrox venom from Peru in laboratory mice.

A case of nasal myiasis due to Oestrus ovis (Diptera: Oestridae) in a llama (Lama glama) / Um caso de miíase nasal devido a Oestrus ovis (Diptera: Oestridae) em lhama (Lama glama)

Infection by the larval form of Oestrus ovis (sheep bot fly) is common in many areas of Peru. This is an obligate parasite of sheep and goats, and it is the cause of oestrosis, or nasal myiasis, which can lead to severe clinical manifestations in livestock. A case of myiasis caused by O. ovis in a llama (Lama glama) in Cuzco, Peru, is reported here. This llama presented with respiratory distress and died due to bilateral hemorrhagic pneumonia. During the necropsy, six intact dipterous larvae were recovered from the nasal fossae and cranial sinuses being identified as O. ovis. This is the first report of nasal myiasis in llamas due to O. ovis in Peru.

Infecção pela forma larval de Oestrus ovis (bicho da cabeça) é comum em muitas regiões do Peru. Este é um parasito obrigatório de ovinos e caprinos, e é a causa de oestrose ou miíase nasal, que pode conduzir à manifestações clínicas graves nos animais. Relatou-se um caso de miíase causada por O. ovis numa lhama (Lama glama) em Cuzco, Peru. A lhama apresentou insuficiência respiratória e morreu de pneumonia bilateral hemorrágica. Durante a necropsia, seis larvas intactas do díptero foram recuperadas das fossas nasais e dos seios cranianos e identificadas como O. ovis. Este é o primeiro relato de miíase nasal em lhamas por O. ovis no Peru.

The suspensory apparatus and digital flexor muscles of the llama (Lama glama) 1: The thoracic limb / El aparato suspensorio y los músculos flexores digitales de la llama (Lama glama) 1: El miembro torácico

The digital flexor muscles of the thoracic limb of four llamas were dissected and illustrated to provide data about the suspensory (support) apparatus and weight bearing structures. An extensive literature search was performed and yielded incomplete information about these anatomical structures. The popularity of the llama world wide as a domesticated animal used for show and fiber has increased in the recent years. It is helpful to describe the anatomy fully to aid in understanding of the species and treatment of pathologic conditions. The description of the anatomical structures and the original illustrations demonstrate genuine peculiarities and differences between the llama and domestic ruminants. In llamas, the three heads of the deep digital flexor muscle (DDF) originate and connect with each other in a very peculiar combination, with one tendon receiving an attachment from the flexor carpi ulnaris muscle (FCU). The superficial digital flexor muscle (SDF) has a thin tendon which is fused with the palmar fascia and then broadens. There are no interflexor muscles. Additionally, unexpected lumbricalis muscles are found in the distal limb and vary in number between the fore and hind limb. The anatomy of the suspensory apparatus in the thoracic limb is evaluated in this paper.

Fueron disecados e ilustrados los músculos flexores digitales del miembro torácico de cuatro llamas con la finalidad de aportar datos sobre el aparato suspensor (de apoyo) que soportan estas estructuras. Se realizó una extensa búsqueda bibliográfica dada la incompleta información existente de estas estructuras anatómicas. La popularidad de la llama en todo el mundo como uno de los animales domésticos utilizados ha aumentado en los últimos años. Es importante describir detalladamente la anatomía de esta especie para su tratamiento en condiciones patológicas. La descripción de las estructuras anatómicas y las ilustraciones originales demuestran peculariedades genuinas y diferencias entre la llama y los rumiantes domésticos. En llamas, las tres cabezas del músculo flexor profundo de los dedos se originan y se conectan entre ellas en una muy peculiar combinación, con uno de los tendones recibiendo un fascículo del músculo flexor ulnar del carpo. El músculo flexor superficial de los dedos tiene un tendón delgado el cual se fusiona con la fascia palmar y luego se amplía. No existen músculos interflexores. Adicionalmente, fueron encontrados músculos lumbricales en la extremidad distal y variaban en número entre los miembros. Finalmente, en este trabajo se evalúa el aparato suspensorio del miembro torácico.

The suspensory apparatus and digital flexor muscles of the llama (Lama glama) 2: The pelvic limb / El aparato suspensorio y los músculos flexores digitales de la llama (Lama glama) 2: El miembro pélvico

This paper provides data (text and illustrations) about the digital flexor muscles of the pelvic limb and the / metatarsophalangeal joint, evaluating the suspensory (support) apparatus and weight bearing structures. Similar to the above mentioned paper, a literature search provided incomplete information about these anatomical structures. As in the thoracic limb, unique anatomically variations exist in the pelvic limb of the llama. The caudal tibial muscle is fused with the lateral head of the deep digital flexor muscle (DDF), and the soleus muscle is missing. A symmetrical unexpected lumbricalis pedis muscle was found; the tendons are fusing with the axial branches of the lateral tendon of the long digital extensor muscle. A quadratus plantae muscle, also unexpected is present on the medial aspect of the tarsal region. The superficial digital flexor muscle (SDF) resembles that of the domestic ruminants. The metacarpo/ metatarsophalangeal joints, referred to as the fetlock joints (FJ) are very different from those of the domestic ruminants. Particular structures were found and they will be described and illustrated in the text. The anatomy of the suspensory (support) apparatus in the pelvic limb is evaluated in this paper.

El presente artículo ofrece datos (texto e ilustraciones) sobre el músculo flexor digital del miembro pélvico y la articulación metatarsofalángica, evaluando el aparato suspensorio (de apoyo) y el peso que soportan estas estructuras. La literatura proporciona información incompleta acerca de estas estructuras anatómicas. Al igual que en el miembro torácico, existen variaciones anatómicamente únicas en el miembro pélvico de la llama. El músculo tibial caudal se fusiona con la cabeza lateral del músculo flexor digital profundo (FDP), y el músculo soleo no existía. Fue encontrada una simetría inesperada del músculo lumbrical del pie; los tendones se encontraban fusionados con las ramas axiales del tendón lateral del músculo extensor digital largo. Un músculo cuadrado plantar, se encontraba presente en la cara medial de la región tarsal. El músculo flexor digital superficial (FDS) se asemeja al de rumiantes domésticos. Las articulaciones metacarpo/metatarsofalángicas, denominadas articulaciones del nudillo (AN) son muy diferentes de las de rumiantes domésticos. Fueron encontradas estructuras particulares que se describen e ilustran en el texto. Se evalúa la anatomía del aparato suspensorio (de apoyo) en el miembro pélvico.