Autochthonous case of Canine Visceral Leishmaniasis in a non-endemic area in Minas Gerais, Brazil / Caso autóctone de Leishmaniose Visceral Canina em área indene em Minas Gerais

Visceral Leishmaniasis by Leishmania infantum chagasi is an endemic zoonosis present in many areas of Brazil. This parasite needs reservoirs for maintenance of the infection and the presence of dogs in urban areas is a key factor for the spread of canine visceral leishmaniasis (CVL). The aim of this study was to report the first autochthonous case of CVL in the municipality of Iguatama, in west central region of Minas Gerais State. Dog infection by Leishmania infantum chagasi was confirmed in the municipality, previously considered as non-endemic area to CVL. The canine infection by Leishmania was confirmed by three immunological tests for antibodies: indirect immunofluorescence assay (IFA), rapid Dual Path Platform (DPP®) CVL immunochromatographic test, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and microscopic demonstration of Leishmania amastigotes in imprints of spleen and bone marrow stained by Giemsa. The species Leishmania infantum chagasi was confirmed by molecular diagnosis (PCR). Studies are being carried out, aiming to describe the importance and the prevalence of this disease in the region and factors associated with its transmission.(AU)

Leishmaniose visceral causada por Leishmania infantum chagasi é uma zoonose endêmica em algumas regiões do Brasil. Este parasito necessita de reservatórios para a manutenção da infecção e a presença de cães em áreas urbanas é um fator importante para a manutenção e expansão da leishmaniose visceral canina (LVC). O objetivo deste estudo foi relatar o primeiro caso autóctone de LVC no município de Iguatama, na região Centro Oeste de Minas Gerais, cidade onde a LVC era tida como não existente. A infecção canina por Leishmania foi confirmada por três testes imunológicos para pesquisa de anticorpos: reação de imunofluorescência indireta (RIFI), teste rápido de imunocromatografia com plataforma dupla (DPP® LVC) e ensaio imunoenzimático (ELISA), e demonstração microscópica de amastigotas de Leishmania a partir de aposições de amostras de baço e de medula óssea corados pelo Giemsa. A espécie Leishmania infantum chagasi foi confirmada por diagnóstico molecular (PCR). Estudos estão sendo realizados com o objetivo de descrever a importância e a prevalência desta parasitose na região e os fatores associados com a transmissão.(AU)

Serological, parasitological and molecular tests for canine visceral leishmaniosis diagnosis in a longitudinal study / Testes sorológicos, parasitológicos e moleculares para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina em estudo longitudinal

Abstract One of the measures to control visceral leishmaniosis (VL) in Brazil is the identification and culling of the canine reservoir. There is much controversy concerning this strategy, including the proper identification of positive dogs and the fact that the host-parasite relationship changes over time make it more challenging. A dynamic cohort of 62 dogs was followed every three months using serological and parasitological examinations and PCR. Positivity by PCR was higher than by serology and by parasitological examinations and showed a tendency to decrease over time, while serology tended to increase after six months. Concomitant positivity in all tests was observed in 10.4% of the samples, and negativity in 29.1%. Overall sensitivity ranged from 43.6 to 64.1%, and was not uniform over time. The proportion of dogs with or without clinical signs was not different by cytology or PCR but PCR was able to identify a larger number of asymptomatic dogs compared to ELISA and immunochromatography. PCR can be useful for surveillance of areas where cases of canine VL have not yet been detected and in which control strategies can be implemented to limit the spread of the disease. Despite the advance in diagnostic tools CVL diagnosis remains a challenge.

Resumo Uma das medidas de controle da leishmaniose visceral (LV) no Brasil se baseia na identificação e eliminação do reservatório canino. Existe considerável controvérsia relativa a esta estratégia incluindo a correta identificação dos cães positivos e a variação temporal da relação hospedeiro-parasita, o que torna esta medida ainda mais desafiadora. Uma coorte dinâmica de 62 cães foi acompanhada trimestralmente utilizando-se métodos sorológicos, parasitológicos e a PCR. A taxa de positividade por PCR foi maior em comparação à dos métodos sorológicos e parasitológicos, e mostrou tendência à diminuição com o passar do tempo, enquanto que a positividade sorológica apresentou tendência a aumento, após seis meses. Observou-se positividade concomitante em todos os testes em 10,4% das amostras e, negatividade concomitante, em 29,1%. A sensibilidade geral variou de 43,6% a 64,1%, não sendo uniforme ao longo do estudo. A proporção de cães com e sem sinais clínicos que foram positivos ao exame parasitológico ou à PCR não foi estatisticamente diferente. Contudo, foi possível identificar como positivos um maior número de animais assintomáticos por meio da técnica de PCR, em comparação aos testes ELISA e imunocromatográfico. A PCR pode ser bastante útil para a vigilância epidemiológica de áreas onde casos de LV canina ainda não tenham sido descritos e onde estratégias de controle podem ser implantadas para limitar a disseminação da doença. Não obstante o avanço nas ferramentas diagnósticas, diagnosticar a LVC continua um desafio.

FIRST REPORT OF CUTANEOUS LEISHMANIASIS CAUSED BY Leishmania (Leishmania) infantum chagasi IN AN URBAN AREA OF RIO DE JANEIRO, BRAZIL / Primeiro relato da leishmaniose cutânea causada por Leishmania (Leishmania) infantum chagasiem uma área urbana do Rio de Janeiro, Brasil

SUMMARY American tegumentary leishmaniasis (ATL) is an infectious disease caused by protozoa of the genus Leishmania, and transmitted by sandflies. In the state of Rio de Janeiro, almost all of the cases of American tegumentary leishmaniasis (ATL) are caused by Leishmania (Viannia) braziliensis, while cases of visceral leishmaniasis (VL) are caused by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. The resurgence of autochthonous VL cases in Rio de Janeiro is related to the geographic expansion of the vector Lutzomyia longipalpis and its ability to adapt to urban areas. We report the first case of leishmaniasis with exclusively cutaneous manifestations caused by L. (L.) infantum chagasi in an urban area of Rio de Janeiro. An eighty-one-year-old woman presented three pleomorphic skin lesions that were not associated with systemic symptoms or visceromegalies. Multilocus enzyme electrophoresis identified L. (L.) infantum chagasi, but direct smear and PCR of bone narrow were negative for Leishmania sp. (suggesting exclusively cutaneous involvement). We discuss the different dermatological presentations of viscerotropic leishmaniasis of the New and Old World, and the clinical and epidemiological importance of the case. Etiologic diagnosis of ATL based upon exclusive clinical criteria may lead to incorrect conclusions. We should be aware of the constant changes in epidemiological patterns related to leishmaniases.

RESUMO A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença infecciosa causada por protozoários do gênero Leishmania, transmitida por flebotomíneos. No estado do Rio de Janeiro, quase todos os casos de LTA são causados por Leishmania (Viannia) braziliensis, enquanto a leishmaniose visceral (LV) é causada por Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. O ressurgimento de casos autóctones de LV no Rio de Janeiro está relacionado com a expansão geográfica dos vetores Lutzomyia longipalpis e à sua capacidade de se adaptar às áreas urbanas. Relatamos o primeiro caso de leishmaniose com manifestações exclusivamente cutâneas causadas por L. (L.) infantum chagasiem uma área urbana do Rio de Janeiro. Mulher de 81 anos apresentou três lesões cutâneas pleomórficas não associadas a sintomas sistêmicos ou visceromegalias. A eletroforese de enzimas multilocus obtida a partir da lesão cutânea identificou L. (L.) infantum chagasi,por outro lado o exame direto e o PCR da medula óssea foram negativos para Leishmaniasp. (sugerindo acometimento exclusivamente cutâneo). Discutimos as diferentes apresentações dermatológicos da leishmaniose visceral do Novo e Velho Mundo, assim como a importância clínica e epidemiológica deste caso. O diagnóstico etiológico da LTA com base apenas em critérios clínicos pode levar a conclusões incorretas. Devemos estar conscientes das constantes mudanças nos padrões epidemiológicos relacionados à leishmaniose.

Estudo fitoquímico e atividades leishmanicida, anticolinestarásica e antioxidante de extratos de Annona glabra L. (araticum panã) / Phytochemical study and leishmanicidal, anticholinesterase and antioxidant activities of Annona glabra L. (araticum panã) extracts

O objetivo deste estudo foi investigar as principais classes de compostos químicos presentes em Annona grabra L. (Araticum panã), e avaliar o seu potencial biológico analisando suas atividades antioxidante, antiacetilcolinesterase e leishmanicida. Para tanto, a entrecasca e sementes foram submetidas à extração em aparelho de soxhlet com os solventes orgânicos hexano, clorofórmio, acetato de etila e metanol, obtendo-se os respectivos extratos. Com os extratos foram realizados testes de prospecção fitoquímica, determinação da atividade antioxidante pelo método de inibição do radical livre DPPH e inibição da acetilcolinesterase em ensaio de cromatografia em camada delgada. Os testes de atividade leishmanicida in vitro em formas promastigotas de Leishmania infantum chagasi foram realizados em placa de 96 poços em aparelho ELISA. Os extratos foram testados a 100 ?g/ mL. Os testes fitoquímicos revelaram a presença de esteroides, triterpenos, alcaloides, compostos fenólicos e saponinas. Todos os extratos apresentaram inibição da acetilcolinesterase e os extratos hexânicos de ambas partes mostraram maior percentual de inibição de L. infantum chagasi. Nestes extratos, compostos apolares como esteroides e triterpenos podem contribuir para a atividade leishmanicida. Os extratos de melhor atividade antioxidante foram o acetato de etila e metanólico da entrecasca e metanólico das sementes que correspondem aos que contem compostos fenólicos. Conclui-se que A. glabra constitui uma fonte potencial de agentes leishmanicida com possível mecanismo de ação pela inibição da enzima acetilcolinesterase das membranas da L. infantum chagasi, causador da leishmaniose visceral.(AU)

The aim of this study was to investigate the main types of chemical constituents present in Annona grabra L. (araticum panã) and evaluate its biological potential by analyzing the antioxidant, antiacetylcholinesterase and antiLeishmanial activities. For this, the sapwood and seeds were subjected to extraction in soxhlet apparatus using the following organic solvents: hexane, chloroform, ethyl acetate and methanol for obtaining the respective extracts. These extracts were submitted to phytochemical prospection, antioxidant tests by scavenging the free radical DPPH, acetylcholinesterase inhibition assay on TLC plates. The in vitro antiLeishmanial assay in Leishmania infantum chagasi promastigotes were performed in a 96 well plate in an ELISA instrument. The extracts were tested at 100 ?g/ mL. Phytochemical investigation revealed the presence of sterols, triterpenes, alkaloids, phenolic compounds and saponins. All extracts showed inhibition of acetylcholinesterase, and hexane extracts of both parts presented more action in L. infantum chagasi. The extracts with better antioxidant action were ethyl acetate and methanol extracts of the sapwood and methanol extract of seeds, which correspond to those, which contains phenolic compounds. In conclusion, A. glabra constitutes a potential source of antiLeishmanial agents with possible mechanism of action by inhibiting the acetylcholinesterase in the membranes of L. infantum chagasi responsible for visceral Leishmaniasis.(AU)

Hypertension and its correlation with renal lesions in dogs with leishmaniosis / Hipertensão e sua correlação com lesões renais em cães com leishmaniose

To evaluate the prevalence of hypertension and its correlation with the severity of renal injury and proteinuria in dogs with leishmaniosis, sixty-six dogs were divided into two groups. Group 1 (G1) was composed of 54 dogs included in stage 1 of chronic kidney disease (CKD), and group 2 (G2) of twelve dogs in stages 2 and 3 of CKD. Prevalence of hypertension was 28.8%, comprising 22.2% of the dogs from G1 and 58.3% from G2 (P=0.011). The mean arterial blood pressure (BP) of dogs from G1 (135.7 ± 20.5) was lower than from G2 (170.0 ± 26.3) (P <0.001). Urine protein-creatinine ratio (UP/C) revealed values above 0.5 in 75.7% of the dogs, with 34% presenting hypertension. All dogs with hypertension had histopathological and laboratory evidence of glomerular disease. Although there was no statistically significant correlation between elevated BP and the severity of glomerular lesions (P=0.408), there was a statistically significant correlation between elevated BP and increased UP/C in the studied population (P=0.002). Thus, dogs with leishmaniosis and renal disease must be screened for the presence of hypertension so that treatment may be instituted as early as possible, in countries where treatment is allowed, to prevent the progression of renal damage.

Para avaliar a prevalência de hipertensão arterial e sua correlação com a severidade da lesão renal e proteinúria em cães com leishmaniose, 66 cães foram divididos em dois grupos. O grupo 1 (G1), composto por 54 cães em estágio 1 de doença renal crônica (DRC), e o grupo 2 (G2) por 12 cães em estágios 2 e 3 de DRC. A prevalência de hipertensão foi de 28,8%, compreendendo 22,2% dos cães de G1 e 58,3% dos cães de G2 (p = 0,011). A pressão arterial média (PA) de G1 (135,7 ± 20,5) foi inferior a de G2 (170,0 ± 26,3) (P <0,001). A relação proteína creatinina urinária (P/C U) foi maior que 0,5 em 75,7% dos cães, dos quais 34% possuíam hipertensão. Todos os cães com hipertensão apresentavam doença glomerular. Embora não tenha sido observada correlação estatisticamente significativa entre elevação da PA e severidade das lesões glomerulares (P =0,408), houve uma correlação significativa entre PA elevada e aumento da UP/C (P = 0,002). Portanto, cães com leishmaniose e doença renal devem ser pesquisados ​​quanto à presença de hipertensão, para que o tratamento possa ser instituído o mais precocemente possível em países onde ele é permitido, para evitar a progressão da lesão renal.

Diagnóstico molecular e frequência de anticorpos anti-Leishmania infantum chagasi em cães do município de Belém, Pará / Molecular diagnosis and frequency of anti-Leishmania infantum chagasi antibodies in dogs in Belém/Pará, Brazil

Visceral leishmaniasis is a disease whose etiological agent in Brazil is Leishmania infantum chagasi. Dogs are considered urban reservoirs of the disease, being an indicator of the human cases occurrence. The present study aimed to diagnose L. infantum chagasi infection in stray and owned dogs in Belém, Pará State, by polymerase chain reaction (PCR) and indirect immunofluorescence assay (IFA) using two different antigens. [...] These animals were divided into two groups: stray dogs captured by the Center for Zoonosis Control (Group A) and owned dogs (Group B). Sera were analyzed by IFA testing for IgG using two different antigens: 1) Bio-Manguinhos/Fiocruz antigen kit (Ag-PRO) containing promastigotes of Leishmania sp. (Complex Major-Like), 2) Instituto Evandro Chagas Antigen (Ag-AMA) consisting of amastigotes of L. infantum chagasi. The evaluation of the two antigens was performed considering positive the reactions above the 1:80 dilution. Already PCR was performed with DNA isolated from whole blood of animals and amplified with the primers RV1 and RV2. Of the 335 samples analyzed, 10.4% (35/335) were positive by IFA (Ag-PRO) and 0.9% (3/335) with the Ag-AMA. The distribution of positive samples is given as follows: Group A 14.8% (25/169) with Ag-PRO and 1.2% (2/169) with Ag-AMA; Group B 6% (10/166) with Ag-PRO and 0.6% (1/166) with Ag-AMA, being that all samples positive by IFA with Ag-AMA also reacted with Ag-PRO, and none of the samples detected DNA of L. infantum chagasi. The findings of this study indicate that Belém can still be considered non-endemic area for canine visceral leishmaniasis and the nature of the antigen influences the result of the IFA for the detection of anti-L. infantum chagasi antibodies in dogs, and the IFA using promastigotes of Leishmania major-like antigen should be used with caution as a confirmatory diagnostic on epidemiological studies in non-endemic areas.

A leishmaniose visceral é uma enfermidade cujo agente etiológico no Brasil é o protozoário Leishmania infantum chagasi. Os cães são considerados reservatórios urbanos da doença, sendo indicadores da ocorrência de casos humanos. O presente trabalho teve como objetivo diagnosticar a infecção por L. infantum chagasi em cães domiciliados e errantes do município de Belém, estado do Pará, através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e da reação de imunofluorescência indireta (RIFI), empregando dois antígenos distintos. [...] A avaliação dos dois antígenos foi realizada com as amostras reagentes a partir da titulação 1:80. Já a PCR foi realizada a partir do DNA extraído do sangue total dos animais e amplificado utilizando-se os iniciadores RV1e RV2. Das 335 amostras analisadas, 10,4% (35/335) foram reagentes na RIFI (Ag-PRO) e 0,9% (3/335) reagiram com o Ag-AMA. A distribuição das amostras positivas se deu da seguinte forma: Grupo A 14,8% (25/169) com Ag-PRO e 1,2% (2/169) com Ag-AMA; Grupo B 6% (10/166) com Ag-PRO e 0,6% (1/166) com Ag-AMA; sendo que todas as amostras positivas pelo teste de RIFI com o Ag-AMA também reagiram com o Ag-PRO e em nenhuma das amostras foi detectado o DNA de L. infantum chagasi. Os achados do presente estudo indicam que Belém ainda pode ser considerada área não endêmica para leishmaniose visceral canina e que a natureza do antígeno influencia no resultado da RIFI para a pesquisa de anticorpos anti-L. infantum chagasi em cães, sendo que a RIFI que utiliza formas promastigotas de Leishmania major-like como antígeno deve ser utilizada com cautela como método diagnóstico confirmatório em estudos epidemiológicos em áreas não endêmicas para LVC.

Morphological changes and parasite load of the adrenal from dogs with visceral leishmaniasis / Alterações morfológicas e carga parasitária da adrenal de cães com leishmaniose visceral

The objective of this study was to analyze morphological changes and parasite loads in the adrenal gland from 45 dogs with visceral leishmaniasis (VL). The animals were from the Zoonosis Control Center of Araçatuba, state of São Paulo, which is an endemic region for the disease. These animals were euthanized due to positive diagnoses of VL. The dogs were classified into asymptomatic, oligosymptomatic and symptomatic groups. The parasite load was determined by immunohistochemistry, using VL-positive dog hyperimmune serum. Nine dogs showed an inflammatory infiltrate composed, predominantly, of plasma cells and macrophages. However, only eight dogs showed macrophages with amastigote forms of the parasite, immunolabeled in the cytoplasm. The medullary and reticular layers were the most affected areas, possibly due to a favorable microenvironment created by hormones in these regions. The density of parasites in the glandular tissue was not associated with clinical signs of VL (P > 0.05). However, the presence of the parasite was always associated with the presence of a granulomatous inflammatory infiltrate. This gland may not be an ideal place for the parasite's multiplication, but the presence of injuries to the glandular tissue could influence the dog's immune system, thus favoring the parasite's survival in the host's different organs.

O objetivo deste estudo foi analisar as alterações morfológicas e a carga parasitária da glândula adrenal de 45 cães com leishmaniose visceral (LV). Os animais eram provenientes do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Araçatuba (SP), região endêmica para a doença. Esses animais são submetidos à eutanásia, devido ao diagnóstico positivo para LV. Os cães foram classificados nos grupos assintomático, oligossintomático e sintomático. A determinação da carga parasitária foi feita por imuno-histoquímica, com utilização de soro hiperimune de cão positivo para LV. Em nove cães, verificou-se um infiltrado inflamatório, composto predominantemente por plasmócitos e macrófagos. Entretanto, apenas oito cães apresentaram macrófagos com formas amastigotas do parasito imunomarcadas em seu citoplasma. As camadas medular e reticulada foram as mais afetadas, possivelmente por um microambiente favorável criado pelos hormônios nestas regiões. A densidade de parasitos no tecido glandular não foi relacionada com os sinais clínicos de LV (P > 0,05). No entanto, a presença do parasito sempre esteve associada à presença de infiltrado inflamatório granulomatoso. Possivelmente, essa glândula não é um sítio ideal para a multiplicação do protozoário, mas a presença de injúrias no tecido glandular poderia influenciar o sistema imune do cão, favorecendo a sobrevivência do parasito nos diferentes órgãos do hospedeiro.

Miocardite crônica em um cão naturalmente infectado com Leishmania (Leishmania) infantum chagasi: aspectos clínicos e patológicos / Chronic myocarditis in a dog naturally infected by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi: clinical and pathological aspects

A leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa crônica frequentemente fatal causada pela Leishmania infantum chagasi nas Américas. A enfermidade pode acometer vários órgãos, determinando diferentes manifestações clínicas. Contudo o envolvimento do coração raramente tem sido reportado em cães infectados por Leishmania sp. Dessa forma, descreve-se um caso de miocardite crônica com repercussões clínicas e patológicas em um cão naturalmente infectado por Leishmania infantum chagasi. A positividade para Leishmaniose Visceral foi determinada pela presença de anticorpos antiLeishmania sp. nos testes sorológicos (RIFI, ELISA e DPP) e confirmada por visualização de formas amastigotas de Leishmania sp. em punção aspirativa do linfonodo poplíteo. O exame cardiovascular revelou alterações radiográficas, eletrocardiográficas, na pressão arterial e nos biomarcardores cardíacos. Após eutanásia, amostras de tecido cardíaco foram avaliadas histologicamente e submetidas à imunomarcação, onde foi observado infiltrado mononuclear (plasmo-histiolinfocitário), com presença de estruturas arredondadas de coloracão marrom-amareladas (imunomarcadas), indicando formas amastigotas de Leishmania infantum chagasi no miocárdio. Os aspectos etiopatogênicos da leishmaniose visceral sobre o miocárdio neste caso podem estar relacionados tanto à presença do parasita quanto à resposta "reacional inespecífica" do tecido à agressão do parasita no organismo. Todavia ainda não se sabem se as cepas de Leishmania infantum chagasi da região semiárida paraibana apresentam algum tropismo por tecido cardíaco ou se induzem a reação imunológica cruzada, com implicações clínicas.

Visceral leishmaniasis (VL) is a chronic, often fatal infectious disease caused by Leishmania infantum chagasi in the Americas. The disease can affect many organs and may express different clinical forms. However, the involvement of the heart has rarely been reported in dogs infected by Leishmania sp. Thus, we describe a case of chronic myocarditis with clinical and pathological effects in a dog naturally infected by Leishmania infantum chagasi. Positivity for Visceral Leishmaniasis was determined by the presence of anti-Leishmania sp. in serological tests (IFAT, ELISA and DPP) and confirmed by visualization of amastigote forms of the parasite in the popliteal lymph node aspiration samples. The cardiovascular clinical examination showed changes in the radiographic, ECG, blood pressure and heart biomarkers. After euthanasia, heart tissue samples were histologically examined and underwent our immunohistochemistry assessment, where mononuclear infiltrate was observed (plasma cells, lymphocytes and macrophages) with the presence of rounded brownish-yellow (immunomarked) cells, indicating amastigotes of Leishmania infantum chagasi within the myocardium. The etiopathogenic aspects of visceral leishmaniasis in the myocardium in this case may be related either to the presence of the parasite or the "nonspecific reactive" response of the tissue attributable to the aggression of the parasite in the body. However, it is not known if the strains of Leishmania infantum chagasi found in the semi-arid of Paraíba have some tropism for cardiac tissue or if they induce immunological cross-reaction with clinical implications.

Estudo da imunopatogenia das lesões no sistema nervoso central de cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral / Study of the immunopathogenesis of central nervous system lesions in dogs naturally affected by visceral leishmaniasis

A Leishmaniose visceral em cães é descrita como uma doença de caráter crônico na qual os principais sintomas são perda progressiva de peso, caquexia e lesões dermatológicas. Recentemente, a doença tem sido relacionada com alterações neurológicas. Um total de 40 cães portadores de leishmaniose visceral foi dividido em dois grupos. O primeiro composto por cães sem sintomas neurológicos (n=30) e o segundo grupo composto por cães com sintomas neurológicos (n=10). Amostras de encéfalo foram coletadas e armazenadas em formalina tamponada, para realização de imunoistoquímica para a pesquisa de formas amastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi, linfócitos T CD3+, CD4+ e CD8+ e macrófagos. A reação de imunoistoquímica não revelou formas amastigotas do parasita. Linfócitos T estavam presentes em 24/30 (80%) dos cães sem sintomas neurológicos e em todos os cães do segundo grupo (p=0,0011). Linfócitos CD4+ e CD8+ raramente foram observados, apresentando imunomarcação para CD4+ em 10/40 (25%) dos cães e em metade dos animais do grupo neurológico (p=0,0090). A presença de CD8+ foi detectada em 4/10 (40%) cães com doenças neurológicas (p=0,0021). Macrófagos foram observados em 38/40 (95%) cães, sem diferença estatística significante entre os dois grupos (p= 0,7664).

Visceral leishmaniasis in dogs is described as a chronic disease whose main symptoms are progressive weigth loss, cachexy and dermatologic lesions. Recently, the disease has been associated to neurologic disorders. A total of 40 dogs with visceral leishmaniasis were divided into two groups. The first composed of dogs without neurological signs (n=30) and the second by dogs with neurological disorders (n=10). Brain samples were collected, stored in 10% buffered formalin and subjected to immunohistochemical examination for amastigotes forms of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi, CD3+, CD4+ and CD8+ T lymphocytes and macrophages. Imunnohistochemistry evaluation revealed no amastigote forms of the parasite. CD3+ T lymphocytes were present in 24/30 (80%) dogs without neurological signs and in all dogs from the second group (p=0.0011). CD4+ and CD8+ were rarely observed, with CD4+ immunostaining in 10/40 (25%) dogs, from which half of them had neurological disease (p=0.0090). The presence of CD8+ was detected only in 4/10 (40%) dogs from neurological group (p=0.0021). Macrophages were detected in 38/40 (95%) dogs, without significant differences between groups (p=0.7664).

Estudo da leishmaniose visceral canina no município de Goiânia, Goiás, Brasil / Studies on canine visceral leishmaniasis in the municipality of Goiânia, Goiás, Brazil

A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose causada por Leishmania infantum chagasi. Canídeos desempenham importante papel epidemiológico por atuarem como reservatórios naturais. Este trabalho teve como objetivo conduzir uma investigação sobre leishmaniose visceral canina (LVC) em cães na cidade de Goiânia-GO. Para o estudo, foram utilizados 214 animais sintomáticos e assintomáticos e colhidas amostras de sangue, biópsias de pele e aspirados de linfonodo. Nos testes sorológicos pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), 20 animais apresentaram resultados positivos. No exame parasitológico direto, foram detectadas amastigotas em seis amostras. Os testes pela reação em cadeia da polimerase (PCR), realizados apenas nos animais sintomáticos ou com resultado positivo em pelo menos um dos exames anteriores (n igual 81), foram positivos para sete cães. As amostras positivas no exame parasitológico foram também submetidas à PCR. Das 20 amostraspositivas nos testes pela RIFI, apenas sete foram confirmadas pela PCR. Os resultados positivos pela PCR espécie-específica, nas sete amostras, confirmaram a identidade molecular de L. i. chagasi nestes animais. Os resultados registraram os primeiros casos autóctones em Caldas Novas-GO e Novo Brasil-GO e evidenciaram a necessidade urgente de intensificação das estratégias de controle da LVC nestes municípios. O estudo revelou a existência de casos de LVC em cães que buscam atendimento clínico na cidade de Goiânia.

A novel A2 allele found in Leishmania (Leishmania) infantum chagasi / Novo alelo do gene A2 descrito em Leishmania (Leishmania) infantum chagasi

Visceral leishmaniasis (VL) is a widely spread zoonotic disease. In Brazil the disease is caused by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Peridomestic sandflies acquire the etiological agent by feeding on blood of infected reservoir animals, such as dogs or wildlife. The disease is endemic in Brazil and epidemic foci have been reported in densely populated cities all over the country. Many clinical features of Leishmania infection are related to the host-parasite relationship, and many candidate virulence factors in parasites that cause VL have been studied such as A2 genes. The A2 gene was first isolated in 1994 and then in 2005 three new alleles were described in Leishmania (Leishmania) infantum. In the present study we amplified by polymerase chain reaction (PCR) and sequenced the A2 gene from the genome of a clonal population of L. (L.) infantum chagasi VL parasites. The L. (L.) infantum chagasi A2 gene was amplified, cloned, and sequenced in. The amplified fragment showed approximately 90 percent similarity with another A2 allele amplified in Leishmania (Leishmania) donovani and in L.(L.) infantum described in literature. However, nucleotide translation shows differences in protein amino acid sequence, which may be essential to determine the variability of A2 genes in the species of the L. (L.) donovani complex and represents an additional tool to help understanding the role this gene family may have in establishing virulence and immunity in visceral leishmaniasis. This knowledge is important for the development of more accurate diagnostic tests and effective tools for disease control.

A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose amplamente disseminada, causada no Brasil pela Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Flebotomíneos vetores adquirem o agente etiológico, alimentando-se do sangue de animais contaminados, como cachorros ou animais selvagens. A doença é endêmica no Brasil, e focos de epidemia são relatados em cidades densamente povoadas por todo o país. Muitas manifestações clínicas relacionadas à infecção por Leishmania estão ligadas à relação parasito-hospedeiro, e vários possíveis fatores de virulência dos parasitas, que causam a LV, são alvos de estudo, tais como os genes A2. O gene A2 foi isolado pela primeira vez em 1994 e, em seguida, em 2005, três novos alelos foram descritos em Leishmania (Leishmania) infantum. No presente estudo, um fragmento do gene A2 de uma população clonal de L.(L.) infantum chagasi foi amplificado por PCR e sua sequência de nucleotídeos determinada. O fragmento mostrou 90 por cento de similaridade com alelos do gene A2 de Leishmania (Leishmania) donovani e de L. (L.) infantum, descritos na literatura. Entretanto, a tradução da sequência de nucleotídeos mostra diferenças na sequência de aminoácidos da proteína, que podem ser essenciais em determinar a variabilidade do gene A2 em espécies do complexo L. (L.) donovani e representa uma ferramenta adicional na compreenssão do papel dessa família de genes na virulência e imunidade da leishmaniose visceral. O conhecimento dessa variação é importante para o desenvolvimento de testes diagnósticos mais precisos e ferramentas mais eficazes no controle da doença.

Infecção natural de Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (Diptera: Psychodidae) por Leishmania infantum chagasi em flebotomíneos capturados no município de Janaúba, Estado de Minas Gerais, Brasil / Natural infection with Leishmania infantum chagasi in Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (Diptera: Psychodidae) sandflies captured in the municipality of Janaúba, State of Minas Gerais, Brazil

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral tem sido notificada em quase todos os estados do Brasil, e principalmente no norte de Minas Gerais, onde a doença é endêmica. Este estudo visou detectar a infecção natural de Lutzomyia longipalpis e identificar através da técnica de PCR/RFLP a espécie de Leishmania encontrada nos flebotomíneos do município de Janaúba. MÉTODOS: Utilizando-se armadilhas luminosas, foram capturadas 1.550 fêmeas de L. longipalpis, que agrupadas em pool de 10 exemplares foram submetidas à extração e amplificação de DNA, através das técnicas de PCR genérico e cacofonia. RESULTADOS: Dos 155 pools, seis apresentaram-se positivos para Leishmania sp., sendo a taxa de infecção do município de 3,9 por cento. Através da PCR/RFLP determinou-se que o padrão de digestão das amostras positivas foi semelhante ao da cepa referência Leishmania chagasi (MHOM/BR/74/PP75). CONCLUSÕES: A detecção de infecção natural associada a estudos sobre a epidemiologia da LV sugere que L. longipalpis esteja envolvida na transmissão de L. infantum chagasi em Janaúba, principalmente nas áreas de intensa transmissão de LV.

INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis has been notified in nearly all states of Brazil, and particularly in the north of Minas Gerais, where the disease is endemic. The aim of this study was to detect natural infection of Lutzomyia longipalpis and, through the PCR/RFLP technique, identify Leishmania species found in sandflies in the municipality of Janaúba. METHODS: Using light traps, 1,550 females of L. longipalpis were caught and grouped into pools of 10 specimens to be subjected to DNA extraction and amplification, by means of generic PCR and cacophony. RESULTS: Out of the 155 pools, six were positive for Leishmania sp., and thus the infection rate in the municipality was 3.9 percent. Through PCR/RFLP, the digestion pattern among the positive samples was found to be similar to that of the reference strain of Leishmania chagasi (MHOM/BR/74/PP75). CONCLUSIONS: The detection of natural infection associated with studies on the epidemiology of visceral leishmaniasis suggests that L. longipalpis is involved in transmission of L. infantum chagasi in Janaúba, particularly in areas of intense transmission of visceral leishmaniasis.

Evidência de transmissão de leishmaniose visceral por Lutzomyia cruzi no município de Jaciara, Estado de Mato Grosso, Brasil / Evidence of transmission of visceral leishmaniasis by Lutzomyia cruzi in the municipality of Jaciara, State of Mato Grosso, Brazil

INTRODUÇÃO: O município de Jaciara foi classificado em 2003, como área de transmissão de leishmaniose visceral em situação de surto. O trabalho objetivou determinar evidência de transmissão de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi por Lutzomyia cruzi no município de Jaciara, Estado de Mato Grosso, Brasil. MÉTODOS: O município situa-se a 127km da capital Cuiabá e é um importante ponto de atração para os praticantes de eco-turismo. Fêmeas de Lutzomyia cruzi, capturadas com armadilha de CDC, foram dissecadas para confirmação da espécie e armazenadas a -20ºC em pools de 10 indivíduos para extração de DNA, PCR genérico, RFLP específico e eletroforese em gel de poliacrilamida. RESULTADOS: O levantamento entomológico demonstrou a ocorrência abundante de Lutzomyia cruzi e ausência de Lutzomyia longipalpis, principal vetora da Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Uma das três amostras analisadas apresentou banda característica de DNA de Leishmania (120pb) em PCR genérico. Para confirmação da espécie de Leishmania, na RFLP utilizaram-se controles positivos de Leishmania (Leishmania) amazonensis, Leishmania (Viannia) braziliensis e Leishmania (Leishmania) infantum chagasi digeridas com enzima de restrição HaeIII. Constatou-se um padrão de bandas semelhante à Leishmania (Leishmania) infantum chagasi em uma amostra, confirmando a detecção de infecção natural de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi em Lutzomyia cruzi. CONCLUSÕES: A ocorrência de casos humanos e cães positivos, a presença da Lutzomyia cruzi e a ausência de Lutzomyia longipalpis, bem como a detecção de infecção natural por Leishmania (Leishmania) infantum chagasi, evidenciam a participação de Lutzomyia cruzi na transmissão da leishmaniose visceral em Jaciara, Estado de Mato Grosso, Brasil.

INTRODUCTION: The municipality of Jaciara was classified in 2003 as a transmission area for visceral leishmaniasis in outbreak situations. This study aimed to establish evidence of transmission of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi by Lutzomyia cruzi in the municipality of Jaciara, State of Mato Grosso, Brazil. METHODS: This municipality is located 127 km from the state capital (Cuiabá) and is an important center for ecotourism practitioners. Females of Lutzomyia cruzi, captured using CDC traps, were dissected to confirm the species and stored at -20ºC in pools of 10 individuals for DNA extraction, generic PCR, specific RFLP and electrophoresis on polyacrylamide gel. RESULTS: The entomological survey showed abundant occurrence of Lutzomyia cruzi and absence of Lutzomyia longipalpis (the main vector for Leishmania (Leishmania) infantum chagasi). One of the three samples showed a characteristic DNA band from Leishmania (120 bp) in generic PCR. To confirm the Leishmania species via RFLP, positive controls for Leishmania (Leishmania) amazonensis, Leishmania (Viannia) braziliensis and Leishmania (Leishmania) infantum chagasi digested with restriction enzyme HaeIII were used. A pattern of bands similar to Leishmania (Leishmania) infantum chagasi was found in one sample, thus confirming the detection of natural infection with Leishmania (Leishmania) infantum chagasi in Lutzomyia cruzi. CONCLUSIONS: The occurrences of positive cases in humans and dogs, the presence of Lutzomyia cruzi and the absence of Lutzomyia longipalpis together with the detection of natural infection with Leishmania (Leishmania) infantum chagasi, indicate that Lutzomyia cruzi participates in visceral leishmaniasis transmission in Jaciara, State of Mato Grosso, Brazil.

Prevalência e epidemiologia da leishmaniose visceral em cães e humanos, na cidade de Cuiabá, Mato Grosso, Brasil / Prevalence and epidemiology of visceral Leishmaniasis in dogs and humans in the city Cuiaba, Mato Grosso, Brazil

A leishmaniose visceral é uma doença infecciosa endêmica em diversas regiões do Brasil, incluindo o Estado de Mato Grosso. Em Cuiabá, no período de janeiro de 2006 a dezembro de 2008, foi realizada investigação dos casos caninos de infecção por Leishmania sp. por meio de sorologia e citologia, enfocando a sua distribuição geográfica e correlacionando a ocorrência de casos de leishmaniose visceral humana. De 150 cães com suspeita da infecção, 57 (38 por cento) foram sorológicos ou parasitologicamente positivos. Observou-se soroprevalência significativa (P≤0,05) nos bairros com renda per capita baixa, além de maior número de casos caninos na regional leste; no entanto, observou-se uma distribuição difusa da doença canina na cidade de Cuiabá, enquanto os casos humanos originaram principalmente na regional norte do município. Esse fato sugere que há risco em todo o município, devendo ser realizados novos estudos soroepidemiológicos, assim como a distribuição vetorial, que promovam maior conhecimento da infecção canina por Leishmania sp, de forma a se gerar medidas adequadas para o controle da doença.

Visceral Leishmaniasis is an infectious disease endemic in several regions of Brazil, including the state of Mato Grosso. In Cuiabá, from January 2006 to December 2008, a research was performed in canine cases of infection with Leishmania sp. by serology and cytology, focusing on its geographical distribution, correlating to the occurrence of human visceral Leishmaniasis cases. From 150 dogs with suspected infection, 57 (38 percent) were serological or parasitologically positive. Seroprevalence was observed (P≤0.05) in districts with low per capita income, besides a larger number of canine cases in the East regional, but there was a diffuse distribution of the canine disease in the city of Cuiabá, in contrast to cases focused mainly on human in the northern municipality. This suggests risk throughout the municipality and further epidemiological studies should be carried out, as well as vector distribution, to promote better understanding of canine infection by Leishmania, in order to promote appropriate measures for disease control.

Leishmania (Leishmania) infantum chagasi em canídeos silvestres mantidos em cativeiro, no Estado de Mato Grosso / Leishmania (Leishmania) infantum chagasi in wild canids kept in captivity in the State of Mato Grosso

INTRODUÇÃO: Leishmaniose visceral é uma zoonose que acomete diversos mamíferos tendo os canídeos domésticos como principais reservatórios em ambiente urbano. A presente nota descreve a infecção de canídeos silvestres por Leishmania (Leishmania) infantum chagasi mantidos em cativeiro no Estado de Mato Grosso, Brasil. MÉTODOS: De seis raposas (Cerdocyon thous) e um cachorro vinagre (Spheotos venaticus), foram coletadas amostras de pele, medula óssea e linfonodo para detecção e caracterização de Leishmania sp pela técnica de PCR-RFLP. RESULTADOS: Todos as animais pesquisados apresentaram-se positivos para Leishmania (L.) infantum chagasi. CONCLUSÕES: Destaca-se a importância de monitoramento adequado dos mesmos, além do maior controle desta enfermidade já que estes animais estão em ambientes de recreação pública.

INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis is a zoonosis that affects many mammals, and domestic canids are the main reservoirs in urban environments. This note describes infection by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi among wild canids kept in captivity in the State of Mato Grosso, Brazil. METHODS: Skin, bone marrow and lymph node samples were collected from six crab-eating foxes (Cerdocyon thous) and one bush dog (Spheotos venaticus), in order to detect and characterize Leishmania using the PCR-RFLP technique. RESULTS: All the animals studied were positive for Leishmania (L.) infantum chagasi. CONCLUSIONS: This study highlights the importance of adequate monitoring of these animals, as well as greater control of this disease, given that these animals are in a public recreation environment.

Distribución de vectores de leishmaniasis visceral en la Provincia de Corrientes, 2008 / Distribution of vectors of visceral leishmaniasis in the Province of Corrientes, 2008

La leishmaniasis visceral es una parasitosis de importancia en salud pública, producida por Leishmania infantum chagasi. A partir de la urbanización y emergencia en el sur de Brasil y Paraguay, se notificó la presencia del insecto vector Lutzomyia longipalpis en la Argentina; en Formosa, 2004, y en Misiones el primer caso humano en 2006. La notificación de casos de reservorios caninos infectados en la provincia de Corrientes, contigua a Misiones, determinó la búsqueda del vector. Mediante trampeos estandarizados en diciembre del 2008 se capturaron 376 Lu. longipalpis en Ituzaingó, Virasoro, Santo Tomé, Garruchos, Riachuelo, Corrientes y Monte Caseros. Se confirma el riesgo de transmisión vectorial autóctona de leishmaniasis visceral en la provincia de Corrientes. La distribución de vectores en áreas urbanas densamente pobladas, con intenso tránsito de reservorios caninos desde zonas de alta transmisión, y la presencia de reservorios infectados, implica a su vez riesgo epidémico.

Visceral leishmaniasis (VL) is a relevant parasitic disease in public health, produced by Leishmania infantum chagasi. Since the urbanization and emergence in Southern Brazil and Paraguay, the vector Lutzomyia longipalpis in Formosa, 2004, and the first human visceral leishmaniasis case in Misiones, 2006, have been reported in Argentina. Due to the reports of canine VL, a search of the vector in the Province of Corrientes, contiguous to Misiones, was performed during December 2008. Standarized trapping detected 376 Lu. longipalpis in Ituzaingó, Virasoro, Santo Tomé, Garruchos, Riachuelo, Corrientes and Monte Caseros localities. The risk of autochtonous vectorial transmission was then confirmed in the Province of Corrientes. The distribution of vectors in populated urban areas, with intense transit of canine reservoirs from localities with high transmission, and the existence of infected reservoirs, also implies epidemic risk.

Experimental infection parameters in Galea spixii (Rodentia: Caviidae) with Leishmania infantum chagasi

In order to better understand the epidemiological transmission network of leishmaniasis, an endemic disease in Northeast Brazil, we investigated the susceptibility of Spix yellow-toothed cavies (Galea spixii) to the Leishmania infantum chagasi parasite. Nine cavies were experimentally infected, separated into three groups and monitored at 30, 90 and 180 days, respectively. Amastigotes were identified in the spleen slides of two cavies killed 180 days after infection. Antibodies against the L. i. chagasi were identified in one of the cavies. This demonstrates that G. spixii is in fact capable of maintaining a stable infection by L. i. chagasi without alterations in biochemical and hematological parameters of the host and without perceivable micro and macroscopic lesions.