ABSTRACT
RESUMEN El virus de la leucosis bovina (VLB) es un retrovirus que afecta principalmente el ganado lechero, reduciendo la producción de leche entre el 2,5 y 5%. La raza criolla colombiana Blanco Orejinegro (BON) es una raza rustica, bien adaptada, que ha mostrado resistencia in vitro a las infecciones ocasionadas por los virus de la fiebre aftosa y la estomatitis vesicular, así como las originadas por la bacteria Brucella abortus. El objetivo del presente estudio fue determinar si la raza BON y su cruce con Holstein son resistentes a la infección por el VLB. Se tomaron 124 muestras de sangre (59 Holstein, 40 BON y 25 BON x HOL) del mismo hato, se extrajo el DNA y se realizó una PCR-anidada correspondiente a una región del gen env de VLB. Se obtuvo un fragmento de 444 pb en los animales positivos. La prevalencia molecular del hato fue 33% para VLB. Se encontró diferencia significativa para infección por VLB entre los tres grupos raciales (p < 0,05). El porcentaje de infección fue del 55,9% para la raza Holstien, 5% para las vacas BON y 24% para el cruce BON x HOL; este último presentó una reducción en el porcentaje de infección del 32% respecto a la raza Holstein, lo cual puede ser atribuido a la presencia de genes de resistencia en la raza BON. Se comprobó que el nivel de infección es menor en vacas lecheras del cruce BON x HOL que en la raza lechera Holstein.
ABSTRACT The bovine leukemia virus (BLV) is a retrovirus that primarily affects dairy cattle, reducing milk production between 2.5 and 5%. The Colombian Blanco Orejinegro (BON) is a well-adapted, rustic, creole breed resistant to in vitro infections of Foot-and-mouth disease virus and vesicular stomatitis virus, as well as to Brucella abortus. This study aimed to determine if the crossing of BON and Holstein breeds is resistant to infection by BLV. Blood samples of 124 individuals (59 Holstein, 40 BON, and 25 BON x HOL) of the same herd were taken. The DNA was extracted, and a nested PCR was performed related to a region of the env gene of BLV. A fragment of 444 bp was obtained for positives animals. The molecular in-herd prevalence was 33% for BLV. A significant difference for BLV infection was found among the groups (p<0.05). The infection rate for the Holstein group was 55.9%, for BON cattle 5%, and for BON x HOL cattle 24%. The latter showed a reduction in the infection rate of 32% to the Holstein breed, which can be attributed to the presence of resistance genes in the BON breed. It was found that the level of infection is lower in BON x HOL cattle in contrast with Holstein dairy cows.
ABSTRACT
La Leucosis Enzootica Bovina (LEB) es una enfermedad de distribución mundial que genera grandes pérdidas económicas. Esta enfermedad, afecta principalmente la ganadería de las zonas lecheras y en Colombia no se tienen datos exactos del estado sanitario, ni se han estimado las pérdidas generadas a causa de esta patología. El objetivo fue determinar la presencia de LEB utilizando las claves hematológicas de Göttingen en Toca, Boyacá (Colombia). Se tomaron 243 muestras serológicas a 81 hembras de razas lecheras, seleccionadas al azar en intervalos de dos meses. Posteriormente, las muestras positivas y sospechosas a las claves, fueron procesadas mediante la técnica de ELISA, con el fin de corroborar su seropositividad. Las claves de Göttingen permitieron clasificar, de los 81 ejemplares, cinco muestras positivas y 18 sospechosas, de las cuales las cinco positivas resultaron también positivas a la técnica de ELISA. De los 18 ejemplares sospechosos, cinco resultaron seropositivos. La prevalencia total fue del 13.5 %; para los ejemplares entre 3 y 6 años de edad fue de 25% y para mayores de seis años fue del 6%. Se pudo concluir que el recuento de leucocitos fue de relevancia para el diagnóstico de la LEB. Sin embargo, las técnicas de Göttingen resultan no ser tan específicas para la detección de la enfermedad, por lo cual se recomienda la aplicación de técnicas con una especificidad y una sensibilidad mayor como ELISA y PCR.
Bovine Leukemia Virus (BLV) is an internationally prevalent disease that causes great economic losses. It mainly affects livestock in dairy production areas. Colombia lacks accurate data on the prevalence of BLV and its economic effect. This study aimed to determine the presence of BLV using Göttingen Hematological Keys in Toca, Boyacá (Colombia). A total of 243 serological samples were taken from 81 females of randomly selected dairy breeds at two-month intervals. Subsequently, the positive and suspect samples to the keys were processed by the ELISA technique in order to corroborate their seropositivity. The Göttingen keys allowed researchers to classify, from the 81 specimens, five positive samples and 18 suspicious ones, of which the five positive samples were also positive for the ELISA technique. Of the 18 suspected specimens, five were also seropositive. The total prevalence was 13.5%; for individuals between 3 and 6 years of age the prevalence was 25% and for individuals over 6 years the prevalence was 6%. Researchers concluded that the leukocyte count was relevant for the diagnosis of LEB. However, the Göttingen techniques are unspecific for the detection of the disease, so techniques with greater specificity and sensitivity such as ELISA and PCR yield more accurate results.
ABSTRACT
Abstract: Introduction: Routine diagnosis for bovine leukemia is performed using indirect serologic tests, although it is recommended to use polymerase chain reaction (PCR), which allows a reliable diagnosis in early stages and in young animals. Moreover, by amplifying the DNA, it is possible to sequence fragments of the virus, which allows to identify genotypes and to construct phylogenetic trees. Objective: To analyze a fragment of the env gene of bovine leukemia virus (BLV) isolated from indirect ELISA-positive animals in dairy farms in the municipality of Pasto (Nariño). Materials and methods: Once the presence of BLV was established in 48 animals over two years old in seven dairy farms in the municipality of Pasto by indirect ELISA test, a nested PCR test was performed to confirm diagnosis and to sequence a fragment of the env gene in positive animals and their daughters. The sequences obtained were compared with the seven genotypes described worldwide by MEGA 6 program. Results: The sequences of the compared fragments do not differ from those described; but they allow their grouping into different clusters according to their similarity. The genotypes found in these farms correspond to genotype 1 and 2 described in the literature. Conclusions: Only one genotype was found on farms with proper recovery and adequate biosecurity measures, and on farms with less control in management and recovery practices, both genotypes described for the region were evident.
Resumen: Introducción: El diagnóstico de rutina para la leucosis bovina se realiza con pruebas serológicas indirectas, aunque se recomienda usar la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), que permite un diagnóstico confiable en fases iniciales y en animales jóvenes. Además, mediante la amplificación del ADN se pueden secuenciar fragmentos del virus, que permite identificar los genotipos presentes y construir árboles filogenéticos. Objetivo: Analizar un fragmento del gen env del virus de leucosis bovina (VLB) aislado de animales positivos a ELISA indirecta en fincas lecheras del municipio de Pasto, Nariño. Materiales y métodos: Una vez establecida la presencia del VLB en 48 animales mayores de dos años en siete fincas lecheras del municipio de Pasto mediante la prueba de ELISA indirecta, se realizó una prueba de PCR anidada para confirmar el diagnóstico y secuenciar un fragmento del gen env en los animales positivos y sus hijas. Las secuencias obtenidas se compararon con los siete genotipos descritos en el mundo mediante el programa MEGA 6. Resultados: Las secuencias de los fragmentos comparados no difieren de las descritas; pero permiten su agrupación en diferentes clústeres de acuerdo con su similitud. Los genotipos encontrados en estas fincas corresponden al genotipo 1 y 2 descritos en la literatura. Conclusiones: En las fincas con reposición propia y adecuadas medidas de bioseguridad solo se encontró un genotipo y en las fincas con menor control en las prácticas de manejo y de reposición se encontraron los dos genotipos descritos para la región.
Resumo: Introdução: O diagnóstico de rotina para a leucose bovina se realiza com provas serológicas indiretas, mesmo que se recomenda usar a reação em cadeia da polimerase (PCR), que permite um diagnóstico confiável em fases iniciais e em animais jovens. Além do mais, mediante a amplificação do ADN se podem sequenciar fragmentos do vírus, que permite identificar os genótipos presentes e construir árvores filogenéticas. Objetivo: Analisar um fragmento do gene env do vírus de leucose bovina (VLB) isolado de animais positivos a ELISA indireta em fazendas leiteiras do município de Pasto, Nariño. Materiais e métodos: Uma vez estabelecida a presença do VLB em 48 animais maiores de dois anos em sete fazendas leiteiras do município de Pasto mediante a prova de ELISA indireta, se realizou uma prova de PCR aninhada para confirmar o diagnóstico e sequenciar um fragmento do gene env nos animais positivos e suas filhas. As sequências obtidas foram compararam com os sete genótipos descritos no mundo mediante o programa MEGA 6. Resultados: As sequências dos fragmentos comparados não diferem das descritas; mas permitem a sua agrupação em diferentes clusters de acordo com sua similitude. Os genótipos encontrados nestas fazendas correspondem ao genótipo 1 e 2 descritos na literatura. Conclusões: Nas fazendas com reposição própria e adequadas medidas de biossegurança somente se encontrou um genótipo e nas fazendas com menos controle nas práticas de manejo e de reposição se encontraram os dois genótipos descritos para a região.
ABSTRACT
Bovine viral diarrhea virus (BVDV), Bovine herpesvirus-1 (BoHV-1) and enzootic bovine leucosis (EBL) are viral infections that cause three of the most important cow diseases in the world. Antibody detection is the quickest and most cost-effective method to detect exposition to the virus. The aim of this study was to determine the seroprevalence and risk factors associated with these diseases in cows from the town of San Pedro de los Milagros, Antioquia. A total of 791 bovines of 24 dairy farms were sampled for blood between may and june of 2014, and analized for antibodies against BVDV and BoHV-1. These 24 farms plus other five were analized for antibodies against EBL for a total of 1003 bovines from 29 farms sampled. All tests were done with ELISA kits commercially available. The risk factors for farm and cow selected were evaluated to analize their relation with the serological state of these three diseases using logistic regression. In general, seroprevalence at the animal level for BVDV BoHV-1 and EBL was 75.7% (95% CI: 68.7-82.6%), 31.1% (95% CI: 22.1-40.1%) and 47.8% (95% CI: 40-55.7%), respectively. The odds ratio of being seropositive for BoHV-1 was significantly higher (OR=3.0) in animals older than 3 years in comparison to bovines younger than a year. Not using disposable needles was associated with prevalence of EBL. In conclusion there was a high seroprevalence of EBL and BVDV, and a lower one for BoHV-1. Seropositivity to BoHV-1 was associated with cows older than 3 years and seropositivity to EBL was associated with not using disposable needles in the farm.
Las infecciones por virus de la diarrea viral bovina (BVDV), el herpes virus bovino-1 (BoHV-1) y la leucosis enzoótica bovina (EBL) causan tres de las enfermedades más importantes de la vaca a nivel mundial. La detección de anticuerpos es el método más rápido y costo-efectivo para detectar la exposición a estos virus. El objetivo de este estudio fue determinar la seroprevalencia y los factores de riesgo asociados a estas enfermedades en vacas del municipio de San Pedro de los Milagros, Antioquia. Un total de 791 bovinos de 24 hatos lecheros no vacunados fueron muestreados para sangre entre mayo y junio de 2014 y analizados para anticuerpos contra BVDV y BoHV-1. Estos 24 hatos más otros cinco fueron analizados para anticuerpos contra EBL para un total de 1003 bovinos de 29 hatos. Todas las pruebas fueron efectuadas con kits de ELISA disponibles comercialmente. Los factores de riesgo de hato y de vaca seleccionados fueron evaluados para analizar su relación con el estado serológico de estas tres enfermedades por medio de regresión logística. En general, la seroprevalencia a nivel de animal para BVDV, BoHV-1 y EBL fue 75,7% (95% CI: 68,7-82,6), 31,1% (95% CI: 22,1-40,1) y 47,8% (95% CI: 40-55,7), respectivamente. La relación de disparidad de ser seropositivo para BoHV-1 fue significativamente más alto (OR=3,0) en animales mayores de 3 años en comparación con bovinos menores de un año. No usar agujas desechables en la granja estuvo asociada con la prevalencia a EBL. En conclusión hubo una alta seroprevalencia de EBL y BVDV y una baja para BoHV-1. La seropositividad a BoHV-1 estuvo asociada con vacas mayores a tres años y la seropositividad a EBL estuvo asociada con el no uso de agujas desechables en la granja.
As infecções por vírus da diarreia viral bovina (BVDV), herpes vírus bovino-1 (BoHV-1) e leucose enzoótica bovina (EBL) causam três das doenças mais importantes da vaca no mundo todo. A detecção de anticorpos é o método mais rápido e custo-efetivo para detectar a exposição a estes vírus. O objetivo desta pesquisa foi determinar a soroprevalência e os fatores de risco associados a estas doenças em vacas de diferentes rebanhos leiteiros do município de San Pedro de los Milagros, Antioquia, Colômbia. Um total de 791 bovinos pertencentes a 24 rebanhos leiteiros não vacinados foram amostrados para sangue entre os meses de maio e junho de 2014 e analisados para anticorpos contra BVDV e BoHV-1. Estes 24 rebanhos mais outros cinco foram analisados para anticorpos contra EBL para um total de 1003 bovinos de 29 rebanhos. Todos os testes foram feitos com kits de ELISA disponíveis comercialmente. Os fatores de risco do rebanho e do animal selecionados foram avaliados para analisar sua relação com o estado sorológico de estas três doenças por médio de regressão logística. Em geral, a soroprevalência no animal para BVDV, BoHV-1 e EBL foi 75,7% (95% CI: 68,7-82,6), 31,1% (95% CI: 22,1-40,1) e 47,8% (95% CI: 40-55,7), respetivamente. A relação de disparidade de ser soropositivo para BoHV-1 foi significativamente maior (OR=3,0) em animais maiores de três anos em comparação com os menores de um ano. O fato de não utilizar agulhas descartáveis na fazenda, esteve associada com a prevalência a EBL. Em conclusão, houve uma alta soroprevalência de EBL e BVDV e a sua vez, uma baixa para BoHV-1. A soropositividade a BoHV-1 esteve associada com vacas maiores a três anos e a soropositividade a EBL esteve associada com a não utilização de agulhas descartáveis na fazenda.
ABSTRACT
A 6 year-old Holstein cow was euthanized after a 3 week course of progressive paraplegia. In spite of the increasing difficulties to rise and walk, the animal remained bright, alert, afebrile and with good appetite throughout most of the clinical course. Complete blood counts, biochemical profiles and analysis of the cerebrospinal fluid were reported within normal limits. Antibody was detected for bovine leukaemia virus using an enzyme-linked immunosorbent assay, supporting a tentative diagnosis of bovine leukosis. Post-mortem examination revealed a localized form of lymphosarcoma with few 2-5 cm nodular tumors confined to the walls of the gastrointestinal tract, particularly in the abomasum. In addition, soft grey tumors were found within the vertebral canal surrounding the lumbar spinal cord and associated nerve roots. Microscopic examination revealed the nodular masses were composed of neoplastic lymphocytes. Mass in the lumbar vertebral canal had extradural neoplastic lymphocytes infiltrating connective tissues around the spinal cord and spinal nerve roots. Unlike the more common chronic and wasting presentation of the disease with widespread lymphadenopathy, the rapid progression of the disease to total paraplegia in this animal could be explained by the localized presence of tumors in the spinal canal.
Una vaca Holstein de 6 años de edad fue sacrificada después de un curso de paraplejía progresiva de 3 semanas de duración. A pesar de las crecientes dificultades para levantarse y caminar, el animal se mantuvo alerta, sin fiebre y con buen apetito casi todo el transcurso de la enfermedad. Los análisis del hemograma, perfil bioquímico y líquido cefalorraquídeo no mostraron alteraciones fuera del rango normal. El análisis de ELISA frente al virus de la Leucosis Bovina resultó positivo, apoyando el diagnóstico diferencial de leucemia. El examen post-mortem reveló una forma localizada de linfosarcoma, con escasas y pequeñas tumoraciones nodulares de 2-5 cm confinadas a las paredes del tracto gastrointestinal, sobre todo en el abomaso. Además, los tumores estaban presentes en el canal vertebral rodeando la médula lumbar espinal y raíces nerviosas adyacentes. El examen microscópico reveló que las masas nodulares estaban compuestas de linfocitos neoplásicos; igualmente, el tejido conectivo rodeando la medula lumbar presentaba gran infiltración de dichos linfocitos. A diferencia de la presentación más corriente y crónica de la enfermedad en que existe un desgaste progresivo del animal asociado a una linfadenopatía generalizada, en este caso la rápida progresión de la enfermedad hacia una paraplejia total se podría explicar por la presencia de tumores localizados en el canal espinal.
Uma vaca holandesa de seis anos de idade foi abatida após um curso de paraplegia progressiva de três semanas de duração. Ainda que a vaca teve muitas e crescentes dificuldades para levantarse e caminhar, o animal se manteve alerta, sem febre e com bom apetite quase todo o transcurso da doença. A análise do resultado de um hemograma, do perfil bioquímico e do líquido cefalorraquiano não mostraram alterações fora do padrão normal. A análise feita pelo teste de ELISA para o vírus da leucose bovina foi positivo, apoiando o diagnostico diferencial de leucemia. O exame post-mortem revelou uma forma localizada de linfosarcoma, com escassas e pequenas tumorações nodulares de 2-5 cm confinadas às paredes do trato gastrointestinal, principalmente no abomaso. Alem, os tumores estavam presentes no canal vertebral rodeando a medula espinhal na região lombar e as raízes nervosas adjacentes. A avaliação microscópica revelou que as massas nodulares estavam compostas de linfócitos neoplásicos; igualmente, o tecido conjuntivo ao redor da medula espinhal na região lombar apresentava uma grande infiltração desses linfócitos. A diferença deste caso com a forma mais comum e crônica da doença na qual existe um desgaste progressivo do animal associado a uma linfadenopatia generalizada, foi que neste caso houve uma rápida progressão da doença que evoluiu para uma paraplegia total que poderia explicar-se pela presença de tumores localizados na medula espinhal.
ABSTRACT
Se realizó un estudio sobre la seroprevalencia de la leucosis enzoótica bovina (LEB) en 360 bovinos lecheros, representativos de los municipios Pedraza y Barinas del estado Barinas, Venezuela, durante el periodo comprendido entre julio y noviembre 2007. En todos ellos se evaluó la presencia de signos clínicos compatibles con LEB (caquexia, decaimiento, y tumefacciones en los ganglios linfáticos supraescapulares e inguinales superficiales). Se recolectaron muestras de sangre, para la detección de anticuerpos y la proporción de linfocitos, lo cual se hizo mediante la prueba de ELISA y por contaje de linfocitos, respectivamente, relacionándose el porcentaje de animales seropositivos con el hallazgo de signos, tumefacciones en los ganglios y valores linfocíticos. Adicionalmente, se evaluó la seropositividad entre sexos, grupos etarios y número de partos, como factores de riesgo, mediante la prueba de Chi cuadrado (X²). Se detectaron 219 de 360 (60,83%) bovinos con anticuerpos específicos contra el virus de la LEB (VLEB), indicando una prevalencia elevada de distribución uniforme, en ambos municipios. La proporción de animales seropositivos con signos clínicos resultó ligeramente superior (33,79%) a la de los seronegativos (19,86%), aunque estos valores no fueron estadísticamente significativos. De igual manera, no se encontraron diferencias entre los seropositivos y seronegativos, en cuanto a las tumefacciones detectadas en los ganglios detectados, indicando que la ausencia de ellas no implica ausencia de infección. Las elevadas proporciones de linfocitos en los bovinos seropositivos y seronegativos resultaron similares, revelando no estar relacionadas con la infección por el VLEB. Con respecto a los factores de riesgo, la edad y el número de partos, mostraron estar asociados con la presencia de anticuerpos (P=0,0030 y P=0,0001, respectivamente), mientras que para el sexo no se detectaron. Estos resultados representan una contribución al conocimiento del comportamiento de la LEB en Venezuela.
An investigation was conducted to study the seroprevalence of enzootic bovine leukosis (EBL) in dairy cattle from the municipalities of Pedroza and Barinas, located at the State of Barinas, Venezuela, from July to November 2007. A total of 360 dairy cows were used. In all animals, the presence of clinical signs compatible with EBL, such as emaciation, weakness, tumefaction in suprascapular and superficial inguinal lymph nodes, were assessed. Blood samples positive to antibodies against EBLV were collected, specific antibodies to EBLV and lymphocyte proportion in samples were determined through the ELISA test and lymphocyte count, respectively. The percentage of positive animals was related to clinical findings, tumors, and lymphocytes values. Additionally, seropositivity among sex, age groups, and calving number, considered as risk factors, were also analyzed using the Chi square (X²) test. Of a total of 360 animals, 219 (60.83%) were positive to EBLV antibodies, indicating an elevated prevalence of uniform distribution in both municipalities. The proportion of seropositive animals with clinical signs was slightly higher (33.79%), when compared to seronegative animals (19.86%), although these values were not statistically significant. Likewise, no differences were found between serpositives and seronegatives regarding tumefaction detected, indicating that absence of such tumefaction does not imply lack of infection. The elevated amount of lymphocytes in both seropositive and seronegative animals was similar, reflecting no relationship with the infection through the EBLV. Concerning risk factors, age and calving number showed to be associated with the presence of antibodies (P=0.0030 and P=0.0001, respectively). In contrast, such association was not found for the variable sex. These results represent a contribution to the comprehension of EBL behaviour in Venezuela.
ABSTRACT
La leucosis enzoótica bovina (LEB), también conocida como leucosis viral bovina (LVB), es una enfermedad neoplásica de origen viral, producida por un oncornavirus tipo C (retroviridae) que ocurre con o sin formación de nódulos neoplásicos. La leucosis bovina (LB) en Venezuela ha sido diagnosticada clínicamente en base a las manifestaciones y evidencias clínico patológicas, así como sobre los cambios anatomopatológicos que han sido descritos en algunos casos, pero ninguno publicado. Se han hecho reportes de esta enfermedad en bovinos de leche, evidenciando la presencia de casos sin formación de nódulos neoplásicos, los cuales han sido considerados sospechosos, en razón de no haber realizado pruebas serológicas en el laboratorio. De igual forma, se han descrito casos de leucosis con formación de nódulos neoplásicos en diferentes órganos y han sido reportados como casos sospechosos de LB. La literatura refiere la existencia de cuatro (4) formas de leucosis: multicéntrica adulta, juvenil poco común, tímica y cutánea. Esta clasificación, es referida a los casos con presencia de nódulos neoplásicos constituidos por tejido linfoide anaplástico, sobre el cual se fundamenta el diagnóstico anatomopatológico. En el presente trabajo se reporta un caso de linfoma o linfosarcoma multicéntrico que se describe como sospechoso de LB en una búfala de agua de 10 años de edad en el estado Mérida, Venezuela, fundamentado en el diagnóstico anatomopatológico, con descripción de los cambios macro y microscópicos observados. Adicionalmente se reporta una ocurrencia de 2 por ciento de positividad a LB mediante las técnicas ELISA y AGID en el rebaño (300 búfalos) de la misma procedencia del caso descrito.
Bovine Enzootic Leukosis (BEL), also known as Viral Bovine Leukosis (VBL), is a viral, oncornavirus type C (retroviridae), neoplasic disease which occurs with or without neoplasic nodules. The disease has been clinically and morphologically diagnosed as suspicious cases in Venezuela since lab serological tests were not performed. Macroscopic and microscopic changes have been described in a few cases with neoplastic nodules and referred as a Bovine leukosis (BL), but none has been published. Bovine leucosis has also been referred in milking cows with or without neoplasic nodules, most cases have not been diagnosed by blood serum analysis and considered to be only suspicious cases. There are four distinct forms of BL (adult mullticentric, juvenile uncommon, thymic and cutaneous) have been reported in the literature around the world, this classification is based upon the presence of neoplasic nodules composed of anaplastic lymphoid tissue. This work reports a case of multicentric form of bovine lymphoma which could be suspicious of BL, in a 10 years old female water buffaloe in Mérida State, Venezuela. This report of one case of lymphosarcoma is supported by macroscopic and microscopic changes described. Aditionally, a frequency of 2 percent of positive cases diagnosed by ELISA and AGID tests is reported in the herd (300 buffaloes) of similar procedence of the described case.