Variability in indigenous Pakistani tomato lines and worldwide reference collection for Tomato Mosaic Virus (ToMV) and Tomato Yellow Leaf Curl Virus (TYLCV) infection

Abstract Local and exotic germplasm of tomato remains a major source for genetic improvement. Assessment of such lines for biotic stresses particularly viral diseases are the most important criteria for selection in Pakistan, where Tomato Yellow Leaf Curl Virus (TYLCV) and Tomato Mosaic Virus (ToMV) are the major diseases/viruses. A set of 40 accessions (including indigenous Pakistani lines and exotic germplasm from Europe, the United States, and Asia) were evaluated for their resistance/infection response to ToMV with artificial inoculation under greenhouse conditions. Infection response was quantified through disease scoring and DAS-ELISA test (for ToMV). A subset of 24 lines, was further screened for TYLCV using disease scoring and TAS-ELISA. The tested lines showed significant variability for resistance to ToMV. Only one accession (Acc-17878) was resistant to the ToMV whereas seven accessions i.e. Acc-17890, AVR-261, CLN-312, AVR-321, EUR-333, CLN-352, and CLN-362 expressed resistance to TYLCV. Correlation between phenotypic evaluation was confirmed by the ELISA results in both diseases, although both tools complemented to assess the viral infection status. In future, tomato breeding programs must consider breeding for ToMV and TYLCV resistance (using identified germplasm in our study) so as to deliver virus resistant tomato varieties.

RESUMO O germoplasma local e exótico do tomate continua sendo uma importante fonte de melhoramento genético. A avaliação de linhagens para estresses bióticos, particularmente as doenças virais, é o critério mais importantes para seleção no Paquistão, onde o vírus da folha amarela do tomate (TYLCV) e o vírus do mosaico do tomateiro (ToMV) são as principais doenças/vírus. Um conjunto de 40 acessos (incluindo linhagens indígenas do Paquistão e germoplasma exótico da Europa, dos Estados Unidos e da Ásia) foi avaliado quanto à resistência/resposta à infecção ao ToMV com inoculação artificial em casa de vegetação. A resposta à infecção foi quantificada por meio de pontuação da doença e de teste DAS-ELISA (para ToMV). Um subconjunto de 24 linhas foi posteriormente rastreado para TYLCV usando pontuação de doença e TAS-ELISA. As linhas testadas apresentaram variabilidade significativa para resistência ao ToMV. Apenas um acesso (Acc-17878) foi resistente ao ToMV, enquanto sete acessos (Acc-17890, AVR-261, CLN-312, AVR-321, EUR-333, CLN-352 e CLN-362) expressaram resistência ao TYLCV. A correlação entre a avaliação fenotípica foi confirmada pelos resultados do ELISA nas duas doenças, embora ambas as ferramentas tenham se complementado para avaliar o estado da infecção viral. No futuro, os programas de melhoramento de tomate devem considerar aperfeiçoamentos para resistência ao ToMV e TYLCV (usando germoplasma identificado em nosso estudo) de modo a fornecer variedades de tomate resistentes a vírus.

Variability in indigenous Pakistani tomato lines and worldwide reference collection for Tomato Mosaic Virus (ToMV) and Tomato Yellow Leaf Curl Virus (TYLCV) infection / Variabilidade em linhagens indígenas de tomate do Paquistão e coleção de referência global para infecção por vírus do mosaico do tomateiro (ToMV) e vírus da folha amarela do tomate (TYLCV)

Local and exotic germplasm of tomato remains a major source for genetic improvement. Assessment of such lines for biotic stresses particularly viral diseases are the most important criteria for selection in Pakistan, where Tomato Yellow Leaf Curl Virus (TYLCV) and Tomato Mosaic Virus (ToMV) are the major diseases/viruses. A set of 40 accessions (including indigenous Pakistani lines and exotic germplasm from Europe, the United States, and Asia) were evaluated for their resistance/infection response to ToMV with artificial inoculation under greenhouse conditions. Infection response was quantified through disease scoring and DAS-ELISA test (for ToMV). A subset of 24 lines, was further screened for TYLCV using disease scoring and TAS-ELISA. The tested lines showed significant variability for resistance to ToMV. Only one accession (Acc-17878) was resistant to the ToMV whereas seven accessions i.e. Acc-17890, AVR-261, CLN-312, AVR-321, EUR-333, CLN-352, and CLN-362 expressed resistance to TYLCV. Correlation between phenotypic evaluation was confirmed by the ELISA results in both diseases, although both tools complemented to assess the viral infection status. In future, tomato breeding programs must consider breeding for ToMV and TYLCV resistance (using identified germplasm in our study) so as to deliver virus resistant tomato varieties.

O germoplasma local e exótico do tomate continua sendo uma importante fonte de melhoramento genético. A avaliação de linhagens para estresses bióticos, particularmente as doenças virais, é o critério mais importantes para seleção no Paquistão, onde o vírus da folha amarela do tomate (TYLCV) e o vírus do mosaico do tomateiro (ToMV) são as principais doenças/vírus. Um conjunto de 40 acessos (incluindo linhagens indígenas do Paquistão e germoplasma exótico da Europa, dos Estados Unidos e da Ásia) foi avaliado quanto à resistência/resposta à infecção ao ToMV com inoculação artificial em casa de vegetação. A resposta à infecção foi quantificada por meio de pontuação da doença e de teste DAS-ELISA (para ToMV). Um subconjunto de 24 linhas foi posteriormente rastreado para TYLCV usando pontuação de doença e TAS-ELISA. As linhas testadas apresentaram variabilidade significativa para resistência ao ToMV. Apenas um acesso (Acc-17878) foi resistente ao ToMV, enquanto sete acessos (Acc-17890, AVR-261, CLN-312, AVR-321, EUR-333, CLN-352 e CLN-362) expressaram resistência ao TYLCV. A correlação entre a avaliação fenotípica foi confirmada pelos resultados do ELISA nas duas doenças, embora ambas as ferramentas tenham se complementado para avaliar o estado da infecção viral. No futuro, os programas de melhoramento de tomate devem considerar aperfeiçoamentos para resistência ao ToMV e TYLCV (usando germoplasma identificado em nosso estudo) de modo a fornecer variedades de tomate resistentes a vírus.

Genetic variability of populations of the white-eared opossum, Didelphis albiventris Lund 1840 (Didelphimorphia; Didelphidae) in Brazil / Variabilidade genética de populações de gambá de orelha branca, Didelphis albiventris Lund 1840 (Didelphimorphia; Didelphidae) no Brasil

Abstract Didelphis albiventris are found throughout Northeast and Central Brazil to central-southern Uruguay and it was subject of few studies in a population level. Given this, the present study investigated the genetic variability of the species using the mitochondrial molecular marker cytochrome oxidase c subunit I. We analyzed samples from the different biomes within three Brazilian regions: Northeast (Caatinga , Cerrado, and Atlantic Forest), Southeast (Cerrado , Atlantic Forest, Cerrado/Atlantic Forest, and Cerrado/Caatinga ecotones) and South (Pampa and Atlantic Forest). Software BAPs retrieved five distinct demes: dm 1, dm 2, and dm 5 that occurs in South, Northeast and Southeast regions respectively and the dm 3 and dm 4 are wide distributed in Northeast and Southeast. Population analysis performed with AMOVA, haplotype network and Mantel test estimated the veracity of the demes. The FST shows structuring for the five demes, with dm 1 (South region) isolated from the others, however the other analysis showed the Northeast/Southeast demes (dm 2-5) united, diagnosing gene flow between them, mainly at the transitional zones, in areas as far away as areas with similar latitude interval (Southeast vs South) that was not detected gene flow. In the haplotype network, the mutational steps was conclusive in split dm1 from dm 2-5 with 15 mutational steps and the Mantel test was moderated, which is explained by genetic similarity despite the great geographic distances (Northeast/Southeast). Thus, our analysis recognized two different lineages (South and Northeast/Southeast) and indicate that the biomes were not decisive in their isolation. The sharing of demes at the transitional zones and in areas with high latitudinal intervals reflects a recent ancestral polymorphism for D. albiventris. The plasticity in the occupation of the space by this species contributes in its wide dispersion capability, that is, geographical distribution. Our results revealed important implications for the management of D. albiventris in these transitional zones areas where demes were shared.

Resumo Didelphis albiventris é encontrada em todo o Nordeste e região central do Brasil até o centro-sul do Uruguai e foi alvo de poucos estudos em nível populacional. Dessa forma, o presente estudo, investiga a variabilidade genética da espécie usando o marcador molecular citocromo c oxidase subunidade I. Analisou-se amostras de diferentes biomas de três regiões brasileiras: Nordeste (Caatinga, Cerrado e Floresta Atlântica), Sudeste (Cerrado, Floresta Atlântica, ecótonos Cerrado/Floresta Atlântica e Cerrado/Caatinga) e Sul (Pampa e Floresta Atlântica). O software BAPs recuperou cinco demes distintos: dm 1, dm 2 e dm 5, que ocorrem nas regiões Sul, Nordeste e Sudeste, respectivamente, e os dm 3 e dm 4, que são amplamente distribuído no Nordeste e Sudeste. Análises populacionais realizadas com AMOVA, rede de haplótipo e teste de Mantel estimaram a veracidade das demes. O FST mostrou estruturação para as cinco demes, com dm 1 (região Sul) isolada das demais, entretanto as outras análises mostraram as demes Nordeste/Sudeste (dm 2-5) unidos, diagnosticando fluxo gênico entre elas, principalmente em zonas de transição, em áreas tão distante quanto áreas com similar intervalo de latitude (Sudeste e Sul), onde não foram detectado fluxo gênico. Na rede de haplótipo, os passos mutacionais foram conclusivos em separar dm 1 do dm 2-5 com 15 passos mutacionais, e o teste de Mantel foi moderado, o que é explicado pela similaridade genética apesar da grande distância geográfica (Nordeste/Sudeste). Assim, duas linhagens diferentes (Sul e Sudeste/Nordeste) foram encontradas, indicando que os biomas não foram decisivos em seus isolamentos. Os compartilhamentos das demes, em zonas de transição e em áreas com elevados intervalos de latitude, refletem um polimorfismo ancestral recente para D. albiventris. A plasticidade na ocupação do espaço por esta espécie contribui em sua ampla capacidade de dispersão, ou seja, distribuição geográfica. Nossos resultados revelam importantes implicações para o manejo de D. albiventris nessas áreas de zonas de transição, onde as demes são compartilhadas.

Diallel analysis and prediction of untested maize single cross hybrids / Análise dialélica e predição de híbridos simples de milho não testados

Popcorn (Zea mays everta) is a popular snack food and very appreciated in Brazil, presenting higher aggregate value when compared with field corn. The aim of this study were to identify superior inbred lines and single crosses hybrids (SH) for popcorn traits, as well as the prediction of the performance of untested single cross hybrids. Sixteen maize inbred lines were crossed in a 9x7 partial diallel, but it was possible to evaluate 47 single crosses in two distinct locations. Predicted genetic values, diallel analysis and the prediction of untested HS were performed by mixed models. Deviance effects for treatments x locations were considered non-significant (p>0.05) for grain yield (GY) and popping expansion (PE), showing an average performance from the HS in the locations. Inbred lines P5-1, P3.3T, GER-P3, P9-1, P12-2 andGER-P12 were selected considering the general combining ability, and should be used for obtaining superior genotypes. Based on the non-additive effects, the single hybrid P3.3T x GERP-P12 was selected for grain yield and popping expansion, and could be exploited in future trials. Neither of the untested single crosses showed desirable performance for grain yield and popcorn expansion.

O milho pipoca (Zea mays everta) é um alimento consumido e apreciado em todo o Brasil, apresentando valor comercial superior ao do milho comum. O presente trabalho teve como objetivo identificar linhagens e híbridos simples (HS) com desempenho superior para as principais características relacionadas ao milho pipoca, além da predição do desempenho de híbridos simples não testados. Foi realizado um dialelo parcial 9x7, dos quais apenas 47 HS foram avaliados em dois locais. Os valores genéticos preditos, análise dialélica e a predição dos HS não avaliados foram realizadas via modelos mistos. Os efeitos da deviance na interação tratamentos x locais foram considerados não significativos (p>0.05) para rendimento de grãos (RG) e capacidade de expansão (CE), indicando um comportamento médio dos HS nos ambientes testados. Com base nos efeitos aditivos, as linhagens P5-1, P3.3T, GER-P3, P9-1, P12-2 e GER-P12 foram selecionados e deverão ser usadas na formação de genótipos com desempenho superior. O híbrido P3.3T x GER-P12 foi selecionadopor apresentar elevado desempenho específico para rendimento e capacidade de expansão, podendo ser utilizado em futuros experimentos. Entre os híbridos não avaliados, nenhum apresentou desempenho satisfatório para as características avaliadas.

Decontamination of genetically modified mice strains by embryo transfer for obtaining SPF colonies in a Brazilian animal facility / Descontaminação de linhagens de camundongos geneticamente modificadas por transferência embrionária para obtenção de colônias SPF em um biotério brasileiro (São Paulo, SP)

The introduction of new strains of mice in specific pathogen-free (SPF) animal facilities should be performed carefully to avoid breaking sanitary barriers. To meet this need, animals should be rederived to reduce infection risk and thus avoid research interference caused by loss of animal health status and welfare. The objective of this study was to implement mice embryo transfer in the laboratory mouse facility of the Department of Immunology at the Institute of Biomedical Sciences/University of São Paulo, Brazil. Embryo transfers were performed to rederive genetically modified mouse strains with undefined sanitary status, received from different research and educational institutions. Fertilized eggs at two-cell stage were obtained by natural means and transferred into the oviducts of SPF pseudo-pregnant female mice. All surgical procedures were performed under aseptic conditions. A total of 625 embryos were transferred into the recipients. 148 pups were born, of which 140 were reared. Viruses, bacteria and intestinal protozoa were eliminated using this technique. The improvement in the microbiological status of mice allowed their expansion in our SPF facility. With these results, we can stimulate the use of embryo transfer technique between rodent facilities in Brazil and thus encourage the distribution of better models to our scientific community.(AU)

A introdução de novas linhagens de camundongos em biotérios livres de patógenos específicos (SPF) deve ser realizada com critérios para evitar a quebra das barreiras sanitárias. Dessa forma, os animais devem ser rederivados para reduzir os riscos de infecção e evitar as interferências provocadas pela perda do status sanitário e do bem-estar dos animais. O objetivo deste estudo foi implementar a transferência de embriões murinos no Biotério do Departamento de Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, Brasil. As transferências embrionárias foram realizadas para rederivar linhagens de camundongos geneticamente modificadas com status sanitário não conhecido, recebidas de diferentes instituições de pesquisa e de ensino. Os embriões em duas células foram obtidos pelos métodos naturais e transferidos para os ovidutos de fêmeas de camundongos SPF pseudoprenhas. Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados sob condições assépticas. Um total de 625 embriões foram transferidos para as receptoras. Foram obtidos 148 filhotes nascidos vivos, destes 140 foram desmamados. Por meio desta técnica, foram eliminados vírus, bactérias e protozoários intestinais. A melhora no status microbiológico dos camundongos permitiu a expansão destes em nossa colônia SPF. Com esses resultados, podemos promover o uso da técnica de transferência de embriões entre os biotérios brasileiros e assim incentivar a distribuição de modelos mais adequados para a nossa comunidade científica.(AU)

Molecular variants of Grapevine rupestris stem pitting-associated virus infecting grapevines (Vitis spp.) in Brazil / Variantes moleculares de Grapevine rupestris stem pitting-associated virus infectando videiras (Vitis spp.) no Brasil

ABSTRACT: Grapevine rupestris stem pitting-associated virus (GRSPaV) is one of the most common viruses of grapevine. It is involved in the graft-transmissible disease rupestris stem pitting of the rugose wood complex. The objective of the research was to perform the molecular characterization of the coat protein (CP) gene of sixteen Brazilian GRSPaV isolates aiming to determine the occurrence of molecular variants (strains) of this virus. Nine grapevine samples were evaluated, from which dsRNA was extracted. Nucleotide sequences were generated by Next generation sequencing (NGS). Fifteen complete sequences of the GRSPaV CP gene were obtained and phylogenetically analyzed. Multiple alignments of the sequences showed identities of nucleotides ranging from 82% to 99%, suggesting high variability among the CPs of Brazilian isolates. The study revealed that genetic variability of GRSPaV comprising three molecular variants is also present in Brazilian grapevine genotypes.

RESUMO: O GRSPaV é um dos vírus mais comuns da videira. Está associado à doença transmissível por enxertia denominada caneluras de rupestris que compõe o complexo do lenho rugoso. O objetivo do trabalho foi realizar a caracterização molecular do gene da proteína capsidial (CP) de 16 isolados brasileiros de GRSPaV visando determinar a ocorrência de variantes moleculares desse vírus. Nove amostras de videira foram avaliadas das quais foi extraído dsRNA. As sequências de nucleotídeos foram geradas pelo sequenciamento de nova geração (NGS). Quinze sequências completas do gene CP de GRSPaV foram obtidas e filogeneticamente analisadas. Os alinhamentos múltiplos entre as sequências mostraram identidades de nucleotídeos variando de 82% a 99%, sugerindo alta variabilidade entre as CPs de isolados brasileiros. O estudo revelou que a variabilidade genética de GRSPaV compreendendo três variantes moleculares também está presente nos genótipos de videira no Brasil.

Reaction of common bean lines derived from recurrent selection for white mold resistance and aggressiveness of Sclerotinia sclerotirum isolates / Reação de linhagens de feijão comum derivadas de seleção recorrente para resistência ao mofo branco e agressividade de isolados de Sclerotinia sclerotiorum

The objectives of this study were to verify the resistance of common bean lines derived from recurrent selection for white mold resistance and to identify those more stable to different isolates; to compare the aggressiveness of different Sclerotinia sclerotiorum isolates; and to verify isolates x lines interaction. Fifteen common bean lines were evaluated, twelve derived from recurrent selection for white mold resistance, one non-adapted source of resistance (Cornell 605), one moderately resistant and adapted (VC-16) and one susceptible to white mold (Corujinha). Ten isolates were used to inoculate the common bean lines through the straw test. A total of ten experiments were performed, one for each isolate. The randomized complete block design with three replications was used in each experiment. Each plot had five plants inoculated in two main branches, therefore the plot data was the average of the ten evaluations through a scale of nine grades. Diallel analysis were used to estimate the general reaction capacity (lines) and general aggressiveness capacity (isolates) to measure the resistance to white mold and the aggressiveness of the isolates, respectively. The GGE biplot analysis was used to group the common bean lines based on their resistance alleles and identify those more instable to the isolates. The resistance of the lines P4 and P10 was similar to Cornell 605, and they had stable reaction to different isolates and "Carioca" grain type. The lines of the advanced cycles of recurrent selection accumulated more favorable alleles than those of the first cycles, confirming the efficiency of the recurrent selection to increase white mold resistance in common bean. In addition, it was identified more aggressive isolates, UFLA 109 and UFLA 116, and a small magnitude of isolates x lines interaction, indicating a predominance of the horizontal resistance of the lines.

Os objetivos deste estudo foram verificar a resistência de linhagens de feijoeiro derivadas de diferentes ciclos de seleção recorrente para resistência ao mofo branco e identificar aquelas mais estáveis quando inoculadas com diferentes isolados; comparar a agressividade de diferentes isolados de Sclerotinia sclerotiorum e verificar se há interação isolados x linhagens. Quinze linhagens de feijoeiro comum foram avaliadas, doze derivadas de seleção recorrente para mofo branco, uma fonte de resistência não adaptada (Cornell 605), uma moderadamente resistente e adaptada (VC-16) e uma suscetível ao mofo branco (Corujinha). Dez isolados foram utilizados para inocular as linhagens de feijoeiro através do straw test. Foram realizados dez experimentos, um para cada isolado. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos casualizados, com três repetições. Em cada parcela, cinco plantas foram inoculadas em dois ramos principais, portanto, os dados da parcela foram a média de dez avaliações utilizando uma escala de nove notas. A análise dialélica foi utilizada para estimar a capacidade geral de reação (linhagens) e capacidade geral de agressividade (isolados) para medir, respectivamente, a resistência das linhagens e a agressividade dos isolados. A análise GGE biplot foi utilizada para agrupar as linhagens baseado em seus alelos de resistência e identificar as mais estáveis aos isolados. A resistência das linhagens P4 e P10 foi semelhante à Cornell 605, com reação estável e grãos tipo "Carioca". Como esperado, as linhagens dos ciclos mais avançados de seleção recorrente acumularam mais alelos favoráveis que aquelas dos primeiros ciclos confirmando a eficiência da seleção. Além disso, foram identificados isolados mais agressivos, UFLA109 e UFLA 116 e interação isolados x linhagens de pequena magnitude, indicando um predomínio da resistência horizontal.

Isolation, culture and characterization of multipotent mesenchymal stem cells from goat umbilical cord blood / Isolamento, cultura e caracterização de células tronco mesenquimais multipotentes provenientes do sangue do cordão umbilical caprino

Mesenchymal stem cells (MSC) reside in small numbers in many adult tissues and organs, and play an active role in the homeostasis of these sites. Goat derived multipotent MSC have been established from bone marrow, adipose tissues and amniotic fluid. Umbilical cord blood (UCB) is considered an important source of these cells. However, the MSC isolation from the goat UCB has not been demonstrated. Therefore, the aim of the present study was to isolate, culture and characterize goat umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells. MSC were isolated from UCB by Ficoll-Paque density centrifugation and cultured in DMEM supplemented with 10% or 20% FBS. FACS analysis was performed and induction lineage differentiation was made to characterize these cells. They exhibited two different populations in flow cytometry, and revealed the positive expression of CD90, CD44 and CD105, but negative staining for CD34 in larger cells, and positive stained for CD90 and CD105, but negative for CD44 and CD34 in the smaller cells. MSC from goat UCB showed capability to differentiate into chondrocytes and osteoblasts when incubated with specific differentiation medium. Present study established that goat mesenchymal stem cells can be derived successfully from umbilical cord blood.(AU)

As células tronco mesenquimais (MSC) residem em pequenas quantidades em muitos tecidos e órgãos adultos, desempenhando um papel ativo na homeostase destes locais. O isolamento de MSC já foi demonstrado em amostras de medula óssea, tecido adiposo e fluido amniótico de cabras. O sangue de cordão umbilical é considerado uma fonte importante desse tipo de células. No entanto, até o presente momento, não foi demonstrado o isolamento de MSC provenientes do sangue de cordão umbilical de cabras. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi isolar, cultivar e caracterizar células tronco mesenquimais provenientes do sangue do cordão umbilical caprino. As MSC foram isoladas utilizando o gradiente de densidade Ficoll-Paque e cultivadas em DMEM suplementado com 10% ou 20% de FBS. A caracterização desse tipo celular foi realizada através de análise por citometria de fluxo e diferenciação em linhagens celulares mesodermais. A analise no citômetro de fluxo demonstrou a presença de duas populações distintas, um grupo com células maiores e outro com células menores; observando expressão positiva de CD90, CD44 e CD105, e negativa para CD34 nas células maiores; enquanto que as menores foram positivas para CD90 e CD105, mas negativas para CD44 e CD34. As células isoladas demonstraram capacidade de se diferenciar em condrócitos e osteoblastos quando incubadas com meio de diferenciação específico. O presente estudo demonstrou que células tronco mesenquimais podem ser obtidas com sucesso do sangue do cordão umbilical caprino.(AU)

Genetic variability of populations of the white-eared opossum, Didelphis albiventris Lund 1840 (Didelphimorphia; Didelphidae) in Brazil

Abstract Didelphis albiventris are found throughout Northeast and Central Brazil to central-southern Uruguay and it was subject of few studies in a population level. Given this, the present study investigated the genetic variability of the species using the mitochondrial molecular marker cytochrome oxidase c subunit I. We analyzed samples from the different biomes within three Brazilian regions: Northeast (Caatinga , Cerrado, and Atlantic Forest), Southeast (Cerrado , Atlantic Forest, Cerrado/Atlantic Forest, and Cerrado/Caatinga ecotones) and South (Pampa and Atlantic Forest). Software BAPs retrieved five distinct demes: dm 1, dm 2, and dm 5 that occurs in South, Northeast and Southeast regions respectively and the dm 3 and dm 4 are wide distributed in Northeast and Southeast. Population analysis performed with AMOVA, haplotype network and Mantel test estimated the veracity of the demes. The FST shows structuring for the five demes, with dm 1 (South region) isolated from the others, however the other analysis showed the Northeast/Southeast demes (dm 2-5) united, diagnosing gene flow between them, mainly at the transitional zones, in areas as far away as areas with similar latitude interval (Southeast vs South) that was not detected gene flow. In the haplotype network, the mutational steps was conclusive in split dm1 from dm 2-5 with 15 mutational steps and the Mantel test was moderated, which is explained by genetic similarity despite the great geographic distances (Northeast/Southeast). Thus, our analysis recognized two different lineages (South and Northeast/Southeast) and indicate that the biomes were not decisive in their isolation. The sharing of demes at the transitional zones and in areas with high latitudinal intervals reflects a recent ancestral polymorphism for D. albiventris. The plasticity in the occupation of the space by this species contributes in its wide dispersion capability, that is, geographical distribution. Our results revealed important implications for the management of D. albiventris in these transitional zones areas where demes were shared.

Resumo Didelphis albiventris é encontrada em todo o Nordeste e região central do Brasil até o centro-sul do Uruguai e foi alvo de poucos estudos em nível populacional. Dessa forma, o presente estudo, investiga a variabilidade genética da espécie usando o marcador molecular citocromo c oxidase subunidade I. Analisou-se amostras de diferentes biomas de três regiões brasileiras: Nordeste (Caatinga, Cerrado e Floresta Atlântica), Sudeste (Cerrado, Floresta Atlântica, ecótonos Cerrado/Floresta Atlântica e Cerrado/Caatinga) e Sul (Pampa e Floresta Atlântica). O software BAPs recuperou cinco demes distintos: dm 1, dm 2 e dm 5, que ocorrem nas regiões Sul, Nordeste e Sudeste, respectivamente, e os dm 3 e dm 4, que são amplamente distribuído no Nordeste e Sudeste. Análises populacionais realizadas com AMOVA, rede de haplótipo e teste de Mantel estimaram a veracidade das demes. O FST mostrou estruturação para as cinco demes, com dm 1 (região Sul) isolada das demais, entretanto as outras análises mostraram as demes Nordeste/Sudeste (dm 2-5) unidos, diagnosticando fluxo gênico entre elas, principalmente em zonas de transição, em áreas tão distante quanto áreas com similar intervalo de latitude (Sudeste e Sul), onde não foram detectado fluxo gênico. Na rede de haplótipo, os passos mutacionais foram conclusivos em separar dm 1 do dm 2-5 com 15 passos mutacionais, e o teste de Mantel foi moderado, o que é explicado pela similaridade genética apesar da grande distância geográfica (Nordeste/Sudeste). Assim, duas linhagens diferentes (Sul e Sudeste/Nordeste) foram encontradas, indicando que os biomas não foram decisivos em seus isolamentos. Os compartilhamentos das demes, em zonas de transição e em áreas com elevados intervalos de latitude, refletem um polimorfismo ancestral recente para D. albiventris. A plasticidade na ocupação do espaço por esta espécie contribui em sua ampla capacidade de dispersão, ou seja, distribuição geográfica. Nossos resultados revelam importantes implicações para o manejo de D. albiventris nessas áreas de zonas de transição, onde as demes são compartilhadas.

Cytotoxic effects of local anesthesia through lidocaine/ropivacaine on human melanoma cell lines / Efeitos citotóxicos de anestesia local com lidocaína/ropivacaína em linhagens celulares de melanoma humano

Abstract Background: Local anesthetics (LAs) are generally considered as safe, but cytotoxicity has been reported for several local anesthetics used in humans, which is not well investigated. In the present study, the cytotoxicity of lidocaine, ropivacaine and the combination of lidocaine and ropivacaine were evaluated on human melanoma cell lines. Melphalan, a nitrogen mustard alkylating agent, was used as a control agent for comparison of cytotoxic activity. Methods: Melanoma cell lines, A375 and Hs294T, were exposed to 1 h to different concentrations of above agents. Cell-viability after exposure was determined by flow cytometry. Results: Investigated LAs showed detrimental cytotoxicity on studied melanoma cell lines in time- (p < 0.001), concentration- (p < 0.001), and agent dependant. In both A375 and Hs294T cell lines, minimum cell viability rates were found after 72 h of exposure to these agents. Lidocaine 2% caused a reduction of vital cells to 10% ± 2% and 14% ± 2% in A375 and Hs294T, respectively after 72 h of exposure. Ropivacaine 0.75% after 72 h reduced viable cells to 15% ± 3% and 25% ± 3% in A375 and Hs294T, respectively. Minimum cell viability after 72 h exposure to the combination was 10% ± 2% and 18% ± 2% in A375 and Hs294T, respectively. Minimum cell viability after 72 h exposure to melphalan was 8% ± 1% and 12% ± 2%, in A375 and Hs294T, respectively. Conclusion: LAs have cytotoxic activity on human melanoma cell lines in a time-, concentration- and agent-dependant manner. Apoptosis in the cell lines was mediated through activity of caspases-3 and caspases-8.

Resumo Justificativa: Os anestésicos locais (ALs) são geralmente considerados como seguros, mas citotoxicidade foi relatada em vários anestésicos locais usados em seres humanos, a qual não é bem investigada. No presente estudo, a citotoxicidade de lidocaína e ropivacaína e da combinação de lidocaína e ropivacaína foi avaliada em linhagens celulares de melanoma humano. Melfalano, um agente alquilante de mostarda nitrogenada, foi usado como um agente de controle para a comparação da atividade citotóxica. Métodos: Linhagens celulares de melanoma, A375 e Hs294T foram expostas por uma hora a concentrações diferentes dos agentes mencionados acima. A viabilidade celular após a exposição foi determinada por citometria de fluxo. Resultados: Os ALs investigados mostraram citotoxicidade prejudicial nas linhagens celulares de melanoma estudadas dependente do tempo (p < 0,001), da concentração (p < 0,001) e do agente. Em ambas as linhagens de células A375 e Hs294T, níveis mínimos de viabilidade celular foram encontrados após 72 horas de exposição a esses agentes. Lidocaína a 2% provocou uma redução das células vitais para 10% ± 2% e 14% ± 2% em A375 e Hs294T, respectivamente, após 72 horas de exposição. Ropivacaína a 0,75% após 72 horas reduziu as células viáveis para 15% ± 3% e 25% ± 3%, em A375 e Hs294T, respectivamente. A viabilidade celular mínima após exposição de 72 horas para a combinação foi de 10% ± 2% e 18% ± 2% em A375 e Hs294T, respectivamente. A viabilidade celular mínima após exposição de 72 horas ao melfalano foi de 8% ± 1% e 12 ± 2, em A375 e Hs294T, respectivamente. Conclusão: Os ALs têm atividade citotóxica em linhagens de celulares de melanoma humano de modo dependente do tempo, da concentração e do agente. A apoptose nas linhagens celulares foi mediada por meio da atividade das caspases-3 e caspases-8.

Ação antiproliferativado flavonoide morina e do extrato da folha de oliveira (Oleaeuropaea L. ) contra a linhagem de célula H460 / The antiproliferative action of morin flavonoid and olive leaf extract (Olea europaea L. ) against the cell line H460

RESUMO O presente estudo investigou a indução de morte celular por apoptose pelo flavonóide morina e pelo extrato da folha de oliveira (Oleaeuropaea L.) em linhagens de células de câncer de pulmão do tipo não pequenas (H460). O tratamento com morina e o extrato de oliveira em células H460 resultou na redução do crescimento tumoral e indução de morte celular avaliados pelos ensaios de MTT e lactato desidrogenase (LDH) e a morte celular por apoptose confirmada por microscopia de fluorescência e análise por citometria de fluxo. Os dados indicaram que o flavonóide morina e o extrato de oliveira diminuíram a viabilidade celular para taxas percentuais de 7,22± 1,54% e 62,37± 2,85% nas concentrações de 800µM e µg/mL, respectivamente. As maiores taxas percentuais de morte celular por apoptose foram100% para morina na concentração de 800µM e 70,49 ± 5,91% para o extrato de oliveira na concentração de 800 µg/mL. Estes resultados foram associados com a alteração do potencial de membrana mitocondrial, cujos valores são de 54,91% para morina na concentração de 400µM e 42,2% para o extrato de oliveira na concentração de 800 µg/mL sugerindo envolvimento da via intrínseca da morte celular por apoptose. Portanto, morina e o extrato de oliveira afetaram a viabilidade celular da linhagem H460 induzindo morte celular por apoptose.

ABSTRACT This study investigates possible apoptosis induction mechanism by the flavonoid morin and the olive leaf extract (Olea europaea L.) in non-small lung cancer cells (H460). The treatment with morin and olive leaves extract resulted in growth inhibition and induction of apoptosis in H460 cells lines measured by the MTT assay methods and confirmed by fluorescence microscopy, flow cytometry analysis. The data indicated that themurin and the extract of olive decreased the cell viability percentage rates of 7.22 ± 1,54% and 62.37 ± 2,85% in the concentrations of 800 µM and µg/mL, respectively. The highest percentage rates of cell death by apoptosis were 100% for themorin in a concentration of 800 µM and 70.49 ± 5.91% for the olive extract in a concentration of 800 µg/mL. These findings were associated with altered mitochondrial membrane potential, whose value is 54.91% for the murin concentration of 400 µM and 42.2% for the olive extract in a concentration of 800 mg / mL, suggesting involvement of the intrinsic pathway of cell death by apoptosis. Therefore, the morin and the olive extract affect the cell viability of H460 cell lines inducing cell death by apoptosis.

Adaptabilidade e estabilidade fenotipica de genótipos de soja em Porto Alegre do Norte, MT / Fentopic adaptability and stability in soybean genotypes in Porto Alegre do Norte, state of Mato Grosso

Estudos de adaptabilidade e estabilidade são de grande importância para os programas de melhoramento de plantas, tornando possível a identificação de cultivares com comportamento previsível frente às variações ambientais. O objetivo deste trabalho foi avaliar, com base na produtividade de grãos, a adaptabilidade e a estabilidade de genótipos de soja de ciclo tardio, cultivados em três anos consecutivos em Porto Alegre do Norte-MT. Os experimentos foram conduzidos na Fazenda Piraguassu, pertencente ao Grupo Itaquere, no município de Porto Alegre do Norte-MT. O delineamento experimental foi o de blocos completos casualizados com três repetições, envolvendo 25 linhagens e quatro cultivares de soja (BRS Garantia, UFUS Impacta, UFUS Xavante e MSOY 8914). Os métodos de Eberhart e Russel (1966) e Lin Binns modificado por Carneiro (1998) permitiram identificar as linhagens UFU-1 e UFU-14 adaptadas a ambiente favorável, alta estabilidade e elevadas médias de produtividade de grãos. Todas as metodologias propostas foram concordantes em destacar a UFU- 16, devido ao maior desempenho produtivo, à adaptação a ambiente favorável, entretanto com baixa estabilidade.

Studies on adaptability and stability are very important in plant improving programs, because they allow identifying cultivars with predictable behavior upon environmental changes. This search aims to evaluate adaptability and productive stability in soybean genotypes [Glycine max (L.) Merrill], in Porto Alegre do Norte, state of Mato Grosso, Brazil. The experiment were carried out in Paraguassu Farm which belongs to Itaquere Group. The experimental design was a randomized block design with three replications, involving 25 lines and four commercial cultivars of soybean (BRS-Garantia, UFUS Impacta, UFUS Xavante e MSOY 8914). Assays were performed in harvests of 2008/2009, 2009/2010 and 2010/2011 in Porto Alegre do Norte-MT. In order to evaluate adaptability and stability, we used the following methods: Eberhart & Russell (1966), Lin & Binns modified by Carneiro (1998), centroid (ROCHA et al., 2005) and Wricke (1965). All these methodologies agreed in highlighting UFU- 16, due to its best productive performance, adaptation to favorable environment, however, it was considered low stability. According to the methods Eberhart & Russell (1966), Lin & Binns modified by Carneiro (1998), UFU-1 and UFU4 lineages showed high grain productivity average, high stability and were classified as adapted to favorable environment. However, both methodologies Lin & Binns modified by Carneiro (1998) and Eberhart & Russell (1966) agreed in classifying the cultivars concerning to adaptability and stability.

Expressão gênica da família das lisil oxidases e papel funcional de LOX em astrocitomas / Gene expression of lysyl oxidase family and functional role of LOX in astrocytomas

O desenvolvimento e invasão de tumores cerebrais primários são diretamente influenciados pela matriz extracelular. Considerando que lisil oxidase (LOX) e os demais membros da família das lisil oxidases (LOXL1, LOXL2, LOXL3 e LOXL4) apresentam complexidade tanto estrutural quanto funcional e estão envolvidos em processos biológicos vitais, como motilidade celular, sinalização celular e regulação gênica, a desregulação da expressão destas proteínas pode levar à gênese e progressão tumoral. O presente trabalho teve como objetivos avaliar os níveis de expressão dos genes que codificam todos os membros da família das lisil oxidases em astrocitomas de diferentes graus de malignidade e correlacionar com a expressão de BMP1 e HIF1A, mutação de IDH1 e tempo de sobrevida total dos pacientes. Adicionalmente, as expressões das proteínas codificadas por estes genes foram também realizadas, além de um estudo funcional in vitro do papel de LOX em astrocitomas. A análise da expressão dos genes foi realizada por PCR quantitativa em tempo real numa série de 153 astrocitomas e 22 amostras de tecido cerebral não neoplásico. A expressão proteica foi conduzida por imuno-histoquímica em amostras de astrocitomas. O silenciamento da expressão de LOX foi realizado em linhagens celulares de glioblastoma humano U87MG e A172 transfectadas com o siRNA para os ensaios funcionais. A expressão de todos os genes (LOX, LOXL1, LOXL2, LOXL3, LOXL4, BMP1 e HIF1A) aumentou com o grau de malignidade dos astrocitomas, com maiores níveis nos casos de glioblastoma. Foi encontrada uma correlação positiva nos valores de expressão dos genes principalmente nos glioblastomas. Somente a expressão de LOXL3 teve um impacto na sobrevida dos casos com GBM. Pacientes com maior expressão apresentaram maior sobrevida em relação aos com menor expressão de LOXL3. Os casos de astrocitoma grau II com mutação de IDH1 apresentaram menor expressão de LOXL1 e de LOXL4 quando comparados com os casos sem mutação. Os casos...

The development and invasion of primary brain tumors are directly influenced by the extracellular matrix. Considering that lysyl oxidase (LOX) and other lysyl oxidase family members (LOXL1, LOXL2, LOXL3 e LOXL4) have both structural and functional complexity and that they are involved in vital biological processes such as cell motility, cell signaling and gene regulation, a deregulation of these proteins can lead to the genesis and tumor progression. This study aimed to evaluate the expression levels of genes that code for the lysyl oxidase family members in astrocytomas of different malignant grades and to correlate to the expression of BMP1 and HIF1A, IDH1 mutation and overall patients' survival. Moreover, protein expression coded by these genes was also analyzed, besides an in vitro functional study of LOX role in astrocytomas. Gene expression analysis was performed by quantitative real-time PCR in a series of 153 astrocytomas and 22 samples of non-neoplastic brain. Protein expression was analyzed by immunohistochemistry in astrocytoma samples. LOX knockdown was performed in cells of human glioblastoma U87MG and A172 transfected with siRNA. Expression levels of all genes (LOX, LOXL1, LOXL2, LOXL3, LOXL4, BMP1 e HIF1A) increased with the malignant grade of astrocytomas, glioblastomas presenting the higher levels. Positive correlations of gene expression values were observed specially in glioblastomas. Only LOXL3 expression impacted in the overall survival of glioblastoma cases. Patients with higher expression presented longer survival time than those with lower LOXL3 expression. Astrocytoma grade II cases with IDH1 mutation presented lower LOXL1 and LOXL4 expression when compared to those cases with wild type IDH1. On the other hand, GBM cases with IDH1-mutated presented lower LOX and LOXL1 expression than GBM cases without IDH1 mutation. Protein expression levels of lysyl oxidase family members were also higher in glioblastoma samples, with both nuclear...

Electroforesis en Gel de Campo Pulsado (PFGE) para la diferenciación molecular de Listeria monocytogenes / Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) for the molecular differentiation of Listeria monocytogenes

En Colombia no es obligatoria la notificación deL. monocytogenes en alimentos, pero se vigilan los alimentos dealto riesgo. Clínicamente se reportan como microorganismoGram-positivo sólo cuando causan meningitis. L. monocytogeneses un patógeno intracelular, transmitido por alimentos, letalpara humanos y animales, que causa Listeriosis; enfermedadque genera varios brotes en el mundo, con pérdidashumanas y económicas. Pocos trabajos en Colombia hanlogrado identificar y serotipificar molecularmente losaislamientos, lo que sólo permite distribuir teóricamentelos serotipos en linajes. Esta revisión se limita a mostrarcaracterísticas del patógeno, su importancia en salud públicay en la industria de alimentos, generalidades de la PFGECHEF;identificando el protocolo estandarizado de trabajoy las enzimas de restricción adecuadas para cortar el ADN.Se encontró que la combinación de enzimas XbaI-AscI,seguida de ApaI es la que ofrece mejores resultados en ladiferenciación de los aislamientos; agrupándolos por linajes;mostrando variaciones intra-serotipo y que en varios paíseslatinoamericanos se analizan los resultados a través dePulseNet, lo que garantiza la comparación de los patronesde PFGE en igualdad de condiciones...

The reporting of L. monocytogenes in food in Colombia is not a mandatory; however, foods consideredhigh-risk are monitored, and the organism is only reported clinically as Gram-positive when it causesmeningitis. L. monocytogenes is a foodborne, intracellular, pathogen which causes listeriosis, a disease lethalto humans and animals. Outbreaks of this disease worldwide can bring about human and economiclosses. Only a few studies in Colombia have been able to identify and molecularly serotype isolatesallowing only the theoretical distribution of serotypes by lineage. This review explains the characteristicsof the pathogen, its importance in public health and in the food industry, and provides an overview ofPFGE-CHEF; identifying the standard work protocol and the appropriate restriction enzymes to cutDNA. We found that the enzyme combination, XbaI-AscI, followed by ApaI offers the best results todifferentiate isolates, by grouping them by lineages, and displaying intra-serotype variations. Additionally,we found that in several Latin American countries the results are analyzed using PulseNet; this ensuresthe comparison of PFGE patterns in equivalent conditions...

Na Colômbia não há uma notificação compulsóriade L. monocytogenes em alimentos, mas alimentos de altorisco são monitorados. Clinicamente, são relatados comoorganismos Gram-positivos apenas quando eles causammeningite. L. monocytogenes é um patógeno intracelularde origem alimentar, letal para seres humanos e animais,que causa a listeriose, que gera surtos em todo o mundo,com perdas humanas e econômicas. Poucos trabalhos naColômbia identificaram e sorotipificaram molecularmenteos isolados, que só permite a distribuição de sorotiposteoricamente em linhagens. Esta avaliação é limitada amostrar características do patógeno, sua importância nasaúde pública e na indústria de alimentos, e uma visãogeral do PFGE-CHEF; identificar o protocolo-padrão detrabalho e enzimas de restrição apropriadas para cortar oADN. Verificou-se que a combinação de enzimas XbaIAscI,seguido por ApaI representa a combinação de enzimasque ofereceu melhores resultados na diferenciação dosisolados, agrupando-a por linhagens, mostrando a variaçãointra-serotipo e que, em muitos países da América Latina,os resultados são analisados através PulseNet, que asseguraa comparação de padrões de PFGE em igualdade decondições...

Adaptabilidade e estabilidade fenotípica de genótipos de soja no estado do Mato Grosso / Phenotypical adaptability and stability of soybean genotypes in the state of Mato Grosso

Objetivou-se por este trabalho avaliar a adaptabilidade e estabilidade fenotípica de genótipos de soja no Estado do Mato Grosso. Foram testados 16 genótipos nas safras 2004/05 e 2005/06, nos municípios de Novo São Joaquim, Porto Alegre do Norte e Sinop, utilizando-se o delineamento de blocos casualizados e três repetições. Os métodos de adaptabilidade e estabilidade avaliados foram: Plaisted e Peterson, Wricke, Annicchiarico, Lin e Binns, Eberhart e Russel, Cruz, Torres e Vencovsky e AMMI. Após as análises dos dados, conclui-se que as metodologias estudadas foram concordantes e complementares quanto aos resultados de análise de adaptabilidade e estabilidade fenotípica. Os ambientes diferiram quanto à favorabilidade em função do ano agrícola. A linhagem UFU 23 apresentou alta adaptabilidade e estabilidade fenotípica em todas as metodologias estudadas.

The objective is study evaluated the phenotypical adaptability and stability of soybean genotypes in the state of Mato Grosso. 16 genotypes were evaluated for yield in the harvests 2004/05, and 2005/06, in the counties Novo São Joaquim, Porto Alegre do Norte and Sinop, using as experimental design randomized blocks, and three repetitions. Genotype x environment was evaluated, and the analysis of adaptability and stability was done with the following methods: Plaisted and Peterson, Wricke, Annicchiarico, Lin and Binns, Eberhart and Russel, Cruz, Torres and Vencovsky and AMMI. The methodologies studied were similar and complemented each other for the results for phenotypical adaptability and stability. The environments differed in favorability as a function of agricultural year. The line UFU 23 presented high phenotypical adaptability and stability in all methodologies evaluated.

Genetic variability among 79 soybean progenies from UFU-Breeding Program / Variabilidade genética entre 79 progênies de soja provenientes do programa melhoramento genético UFU

Achieving high yield strains and early maturity are primary objectives in Soybean Breeding Program. As a result, the objective of this study was to evaluate 79 soybean progenies derived from ten biparental crosses from the Soybean UFU- Breeding Program. The experiment was conducted at Capim Branco Farm in Uberlândia, Minas Gerais. Initially the hibridation occurred among the parental genotypes with the desirable agronomic trai ts in a greenhouse. Subsequently, the selection by Bulk was made until the F4 generation. From this, individuals in the F5 generation progeny test were selected considering the traits grain yield and early. On February 10, 2010 it was carried out the conventional seeding of 79 progenies derived from ten biparental crosses in order to assess the following traits: Cycle (days), type of growth (TC), color of flower (CF), color of pubescence (CP), plant lodging (PL), number of pods with three grains (P3), number of pods with two grains (P2), number of pods with one grain (P1), total number of pods (PT), weight of 100 grains (W100), number of days to flowering (NDF), plant height at flowering (HPF), number of days to maturity (NDM), plant height at maturity (HPM), insertion height of first pod (H1V) and grain yield (PROD). With the exception of trait plant lodging, the agronomic traits that were evaluated allowed to identify genetic variability among the genotypes. The progenies UFUS 32, UFUS 02, UFUS 01, UFUS 37, UFUS 12, UFUS 36, UFUS 16, UFUS 29, UFUS 14 and UFUS 51 were the most promising genotypes for the conditions of Uberlândia ­ Minas Gerais, plant height at flowering and more adequate maturity and type of indeterminate growth, these being more productive, can be inserted in final testing of the Soybean UFU-Breeding Program and released as new cultivars.

A obtenção de linhagens de alta produtividade e de ciclo precoce são objetivos primordiais em programas de melhoramento genético da soja. Em função disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar 79 progênies de soja resultantes de dez cruzamentos biparentais provenientes do Programa de Melhoramento Genético de Soja da UFU. O experimento foi conduzido na Fazenda Capim Branco, no município de Uberlândia, MG. Inicialmente, a hibridação ocorreu entre os parentais com as características agronômicas desejáveis, em casa de vegetação. Posteriormente, a seleção por Bulk foi efetuada até a geração F4. A partir disso, selecionaram-se os indivíduos na geração F5 pelo teste de progênie, levando em consideração os caracteres produtividade de grãos e precocidade. No dia 10 de fevereiro de 2010, realizou-se a semeadura convencional de 79 progênies resultantes de dez cruzamentos biparentais a fim de avaliar as seguintes características: Ciclo (dias), tipo de crescimento (TC), cor de flor (CF), cor de pubescência (CP), acamamento (AC), número de vagens com um grão (V1), número de vagens com dois grãos (V2), número de vagens com três grãos (V3), número de vagens total (VT), peso de 100 grãos (P100), número de dias para floração (DIASF), altura da planta na floração (APF), número de dias para maturidade (DIASM), altura da planta na maturidade (APM), altura de inserção de primeira vagem (A1V), peso por parcela (PP) e produtividade de grãos (PROD). Com exceção do caráter acamamento, os caracteres agronômicos avaliados permitiram identificar variabilidade genética entre os genótipos. As progênies UFUS 32, UFUS 02, UFUS 01, UFUS 37, UFUS 12, UFUS 36, UFUS 16, UFUS 29, UFUS 14 e UFUS 51 foram os genótipos mais promissores para as condições de Uberlândia-MG, sendo estes mais produtivos, altura de planta mais adequada na floração e maturidade e tipo de crescimento indeterminado, podendo ser inseridos em ensaios finais do Programa melhoramento genético de soja UFU e lançados como novas cultivares.

Tegumentary changes in two diferent strains of schistosoma mansoni treated with artemisinin and artesunic acid

Different strains of Schistosoma mansoni can respond differently to conventional and experimental treatments. Therefore, the responses to potential schistosomicidal drugs must be checked with different parasite strains. This work aimed to analyze changes caused by different concentrations of artemisinin or artesunic acid administered on different days in the teguments of adult S. mansoni belonging to two Brazilian strains (BH and SJ), using scanning electron microscopy (SEM). Infected mice were treated with 300 or 500 mg/kg of artemisinin and artesunic acid, 30 or 45 days post infection. Fifteen days after treatment, worms were examined by SEM. Altered teguments were observed in males and females on both days of treatment with both compounds, but the injury with artesunic acid was more intense. The treatment utilizing 500 mg/kg of artesunic acid against the BH strain 30 days after the infection proved to be particularly effective, resulting in erosion, peeling, sensory structure damage, and vesicle formation on the tegument of males and females. It is concluded that artemisinin and artesunic acid showed qualitatively similar tegumentary changes in both genders of the BH and SJ parasite strains. However, changes induced by artesunic acid were more severe for the BH strain, which demonstrates greater susceptibility of this strain to this experimental treatment...

Alterações tegumentares em duas diferentes linhagens de Schistosoma mansoni submetidas a tratamento com artemisinina e ácido artesúnicoDiferentes linhagens de Schistosoma mansoni podem responder de formas distintas a tratamentos experimentais. Portanto, ensaios com potenciais fármacos esquistossomicidas necessitam ser realizados com várias linhagens. Este trabalho visou analisar as alterações causadas por diferentes concentrações de artemisinina e ácido artesúnico, administradas em diferentes dias, sobre o tegumento de adultos de S. mansoni de duas linhagens brasileiras (BH e SJ), utilizando-se microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os camundongos infectados foram tratados com 300 e 500 mg/kg de artemisinina ou ácido artesúnico, 30 ou 45 dias após a infecção. Após 15 dias do tratamento, os vermes foram analisados pela MEV. A destruição do tegumento foi observada em machos e fêmeas nos dois dias de tratamento com ambos os compostos, mas observou-se que o ácido artesúnico provocou uma destruição mais intensa. O tratamento realizado com 500 mg/g de ácido artesúnico contra parasitos da linhagem BH, 30 dias após a infecção, mostrou ser o mais efetivo, resultando em erosão, descamação, destruição das estruturas sensoriais e formação de vesículas nos machos e nas fêmeas. Ficou evidenciado que as linhagens BH e SJ apresentaram alterações tegumentares diferentes quanto à intensidade, com ambos os compostos. No entanto, a destruição do tegumento foi mais intensa na linhagem BH, especialmente com o ácido artesúnico, o que demonstrou maior suscetibilidade desta linhagem a esse tratamento experimental...

Assessing the genetic diversity and ancestry of Hartón del Valle cattle using mitochondrial DNA / Diversidad genética y ancestría del ganado Hartón del Valle mediante ADN mitocondrial / Estimação da ancestralidade e da diversidade genética no gado Hartón del Valle utilizando DNA mitocondrial

The Hartón del Valle(HV)cattleisa Criollo breed of Spanish descent that has adapted to the conditionsof the Cauca valley (Colombia). This breed is currently listed as “vulnerable” because its population has dramatically declined in the last two years. Prompted by the uncertain future of this breed and its importance as a potential resource of valuable genes. Objective: this study addressed the diversity, genetic structure and ancestry of HV cattle using mitochondrial DNA (mtDNA). Methods: a 350-bp fragment was amplified and sequenced from 72 HV animals in 9 separate farms and from animals of Brahman and Holstein breeds. To analyze the breed's ancestry, the sequences were compared with 560 sequences available in the GenBank, representing 50 Bos taurus and Bos indicus breeds. Results: in accordance with the Spanish origin of the HV breed, there was a high representation of European mtDNA (91.7%) and a low representation of African (5.5%) and Middle Eastern mtDNA (2.7%). The average haplotype diversity was 0.65 ± 0.05. The farm with the oldest ancestry was the only population in which three mitochondrial lineages were observed; unfortunately, it was recently depopulated. Proximity was observed between HV and two Columbian breeds, the Romosinuano and Costeño con Cuernos. A comparative analysis with the sequences deposited in the GenBank from numerous breeds revealed the presence of 37 haplotypes, seven of which were unique to HV. Conclusions: the following Iberian breeds were found to be most closely related to HV: Tudanca, Rubia Gallega, Negra Serrana, Murciana, Pajuna, Avileña, Garvonesa and Mertolenga. Phylogenetic analysis confirmed the Iberian ancestry and some African influence on this Latin American Criollo breed.

El Hartón del Valle (HV),es una raza adaptada a las condiciones del Valle del Cauca(Colombia) que está catalogada como “vulnerable” y cuya población ha descendido drásticamente en los últimos dos años. Objetivo: debido al futuro incierto y a la importancia como recurso potencial en la seguridad alimentaria regional se abordó el estudio de la diversidad, la estructura genética y la ancestría del HV, mediante ADN mitocondrial (ADNmt). Métodos: se amplificó y secuenció un fragmento de 350 pb en 72 animales HV, provenientes de nueve poblaciones y de controles de las razas Brahman y Holstein. Para analizar la ancestría las secuencias fueron comparadas con 560 secuencias de 50 razas Bos taurus y Bos indicus, depositadas en el GenBank. Resultados: de acuerdo con su origen español, se encontró una marcada influencia del ADNmt europeo (91.7%) y baja participación de taurinos de origen africano (5.5%) y del cercano Oriente (2.7%). La diversidad haplotípica promedio fue 0.65 ± 0.05. El hato más antiguo fue el único que mostró los tres linajes mitocondriales, sin embargo, este ha sido liquidado recientemente. Se observó proximidad entre el HV con las razas colombianas Romosinuano y Costeño con Cuernos. La comparación con las secuencias depositadas en el GenBank con diferentes razas reveló la presencia de 37 haplotipos, de los cuales siete fueron únicos en el HV. Conclusiones: las razas ibéricas más cercanas al HV fueron: Tudanca, Rubia Gallega, Negra Serrana, Murciana, Pajuna, Avileña, Garvonesa y Mertolenga. El árbol filogenético confirmó la ancestralidad ibérica y la influencia africana en las razas criollas de América Latina.

O Hartón del Valle (HV) é uma raça adaptada às condições da região pertencente ao departamento do Valle del Cauca (Colombia). A raça está catalogada como vulnerável já que sua população tem sido reduzida drasticamente nos últimos dois anos. Objetivo: devido a incerteza no futuro da raça e a sua importancia como recurso potencial na segurança alimentaria regional, abordou-se o estudo da diversidade, a estrutura genética e a ancestralidade do gado HV, utilizando DNA mitocondrial (mtDNA). Métodos: para isto, se amplificou e sequenciou um fragmento de 350 pares de bases em 72 animais provenientes de nove populações e também de controles das raças Brahman e Holandesa. Para analizar a ancestralidade das sequências, estas foram comparadas com outras 560 de 50 raças Bos taurus y Bos indicus depositadas no genebank. Resultados: de acordo com sua origem espanhola, foi encontrada uma marcada influência do DNA mitocondrial europeu (91.7%), e baixa participação de taurinos de origem africana (5.5%) e do Oriente Próximo (2.7%). A média da diversidade haplotípica foi de 0.65 ± 0.05. A população de gado HV mais antiga foi a única que apresentou as três linhagens mitocondriais encontradas; embora, esta população foi terminada recentemente. Observou-se também proximidade do gado HV com as raças colombianas da região Caribe, Romosinuano e Costeño con Cuernos. A comparação com as sequências depositadas no genebank com diferentes raças revelou a presença de 37 haplotipos, dos quais sete foram únicos no HV. Conclusões: as raças ibéricas mais aproximadas do HV foram: Tudanca, Rubia Gallega, Negra Serrana, Murciana, Pajuna, Avileña Garvonesa e Mertolenga. A árvore filogenética confirmou sua ancestralidade ibérica e a influência africana nas raças crioulas da América Latina.

Reação de linhagens de feijoeiro ao fungo Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli em condições controladas / Reaction of common bean lines to Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli in controlled conditions

Entre os patógenos que mais contribuem para a redução da produtividade do feijoeiro no Brasil está o Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli. O emprego de cultivares resistentes é o controle mais eficaz para esse patógeno. Conduziu-se este trabalho, com o objetivo de avaliar linhagens de feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.) do banco de germoplasma da Universidade Federal de Lavras (UFLA), quanto a reação ao Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli e, ao mesmo tempo, estimar os parâmetros genéticos e fenotípicos que possam auxiliar em futuros programas de melhoramento para esse caráter. Foram avaliadas 367 linhagens em dez experimentos. As testemunhas 'Carioca' (suscetível) e 'Carioca MG' (resistente) foram utilizadas em todos os experimentos. O delineamento utilizado foi inteiramente ao acaso, com cinco repetições e parcelas de uma planta por vaso. As inoculações foram realizadas segundo a metodologia de corte e imersão de raízes na suspensão de esporos do fungo e as avaliações realizadas aos 21 dias após a inoculação com base no índice de severidade da doença empregando-se notas de 1 (plantas sem sintomas) a 9 (plantas mortas).Das linhagens do banco de germoplasma da Universidade Federal de Lavras (UFLA) avaliadas, 36,5 por cento foram resistentes ao Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli. Entre as resistentes, a maioria foi linhagens obtidas antes de 1990. Das 18 linhagens dos experimentos de VCU, do período de 2005/06, apenas quatro foram suscetíveis. A estimativa da herdabilidade (h²) foi elevada (h² = 87 por cento), indicando que, a princípio, o caráter é de fácil seleção.

Among the pathogens that most contribute for reducing the productivity of beans in Brazil is the Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli. The use of resistant cultivars is the most effective control for this pathogen. The aim of this study was to evaluate germoplasm bean (Phaseolus vulgaris L.) lines of the Federal University of Lavras (UFLA) as the reaction to the Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli and at the same time, to estimate the genetic and phenotypic parameters that could help in future programs of improvement for this character. Three hundred and sixty seven lines were evaluated in ten experiments. The controls' Carioca'(susceptible) and 'Carioca MG'(resistant) were used in all experiments. The experimental design used was a entirely randomized one, with five replicates and plots of one plant per pot. The inoculations were carried out following the method of cutting and dumping of roots in the suspension of spores of the fungus and the assessments conducted at 21 days after inoculation based on the index of severity of the disease employing up notes of 1 (plants without symptoms) to 9 (dead plants). Among the lines of germoplasm bank of the Federal University of Lavras (UFLA) assessed, 36.5 percent were resistant to Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli. Among the resistance, most of the lines were obtained before 1990: out of the 18 lines of the experiments of VCU evaluated in 2005/06, only four were susceptible. The estimate of heritability (h²) was high (h² = 87 percent), indicating that, in principle, the character is of easy selection.

Padronização da técnica de eletroforese de isoenzimas para certificação de linhagens celulares / Standardization of isoenzymes electrophoresis technique for cell lines certification

A comprovação da espécie de origem é um dos itens da certificação de linhagens celulares, que pode ser feita por meio de técnica de eletroforese de isoenzimas. Com o objetivo de padronizar essa técnica, o grupo de estudo do Núcleo de Cultura de Células do IAL utilizou extratos celulares de diferentes espécies animais, que foram submetidos à eletroforese horizontal ou vertical em géis de poliacrilamida ou agarose, 100 V e4 oC. A revelação das bandas para a enzima glicose 6-fosfato desidrogenase foi realizada com o auxílio de sais de tetrazólio. Observou-se a presença de uma única banda para cada linhagem celular testada, com os padrões de migração esperados para as diferentes espécies utilizadas, com exceção da linhagem bovina MDBK, que não apresentou uma das bandas, provavelmente em função de menor expressão dessa enzima. Após a avaliação dos resultados obtidos com os diferentes sistemas de eletroforese e géis testados, optou-se pelo uso de eletroforese horizontal em géis de agarose a 2. A padronização e a implantação dessa técnica permitirão que o laboratório forneça linhagens celulares com o devido controle de qualidade.