Molecular characterization of Enterobacteriaceae resistant to carbapenem antimicrobials / Caracterização molecular de enterobactérias resistentes aos carbapenêmicos

ABSTRACT The present study aimed to genotypically and phenotypically characterize clinical isolates of carbapenem-resistant Enterobacteriaceae collected from inpatients at the University Hospital of Santa Maria, during seven months. Among the clinical isolates subjected to the modified Hodge test (MHT), 62.5% were positive, indicating possible production of carbapenemase. Polymerase chain reaction (PCR) demonstrated that blaKPC was the most frequently found gene (31%), followed by blaIMP (12.5%). Combined use of the methods is needed to identify carbapenem resistance in enterobacteria to prevent their spread and control the infections caused by these organisms.

RESUMO Objetivou-se caracterizar fenotípica e genotipicamente isolados clínicos de enterobactérias resistentes aos carbapenêmicos (CRE) provenientes do Hospital Universitário de Santa Maria (RS). Entre os isolados clínicos submetidos ao teste modificado de Hodge (MHT), 62,5% apresentaram positividade, indicando possível produção de carbapenemase. A reação em cadeia da polimerase (PCR) demonstrou que o blaKPC foi o gene mais encontrado (31%), seguido de blaIMP (12,5%). O uso conjunto de distintas metodologias faz-se necessário para identificar a resistência aos carbapenêmicos produzida pelas enterobactérias, de modo a auxiliar o controle de infecção prevenindo a disseminação desses microrganismos.

Diferentes métodos fenotípicos para isolamento e identificação de espécies de Candida / Different phenotypic methods for isolation and identification of Candida species

C. albicans é o mais frequente agente responsável pela candidíase e está também associada a doençasimunossupressoras como, por exemplo, diabetes. Entretanto, outras espécies não-albicans como C.dubliniensis inicialmente associada com candidíase da orofaringe de pacientes infectados pelo vírus HIV,onde ainda é mais prevalente, tem sido reconhecida como causa de infecção em pacientes com câncer,com fibrose cística e pacientes com diversas patologias e diferentes graus de imunocomprometimento.Utilizando-se métodos fenotípicos para identificação de Candida spp. é possível discriminar rotineiramenteisolados orais em laboratórios de microbiologia. Um dos problemas que interferem na realização de identificaçãodas espécies do gênero Candida em estudos epidemiológicos mais amplos é a dificuldade da rápidaidentificação, a partir de meios de triagem de baixo custo. Dessa forma, alguns métodos fenotípicos sãoapresentados com o objetivo de contribuir na busca de testes alternativos que possam com segurança, seremaplicados às rotinas de laboratórios.

C. albicans is the frequent agent for the oral candidosis and it is also associated to immunosuppressivediseases as, for example, diabetes. However, other non-albicans species such as C. dubliniensis initiallyassociated with candidosis in orofaringe patients infected by the virus HIV, where is still more prevalent,it has been recognized as infection cause in patients with cancer, cystic fibrosis and patients with severalpathologies. Phenotypics methods for Candida spp. are easy-to-use procedures for routine discriminationof oral isolates in the clinical microbiology laboratory. One of the problems that interfere in the identificationaccomplishment of the species of Candida in more wide epidemic studies is the difficulty of the fast identification,starting from screen methods of low cost. In that way, some phenotypics methods are presented withthe objective of contributing in the search of alternative tests to be applied as routine in laboratories.

Detección fenotípica y molecular de resistencia a meticilina en S. aureus / Phenotypic and molecular detection of methicillin resistance in S. aureus

La detección de resistencia a meticilina es complicada debido a la heterogeneidad de su expresión fenotípica; dificultando su detección en el laboratorio, lo que ha conducido al desarrollo de varias técnicas para incrementar su expresión in vitro. A fin de evaluar cuatro técnicas para la detección de resistencia a meticilina: método de difusión del disco con oxacilina (OX, 1 ug) y cefoxitin (FOX, 30 ug); screening test, concentración inhibitoria mínima (CIM) y detección de PBP2a, utilizando la presencia del gen mecA como método de referencia, se procesaron 286 cepas de S. aureus. Se determinó la sensibilidad (SEN), especificidad (ESP), valor predictivo positivo (VPP), valor predictivo negativo (VPN) y eficiencia (EFC) de cada uno de los métodos. Se obtuvo un total de 50 cepas resistentes a oxacilina, PBP2a positivos (mecA positivos). La sensibilidad del disco de OX fue de 99.14 por ciento y la de FOX fue de 100 por ciento. La SEN, VPP, VPN y EFC de los otros métodos fue de 100 por ciento. Todas, a excepción del método de difusión del disco de OX (ESP de 99.14), resultaron 100 por ciento específicos.

Detecting methicillin resistance is complicated due to the heterogeneity of its phenotypic expression, making its detection difficult in the laboratory; this has led to the development of several techniques to increase its expression in vitro. Four techniques for detecting methicillin resistance were evaluated: the disk diffusion method with oxacillin (OX, 1 ug) and cephoxitin (FOX, 30 ug); the screening test, minimum inhibitory concentration (MIC) and detection of PBP2a, using the presence of mecA gen as a reference method; 286 strains of S. aureus, were processed. The sensibility (SEN), specificity (SPE), positive predictive value (PPV), negative predictive value (NPV) and efficiency (EFC) of each method were determined. A total of 50 oxacillin resistant, PBP2a positive (mecA positive) strains were obtained. Sensibility of the OX disk was 99.14 percent; and of the FOX disk was 100 percent. The SEN, PPV, NVP and EFC of the other methods were 100 percent. All the tests, except the OX disk diffusion method (99.14 percent of ESP), were 100 percent specific.