Genital infection by Aerococcus viridans in a captive african elephant (Loxodonta africana) / Infecção genital por Aerococcus viridans em um elefante africano em cativeiro (Loxodonta africana)

ABSTRACT: Aerococcus viridans is an emerging pathogen for humans and livestock animals, mainly associated with genitourinary infections cases. Its occurrence in wild mammals has never been reported. The aim of this study was to determine the etiological agent associated with clinical a case of a genital infection in a female African elephant (Loxodonta africana). Phylogenetic analysis and antimicrobial susceptibility profile of the isolate were also addressed. The animal presented frequent cases of genital infection with intermittent white secretion. Purulent secretion was sampled and submitted to bacteriological exam. The isolate obtained was thus identified by phenotypic and molecular methods as A. viridans and was found to be similar to human pathogenic isolates in BLASTn and phylogenetic analysis. The isolate was sensitive to almost all antimicrobials evaluated, presenting resistance to ciprofloxacin and norfloxacin. This is the first report of occurrence of A. viridans infection in the genital tract of an African elephant.

RESUMO: Aerococcus viridans é um patógeno emergente para seres humanos e animais de produção, principalmente associado a casos de infecções geniturinárias. Sua ocorrência em mamíferos selvagens nunca foi relatada. O objetivo deste estudo foi determinar o agente etiológico associado a um caso clínico de infecção genital em uma fêmea de elefante africano (Loxodonta africana). Análises filogenéticas e perfil de susceptibilidade antimicrobiana do isolado também foram avaliados. O animal apresentou casos frequentes de infecção genital com eliminação de secreção branca intermitente. A secreção purulenta foi coletada e submetida a exame bacteriológico. O isolado obtido foi identificado por métodos fenotípicos e moleculares como A. viridans e apresentou alta similaridade a isolados humanos patogênicos nas análises de BLASTn e filogenética. O isolado foi sensível a quase todos os antimicrobianos avaliados, apresentando resistência à ciprofloxacina e norfloxacina. Este é o primeiro relato de ocorrência de infecção por A. viridans no trato genital de elefante africano.

Pterygodermatites (Multipectines) affinis (Jägerskiöl, 1904) (Nematoda: Rictulariidae), a parasite of Cerdocyon thous (Linnaeus, 1766) (Carnivora: Canidae) from the Brazilian Amazon / Pterygodermatites (Multipectines) affinis (Jägerskiöl, 1904) (Nematoda: Rictulariidae), um parasito de Cerdocyon thous (Linnaeus, 1766) (Carnivora: Canidae) da Amazônia brasileira

Abstract Among the Nematodes of Cerdocyon thous, the genus Pterygodermatites is characteristic for presenting cuticular projections along the body, being mentioned in different hosts in South America, although there are no records of its occurrence in the Amazon Biome. To enable further exploration in terms of their morphology and morphometry, the nematodes collected from cadavers of C. thous were fixed and observed using bright field microscopy and scanning electron microscopy, revealing characteristics compatible with P. (Multipectines) affinis, thus contributing more information about the geographic distribution of the parasite, as well as knowledge of the helminthological fauna of wild mammals in the Brazilian Amazon.

Resumo Entre os nematodas de Cerdocyon thous, o gênero Pterygodermatites é característico por apresentar projeções cuticulares ao longo do corpo, sendo citado em diferentes hospedeiros na América do Sul, porém, sem registros de sua ocorrência no Bioma Amazônia. Passível de maior exploração quanto à sua morfologia e morfometria, os nematoides colhidos de cadáveres de C. thous foram fixados e observados em microscopia de campo claro e microscopia eletrônica de varredura, revelando características compatíveis com P. (Multipectines) affinis. Com isso contribuiu com mais informações sobre a distribuição geográfica do parasito, bem como o conhecimento da fauna helmintológica de mamíferos selvagens na Amazônia brasileira.

Reacción de comunidades rurales de la cordillera occidental de Perú en interacciones con el puma (Puma concolor), con y sin pérdida de animales domésticos / Reactions of rural communities of the western cordillera of Peru during interactions with puma (Puma concolor), with and without livestock loss

Entre los años 2013 y el 2017, siete (7) interacciones de pumas con comunidades rurales fueron registradas, cuatro (n= 4) de las cuales incluyeron ataques a animales domésticos, y donde la respuesta de la comunidad fue la persecución y muerte del puma. En los otros tres (n 3) registros, no se reportaron daños a rebaños, y los pumas fueron capturados, o por la comunidad, o por el servicio público, y translocados por el servicio público a una nueva área. A pesar del bajo número de muestras, los resultados revelan: (1) que existen casos en los que la población no elimina al felino inmediatamente sucedida la interacción, y solicitan asistencia de las autoridades; (2) aunque las autoridades reaccionan de la mejor manera posible para efectuar translocaciones, en una ocasión un puma silvestre fue enviado a un zoológico y en la otra el puma fue abatido, lo que demanda la implementación de un protocolo para ayudar a la toma de decisiones en estas situaciones. Los resultados también indicarían: (1) que los niveles de tolerancia de la población serían menores cuando hay pérdidas de rebaños domésticos; (2) que las interacciones en áreas residenciales rurales y el registro cerca del litoral desértico, zona distante de hábitats característicos de los pumas, serían indicios de una posible expansión de las poblaciones de pumas.

Records of interactions of pumas with rural communities (n= 7) are registered from 2013 to 2017, four of them with attacks on domestic herds, which resulted in the persecution and death of the puma. In the remaining three records, without damage to domestic herds, the puma was captured, either by the community, or by the public service, and translocated by the public service to a new area. Despite the low sample size, the results revealed: (1) That, there are cases in which the population does not eliminate the feline promptly, but calls for assistance from the authorities; (2) That the authorities react as best they can to carry out translocations in spite of that, in one occasion a wild puma was sent to a zoo and in other it was killed, which requires the implementation of a standardized protocol to aid decision making in these situations. The results indicate other possible consequences: (1) That the tolerance levels of the population appear to be lower when there are losses of domestic herds; (2) A possible expansion of the puma population, as in other regions of its distribution, due to interactions in residential areas and registry near the desert coast, away from appropriate habitats.

Toxoplasma gondii in cetaceans of Brazil: a histopathological and immunohistochemical survey / Toxoplasma gondii em cetáceos do Brasil: estudo histopatológico e imuno-histoquímico

Abstract Toxoplasmosis is a parasitic disease caused by the protozoan Toxoplasma gondii. In cetaceans, T. gondii infection is a significant cause of morbidity and mortality. Despite the worldwide range and broad cetacean host record of T. gondii infection, there is limited information on toxoplasmosis in cetaceans from the Southern hemisphere. We investigated the occurrence of T. gondii by histopathology and immunohistochemistry in tissue samples of 185 animals comprising 20 different cetacean species from Brazil. Three out of 185 (1.6%) animals presented T. gondii-associated lesions: a captive killer whale Orcinus orca, a free-ranging common bottlenose dolphin Tursiops truncatus and a free-ranging Guiana dolphin Sotalia guianensis. The main lesions observed in these animals were necrotizing hepatitis, adrenalitis and lymphadenitis associated with protozoal cysts or extracellular tachyzoites presenting immunolabeling with anti-T. gondii antibodies. This study widens the spectrum of species and the geographic range of this agent in Brazil, and provides the first reports of T. gondii infection in a captive killer whale and in a free-ranging common bottlenose dolphin in South America.

Resumo Toxoplasmose é uma doença parasitária causada pelo protozoário Toxoplasma gondii. A infecção por T. gondii é uma causa significativa de morbidade e mortalidade, nos cetáceos. Apesar da abrangência mundial e amplo registro de espécies de cetáceos infectadas por T. gondii, informações sobre toxoplasmose em cetáceos do hemisfério sul são limitadas. Neste estudo pesquisou-se por meio de histopatologia e imuno-histoquímica a ocorrência de T. gondii em amostras de tecido de 185 animais, compreendendo 20 diferentes espécies de cetáceos que ocorrem no Brasil. Três dos 185 (1,6%) animais apresentaram lesões associadas a T. gondii: uma orca Orcinus orca mantida em cativeiro, um golfinho-nariz-de-garrafa Tursiops truncatus e um boto-cinza Sotalia guianensis de vida livre. As principais lesões observadas nesses animais foram hepatite, adrenalite e linfadenite necrotizantes associadas a cistos protozoários ou taquizoítos extracelulares, marcados com anticorpos anti-T. gondii. O presente estudo amplia o espectro de espécies susceptíveis a esse agente e o seu alcance geográfico no Brasil, fornecendo o primeiro relato da infecção por T. gondii em uma orca mantida em cativeiro e em um golfinho-nariz-de-garrafa de vida livre na América do Sul.

Microestructura cuticular y medular del pelo de guardia de mamíferos pequeños terrestres en la región de Arequipa, Perú / Cuticular and medullar microstructure of the guard hair of small land mammals in the region of Arequipa, Peru

Actualmente, el estudio de pelos de guardia está siendo utilizado en diversas áreas de las ciencias básicas y aplicadas (taxonomía, ecología, genética, paleontología, criminalística, entre otras), debido a su resistencia a factores físicos, químicos, mecánicos y biológicos, conservando su estructura cuticular y medular. Dichas estructuras forman patrones que permiten la identificación de especímenes a nivel de géneros y familias. Sin embargo, a pesar de la importancia, no hay estudios sobre este tema en Perú. Por ello, con el fin de llenar este vacío de información, se examinaron muestras de 30 especies de mamíferos de la región de Arequipa, correspondientes a los órdenes Didelphimorphia y Rodentia, donde encontramos 5 patrones medulares y 8 cuticulares. Los marsupiales didélfidos presentan un patrón medular uniseriado escaleriforme con un patrón cuticular foliáceo. En los roedores, los cricétidos tienen un patrón medular multiseriado alveolar y un patrón cuticular foliáceo, los chinchílidos un patrón medular reticular con patrón cuticular pétalo diamante tipo D, los cávidos un patrón medular reticular con patrón cuticular ondeado transversal, los abrocómidos un patrón medular listrado con patrón cuticular ondeado oblicuo simple, y los múridos un patrón medular reticular y alveolar con patrón cuticular pétalo diamante (tipo B y C) y foliáceo. Presentamos por primera vez la descripción detallada de la cutícula y médula de los pelos de guardia de 24 especies de roedores y 2 marsupiales.

Currently, the study of guard hairs is used in various areas of basic and applied sciences (taxonomy, ecology, genetics, paleontology, criminology, among others), due to its resistance to physical, chemical, mechanical and biological factors, conserving its cuticular and medullar structure. These structures form patterns that allow the identification of specimens at the level of genera and families. However, despite the importance, there are no studies on this subject in Peru. Therefore, samples from 30 mammalian species of Didelphimorphia and Rodentia were examined to fill this information gap. Among the species studied, we differentiated 5 medullary and 8 cuticular patterns. The didelphid marsupials have a medial uniseriate scaleriform pattern with a foliaceous cuticular pattern; the cricetid rodents have an alveolar multiseriate medullary pattern and a foliate cuticular pattern, the chinchillids a reticular medullary pattern with a cuticular pattern of diamond petal type D, the caviids a reticular medullary pattern with a transverse cuticular pattern, the abrocomids a medullary pattern listrade with simple oblique wave cuticular pattern, and the murids a reticular and alveolar medullary pattern with cuticular pattern petal diamond (type B and C) or foliaceous. We present for the first time the detailed description of the cuticle and marrow of the guard hairs of 24 species of rodents and 2 marsupials.

Expressão e caracterização da glicoproteína D do HSV-1 geneticamente fusionada às oncoproteínas E6 e E7 do HPV-16 e HPV-18 (gDE7E6) em células de mamífero / Expression and characterization of the genetically fused HSV-1 glycoprotein D to E6 and E7 oncoproteins HPV-16 e HPV-18 (gDE7E6) in mammalian cells

O câncer cervical é um dos tipos de câncer mais comuns entre as mulheres, e a infecção persistente pelos HPV-16 e HPV-18 é responsável por 70% dos casos. As vacinas profiláticas disponíveis possuem alta eficácia na prevenção da infecção pelos tipos mais prevalentes de HPV. No entanto, este tipo de abordagem não beneficia mulheres que já apresentam lesões precursoras ou tumores cervicais avançados, e a busca por abordagens terapêuticas para esse tipo de câncer é considerada uma necessidade. A qualidade do antígeno representa um aspecto fundamental para o sucesso de vacinas terapêuticas baseadas em proteínas recombinantes. Neste sentido, os sistemas de expressão em células eucarióticas, como leveduras e células de mamíferos são considerados adequados para a produção de proteínas com aplicação biotecnológica. O objetivo principal deste trabalho contemplou a expressão das proteínas de fusão gDE7E6 do HPV-16 e do HPV-18 e a oncoproteína E7 do HPV-16 em células da levedura Pichia pastoris e expressão da gDE7E6 do HPV-16 e do HPV-18 em células de mamífero HEK293T e CHODG-44 para obtenção de antígenos purificados com futura aplicação em vacinas terapêuticas contra tumores associados ao HPV-16 e HPV-18. Os genes que codificam as proteínas gDE7E6 dos HPV-16 e HPV-18 e da E7 do HPV-16 foram clonados no vetor pPIC9K, os quais foram linearizados por digestão enzimática e utilizados na transformação da P. pastoris. A expressão das proteínas foi analisada nos tempos de 24, 48, 72 e 96 horas, no entanto, não foi observada a produção das proteínas no sobrenadante e nem no lisado celular. Diante desta constatação, iniciamos a expressão das proteínas gDE7E6 do HPV-16 e gDE7E6 do HPV-18 em células de mamíferos HEK293T e CHODG-44. As sequências genéticas das proteínas gDE7E6 do HPV-16 e do HPV-18 foram clonadas no vetor de expressão pNU1 e analisadas por digestão enzimática. Análises de SDS-PAGE e western blot demonstraram a expressão das proteínas gDE7E6 do HPV-16 e do HPV-18 em até 96 horas em células HEK293T. Em paralelo, realizamos a transfecção estável dos plasmídeos contendo as sequencias da gDE7E6 do HPV-16 e gDE7E6 do HPV-18 em células CHO-DG44. Com o intuito de aumentar a expressão das proteínas de interesse na população mista de CHODG-44, realizamos amplificação genômica com metotrexato (MTX), sendo possível observar aumento da expressão das proteínas, conforme aumento gradativo nas concentrações de MTX. Posteriormente, foram feitas tentativas para isolar um clone produtor das proteínas gDE7E6 HPV-16 e HPV-18, através de clonagem por diluição limitante e sistema automatizado, sendo possível isolar um clone para cada construção através de matriz semisólida, confirmado por western blot e citometria de fluxo. Apesar de demonstrar a expressão das proteínas de interesse em sistema de expressão baseado em células de mamífero, o rendimento obtido após a purificação por afinidade ao níquel foi extremamente baixo, o que dificulta a obtenção dos antígenos para fins vacinais

Cervical cancer is one of the most common cancers among women, and persistent infection with HPV-16 and HPV-18 accounts for 70% of the cases. Available prophylactic vaccines are highly effective in preventing infection by the most prevalent types of HPV. However, this type of approach does not benefit women who already have precursor lesions or advanced cervical tumors, and the search for therapeutic approaches to this type of cancer is considered a necessity. Antigen quality represents a key aspect for the success of therapeutic vaccines based on recombinant proteins. In this sense, expression systems based in eukaryotic cells such as yeast and mammalian cells are considered suitable for the production of proteins with biotechnological applications. The main objective of this work was to express the gDE7E6 fusion proteins HPV-16 and HPV-18 and the E7 oncoprotein HPV-16 in Pichia pastoris and expression of gDE7E6 HPV-16 and HPV-18 in mammalian cells HEK293T and CHODG-44 to obtain purified antigens with future applications in therapeutic vaccines against HPV-16 and HPV-18 associated tumors. The genes encoding the gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 and E7 HPV-16 were cloned into the pPIC9K vector, which were linearized by enzymatic digestion and used in the transformation of P. pastoris. Expression of the proteins was analyzed at 24, 48, 72 and 96 hours, however, the production of the proteins in the supernatant and in the cell lysate was not observed. In light of this finding, we initiated the expression of gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 in mammalian cells HEK293T and CHODG-44. The genetic sequences of gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 were cloned into the pNU1 expression vector and analyzed by enzymatic digestion. SDSPAGE and western blot analyzes demonstrated expression of gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 within 96 hours in HEK293T cells. In parallel, we performed stable transfection of plasmids containing gDE7E6 HPV-16 and HPV-18 sequences into CHODG44 cells. In order to increase the expression of the proteins in the mixed population of CHODG-44, we performed genomic amplification with methotrexate (MTX), and it was possible to observe an increase in protein expression, as a gradual increase in MTX concentrations. Therefore, attempts were made to isolate a clone producing gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 by limiting dilution and automated system, being possible to isolate one clone for each construct through a semisolid matrix, confirmed by western blot and flow cytometry. Despite observing protein expression in mammalian cell-based expression system, the yield obtained after nickel affinity purification was extremely low, which makes it difficult to obtain the antigens for vaccine purposes

Nematode capilaridae in the tongue of Cerdocyon thous of free life in Brazil / Nematoide capilaridae na língua de Cerdocyon thous de vida livre no Brasil

Abstract Studies of helminths in road-killed wild animals are still uncommon but may provide promising results since they can identify the parasites in juvenile and adult hosts and meet the recommendations of current discussions on bioethics that prioritize alternative methods for the use of animals. This study evaluated three Cerdocyon thous individuals that were donated after dying from being run over. Two of them had small nematode adults in the epithelial and connective tissues of the tongue. The diagnosis was based on the presence of eggs, observed in histological sections, and morphological characteristics of the nematodes in the tongue. Morphologically, this nematode has a body with transverse grooves, simple mouth opening and no lips, esophagus and stichosome with stichocytes and bacillary bands along the body, which is characteristic morphology of the family Capilariidae and genus Capillaria . The presence of this nematode in the tongue of C. thous is an extremely important fact that contributes to what is known about the biodiversity of zoonotic parasites in wild canid populations. However, an explanation for these findings remains unclear because, until now, this has not been observed in the biological cycle of the species.

Resumo O estudo de helmintos de animais selvagens vitimados por atropelamento, ainda é uma prática pouco comum, porém pode ser promissor, uma vez que permite a identificação de helmintos a partir de hospedeiros juvenis e adultos, e atendem às atuais discussões em bioética, as quais priorizam métodos alternativos para o uso de animais. Foram avaliados 3 exemplares de Cerdocyon thous provenientes de doação pós-óbito por atropelamento. Dois deles apresentaram pequenos nematoides adultos inseridos nos tecidos epitelial e conjuntivo da língua. O diagnóstico foi baseado na análise de cortes histológicos que evidenciaram a presença de ovos no interior do nematoide e nas características morfológicas gerais do mesmo. Morfologicamente estes nematoides apresentavam corpo com estrias transversais, abertura bucal simples e lábios ausentes, esôfago trichuroiude com a presença de esticócitos e bandas bacilares ao longo do corpo, característica morfologicamente sugestiva da família Capillariidae e do gênero Capillaria . A presença de nematoides inseridos na língua de C. thous é um fato de extrema importância para o conhecimento da biodiversidade de parasitos zoonóticos circulantes presentes em populações selvagens de canídeos. Porém, permanece obscura a explicação para tais achados, uma vez que tal evento não foi observado no ciclo biológico das espécies até o momento.

Cetacean sightings and acoustic detections during a seismic survey off Nicaragua and Costa Rica, November-December 2004 / Avistamientos y detecciones acústicas de cetáceos durante un sondeo sísmico en aguas fuera de las costas de Nicaragua y Costa Rica, en Noviembre y Diciem bre 2004

AbstractAlthough the wider Eastern Tropical Pacific has been systematically surveyed during summer/fall, relatively little effort has focused on shelf and slope waters of Nicaragua and Costa Rica. Such data are useful for establishing baseline information and assessing potential changes in cetacean occurrence and distribution relative to natural (e.g., El Niño-Southern Oscillation, climate change) and anthropogenic factors. A visualacoustic survey for cetaceans occurred as part of a monitoring and mitigation program during an academic geophysical seismic study off Nicaragua and Costa Rica, during November-December 2004. Approximately 2 067 cetaceans representing at least seven species were seen in 75 groups during 373 h (3 416 km) of daytime observations from the seismic research vessel (R/V) Maurice Ewing. The humpback whale (Megaptera novaeangliae) and the pantropical spotted dolphin (Stenella attenuata) were the most frequently sighted species (30 % of all groups sighted); both were seen in shelf waters < 100 m deep and in slope waters. The bottlenose dolphin (Tursiops truncatus; 10 % of sightings) was the third most frequently sighted species and was only seen in water > 100 m deep. In addition, sightings were made of spinner dolphins (S. longirostris), short-beaked common dolphins (Delphinus delphis), Risso's dolphins (Grampus griseus), short-finned pilot whales (Globicephala macrorhynchus), and unidentified dolphins and whales. Unconfirmed sightings of a minke whale (Balaenoptera acutorostrata) and a pod of false killer whales (Pseudorca crassidens) were also recorded. An additional six groups of dolphins (50 % confirmed to species, all pantropical spotted dolphins) were made during 187 h (1 549 km) of observation effort during darkness, two of which were detected within 30 m of the vessel bow using a night vision device. A total of 217 cetacean detections occurred during 633 h of passive acoustic monitoring. A small concentration of 12 humpback whales was seen in eight groups, and two humpbacks were recorded singing in the Gulf of Fonseca on 9 December 2004. To our knowledge, such concentrations of humpback whales, particularly singing humpbacks, have not been previously reported in this specific area. In addition, a humpback mother-calf pair, likely from the Northern Hemisphere population, was seen off Northern Costa Rica on 25 November 2004. Although cetacean sighting rates were significantly different during seismic and non-seismic periods even when corrected for differential detection probability related to sea conditions, our survey results do provide information to address previous data gaps on cetacean occurrence in shelf and slope waters off the Pacific coast of Central America during late fall.

ResumenAunque el ancho Pacífico Tropical Oriental ha sido sistemáticamente sondeado durante el verano/otoño, relativamente poco esfuerzo se ha aplicado tanto en aguas de la plataforma continental como el talud de Nicaragua y Costa Rica. Tales datos son útiles para establecer una información base y evaluar los cambios potenciales en la presencia y distribución relacionada tanto a factores naturales (ej., fenómeno de El Niño, cambio climático) como a factores antropogénicos. Un sondeo visual y acústico de cetáceos fue realizado como parte de un programa de monitoreo y mitigación durante un estudio académico de geofísica (sísmica) en las afueras de las costas de Nicaragua y Costa Rica durante Noviembre y Diciembre 2004. Aproximadamente 2 067 cetáceos representantes de al menos siete especies fueron avistados en 75 grupos durante 373 h (3 416 km) de observación diurna desde el buque de prospección sísmica (R/V) Maurice Ewing. La ballena jorobada (Megaptera novaeangliae) y el delfín manchado pantropical (Stenella attenuata) fueron las especies más frecuentemente avistadas (30 % de todos los grupos avistados); ambas fueron avistadas tanto en aguas de la plataforma continental < 100 m de profundidad como en aguas del talud. El delfín nariz de botella (Tursiops truncatus; con un 10 % de los avistamientos) fue la tercera especie más avistada, solamente visto en aguas > 100 m de profundidad. Adicionalmente, se registraron avistamientos de delfines acróbatas (S. longirostris), delfines comunes de hocico corto (Delphinus delphis), calderones grises (Grampus griseus), ballenas piloto de aleta corta (Globicephala macrorhynchus) además de ballenas y delfines no identificados. También se registró un avistamiento no confirmado de una ballena de minke (Balaenoptera acutorostrata) y uno de un grupo de falsas orcas (Pseudorca crassidens). Un adicional de seis avistamientos de delfines (confirmándose en un 50 % de ellos para la especie de delfín manchado pantropical) se observaron durante 187 h (1 549 km) de esfuerzo durante lapsos de oscuridad, dos de los cuales se detectaron a 30 m de la proa de la embarcación utilizando dispositivos de visión nocturna. Un total de 217 detecciones de cetáceos ocurrieron durante 633 h de monitoreo acústico pasivo. Una pequeña concentración de 12 ballenas jorobadas fue avistada en ocho grupos, y dos jorobadas fueron registradas cantando en el Golfo de Fonseca el 9 de Diciembre 2004. Para nuestro conocimiento, tal concentración de ballenas jorobadas, particularmente jorobadas cantando, no han sido reportadas previamente en esta área específica. Adicionalmente, una pareja de jorobadas madre-cría, probablemente de la población del Hemisferio Norte, fue avistada en las afueras de la costa de Costa Rica el 25 de Noviembre 2004. A pesar de que las tasas de avistamiento fueron significativamente distintas durante los periodos sísmicos y no sísmicos, incluso siendo corregidos según la probabilidad de detecciones relacionadas a las condiciones del mar, nuestro sondeo provee información que cubre vacíos previos de datos en la presencia de cetáceos en las aguas tanto de la plataforma como del talud continental fuera de las costas del Pacífico de América Central durante el otoño tardío.

Helminth parasites of Galictis cuja (Carnivora, Mustelidae), from localities in the Atlantic forest of Brazil / Helmintos parasitos de Galictis cuja (Carnivora, Mustelidae), em localidades de Mata Atlântica no Brasil

Abstract The current study aimed to investigate the helminth parasites of a population of Galictis cuja (Carnivora, Mustelidae) that occur in Atlantic Forest in the Southeastern region of Brazil. We necropsied 18 specimens of G. cuja, collected between January 2009 and May 2014, ran over victims on BR-040 highway, between the municipalities of Duque de Caxias, state of Rio de Janeiro and Juiz de Fora, state of Minas Gerais, localities inserted in Atlantic rainforest Biome. A total of six species of helminths were identified: Dioctophyme renale, Molineus elegans, Physaloptera sp., Strongyloides sp., Platynosomum illiciens, and Pachysentis gethi. Molineus elegans, Physaloptera sp. and P. illiciens were recorded for the first time in this host. Data provided in the current study when compared to the previous reports of parasitism by helminths in G. cuja in Brazil demonstrate that this study is the most representative with this host species.

Resumo O presente estudo teve como objetivo investigar a fauna de helmintos de uma população de Galictis cuja (Carnivora, Mustelidae) que ocorre em uma região de Mata Atlântica na região Sudeste do Brasil. Foram necropsiados 18 espécimes de G. cuja, coletados entre Janeiro de 2009 e Maio de 2014, que foram mortos acidentalmente por atropelamentos na rodovia BR-040, entre os municípios de Duque de Caxias, no Estado do Rio de Janeiro e Juiz de Fora, no Estado de Minas Gerais, localidades inseridas no Bioma Mata Atlântica. No total seis espécies de helmintos foram identificadas: Dioctophyme renale, Molineus elegans, Physaloptera sp, Strongyloides sp, Platynosomum illiciens e Pachysentis gethi. Molineus elegans, Physaloptera sp. e P. illiciens foram registradas pela primeira vez nesta espécie de hospedeiro. O estudo amplia a diversidade de helmintos conhecidos para o hospedeiro em questão. Os dados fornecidos no presente estudo quando comparados com os registros prévios de helmintos em G. cuja no Brasil demonstram que este estudo é o mais representativo com esta espécie de hospedeiro.

Estudo dos mecanismos moleculares do reparo de quebra de duplas fitas no DNA mitocondrial / Study of the molecular mechanisms of double-strand break repair in mitochondrial DNA

O DNA está constantemente exposto a danos causados tanto por agentes endógenos quanto exógenos. Estes podem causar diferentes tipos de lesões incluindo modificações de bases e do açúcar, além de quebras de fitas simples ou duplas. As quebras de duplas fitas, quando comparadas às demais, constituem as mais citotóxicas e podem resultar em deleções no DNA e instabilidade genética. Deleções no DNA mitocondrial (mtDNA) causam diversas doenças e estão envolvidas no processo de envelhecimento. No núcleo, as quebras de duplas fitas no DNA podem ser reparadas por recombinação homóloga (HR), ligação de pontas não homólogas (NHEJ) e anelamento de fita simples (SSA). No entanto, em mitocôndrias de células de mamíferos, o reparo de quebras de duplas fitas ainda não foi completamente caracterizado. Experimentos in vitro usando extratos mitocondriais de células de roedores mostraram que estes são capazes de reparar essas quebras, no entanto pouco é sabido sobre quais proteínas são responsáveis por cada etapa de reparo, bem como sua implicação na manutenção da integridade do genoma mitocondrial. Sendo assim, nesse trabalho investigamos a localização e função mitocondrial das proteínas ATM, Rad51, Rad52, Ku70/86 e DNA-PKCs, que são sabidamente envolvidas em reparo de quebras de duplas fitas no núcleo. Para identificar essas proteínas em mitocôndrias de células de mamíferos, mitocôndrias foram isoladas a partir de células da linhagem HEK293T, usando centrifugação diferencial seguida por gradiente de Percoll. Para as proteínas de recombinação homóloga, ATM e Rad51, imunodetectamos isoformas semelhantes em todos os compartimentos celulares. Já para a proteína Rad52 o mesmo anticorpo imunodetectou duas bandas distintas na mitocôndria ao passo que no núcleo foram quatro. Além disso, verificamos que baixos níveis de proteína Rad52, induzidos pela expressão de shRNA (short hairping RNA) específico, resultam em diminuição do número de cópias de mtDNA bem como acúmulo de deleções no genoma mitocondrial. Para as proteínas de NHEJ, DNA-PKCs e a subunidade Ku70, identificamos isoformas semelhantes em todos os compartimentos celulares. Já para a subunidade 86 do heterodímero Ku70/86 o anticorpo detectou, somente em mitocôndrias, uma banda menor de 50 kDa, a qual difere na região N-terminal da subunidade detectada no núcleo (86 KDa). Experimentos de co-imunprecitação de proteínas mostraram que essa isoforma menor compõe o heterodímero mitocondrial juntamente com a subunidade 70 (mtKu70/50) e que esse interage com DNA ligase III mitocondrial. Nossos resultados também mostraram que a estabilidade proteica de mtKu70/50 é regulada por ATM. Tratamento das células com peróxido de hidrogênio, que induz quebras de duplas fitas, aumentou a associação do heterodímero mtKu70/50 com o mtDNA, de forma independente de aumento da concentração proteica intra-mitocondrial. Já a diminuição dos níveis proteicos de Ku, induzida através de shRNA, resultou em diminuição do número de cópias de mtDNA e acumulo de danos nesse genoma. Extratos mitocondriais de células knockdown para Ku apresentaram menor atividade de reparo NHEJ em um ensaio in vitro, sugerindo que o acúmulo de danos nestas células é provavelmente devido a deficiências na via de NHEJ. Em conjunto, nossos dados sugerem que tanto HR quanto NHEJ operam em mitocôndrias. Além disso, a via de NHEJ mitocondrial utiliza o heterodímero mitocondrial Ku70/50 o qual está envolvido na manutenção do mtDNA. Ademais, nossos resultados mostram uma grande conservação molecular e funcional entre as vias de reparo de NHEJ e HR no núcleo e na mitocôndria, o que reforça sua importância para a manutenção da estabilidade genômica mitocondrial e, provavelmente a função mitocondrial

DNA is constantly exposed to damaging agents from both endogenous and exogenous sources. These can cause different types of DNA lesions that include base and sugar modifications and single and double strand breaks. DNA doublestrand breaks (DSBs) are among the most cytotoxic DNA lesions, which can result in deletions and genetic instability. Deletions in the mitochondrial DNA (mtDNA) cause numerous human diseases and drive normal aging. DSBs in the nuclear DNA are repaired by non-homologous DNA end joining (NHEJ), homologous recombination (HR) or Single Strand Annealing (SSA). Yet, repair of DSBs in mammalian mitochondria has not been fully characterized. Mitochondrial extracts from rodent cells are proficient in ligating DNA ends in vitro, but little is known about which proteins are responsible for each enzymatic step and its implication in mitochondrial genome maintenance. Thus, we investigated mitochondrial localization and function of DSBR (double strand break repair) proteins ATM, Rad51, Rad52, the Ku70/86 heterodimer and DNA-PKCs.To identify DSBR proteins in mammalian mitochondria, highly purified mitochondria from HEK293T cells were isolated using differential centrifugation followed by Percoll gradient. For HR proteins, we detected similar isoforms for ATM and Rad51 proteins in all cellular compartments. Two mitochondriaspecific isoforms of Rad52 were detected, while the same antibody detected four isoforms in the nucleus. In addition, lower Rad52 protein levels, induced by specific shRNA expression, result in decreased mtDNA copy number and accumulation of deleted mitochondrial genomes. For NHEJ proteins, similar isoforms of DNA-PKcs and the Ku70 subunit were detected in all cellular compartments. On the other hand, antibodies against the Ku86 subunit detected a smaller band in mitochondrial extracts (50 KDa), lacking the N-terminal region of the canonical isoform detected in the nucleus (86 KDa). The mitochondrial Ku70/50 heterodimer interacts with mitochondrial DNA ligase III, suggesting a role in DSBR. Moreover, stability of the mtKu heterodimer is regulated by ATM. Hydrogen peroxide treatment, which induces DSBs, increases mtKu70/50 association with the mtDNA and cells with reduced Ku levels, also induced by shRNA transfection, have lower mtDNA copy number and accumulate mtDNA damage. Moreover, mitochondrial extracts from Ku knockdown cells show lower NHEJ repair activity in an in vitro assay, suggesting that damage accumulation in these cells is likely due to deficiencies in NHEJ. Together, our data suggest that both HR and NHEJ operate in mitochondria. Also, mtNHEJ requires the Ku heterodimer and is involved in mtDNA maintenance. Moreover, our results indicate that there is a significant molecular and functional conservation between NHEJ and HR repair pathways in the nucleus and in mitochondria, which reinforces their importance for maintenance of mitochondrial genomic stability and, likely mitochondrial function

Tempo de passagem de duas dietas no trato gastrointestinal do peixe-boi da Amazônia Trichechus inunguis (Natterer, 1883) em cativeiro / Transit time of two diets in the gastrointestinal tract of the Amazonian manatee Trichechus inunguis (Natterer, 1883) in captivity

The objective of this study was to determine the transit time of two diets in the digestive tract of the Amazonian manatee in captivity. We tested separately two different diets: one composed exclusively of grass of the genus Brachiaria (experimental diet - ED- A 1) and the other composed of grass Brachiaria added with small portions of extruded pellets for horses (experimental diet ED- A 2). Two healthy adult manatees were selected and isolated from the rest and underwent a period of food acclimation with the experimental diets for 15 days. After this period, the experimental diet was marked with a plastic colored tape of 10-cm length and given to the animals. The manatees were monitored at intervals of 1 hour and all fecal material was collected until recovery of the markers. The mean transit time of ED - A1 was 123h57min , about 5.16 days and ED - A 2 was 125h04min or 5.21 days. There was no statistical difference (P <0.05) between the transit time of the two diets provided. The transit time observed (approximately 5 days) has also been reported by other authors for this species and is considered a strategy to increase the absorption time of food nutrients. Despite the small sample size, the results suggest that the use of pellets in the diet of the Amazonian manatee did not affect the transit time of the grass. Therefore, it is reasonable to believe that the introduction of concentrated food (pellets) does not affect the efficiency of the animal to digest and absorb food properly.

Com o objetivo de testar o tempo de passagem do alimento no trato digestório de peixes-bois da Amazônia em cativeiro, foram testadas separadamente duas dietas distintas. Uma composta exclusivamente de capim do gênero Brachiaria (dieta experimental - DE 1) e outra de capim do gênero Brachiaria acrescentado de pequenas porções de ração extrusada para eqüinos (dieta experimental - DE 2). Foram selecionados do plantel do INPA dois animais adultos machos sadios, os quais foram isolados dos demais e submetidos a um período de aclimatação às dietas experimentais por 15 dias. Após este período, as dietas foram marcadas com uma fita plástica de 10 cm e fornecidas aos animais que foram monitorados em intervalos de uma hora. Todo material fecal foi coletado até a recuperação dos marcadores plásticos. A média do tempo de passagem da DE 1 foi de 123h57min, cerca de 5,15 dias e da DE 2 foi de 125h04min ou 5,21 dias. Não houve diferença estatística (P<0,05) entre as dietas fornecidas. O tempo de passagem observado (aproximadamente 5 dias) coincide com o relatado por outros autores para a espécie, sendo esse tempo considerado uma estratégia para aumentar o tempo de absorção nutricional dos alimentos. Apesar do número reduzido de amostras, os resultados sugerem que o uso da ração na alimentação não interfere no tempo de passagem do capim pelo trato digestório do peixe-boi. Com isso, sugere-se que a introdução de alimento concentrado (ração) não afeta a eficiência na digestão e absorção correta do alimento.

Sperm morphology and natural biomolecules from marine snail Telescopium telescopium: a phylogenetic perspective / Morfología de los espematozoides y biomoléculas naturales del caracol marino Telescopium telescopium: una perspectiva filogenética

Biochemical analysis of the cytosol fraction isolated from the ovotestis/spermatheca glands of marine mollusc Telescopium telescopium and it's sperm microtubular structure revealed that relatively similar biomolecules like different enzymes, hormones, minerals and structures of the sperm are also exist in humans. Moreover, antiserum of the cytosol fraction was found to cross-react with the human sperm antigen indicated presence of a common sperm surface antigenicity between these two diversified species. These findings might support and / or hypothesize about the origin and diversification of the vertebrate molecules from its ancestral form (s) from the invertebrates, and basic physiological functions of these ancestral biomolecules including some of the cellular structures plausibly remain the same regardless their structural changes even after evolution.

El análisis bioquímico de la fracción aislada del citosol desde las glándulas ovotestes/espermateca del molusco marino Telescopium telescopium y su estructura tubular espermática revelaron biomoléculas relativamente similares como tales como diferentes enzimas, hormonas, minerales y estructuras de los espermatozoides que también existen en los seres humanos. Por otra parte, en el antisuero de la fracción citosólica se encontró una reacción cruzada con los antígenos del esperma humano indicando la presencia de una superficie espermática de antigenicidad común entre estas dos diversificadas especies. Estos hallazgos pueden apoyar y/o hipotetizar sobre el origen y la diversificación de las moléculas de los vertebrados desde su forma (s) ancestral desde los invertebrados, y funciones básicas fisiológicas de estas biomoléculas ancestrales incluyendo algunas de las estructuras celulares siendo plausiblemente las mismas, independientemente de sus cambios estructurales incluso después de la evolución.

Validated cleaner: the cuculid bird Crotophaga ani picks ticks and pecks at sores of capybaras in southeastern Brazil / Limpador confirmado: a ave Cuculídea Crotophaga ani cata carrapatos e bica ferimentos em capivaras no sudeste do Brasil

Information on the role of smooth-billed anis (Crotophaga ani) as tick-pickers on mammals remains controversial. I record here these birds removing ticks and pecking at wounds of capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris) in a small reserve at Campinas, São Paulo, southeastern Brazil. The birds inspected the mammals' skin, both in places with and without hair. The hair was parted with bill movements, and ticks were removed by vigorous pulling. The birds also pecked at open or healing sores, from which they extracted small portions of blood clots and dead tissue. The capybaras appeared oblivious to the birds' activity. Even in the case that the cleaning behaviour is restricted to some bird individuals and populations, or places and periods, this record validates the notion that smooth-billed anis removes ticks from herbivorous mammals.

As informações sobre a função de anus-pretos (Crotophaga ani) como catadores de carrapatos em mamíferos permanecem controversas. Registro aqui estas aves removendo carrapatos e bicando ferimentos de capivaras (Hydrochoerus hydrochaeris) numa pequena reserva em Campinas, estado de São Paulo. As aves inspecionavam a pele dos mamíferos, em locais com e sem pêlos. Os pêlos eram afastados com movimentos do bico e os carrapatos maiores eram retirados com puxadas vigorosas. As aves também bicavam ferimentos abertos ou em cicatrização, dos quais retiravam pequenas porções de sangue coagulado e tecido morto. As capivaras pareciam indiferentes à atividade das aves. Ainda que este caso de comportamento de limpeza possa estar restrito a alguns indivíduos e populações, ou locais e períodos, o presente registro confirma a noção de anus-pretos removerem carrapatos de mamíferos herbívoros.

Análise do número de cerdas internas do órgão de Haller de larvas de Amblyomma nodosum Neumann (Acari, Ixodidae) / Analysis of the number of internal setae in Haller's organ of larvae of Amblyomma nodosum Neumann (Acari, Ixodidae)

Larvae from Amblyomma nodosum Neumann, 1899 from engorged female ticks removed from Tamandua tetradactyla (Linnaeus, 1758) were obtained under laboratory conditions. Two hundred and nineteen larvae were examined under brightfiel microscopy with and imersion objective and confocal laser scanning microscopy in order to analyze the variation of the number of internal setae of the right and left side of the Haller's organ chamber. The mean number of internal setae was 5,06±0,71, with parametric valves of 4-11 setae.

A partir de teleógina de Amblyomma nodosum Neumann, 1899, removida de Tamandua tetradactyla (Linnaeus, 1758) foram obtidas posturas que originaram larvas, em condições de laboratório. Um total de 219 larvas foi examinado em microscopia de luz, com objetiva de imersão e microscopia de confocal com varredura a laser. Buscou-se analisar a variação do número das cerdas internas dos lados direito e esquerdo, no fundo da cápsula do Orgão de Haller, com intuito de utilizá-las como um parâmetro quetotáxico na diagnose específica. A média do número de cerdas foi 5,06±0, 71, com valores limites da amplitude de 4-11.