Proteínas mir-203a-3p e mmp-2 são altamente expressas em células tumorais circulantes de pacientes com carcinoma pancreático / Mir-203a-3p and mmp-2 proteins are highly expressed in circulating tumor cells from patients with pancreatic carcinoma

RESUMO -RACIONAL: O adenocarcinoma ductal do pâncreas é a quarta causa de morte associada ao câncer mais comum no mundo ocidental. A presença de células tumorais circulantes (CTCs) pode ser considerada um potencial fator prognóstico, visto que essas células representam a progressão tumoral, permitindo o monitoramento da eficácia terapêutica. OBJETIVOS: explorar as características morfológicas, moleculares e fenotípicas das células tumorais circulantes (CTCs) do sangue de pacientes com carcinoma pancreático e correlacionar os achados com a resposta ao tratamento, sobrevida livre de progressão, sobrevida global (SG) e trombose venosa profunda (TVP). MÉTODOS: o sangue periférico (10mL) foi analisado antes do início do tratamento e após 60 e 120 dias. As CTCs foram detectadas pelo ISET® e caracterizadas por imunocitoquímica. Para análise de miRNAs, leucócitos periféricos dos mesmos pacientes e indivíduos saudáveis foram coletados em paralelo no início do estudo. A expressão de miRNAs foi avaliada usando TaqMan T Array Human MicroRNA Cards v2.0. RESULTADOS: foram incluídos 9 pacientes. As proteínas MMP2 e TGFß-RI foram altamente expressas (77,7%) nas CTCs no início do estudo. No primeiro acompanhamento, MMP2 era predominante (80%) e no segundo acompanhamento, MMP2 e vimentina eram predominantes (50%). Microêmbolos tumorais circulantes (MTC) foram encontrados em dois pacientes e ambos apresentavam TVP. O miR-203a-3p foi altamente expresso em CTCs. miR-203a-3p está envolvido na estimulação da transição epitelio-mesenquima (TEM) e relacionado a pior SG no câncer pancreático (dados TCGA). CONCLUSÃO: Devido ao baixo número de pacientes e curto seguimento, não observamos correlação entre CTCs e resposta ao tratamento. No entanto, houve uma correlação entre MTC e TVP. Além disso, miR-203a-3p foi altamente expresso em CTCs, corroborando os achados de proteínas EMT. Este estudo abre perspectivas sobre a mudança dinâmica no padrão de proteínas expressas ao longo do tratamento e a utilização de miRNAs como novos alvos no carcinoma pancreático.

ABSTRACT - BACKGROUND: Ductal adenocarcinoma of the pancreas is the fourth most common cancer-associated cause of death in the Western world. The presence of circulating tumor cells (CTCs) can be considered a potential prognostic factor, as these cells represent tumor progression, allowing monitoring of therapeutic efficacy. OBJECTIVES: The objectives of this study were to explore the morphological, molecular, and phenotypic characteristics of CTCs from the blood of patients with pancreatic carcinoma and to correlate the findings with response to treatment, progression-free survival, overall survival (OS), and deep vein thrombosis (DVT). METHODS: Peripheral blood (10 mL) was analyzed before the beginning of treatment after 60 and 120 days. CTCs were detected by using ISET® and characterized by immunocytochemistry. For microRNAs (miRNAs) analysis, peripheral leukocytes from the same patients and healthy individuals (controls) were collected in parallel at baseline. The expression of miRNAs was evaluated (in pool) using TaqMan® Array Human MicroRNA Cards v2.0. RESULTS: Only nine patients were included. The proteins, namely, matrix metalloproteinase-2 (MMP2) and TGFβ-RI, were highly expressed (77.7%) in CTCs at baseline; at the first follow-up, MMP2 was predominant (80%) and, at the second follow-up, MMP2 and vimentin were predominant (50%). Circulating tumor microemboli (CTMs) were found in two patients and both presented DVT. The miR-203a-3p was highly expressed in CTCs. The miR-203a-3p is involved in the stimulation of epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) and is related to worse OS in pancreatic cancer (TCGA data). CONCLUSION: Due to the low number of patients and short follow-up, we did not observe a correlation between CTCs and response to treatment. However, there was a correlation between CTM and DVT and also miR-203a-3p was highly expressed in CTCs, corroborating the findings of EMT proteins. This study opens the perspectives concerning the dynamic change in the pattern of proteins expressed along with treatment and the use of miRNAs as new targets in pancreatic carcinoma.

A Redução do Colágeno Tipo I está Associada ao Aumento da Atividade da Metaloproteinase-2 e da Expressão Proteica de Leptina no Miocárdio de Ratos Obesos / Decreased Collagen Type I is Associated with Increased Metalloproteinase-2 Activity and Protein Expression of Leptin in the Myocardium of Obese Rats

Resumo Fundamento A obesidade é um fator de risco para complicações médicas, incluindo o sistema cardiovascular. Há informações limitadas sobre o colágeno no coração obeso. Nosso estudo anterior demonstrou uma redução dos níveis proteicos de colágeno miocárdico tipo I em ratos obesos alimentados com uma dieta com alto teor de gordura durante 34 semanas. No entanto, os mecanismos responsáveis pelos níveis baixos não estão completamente elucidados. Objetivo O objetivo deste estudo foi testar a hipótese de que a redução do colágeno tipo I está associada ao aumento da atividade da metaloproteinase-2 (MMP-2), a qual está ligada à elevação de leptina no miocárdio de ratos obesos. Métodos Ratos Wistar machos com 30 dias de idade foram randomizados em dois grupos: controle (dieta padrão) e obeso (dieta com alto teor de gordura), e alimentados durante 34 semanas. Foram avaliados as características gerais dos animais e os perfis metabólicos e endócrinos. Foram avaliados as expressões proteicas miocárdicas de colágeno tipo I, leptina e inibidores teciduais de metaloproteinases (TIMP), bem como a atividade da MMP-2. O teste de correlação de Pearson foi aplicado para determinar as associações entre variáveis. O nível de significância foi de 5%. Resultados Os animais obesos apresentaram índice de adiposidade mais elevado em comparação ao controle. Foram observadas comorbidades como intolerância à glicose, hiperinsulinemia, resistência à insulina, hiperleptinemia e hipertensão nos ratos obesos. A obesidade reduziu o colágeno tipo I, TIMP-1 e TIMP-2, e aumentou a leptina e a MMP-2 no miocárdio. Houve uma correlação negativa entre o colágeno tipo I e a MMP-2 e uma correlação positiva entre a leptina e a MMP-2. Conclusão Foi confirmada a hipótese de que a redução do colágeno tipo I está associada ao aumento da atividade da MMP-2 e da expressão de leptina no miocárdio de ratos obesos. (Arq Bras Cardiol. 2020; 115(1):61-70)

Abstract Background Obesity is a risk factor for medical complications, including the cardiovascular system. There is limited information on collagen in the heart in obesity. Our previous study showed decreased protein levels of myocardial collagen type I in obese rats fed a high-fat diet for 34 weeks. However, the mechanisms responsible for low levels are not fully elucidated. Objective The purpose of this study was to test the hypothesis that the reduction in collagen type I is associated with increased metalloproteinase-2 (MMP-2) activity, which is linked to elevated leptin in the myocardium of obese rats. Methods Thirty-day-old male Wistar rats were randomized into two groups, control (standard diet) and obese (high-fat diet), and fed for 34 weeks. The general animal characteristics and metabolic and endocrine profiles were evaluated. Myocardial protein expressions of collagen I, leptin, tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMP), and MMP-2 activity were assessed. Pearson correlation was employed to determine the associations between variables. The level of significance was 5%. Results The obese animals had increased adiposity index compared to control. Comorbidities such as glucose intolerance, hyperinsulinemia, insulin resistance, hyperleptinemia, and hypertension were observed in obese rats. Obesity reduced collagen I, TIMP-1, and TIMP-2, and it increased leptin and MMP-2 in the myocardium. There was a negative correlation between collagen I and MMP-2 and a positive correlation between leptin and MMP-2. Conclusion The hypothesis was confirmed; the reduction in collagen type I is associated with increased MMP-2 activity and leptin expression in the myocardium of obese rats. (Arq Bras Cardiol. 2020; 115(1):61-70)

Influence of Spironolactone on Matrix Metalloproteinase-2 in Acute Decompensated Heart Failure / Influência da Espironolactona na Metaloproteinase de Matriz 2 na Insuficiência Cadíaca Aguda Descompensada

Background: Matrix metalloproteinases (MMPs) are a family of enzymes important for the resorption of extracellular matrices, control of vascular remodeling and repair. Increased activity of MMP2 has been demonstrated in heart failure, and in acutely decompensated heart failure (ADHF) a decrease in circulating MMPs has been demonstrated along with successful treatment. Objective: Our aim was to test the influence of spironolactone in MMP2 levels. Methods: Secondary analysis of a prospective, interventional study including 100 patients with ADHF. Fifty patients were non-randomly assigned to spironolactone (100 mg/day) plus standard ADHF therapy (spironolactone group) or standard ADHF therapy alone (control group). Results: Spironolactone group patients were younger and had lower creatinine and urea levels (all p < 0.05). Baseline MMP2, NT-pro BNP and weight did not differ between spironolactone and control groups. A trend towards a more pronounced decrease in MMP2 from baseline to day 3 was observed in the spironolactone group (-21 [-50 to 19] vs 1.5 [-26 to 38] ng/mL, p = 0.06). NT-pro BNP and weight also had a greater decrease in the spironolactone group. The proportion of patients with a decrease in MMP2 levels from baseline to day 3 was also likely to be greater in the spironolactone group (50% vs 66.7%), but without statistical significance. Correlations between MMP2, NT-pro BNP and weight variation were not statistically significant. Conclusion: MMP2 levels are increased in ADHF. Patients treated with spironolactone may have a greater reduction in MMP2 levels. .

Fundamento: As metaloproteinases de matriz (MMPs) constituem uma família de enzimas importantes para a reabsorção da matriz extracelular e controle do remodelamento e da reparação vasculares. Demonstrou-se aumento da atividade de MMP2 na insuficiência cardíaca, e, na insuficiência cardíaca agudamente descompensada (ICAD), demonstrou-se uma diminuição nas MMPs circulantes juntamente com o tratamento bem-sucedido. Objetivos: Testar a influência da espironolactona nos níveis de MMP2. Métodos: Análise secundária de estudo prospectivo, intervencionista, incluindo 100 pacientes com ICAD, 50 designados não aleatoriamente para o uso de espironolactona (100 mg/dia) mais terapia padrão para ICAD (grupo espironolactona) e 50 para terapia padrão para ICAD apenas (grupo controle). Resultados: Os pacientes do grupo espironolactona eram mais jovens e tinham níveis mais baixos de creatinina e ureia (todos p < 0,05). Os valores basais de MMP2, NT-pro BNP e peso não diferiram entre os grupos espironolactona e controle. Observou-se tendência para uma redução mais pronunciada na MMP2 do basal para o dia 3 no grupo espironolactona (-21 [-50 a 19] vs 1,5 [-26 a 38] ng/ml, p = 0,06). Os valores de NT-pro BNP e peso também apresentaram maior diminuição no grupo espironolactona. A proporção de pacientes com redução nos níveis de MMP2 do basal para o dia 3 também foi maior no grupo espironolactona (50% vs 66,7%), embora sem significado estatístico. As correlações entre as variações de MMP2, NT-pro BNP e peso não apresentaram significado estatístico. Conclusões: Os níveis de MMP2 acham-se aumentados na ICAD. Pacientes tratados com espironolactona podem apresentar maior redução nos níveis de MMP2. .

Effect ofbuyang huanwu decoction combined with bone marrow mesenchymal stem cell transplantation on cerebral ischemia-reperfusion injury / 中国组织工程研究

BACKGROUND:When acute cerebral ischemia attacks, matrix metaloproteinases (MMPs) lead to the occurrence of cerebral edema through degrading the extracelular matrix, breaking the close connection between endothelial cels, increasing the permeability of capilaries, and destroying the blood brain barrier. OBJECTIVE: From the aspects of MMPs and extracelular matrix, to discuss the therapeutic effects ofbuyang huanwu decoction combined with bone marrow mesenchymal stem cel (BMSCs) transplantation on cerebral ischemia-reperfusion injury. METHODS:A total of 96 Sprague-Dawley rats were randomly divided into model group, tissue inhibitor of MMPs-1 (TIMP-1) group, TIMP-1+BMSCs group (BMSCs group) andbuyang huanwu decoction+BMSCs+TIMP-1 group (combined group that was divided into four subgroups, 12-, 24-, 36-, 48-hour groups). Rat models of cerebral ischemia-reperfusion were constructed, and TIMP-1 and BMSCs were injected to the brain of rats by a microinjector in a stereotaxic apparatus. Rats in the combined group were given buyang huanwu decoction (10 mL/kg), and rats in the other groups were given the same volume of normal saline at 7 days before surgery. After 10 days of administration, serum samples and brain tissues were colected to determine MMP-2 and MMP-9 levels using ELISA and to detect MMP-9 activity using gelatinases spectrometry method. RESULTS AND CONCLUSION:Compared with the model group, the levels of MMP-2 and MMP-9 in the serum and MMP-9 activity in the brain were decreased in the other groups to different extents, especialy the levels of MMP-9 (P < 0.05). Compared with the BMSCs group, the levels of MMP-2 and MMP-9 in serum as wel as activities of MMP-9 and pro-MMP-9 in the brain were decreased significantly in the combined group at 36 and 48 hours after treatment (P< 0.01). The results show that thebuyang huanwu decoction can be mutualy cooperated with TIMP-1 to inhibit the degradation of extracelular matrix induced by MMP-2 and MMP- 9, repair the damaged blood brain barrier, prevent and cure cerebral edema after ischemia.

The increased activation of matrix metalloproteinase 2/9 and gradual degradation of claudin in rat models of middle cerebral artery ischemia / 中国组织工程研究

BACKGROUND:During the process of acute brain injury after stroke, matrix metaloproteinase can undermine the integrity of vascular basement membrane, promote the migration of neutrophils and inflammatory factors, and cause secondary brain injury. OBJECTIVE:To investigate the activation of matrix metaloproteinase 2/9 and the degradation rule of claudin in rat models of middle cerebral artery ischemia at different ischemic durations. METHODS:Thirty-nine male SD rats were randomly divided into three groups according to different ischemic durations (3, 5 and 7 hours) . Middle cerebral artery occlusion (stroke) model was established using modified suture method,i.e., separation of the external carotid artery, inserting the suture into the internal carotid artery through the external carotid artery, and eventualy reaching the middle cerebral artery. The ischemic duration in these three groups was respectively 3 , 5 and 7 hours. After 2 hours of reperfusion, Zea-Longa score and Ludmila Belayev score, brain infarct area, matrix metaloproteinase 2/9 activities and claudin 5 degradation were determined in each group. RESULTS AND CONCLUSION:With the extension of ischemic duration, brain infarct area gradualy increased, central nervous system damage gradualy aggravated, matrix metaloproteinase 2/9 activities gradualy increased, and claudin-5 expression gradualy decreased. There were significant differences between any two ischemic durations in terms of each of above-mentioned indices. The results indicate that after long duration of ischemia, the progressive damage of brain tissue can cause the gradual increase of activation of matrix metaloproteinase 2/9 and the gradual degradation of claudin 5.

Metaloproteinases 2 e 9 são preditoras de remodelação ventricular esquerda após o infarto do miocárdio / Metalloproteinases-2 and -9 predict left ventricular remodeling after myocardial infarction

FUNDAMENTO: O papel de metaloproteinases (MMP) séricas após o infarto do miocárdio (IM) é desconhecido. OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi o de avaliar o papel das MMP-2 e -9 séricas como marcadores prognósticos da remodelação ventricular seis meses após o IM anterior. MÉTODOS: Fizemos um registro prospectivo dos pacientes após o seu primeiro IM anterior. A atividade de MMP foi analisada entre 12 a 72 horas após o IM. Foi feito um ecocardiograma durante a internação e seis meses depois. RESULTADOS: Incluímos 29 pacientes; 62% mostraram remodelação ventricular. Os pacientes que mostraram remodelação tinham maior tamanho de infarto baseado nos valores pico da creatinofosfoquinase (CPK) (p = 0,037), alta prevalência de insuficiência cardíaca congestiva em hospitais (p = 0,004), e redução da fração de ejeção (FE) (p = 0,007). Os pacientes com remodelação ventricular tiveram menores níveis séricos de MMP-9 inativa (p = 0,007) e maiores níveis da forma ativa da MMP-2 (p = 0,011). Em um modelo de regressão logística multivariada, ajustado pela idade, pico de CPK, FE e prevalência de insuficiência cardíaca, os níveis séricos da MMP-2 e -9 estavam associados à remodelação (p = 0,033 e 0,044, respectivamente). CONCLUSÃO: Níveis séricos mais elevados da MMP-9 inativa foram associados com a preservação dos volumes ventriculares esquerdos, e níveis séricos mais elevados da forma ativa da MMP-2 foram um preditor da remodelação seis meses após o IM.

BACKGROUND: The role of serum metalloproteinases (MMP) after myocardial infarction (MI) is unknown. OBJECTIVE: The aim of this study was to evaluate the role of serum MMP-2 and -9 as predictors of ventricular remodeling six months after anterior MI. METHODS: We prospectively enrolled patients after their first anterior MI. MMP activity was assayed 12 to 72 hours after the MI. An echocardiogram was performed during the hospitalization and six months later. RESULTS: We included 29 patients; 62% exhibited ventricular remodeling. The patients who exhibited remodeling had higher infarct size based on creatine phosphokinase (CPK) peak values (p = 0.037), higher prevalence of in-hospital congestive heart failure (p = 0.004), and decreased ejection fraction (EF) (p = 0.007). The patients with ventricular remodeling had significantly lower serum levels of inactive MMP-9 (p = 0.007) and significantly higher levels of the active form of MMP-2 (p = 0.011). In a multivariate logistic regression model, adjusted by age, CPK peak, EF and prevalence of heart failure, MMP-2 and -9 serum levels remained associated with remodeling (p = 0.033 and 0.044, respectively). CONCLUSIONS: Higher serum levels of inactive MMP-9 were associated with the preservation of left ventricular volumes, and higher serum levels of the active form of MMP-2 were a predictor of remodeling 6 months after MI.

Cinética de expressão e localização de indutor de metaloproteínases (EMMPRIN) durante o desenvolvimento de lesão periapical induzida em camundongos / Kinetics of expression and location of metalloproteinase inducer (EMMPRIN) during the development of periapical lesions induced experimentally in mice

Neste estudo foi avaliada a cinética de expressão, a localização do EMMPRIN e a correlação de sua expressão com a expressão das MMPs -1, -2 e -9 e com a perda óssea alveolar, durante o desenvolvimento da lesão periapical experimentalmente induzida em camundongos. Foram utilizados 40 camundongos wild-type (WT) da linhagem C57BL/6. As lesões periapicais foram induzidas nos 1os molares inferiores e após os períodos experimentais de 7, 14, 21 e 42 dias, os animais foram mortos e as mandíbulas foram removidas. Como controles foram usados 1os molares hígidos. A mensuração das lesões periapicais foi efetuada em microtomografia computadorizada. A expressão do RNA mensageiro (mRNA) do EMMPRIN, MMPs -1, -2, e -9 foi determinada por meio de RT-PCR em tempo real. A presença, a localização e a expressão do EMMPRIN e das MMPs nas lesões periapicais foram avaliadas por imunohistoquímica. Os dados foram analisados por meio dos testes ANOVA, Bonferroni e correlação de Spearman com nível de significância de 5%. Os resultados mostraram que a área da lesão periapical aumentou significativamente dos 7 para os 14 dias (83%) e a partir de então houve estabilização. No grupo controle, o EMMPRIN foi expresso fortemente nas células da camada odontoblástica da polpa dentária. Nos períodos de 7, 14, 21 e 42 dias, foram observadas imunomarcações intensas para o EMMPRIN, MMPs -1, -2 e -9 na região adjacente ao forame apical, onde havia infiltrado inflamatório denso e ocasionalmente em outras regiões da lesão periapical. O EMMPRIN, MMP-1, -2 e -9 apresentaram forte expressão em células inflamatórias mononucleares e polimorfonucleares e marcação discreta em fibroblastos. A imunoexpressão do EMMPRIN na região periapical foi maior nos períodos de 7, 14, 21 e 42 dias comparado ao controle. A expressão do gene EMMPRIN apresentou-se maior no grupo controle em relação aos 7, 14, 21 e 42 dias. A expressão do gene MMP-1 aumentou aos 7 dias e manteve-se elevada até os 42 dias. Os níveis de mRNA das MMP -2 e -9 aumentaram significativamente aos 14 dias e retornaram a níveis semelhantes ao controle em 21 dias. A imunoexpressão do EMMPRIN apresentou correlação positiva com a expressão dos genes MMP-1, -2 e -9 e com o aumento da área da lesão periapical. Concluiu-se que, na lesão periapical, o EMMPRIM é expresso por fibroblastos e principalmente pelo infiltrado inflamatório localizado próximo ao forame apical e em regiões adjacentes a esse infiltrado. A sua imunoexpressão é elevada e se correlaciona positivamente com a expressão dos genes MMPs -1, -2, e 9 e com a perda óssea alveolar

This study evaluated the kinetics of expression and location of EMMPRIN and the correlation of its expression with expression of MMPs -1, -2 and -9 and with alveolar bone loss during the development of experimentally induced periapical lesions in mice. A total of 40 C57BL/6 wild-type mice (WT) were used. The periapical lesions were induced in first lower molars. After 7, 14, 21 and 42 days, the animals were killed and the mandibles were removed. Mice without pulp exposure served as controls. Measurement of periapical lesions was performed in micro-computed tomography. mRNA levels of EMMPRIN, MMPs-1, -2, and -9 were detected by real time RT-PCR. Presence, localization, and expression of EMMPRIN and MMPs were evaluated by immunohistochemistry. Data were analyzed using ANOVA, Bonferroni and Spearman correlation tests with significance level of 5%. The results showed that periapical lesion area was significantly increased from 7 to 14 days (83%) and thereafter become stable. In the control group, EMMPRIN was strongly expressed in odontoblastic layer of the dental pulp. At 7, 14, 21 and 42 days there was intense immunostaining for EMMPRIN, MMPs -1, -2 and -9 in the adjacent region of apical foramen, where there was dense inflammatory infiltrate. These proteins were expressed in other parts of the periapical lesion occasionally. EMMPRIN, MMP-1, -2 and -9 were intensely expressed in mononuclear and polymorphonuclear inflammatory cells and discretely expressed in fibroblasts. In the periapical region, the EMMPRIN immunostaining was higher at 7, 14, 21 and 42 days compared with control. The expression of EMMPRIN gene was higher in control group compared with 7, 14, 21 and 42 days. The expression of MMP-1 gene increased at 7 days and stays elevated until 42 days. The mRNA levels of MMP -2 and -9 increased significantly at 14 days and returned to control level at 21 and 42 days. The EMMPRIN immunostaining was positively correlated with expression of MMP-1, -2 and -9 genes and with increasing of periapical lesion area. It was concluded that EMMPRIM is expressed by fibroblasts and mainly by inflammatory infiltrate localization near of apical foramen and adjacent regions of this infiltrate in periapical lesion. The EMMPRIN immunostaining is elevated and correlates positively with the expression of MMPs-1, -2 and 9 genes and with alveolar bone loss during development of periapical lesions

Primary ductal adenocarcinoma of the lacrimal gland: case report / Adenocarcinoma ductal primário da glândula lacrimal: relato de caso

A 78-year-old male patient presented with double vision, painless palpable mass under the right superolateral orbital rim, downward displacement and restricted adduction of the right eye. His visual acuity was 20/50 OD and 20/20 OS. Hertel exophthalmometry was 21 mm OD and 17 mm OS. Computed tomographic scans showed an infiltrative orbital mass with ill-defined, irregular margins, involving the lacrimal gland and the lateral rectus muscle. The patient underwent an anterior transcutaneous transseptal orbitotomy with incisional biopsy and surgical debulking. Histopathologic evaluation revealed primary ductal adenocarcinoma of the lacrimal gland. Following the metastatic work up, he underwent an eyelid-sparing orbital exenteration. Microscopically, the tumor elements were characterized by large polygonal cells with vesicular nuclei, prominent nucleoli and amphophilic cytoplasm. The tumor components comprised duct-type structures with papillary and cribriform patterns, surrounded by prominent basement membrane. The tumor cells were positive for cytokeratin-7, matrix metalloproteinase (MMP)-2, MMP-9, MMP-13 and proto-oncogene Her-2/neu, but negative for cytokeratin-5, cytokeratin-20, p63, prostate-specific antigen, S-100 protein and thyroid transcription factor. These histopathologic findings were compatible with poorly differentiated ductal adenocarcinoma of the lacrimal gland, T3N0M0. Twenty-four months after orbital exenteration, the patient was diagnosed with ipsilateral parotid gland and cervical lymph node metastases and died of disease.

Paciente do sexo masculino e com 78 anos de idade apresentou diplopia, massa palpável abaixo da margem orbitária direita, deslocamento inferior do bulbo ocular direito e limitação da adução do olho direito. A acuidade visual foi 20/50 OD e 20/20 OE. A exoftalmometria de Hertel foi 21 mm OD e 17 mm OE. Tomografia computadorizada mostrou uma massa orbitária, infiltrativa e com margens irregulares, envolvendo a glândula lacrimal e o músculo reto lateral. O paciente foi submetido a uma orbitotomia anterior com biópsia incisional. O exame histopatológico revelou adenocarcinoma ductal primário da glândula lacrimal. Em seguida, o paciente foi submetido a uma exenteração orbitária com preservação das pálpebras. Microscopicamente, os elementos tumorais foram caracterizados por células poligonais grandes com citoplasma anfofílico, núcleo vesicular e nucléolo proeminente. Os componentes tumorais incluíram estruturas ductais com padrões cribriforme e papilífero e cercadas por membrana basal proeminente. As células tumorais foram positivas para citoqueratina 7, metaloproteinase 2 da matriz, metaloproteinase 9 da matriz, metaloproteinase 13 da matriz e Her-2/neu, mas negativas para citoqueratina 5, citoqueratina 20, p63, antígeno prostático específico, proteína S-100 e fator de transcrição da tiroide. Estes achados histopatológicos foram compatíveis com o diagnóstico de adenocarcinoma ductal pouco diferenciado da glândula lacrimal, T3N0M0. Vinte e quatro meses após a exenteração orbitária, o paciente foi diagnosticado com metástases nos linfonodos cervicais ipsilaterais e na glândula parótida ipsilateral e faleceu.

Associação entre polimorfismos nas metaloproteinases da matriz extracelular e seu inibidor e a cárie dentária / Association between polymorphisms in matrix metalloproteinases and its inhibitor and dental carie

A cárie dentária destaca-se ainda como a principal doença relacionada à cavidade bucal de crianças e adolescentes. Pesquisas recentes têm buscado evidências de um componente genético na sua etiologia. Sabe-se que as enzimas metaloproteinases da matriz (MMPs) participam da formação do esmalte dentário e tem-se sugerido o envolvimento destas no desenvolvimento e na progressão da lesão cariosa. Dessa maneira, objetivou-se identificar associações entre polimorfismos nos genes MMP2, MMP9, MMP13, MMP20 e TIMP2 e a doença cárie em uma população brasileira. A amostra constituiu-se de 505 crianças e adolescentes, com média de idade de 9,0 anos (±3,1), em atendimento nas clínicas de Odontopediatria da Universidade Federal do Rio de Janeiro. Ao exame clínico avaliaram-se os índices CPO-D e/ou ceo-d. Os responsáveis ou cuidadores responderam a um questionário sobre dados sócio-demográficos, hábitos de higiene bucal e dieta. Amostras de saliva foram coletadas como fonte de DNA genômico e através do método Taqman, por PCR em tempo real, realizou-se a genotipagem das regiões rs243265(C/T), rs17576(A/G), rs2252070(C/T), rs7492661(A/G) e rs7501477(G/T) nos genes MMP2, MMP9, MMP13, MMP20 e TIMP2, respectivamente. A freqüência dos alelos e genótipos foi observada entre crianças com dentição hígida e com experiência de cárie. A média do índice ceo-d foi 2,35 (±2,85) e do índice CPO-D foi 0,73 (±1,53). Nos genes MMP2, MMP13 e TIMP2 os alelos polimórficos foram observados em maior freqüência nos indivíduos com experiência de cárie, com associação significativa para o gene MMP13 (p=0,004). Para o gene MMP13, houve diferença significativa na distribuição dos genótipos entre os grupos com e sem experiência de cárie (p=0,04) e carrear o genótipo GG apresentou-se como um fator protetor para o desenvolvimento desta patologia (OR=0,53; 95% IC 0,31-0,92). Para o gene MMP20, a distribuição dos genótipos apresentou diferença significante no grupo de caucasianos (p=0,03)...

The interaction between aromatase, metalloproteinase 2,9 and cd44 in breast cancer / A interação entre aromatase, metalloproteinase 2, 9 e cd44 no câncer de mama

OBJECTIVE: This study intends to verify the expression levels and correlation of aromatase, matrix metalloproteinase 2 (MMP-2), matrix metalloproteinase 9 (MMP-9) and CD44 in ductal carcinoma in situ (DCIS) and infiltrating ductal carcinoma (IDC) when both are found in the same breast. METHODS: One hundred and ten cases were evaluated by tissue microarray (TMA) and immunohistochemically screened with anti-aromatase polyclonal antibodies, anti-MMP-2 monoclonal antibodies, anti-MMP-9 policlonal antibodies and anti-CD44 monoclonal antibodies. RESULTS: Aromatase was expressed in IDC and DCIS in 63 (57.3 percent) and 60 (67 percent) of the cases respectively; MMP-2 was similarly expressed in IDC and DCIS in 15 (13.60 percent) cases; MMP-9 was positively expressed in IDC and DCIS in 83 (75.50 percent) and 82 (74.50 percent) cases, respectively; CD44 was positively expressed in IDC and DCIS in 49 (44.50 percent) and 48 (42.60 percent) of the cases, respectively; all of them were highly correlated (p<0,001). The correlation analysis found positive, statistically significant correlation, in IDC between aromatase and MMP-2 (p<0.001) and between aromatase and MMP-9 (p=0.034). Positive correlation between aromatase and MMP-2 (p<0.001) and between MMP-9 and CD44 (p=0.030) were found in DCIS. CONCLUSION: These results allow us to conclude that aromatase through local estrogen synthesis in breast tissue plays an important role in breast carcinogenesis, mainly influencing MMP-2 and MMP-9 which are important participants in tumor cell invasion and dependence of their connection to CD44 for action.

OBJETIVO: O objetivo desse estudo é verificar as expressões e correlações da aromatase, metalloproteinase 2 da matriz (MMP2), metalloproteinase 9 da matriz (MMP-9) e CD44 no carcinoma ductal in situ (CDIS) e carcinoma ductal infiltrativo (CDI) quando ambos estão presentes simultaneamente na mesma mama. MÉTODOS: Foram avaliados 110 casos pelo método de tissue microarray (TMA) e através da utilização de anticorpos policlonais antiaromatase, anticorpos monoclonais anti-MMP-2, anticorpos policlonais anti-MMP-9 e anticorpos monoclonais anti-CD44. RESULTADOS: A aromatase estava expressa de forma positiva no CDI e CDIS em 63 (57,3 por cento) e 60 (67 por cento) casos, respectivamente. A expressão de MMP-2 estava expressa de forma positiva em 15 (13,6 por cento) casos tanto no CDI, quanto no CDIS. A expressão da MMP-9 estava expressa de forma positiva em 83 (75,5 por cento) e 82 (74,5 por cento) casos de CDI e CDIS, respectivamente. A expressão de CD44 estava expressa de forma positiva em 49 (44,5 por cento) e 48 (42,6 por cento) casos de CDI e CDIS, respectivamente. Todos eles apresentando alta correlação (p<0,001). Na avaliação de correlação foi encontrada correlação positiva estatisticamente significante no CDI entre aromatase e MMP-2 (p<0,01) e entre aromatase e MMP-9 (p=0,034). Nos casos de CDIS houve correlação positiva estatisticamente significante entre aromatase e MMP-2 (p<0,001) e entre CD44 e MMP-9 (p=0,030). CONCLUSÃO: Após analisarmos os resultados de nosso estudo, podemos concluir que a aromatase, através da síntese de estrogênio local no tecido mamário, desempenha importante papel na carcinogênese mamária, principalmente influenciando a atuação da MMP-2 e da MMP-9, grandes responsáveis pela invasão celular tumoral que, por sua vez, provavelmente dependem de sua ligação a CD44 para poder desempenhar suas funções.

Expressão imuno-histoquímica das metaloproteinases 2 e 9 não está associada à progressão do carcinoma de células escamosas de esôfago / Metalloproteinases 2 and 9 immunohistochemistry expression is not associated to esophageal squamous cell carcinoma progression

INTRODUÇÃO: O carcinoma de células escamosas do esôfago está entre os tipos mais agressivos de câncer e de pior prognóstico. As metaloproteinases de matriz (MMPs), especialmente as MMP-2 e MMP-9, vêm sendo utilizadas para avaliação prognóstica do câncer, associadas a invasão, tamanho e crescimento tumoral. OBJETIVO: O presente estudo visa investigar as expressões imuno-histoquímicas de MMP-2 e MMP-9, avaliando se existe correlação entre sua expressão e o estadiamento tumoral, invasão vascular, invasão local (pT) e diferenciação tumoral no carcinoma de células escamosas de esôfago. MATERIAL E MÉTODO: Foi realizado um estudo retrospectivo utilizando 31 blocos de parafina contendo tumores de carcinoma escamoso esofágico, obtidas por esofagectomias realizadas entre 1998 e 2003, no Hospital Universitário de Santa Maria (HUSM). Os cortes histológicos foram submetidos à reação imuno-histoquímica, com sistema de amplificação por polímero não-biotinilado Novolink para detecção de MMP-2 e MMP-9. RESULTADOS: A avaliação da MMP-2 apresentou positividade fraca em apenas cinco casos, não demonstrando correlação com as variáveis estudadas. Também não foram observadas associações significativas entre as variáveis do estudo e o grau de expressão imuno-histoquímica da MMP-9. CONCLUSÃO: A expressão imuno-histoquímica das MMP-2 e MMP-9 não parece ser influenciada pelos parâmetros investigados. Nesse sentido, estudos adicionais são necessários para melhor compreensão de sua associação aos fatores prognósticos do carcinoma de células escamosas de esôfago.

INTRODUCTION: Esophageal squamous cell carcinoma is an aggressive malignant neoplasia with poor prognosis. The expression of matrix metalloproteinases (MMPs), mainly 2 and 9, has been used for the prognostic evaluation of cancer in association with tumor invasion, size and tumoral growth analysis. OBJECTIVE: The aim of the present study was to investigate the immunohistochemical expression of MMP-2 and MMP-9 and evaluate if there is an association between their expression and tumor staging, vascular invasion, local invasion (pT) and tumoral differentiation in esophageal squamous cell carcinoma. MATERIAL AND METHODS: We conducted a retrospective study using 31 paraffin-embedded specimens of esophageal squamous cell carcinoma obtained by esophagectomies performed at Santa Maria University Hospital, Rio Grande do Sul State, Brazil between 1998 and 2003. The histological sections were immunohistochemically studied using a non-biotinylated Novolink system for MMP-2 and MMP-9 detection. RESULTS: MMP-2 immunohistochemical expression was detected only in 5 cases and did not demonstrate correlation with the variables analyzed. Furthermore, MMP-9 immunohistochemical expression was not significantly associated with the other variables. CONCLUSION: MMP-2 and MMP-9 immunohistochemical expression does not seem to be influenced by the variables reported in this study. Thus further investigations are required to a better understanding of their association with the prognostic factors of esophageal squamous cell carcinoma.

Detection of MMP-2 and MMP-9 salivary levels in patients with chronic periodontitis before and after periodontal treatment / Detecção de MMP-2 e MMP-9 antes e após o tratamento periodontal de pacientes com periodontite crônica

Purpose: Patients suffering from periodontal disease have high salivary levels of gelatinases, especially metalloproteinases (MMPs). The aim of this study was to evaluate MMP-2 and MMP-9 levels in whole saliva of patients with chronic periodontitis before and after non-surgical treatment, using a zimographic assay. Methods: The test group comprised 8 patients with chronic periodontitis before (G1) and after (G2) periodontal treatment. The control group (GC) consisted of 8 subjects with no evidence of periodontal disease. The whole stimulated saliva was collected and analyzed by zymography. Gels were assessed with the AphaDigiDoc RT® software program. Data were analyzed by paired t test, ANOVA, and t-Student tests.Results: The MMP-9 mean values (±SD) in arbitrary units (AU) for G1 were 74.17 (±16.28) AU, for G2 65.58 (±20.18) AU, and for GC 74.75 (±23.16) AU. MMP-2 mean values were 100.33 (±25.24) AU for G1, 93.62 (±30.93) AU for G2, and 97.50 (±24.82) AU for GC. No statistically significant differences were found between groups for MMP-2 and MMP-9 activity (P>0.05).Conclusion: The results suggest that the analysis of gelatinases in saliva using zymography may not be a precise indicator of periodontal disease activity.

Objetivo: Pacientes com doença periodontal possuem altos níveis de gelatinases, especialmente metaloproteinases (MMPs) na saliva. O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis de gelatinases (MMP-2 e MMP-9) na saliva total de pacientes portadores de periodontite crônica antes e após tratamento periodontal, utilizando a zimografia. Metodologia: O grupo teste foi constituído por 8 portadores de periodontite crônica generalizada antes (G1) e (G2) depois do tratamento periodontal. O grupo controle (GC) constituído por 8 indivíduos sem sinais de doença periodontal. A saliva total estimulada foi coletada e analizada por zimografia. Os géis foram avaliados pelo programa AlphaDigiDoc® RT 2. Os dados foram analisados por teste-t pareado, ANOVA e teste-t de Student. Resultados: Para MMP-9 os valores médios (±DP) em unidades arbitrárias (UA) foram 74,17 (±16,28) UA para G1, 65,58 (±20,18) UA para G2, e 74,75 (±23,16) UA para GC. Para MMP-2, os valores foram 100,33 (±25,24) UA para G1, 93,62 (±30,93) UA para G2 e 97,50 (±24,82) UA para GC. Não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos para os níveis de MMP-2 e MMP-9 (P>0,05). Conclusão: Os resultados sugerem que a análise da gelatinase na saliva utilizando a zimografia não é um indicador preciso da atividade da doença periodontal.

Estudo imunohistoquímico do remodelamento pulmonar em camundongos expostos à fumaça de cigarro / Immunohistochemical study of lung remodeling in mice exposed to cigarette smoke

OBJETIVO: Muitos estudos sobre enfisema são realizados com exposição de animais à fumaça de cigarro durante um longo tempo, focando o tipo de célula envolvida no desequilíbrio protease/antiprotease e a degradação da matriz extracelular. A expressão aumentada de metaloproteinases no enfisema está associado com citocinas e evidências sugerem um papel importante da metaloproteinase de matriz-12 (MMP-12). Nosso objetivo foi estudar a detecção de inibidor tissular de metaloproteinase-2 (TIMP-2), fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e interleucina-6 (IL-6) por métodos imunohistoquímicos no pulmão de camundongos. MÉTODOS: Camundongos C57BL/6 machos foram expostos 3 vezes ao dia a fumaça de 3 cigarros por um período de 10, 20, 30 ou 60 dias através de uma câmara de inalação (grupos CS10, CS20, CS30 e CS60, respectivamente). O grupo controle foi exposto às mesmas condições ao ar ambiente. RESULTADOS: Nós observamos um aumento progressivo de macrófagos alveolares no lavado broncoalveolar dos grupos expostos. O diâmetro alveolar médio, um indicador de destruição alveolar, aumentou em todos os grupos expostos quando comparado ao grupo controle. O índice imunohistoquímico (II) para MMP-12 aumentou nos grupos CS10, CS20 e CS30 em paralelo a uma redução do II para TIMP-2 nos grupos CS10, CS20 e CS30. O II para as citocinas TNF-α e IL-6 aumentou em todos os grupos expostos quando comparado ao grupo controle. Enfisema foi observado no grupo CS60, com alterações na densidade de volume de fibras colágenas e elásticas. CONCLUSÕES: Estes achados sugerem que a fumaça de cigarro induz enfisema com uma participação importante do TNF-α e da IL-6 sem a participação de neutrófilos.

OBJECTIVE: Various studies of emphysema involve long-term exposure of animals to cigarette smoke, focusing on the cell type involved in the protease/antiprotease imbalance and on extracellular matrix degradation. In emphysema, increased expression of metalloproteinases is associated with cytokines, and evidence suggests that the matrix metalloproteinase-12 (MMP-12) plays an important role. Our objective was to investigate tissue inhibitor of metalloproteinase-2 (TIMP-2), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) detection by immunohistochemical methods in mouse lung. METHODS: Male C57BL/6 mice were exposed 3 times a day to smoke of 3 cigarettes over a period of 10, 20, 30 or 60 days in an inhalation chamber (groups CS10, CS20, CS30 and CS60, respectively). Controls were exposed to the same conditions in room air. RESULTS: A progressive increase in the number of alveolar macrophages was observed in the bronchoalveolar lavage fluid of the exposed mice. The mean linear intercept, an indicator of alveolar destruction, was greater in all exposed groups when compared to control group. In the CS10, CS20 and CS30 mice, the immunohistochemical index (II) for MMP-12 increased in parallel with a decrease in II for TIMP-2 in the CS10, CS20 and CS30 mice. The II for the cytokines TNF-α and IL-6 was greater in all exposed groups than in the control group. Emphysema, with changes in volume density of collagen and elastic fibers, was observed in the CS60 group. CONCLUSIONS: These findings suggest that cigarette smoke induces emphysema with major participation of TNF-α and IL-6 without participation of neutrophils.

Expressão de metaloproteinases de matriz e de seus inibidores teciduais em carcinomas basocelulares / Expression of matrix metalloproteinasis and their tissue inhibitors in basal cell carcinoma

INTRODUÇÃO: Aproximadamente 80 por cento das neoplasias malignas de pele não-melanomas são carcinomas basocelulares (CBC). Apesar das raras metástases, esses tumores são localmente agressivos. As metaloproteinases de matriz (MMPs), especialmente as MMP-2 e 9, são importantes no processo de invasão. Em contrapartida, os inibidores teciduais das MMPs (TIMPs) têm como principal função a inibição dessas enzimas. OBJETIVO: Investigar a associação de variáveis clinicopatológicas de pacientes portadores de CBC com a expressão de MMP-2, MMP-9, TIMP-1 e TIMP-2. MATERIAL E MÉTODOS: Foram selecionados 31 casos de CBC, sendo então obtidos, retrospectivamente, os dados referentes a idade, sexo e tamanho da lesão. Cortes histológicos das lesões foram submetidos a reação imuno-histoquímica pela técnica estreptavidina-biotina-peroxidase para detecção dos antígenos de interesse. Índices de imunomarcação foram construídos e comparados com os dados previamente obtidos. RESULTADOS: Observou-se correlação significativa entre idade e tamanho da lesão (R = 0,532; p = 0,008). Não foram observadas correlações significativas entre as outras variáveis e a expressão imuno-histoquímica dos antígenos de interesse. CONCLUSÃO: A expressão das metaloproteinases e de seus inibidores teciduais não parece ser influenciada pelos parâmetros investigados. Estudos adicionais são necessários para melhor compreensão de sua associação com o comportamento biológico do CBC.

INTRODUCTION: Approximately 80 percent of non-melanoma skin neoplasias are basal cell carcinomas (BCC). Although metastasis is rare, BBC carcinomas are locally aggressive tumors. Matrix metalloproteinases (MMPs), mainly MMP-2 and MMP-9, play an important role on the invasion process. On the other hand, tissue inhibitors of MMPs (TIMPs) have the main function of inhibiting these enzymes. OBJECTIVE: To investigate the association of clinical-pathological variables of BCC patients with the expression of MMP-2 and MMP-9, TIMP-1 and TIMP-2. Methods: Thirty-one BCC cases were selected. Gender, age of the patients and size of the lesions were obtained retrospectively. Histological cuts of the lesions were exposed to immunohistochemistry reaction by use of the streptavidine-biotin peroxidase technique in order to detect antigens. Immunomarking parameters were established and compared with previous data. RESULTS: A significant correlation between age and size of the lesion was observed (R = 0.532; p = 0.008). No significant correlations between other variables and immunohistochemical expression of antigens were observed. CONCLUSION: The expression of MMPs and TIMPs does not seem to be influenced by the parameters investigated in this work. Additional studies should be made to better understand its association with the biological behavior of basal cell carcinomas.