Stability of hydroalcoholic extracts of two species of guaco; Mikania glomerata SPRENG. and Mikania laevigata SCHULTZ. (Asteraceae), by UHPLC-MS

It is important to study the stability of plant extracts used as active ingredients in phytotherapic medicine, as degradation of the active principles directly affects the efficacy and safety of these products. Therefore, a stability study of the hydroalcoholic extract of the species: Mikania glomerata and Mikania laevigata was conducted in order to determine the speed of degradation and shelf life of these extracts, which are incorporated in cough syrup in Brazil. Leaves of both species were dried in an oven or by lyophilization (freeze-dried). Hydroalcoholic extracts underwent both accelerated stability study of six months and long-term stability study for 12 months. Samples were stored at different temperatures and every three months were analysed by ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometry (UHPLC-MS) to monitor their chemical profile, quantifying coumarin and chlorogenic acid. For all conditions of the study, a reduction of the content of the chemical marker of this species, coumarin, greater than 5% was observed, so a shelf life of two years cannot be assigned to the hydroalcoholic extracts of these species as observed in commercial extracts.

Radiation levels of UV-A and UV-B on growth parameters and coumarin content in guaco / Níveis de radiação UVA e UVB sobre parâmetros de crescimento e conteúdo de cumarina em guaco

ABSTRACT: Guaco is a medicinal plant species containing coumarin, a secondary metabolite whose concentration is influenced by various factors, such as the level of exposure to UVA (315-400 nm) and UVB (280-315 nm) radiation, age of the plant, and position of the storage organ in the plant. This study aimed to assess the effect of different blocking levels of UVA and UVB radiation on growth parameters and coumarin content of two guaco accessions. Treatments did not affect any of the growth parameters assessed, except leaf area. Coumarin content was higher in leaves collected from the upper canopy and with unblocked exposure to UVA and UVB.

RESUMO: Guaco é uma espécie medicinal que apresenta em sua composição a cumarina, um metabólito secundário cuja concentração no vegetal é influenciada por fatores como os níveis de radiação UV-A (315-400 nm) e UV-B (280-315 nm) incidentes, bem como pela idade e posição do órgão de armazenamento na planta. O objetivo deste estudo foi o de avaliar o efeito de diferentes níveis de bloqueio das radiações UV-A e UV-B sobre parâmetros de crescimento e teor de cumarina em dois acessos de guaco. Os tratamentos não apresentaram efeito sobre os parâmetros de crescimento avaliados, com exceção dos valores de área foliar. Em relação aos teores de cumarina, estes foram superiores nas folhas coletadas do dossel superior, bem como no tratamento sem bloqueio das radiações UV-A e UV-B incidentes.

UHPLC–MS quantification of coumarin and chlorogenic acid in extracts of the medicinal plants known as guaco (Mikania glomerata and Mikania laevigata)

Abstract In Brazil, Mikania glomerata Spreng. and M. laevigata Sch. Bip. ex Baker, Asteraceae, known popularly as guaco, are widely used for colds and asthma. Although coumarin is adopted as the chemical marker of both species, it was not always detected in M. glomerata, for which chlorogenic acid was identified and quantified instead. The purpose of this study was to develop and validate a method to quantify both coumarin and chlorogenic acid and apply it to extracts of plants identified as M. glomerata, M. laevigata, or as guaco, to determine the pattern of composition of these two species and to observe differences between oven-dried and lyophilized leaves. A method using ultra-high resolution liquid chromatography–mass spectrometry (UHPLC–MS) in the full scan mode was validated for selectivity, matrix effect, linearity, limits of detection and quantification, precision and accuracy. The concentration of coumarin varied between species and samples, therefore these two species should not be used interchangeably. The concentration of chlorogenic acid was also determined for all samples. The UHPLC–MS method permitted the quantification of coumarin and chlorogenic acid in 16 samples of guaco and several commercial samples were possibly misidentified.

Quantificação de citocinas no soro e homogenato da pata na intoxicação experimental com veneno de Bothropoides jararaca em ratos Wistar tratados com soroterapia e Mikania glomerata / Quantification of cytokines in serum and paw homogenate of experimental intoxication for venom of the Bothropoides jararaca in Wistar rats treated with antivenom and Mikania glomerata

O presente estudo teve como objetivo quantificar os níveis de citocinas pró-inflamatórias, entre as quais TNF-α, interleucina-1β (IL-1β), IL-6, e anti-inflamatórias, como IL-10, interferon-γ (INF-γ), bem como comparar o efeito do tratamento convencional com o efeito do tratamento complementado pelo extrato da planta Mikania glomerata, na intoxicação experimental por Bothropoides jararaca. Foram usados ratos Wistar,divididos em três grupos: C - controle, VB - veneno botrópico + soro antiofídico e VBM - veneno botrópico + soro antiofídico + Mikania glomerata. As citocinas foram quantificadas, no soro e no homogenato desses animais, pelo teste ELISA, em três momentos (M1 - 30 minutos, M2 - seis horas e M3 - 24 horas após a inoculação do veneno). Os resultados obtidos evidenciaram que a intoxicação por veneno botrópico estimula principalmente a produção de IL-6 no soro e TNF-α, IL-1β, IL-6 no homogenato da pata de animais experimentalmente intoxicados. O tratamento complementar, com o extrato da planta Mikania glomerata, teve influência principalmente na produção de IL-6, IL-10 e IFN-γ no soro e IL-6, IL-1β e IFN-γ no homogenato. Porém, são necessários novos estudos com o extrato de Mikania glomerata para que se possa entender a ação dessa planta sobre a intoxicação botrópica, bem como verificar qual a melhor via para administrá-lo...

This experiment aimed to quantify the pro-inflammatory cytokine levels, including TNF-α, interleukin-1β (IL-1β) and IL-6 as well as the anti-inflammatory ones such as IL-10 and INF-γ. It was also proposed to compare the effect of the conventional treatment to a treatment in which was added the Mikania glomerata plant in the experimental intoxication using Bothropoides jararaca venom. It was used Wistar rats that were randomly divided into 3 groups: C - control; VB - Bothrops venom + antivenom serum; and VBM - Bothrops venom + antivenom serum + Mikania glomerata. Cytokines were quantified in the serum and paw homogenate using ELISA test in three different moments (M1- 30 minutes, M2- 6 hours and M3- 24 hours after venom injection). The intoxication by Bothropoides jararaca venoms mainly stimulated the production of IL-6 in the serum and TNF-α, IL-1β, IL-6 in paw homogenate of animals experimentally intoxicated. Adjunctive treatment with the extract of the Mikania glomerata plant mainly influenced the production of IL-6, IL-10 and IFN-γ in the serum and IL-6, IL1β and IFN-γ in paw homogenate. Further research is necessary with the extract of Mikania glomerata in order to understand the action of this plant on the Bothropoides poisoning and also to verify the best way to manage it...

Estudo das propriedades físico-químicas e avaliação da toxicidade aguda do extrato etanólico das folhas de Mikania glomerata Sprengel / Study of the physicochemical properties and acute toxicity evaluation of the ethanolic extract of the leaves of Mikania glomerata Sprengel

A Mikania glomerata é uma planta pertencente à família Asteraceae que é bastante utilizada na medicina popular devido às suas ações broncodilatadora, antiasmática, expectorante e antitussígena. O objetivo do presente estudo foi determinar as propriedades físico-químicas do pó obtido a partir das folhas de M. glomerata, bem como, avaliar a toxicidade em camundongos após tratamento agudo com doses repetidas do extrato etanólico padronizado preparado a partir das folhas dessa espécie. Durante o estudo das propriedades físico-químicas do pó obtido a partir das folhas de M. glomerata foram feitas as determinações da densidade bruta e de compactação, do teor de cinzas totais, do teor de umidade, e da granulometria. De acordo com os resultados obtidos podemos sugerir que o pó pode ser usado na formulação de uma forma farmacêutica sólida. Na segunda parte do estudo foi determinada a Dose Letal 50% (DL50), bem como, realizada a análise morfológica macroscópica e avaliados a toxicidade aguda com doses repetidas e os parâmetros bioquímicos e hematológicos de camundongos. De acordo com os dados obtidos na segunda parte deste estudo podemos sugerir que o extrato etanólico pode ser usado de forma segura em humanos, uma vez que apresentou valor de DL50 de aproximadamente 3000 mg Kg-1), bem como, não produziu nenhuma alteração morfológica nos principais órgãos, e nem provocou alterações nos parâmetros bioquímicos e hematológicos de camundongos.

The Mikania glomerata is a plant belonging to the Asteraceae that is widely used in folk medicine because of its bronchodilator, antiasthmatic, expectorant and antitussive actions. The aim of this study was to determine the physicochemical properties of the powder obtained from the leaves of M. glomerata, and to evaluate its toxicity in mice after acute treatment with repeated doses of standardized ethanol extract prepared from the leaves of this plant species. We determined the bulk and packing density, the total ash content, the moisture content and the particle size. The results suggest that the powder can be used in the formulating of a solid pharmaceutical form. In the second part of this study, we determined the 50% lethal dose (LD50), performed the gross morphological analysis and evaluated the acute toxicity from the use of repeated doses and the biochemical and hematologic parameters in mice. The data obtained in this part suggest that the ethanol extract can be used safely in humans, since it has a LD50 value of approximately 3000 mg kg -1 and produced no morphological changes in the major organs, or caused alterations in the biochemical and hematological parameters in mice.

Propriedades físicoquímicas e avaliação da toxicidade aguda do extrato etanólico padronizado a 70% das folhas de Mikania glomerata (Asteraceae) / Physicochemical properties and acute toxicity evaluation of ethanol extract of the leaves from Mikania glomerata Sprengel

Mikania glomerata (Asteraceae) é bastante utilizada na medicina popular devido às suas ações broncodilatadora, antiasmática, expectorante e antitussígena. O objetivo do presente estudo foi determinar propriedades físicoquímicas do pó obtido a partir das folhas de M. glomerata, bem como avaliar a toxicidade em camundongos após tratamento agudo com doses repetidas do extrato etanólico padronizado a 70% preparado durante 30 dias consecutivos. No estudo das propriedades físicoquímicas fez-se a determinação da densidade bruta e de compactação, do teor de cinzas totais, do teor de umidade e da granulometria. De acordo com os resultados obtidos o pó pode ser usado na formulação de uma forma farmacêutica sólida, uma vez que suas propriedades físico-químicas são compatíveis com o desenvolvimento desse tipo de formulação. Na segunda parte do estudo foi determinada a dose letal 50% (DL50) em camundongos, e na análise morfológica macroscópica dos principais órgãos e avaliada a toxicidade aguda com doses repetidas em parâmetros bioquímicos e hematológicos de camundongos. Os resultados sugerem que o extrato etanólico padronizado a 70% pode ser usado de forma segura, uma vez que apresentou um valor para a DL50 (~3000 mg kg-1) que pode ser classificado na categoria nociva, e não produziu nenhuma alteração morfológica nos principais órgãos e em parâmetros bioquímicos e hematológicos de camundongos.

Mikania glomerata Sprengel is a plant from the Asteraceae family and it is widely used in folk medicine because of its bronchodilating, anti-asthmatic, expectorant and antitussive effects. The purpose of this study was to determine the physicochemical properties of the powder obtained from the leaves of M. glomerata, and to evaluate the toxicity in mice after an acute treatment with repeated doses of standardized 70% ethanol extract prepared from the leaves during 30 consecutive days. To study the physicochemical properties of the powder, we conducted a determination of the bulk density and compaction, the total ash content, the moisture content and particle size. According to the results obtained, we suggest that the powder can be used to formulate a solid dosage form, since its physicochemical properties matches the development of this type of formulation. In the second part of the study, it was determined a lethal dose in the order of 50% (LD50), along with a gross morphological analysis and the evaluation of the acute toxicity with repeated doses, in the terms of biochemical and hematological parameters of mice. According to the results from the second phase, we suggest that the 70% ethanol extract can be used safely in humans, since it presented a value for the LD50 (~ 3000 mg kg-1) that can be classified as 'harmful'. It also did not produce any morphological changes in the major organs and in the biochemical and hematological parameters of mice.

Rendimento extrativo de cumarina de folhas de guaco (Mikania glomerata Sprengel) submetidas a diferentes temperaturas de secagem / Extraction yield of coumarin from guaco (Mikania glomerata Sprengel) leaves subjected to different drying temperatures

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da temperatura do ar de secagem no rendimento extrativo da cumarina de folhas de guaco. Foram empregados 6 tratamentos de secagem, sendo ar ambiente, ar aquecido a 40, 50, 60, 70 e 80ºC. Utilizou-se secador de bandejas, tendo como fonte de aquecimento o gás liquefeito de petróleo (GLP). Os rendimentos extrativos da cumarina, depois de realizada a secagem, foram comparados com os valores obtidos da planta fresca (tratamento testemunha). A extração da cumarina foi realizada pelo método a quente, em banho-maria a 65ºC, sendo a identificação e quantificação realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Em função dos resultados obtidos, pôde-se concluir que a temperatura do ar de secagem a 50ºC possibilitou o melhor resultado para o rendimento extrativo de cumarina em folhas de guaco.

The aim of this study was to evaluate the effect of drying on the extraction yield of coumarin from guaco leaves. Six drying treatments were used, being room air, heated air at 40, 50, 60, 70 and 80ºC. A tray dryer was used with liquefied petroleum gas (LPG) as heating source. The extraction yield of coumarin, after drying, was compared to the values obtained from the fresh plant (control treatment). Coumarin extraction was carried out by using the heat method, in water bath at 65ºC, and identification and quantification were done by means of high performance liquid chromatography (HPLC). Considering the obtained results, the temperature of the drying air at 50ºC led to the best result for the extraction yield of coumarin in guaco leaves.

Toxicological screening of Mikania glomerata Spreng., Asteraceae, extract in male Wistar rats reproductive system, sperm production and testosterone level after chronic treatment / Triagem toxocológica do extrato de Mikania glomerata Spreng., Asteraceae, no sistema reprodutor, produção espermática e nível de testosterona em machos de ratos Wistar após tratamento crônico

Some compounds present in therapeutic plants may be responsible for the occurrence of adverse side effects. Coumarin and flavonoids are substances found in many plant species that showed antifertility activity in female rats and dogs, respectively. Mikania glomerata Spreng., Asteraceae, known as guaco in Brazil, is a plant largely used in folk medicine and its leaves are reported to have coumarin and flavonoids. This work analyzes the effect of chronic administration of M. glomerata on the reproductive system of male rats. Thirty-day-old Wistar rats were treated with M. glomerata hydroalcoholic extract at a dose of 3.3 g/kg of body weight for ninety days. Body and organ weights, gamete concentration on the epididymis cauda, serum testosterone level and food consumption were evaluated. No significant alteration was observed in any of the variables analyzed, suggesting the absence of toxic action or antifertility activity of the M. glomerata hydroalcoholic extract.

As plantas medicinais podem apresentar na sua constituição compostos capazes de causar efeitos adversos no organismo. Cumarina e flavonoides são substâncias encontradas em muitas espécies vegetais, cuja interferência na fertilidade de ratas e cadelas, respectivamente, foi evidenciada em estudos prévios. Mikania glomerata Spreng., Asteraceae, (guaco) é uma planta usada no tratamento de doenças respiratórias e em suas folhas foi detectada a presença de cumarina e flavonoides. Neste estudo, avaliou-se o efeito do extrato hidroalcoólico, preparado com partes aéreas de guaco, no sistema reprodutor de ratos submetidos a tratamento crônico. Ratos Wistar (trinta dias de idade) foram tratados com extrato hidroalcoólico de guaco na dose de 3,3 g/kg de peso corporal durante noventa dias. O peso corporal e de órgãos, a produção de espermatozoides, a concentração de testosterona plasmática e o consumo de ração foram avaliados. Não foi observada nenhuma alteração significativa das variáveis analisadas e o tratamento não afetou o consumo de ração. Estes dados sugerem que, na dose utilizada, o extrato hidroalcoólico de guaco não teve efeito tóxico e nem interferiu com a fertilidade de ratos Wistar submetidos a um tratamento de longa duração.

Avaliação do efeito de polietilenoglicóis no perfil de extratos de Mikania glomerata Spreng., Asteraceae, e Passiflora edulis Sims, Passifloraceae / Evaluation of PEG effects on the extracts obtaining from Passiflora edulis Sims, Passifloraceae, and Mikania glomerata Spreng., Asteraceae

Os polietilenoglicóis (PEG) são polímeros hidrossolúveis capazes de reduzir a constante dielétrica de solventes como a água, e assim são utilizados como cossolventes para solubilização de diferentes fármacos. Atualmente, o PEG tem sido empregado satisfatoriamente na obtenção de extratos de matérias-primas vegetais por favorecer a extração de substâncias com polaridades semelhantes às extraídas pelos solventes hidroetanólicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da concentração e da massa molar de PEG (400 e 4000 g/mol) sobre a extração de flavonoides totais a partir de Passiflora edulis Sims, Passifloraceae, (maracujá) e de cumarina a partir da Mikania glomerata Spreng., Asteraceae, (guaco). Este estudo revelou que o aumento da concentração de PEG promoveu um aumento na capacidade extrativa de flavonoides totais e cumarina a partir da Passiflora edulis e Mikania glomerata respectivamente, comportamento atribuído a alterações da constante dielétrica. Apesar de elevar a capacidade extrativa, os líquidos extratores contendo PEG exigiram elevada relação planta:solvente para alcançar teores extrativos semelhante ao solvente hidroetanólico utilizado, com exceção da extração de flavonoides totais com PEG 4000 g/mol a partir da Passilfora edulis.

Polyethylene glycols (PEG) are hydrosoluble polymers able to reducing dielectric constant of solvents like water and thus are used as cosolvents to enhance the aqueous solubility of several drugs. Actually, the PEG have been successful applied to obtain extracts of plant raw material once can facilitate the extraction of substances with polarities similar to those extracted by hydroethanol solvents. In this study, the objective was to evaluate the effect of PEG concentration and molecular weight (400 and 4000 g/mol) on the extraction of total flavonoids from Passiflora edulis Sims, Passifloraceae, and coumarin from Mikania glomerata Spreng., Asteraceae. The results showed that increasing PEG concentration promoted an increase in the extractive capacity of total flavonoid and coumarin from Passiflora edulis and Mikania glomerata respectively. This behavior was attributed to changes in dielectric constant. Despite raising the extractive capacity, the solvent containing PEG required high plant/solvent ratio to reach levels similar to hydroethanol solvents used, except for the extraction of total flavonoids from Passiflora edulis using PEG 4000 g/mol.

Mikania glomerata Spreng. e M. laevigata Sch. Bip. ex Baker, Asteraceae: estudos agronômicos, genéticos, morfoanatômicos, químicos, farmacológicos, toxicológicos e uso nos programas de fitoterapia do Brasil / Mikania glomerata Spreng. e M. laevigata Sch. Bip. ex Baker, Asteraceae: agronomic, genetic, anatomical, chemical, pharmacological, toxicological studies and its use in herbal therapy programs in Brazil

No Brasil as espécies de Mikania glomerata Spreng. e M. laevigata Sch. Bip. ex Baker, Asteraceae, popularmente conhecidas como guaco, são amplamente utilizadas com evidências pré-clínicas para o tratamento de doenças onde estejam envolvidas suas ações broncodilatadoras, antialérgicas, antiasmáticas, anti-inflamatórias, antiulcerogênicas e relaxantes da musculatura lisa. Em virtude das propriedades terapêuticas atribuídas as essas espécies, ambas foram oficializadas na farmacopéia brasileira, e por serem bastante semelhantes, dificilmente são diferenciadas. Com o objetivo de contribuir com novas pesquisas, a presente revisão descreve, de forma sistematizada, sobre os aspectos farmacológicos, toxicológicos, químicos, agronômicos, morfoanatômicos, genéticos e o uso nos programas de fitoterapia do Brasil destas espécies. As principais diferenças e semelhanças entre as duas espécies são evidenciadas através da comparação das informações baseadas na literatura específica.

In Brazil the species of Mikania glomerata Spreng. and M. laevigata Sch. Bip. ex Baker, Asteraceae popularly known as guaco, are widely used with preclinical evidence for the treatment of diseases whose actions involve bronchodilators, antiallergic, anti-asthmatic, anti-inflammatory, antiulcerogenic and smooth muscles relaxant. Due to the therapeutic properties attributed to these species, both were included in the official Brazilian Pharmacopoeia, and because of their similarity, they are hardly differentiated. In order to contribute to the new research, this review describes their several aspects: pharmacology, toxicology, chemical, agricultural, anatomical, genetics and the use in herbal medicine programs in Brazil, in a systematic way. The main differences and similarities between the two species are evidenced by comparing the information based on literature.

Effect of Mikania glomerata (Asteraceae) leaf extract combined with anti-venom serum on experimental Crotalus durissus (Squamata: Viperidae) envenomation in rats

Crotalic envenomation represents the highest number of deaths when compared to other snakebite envenomations of medical interest. Crotalic venom has important characteristics such as neurotoxicity, myotoxicity, nephrotoxicity, and clotting and hemolytic action. We evaluated the clinical and laboratory aspects of Crotalus durissus terrificus experimental envenomation in Wistar rats treated with antivenom and the aqueous extract of the plant Mikania glomerata. The animals were divided into three groups: Group C (control); Group VS-venom and antivenom; Group VSM-venom, antivenom and aqueous extract of M. glomerata. Crotalic poison caused clinical and laboratory alterations in Wistar mice. Significant linical alterations were: temperature decrease, edema in the venom inoculated member, sedation and a locomotion decrease in groups VS and VSM when compared with group C. A faster recovery from sedation was observed only for animals of group VSM when compared to VS. There was an increase in the number of leukocytes, neutrophils and creatine kinase in the VS and VSM groups, compared to group C. Wistar rats showed a high resistance to crotalic venom. Additional studies with different doses, time of treatment, different administration methods and histopathological and immunological studies are necessary to understand the action of M. glomerata in crotalic accidents. Rev. Biol. Trop. 57 (4): 929-937. Epub 2009 December 01.

El envenamiento crotálico representa el número más alto de muertes cuando es comparado con envenenamientos por mordeduras de otras serpientes de interés médico. El veneno crotálico tiene importantes características de acción neurotóxica, miotoxicidad, nefrotoxicidad, coagulación y acción hemolítica. Este trabajo evaluó los aspectos clínicos y de laboratorio del envenenamiento experimental con el veneno de la serpiente Crotalus durissus terrificus en las ratas Wistar tratadas con suero antiofídico y extracto acuoso de M. glomerata. Los animales fueron separados en tres diferentes grupos: grupo control (C); grupo veneno+suero (VS), grupo veneno+suero+extracto acuoso de M. glomerata (VSM). El veneno crotálico causó alteraciones clínicas y diferencias en los análisis sanguíneos practicados a los ratones Wistar evaluados. Las alteraciones clínicas más importantes fueron una disminución de la temperatura, edema en el miembro inoculado de veneno, la sedación y una disminución de la locomoción en los grupos VS y VSM comparado con el grupo C. Una rápida recuperación de la sedación estadísticamente significativa fue observada en los animales del grupo VSM al compararse con los del grupo VS. Los análisis sanguíneos mostraron un aumento en el número de leucocitos, neutrofilos y creatina quinasa en los grupos VS y VSM comparados con el grupo C. Los ratones Wistar mostraron una alta resistencia al veneno del crótalo. Estudios adicionales con variación en las dosis, tiempo de tratamiento, y métodos de administración, así como la realización de estudios histopatológicos e inmunológicos son importantes para comprender la acción de M. glomerata en accidentes crotálicos.

Determinação do teor de cumarina no xarope de guaco armazenado em diferentes temperaturas / Coumarin content of guaco syrup stored at different temperatures

A produção magistral do xarope de guaco, obtido a partir do extrato fluido do guaco (Mikania glomerata Spreng., Asteraceae) e comercializada na Farmácia Universitária da UFJF/MG, gerou um projeto de pesquisa com o objetivo principal de estudar a estabilidade do produto acabado, tendo como ponto de referência a determinação do teor de cumarina das amostras armazenadas em diferentes temperaturas. O método aplicado para realizar a análise do teor de cumarina presente no xarope em estudo foi espectrometria no UV com comprimento de onda de 275,4 nm. Utilizou-se como veículo para efetuar as diluições da amostra uma mistura de metanol/água destilada, na proporção de 80 por cento v/v. A curva de calibração foi obtida diluindo-se 100 mg de cumarina padrão em 100 mL da solução descrito acima, obtendo-se sete concentrações distintas com variação de 2 µg a 20 µg. Os resultados obtidos demonstraram que a temperatura de armazenamento de 45 °C foi considerada ótima para desenvolver a conversão do isômero trans em cis com subseqüente conversão deste a cumarina. Os valores de cumarina encontrados na forma farmacêutica em estudo foram de 1,19 a 1,37 mg/mL, sendo que o valor mais alto refere-se às amostras armazenadas a 45°C durante seis meses.

The production of guaco syrup, obtained from guaco (Mikania glomerata Spreng., Asteraceae) fluid extract, and commercialized by the University Pharmacy of the Federal University of Juiz de Fora-MG, Brazil, led to a research project whose main aim was to study the stability of the finished product, with reference to the coumarin content of samples stored at different temperatures. UV spectrophotometry (275.4 nm) was used to assess the coumarin content of the study syrup. An 80 percent v/v methanol/distilled water mixture was used for sample dilution. The calibration curve was constructed by the dilution of 100 mg standard coumarin in 100 ml of the aforementioned solution, with seven distinct concentrations (ranging from 2 µg a 20 µg) being obtained. The results showed the 45 °C storage temperature to be optimum for the development of trans-cis isomerization, with subsequent conversion of the latter into coumarin. Coumarin content in the studied pharmaceutical presentation ranged from 1.19 to 1.37 mg/mL, the highest value corresponding to the samples stored at 45 °C for six months.

Estudo comparativo da composição química das espécies vegetais Mikania glomerata Sprengel e Mikania laevigata Schultz Bip. ex Baker / Comparative study of the chemical composition of the species Mikania glomerata Sprengel and Mikania laevigata Schultz Bip. ex Baker

Adulterações da matéria-prima vegetal ocorrem comumente no mercado de fitoterápicos, sob a forma de substituições e/ou falsificações. Muitas vezes, espécies distintas são comercializadas em substituição à farmacopéica devido à dificuldade de obtenção desta, ou mesmo pelo emprego intencional de espécies de menor valor econômico que apresentem características morfológicas semelhantes. Portanto, faz-se necessária a realização de estudos que busquem identificar a constituição química das espécies de amplo uso medicinal, que são alvos de adulterações. Mikania glomerata e Mikania laevigata, conhecidas popularmente como "guaco", são comercializadas indistintamente. Buscando-se avaliar a composição química das duas espécies, realizou-se uma prospecção fitoquímica por CCD e foram obtidos os perfis cromatográficos por CLAE-FR. Fez-se a quantificação da cumarina empregando-se o mesmo método. Na prospecção fitoquímica por CCD, foi detectada, nas duas espécies, a presença de cumarina, triterpenos/esteróides e heterosídeos flavônicos. Os perfis cromatográficos, obtidos por CLAE-FR, mostraram-se semelhantes, observando-se a predominância de compostos polares. Na quantificação da cumarina, obtêve-se um teor de 0,30 por cento para M. glomerata e 0,43 por cento para M. laevigata, teores de acordo com o preconizado na monografia do guaco-cheiroso (mín. 0,1 por cento). M glomerata e M. laevigata apresentaram composição química semelhante e teores de cumarina próximos, sugerindo que estas podem ser utilizadas de forma indistinta.

Adulterations of plant raw materials often occur in the marketing of herbal medicine, usually in the form of substitutions and/ or fakes. Many times, different plant species are commercialized in the place of the one recognized by the pharmacopoeia. This may occur due to the difficulties of obtaining the authentic plant material, or by an intentional use of a plant species that has less economic value but shows similar morphologic features. Therefore, it is necessary to carry out studies that can identify the chemical composition of those species of wide medicinal use, which are the targets of adulterations. Mikania glomerata and Mikania laevigata, popularly known as "guaco", are indistinctly commercialized in Brazil. A phytochemical screening by TLC was carried out to evaluate the chemical composition of both species. The RP-HPLC profiles were obtained and the quantification of coumarin was determined by the same method. A phytochemical screening has shown that coumarin, triterpenes/ steroids and flavonic heterosides are the constituents detected in both species. The RP-HPLC profiles were similar between the two species and revealed the predominance of polar compounds. In the quantification of coumarin, a content of 0.30 percent (w/w) was obtained for M. glomerata and 0.43 percent (w/w) for M. laevigata. These values are in accord with the contents (min. 0.1 percent, w/w) described by the monograph of "guaco-cheiroso" in the Brazilian Pharmacopoeia. Therefore, the results indicated similar chemical profiles for M. glomerata and M. laevigata, as well as comparable coumarin contents, thus suggesting that the species might be used indistinctly.

A validated capillary gas chromatography method for guaco (Mikania glomerata S) quality control and rastreability: from plant biomass to phytomedicines / Método validado por cromatografia gasosa capilar para o controle de qualidade e rastreabilidade de guaco (Mikania glomerata S): da matéria-prima ao fitoterápico

Este trabalho descreve a validação completa de metodologia analítica empregando cromatografia gasosa capilar com padronização interna para quantificação da cumarina (1,2-benzopirona) em produtos contendo guaco (Mikania glomerata Spreng - Asteraceae): xarope, planta e extrato padronizado, além do estudo de estabilidade do fitoterápico em questão. Utilizou-se uma coluna capilar HP-5 (30 m x 0,32 mm x 0,25 µm), hidrogênio a 1,8 mL/min e rampa de temperatura de 100 ºC a 250 ºC, a 15 ºC/min. A temperatura do injetor (split 1:20) foi de 250 ºC, enquanto a do detector foi de 270 ºC. Os tempos de retenção dos padrões foram: 2,86 minutos para o 1, 2, 3, 4-tetrametilbenzeno, 4,45 minutos para o piperonal (padrões internos) e 5,36 minutos para a cumarina. Após o procedimento de extração da planta in natura, a recuperação da cumarina foi de 101,6 por cento, enquanto que para o xarope esta foi de 100,8 por cento. Os limites de detecção e quantificação foram 0,5 µg/mL e 1,5 µg/mL, respectivamente. A precisão, determinada para todas as amostras, apresentou desvios padrões relativos menores que 2,5 por cento. Os teores de cumarina presentes nas folhas, extrato e xarope foram de 0,38 por cento m/m, 1,33 mg/mL e 0,143 mg/mL, respectivamente.

This work describes a full validation of a capillary gas chromatography analytical methodology using internal standardization for the quantification of coumarin (1,2-benzopyrone) in guaco (Mikania glomerata Spreng - Asteraceae) products: syrup, plant and its extract, including the stability study of the phytomedicine. For the analysis, it was used an HP-5 capillary column (30 m x 0.32 mm x 0.25 µm), hydrogen at a flow rate of 1.8 mL/min and the increasing temperature gradient was: 100 ºC to 250 ºC, 15 ºC/min. The temperature of injector (split 1:20) and detector were kept at 250 ºC and 270 ºC, respectively. The retention times of the standards for the above conditions were 2.86 minutes for 1, 2, 3, 4-tetramethylbenzene, 4.45 min for piperonal (internal standards), and 5.36 minutes for coumarin. After extraction procedure, the recovery of coumarin determined for plant raw material was 101.6 percent, while for syrup it was 100.8 percent. Detection and quantification limits were 0.5 µg/mL and 1.5 µg/mL, respectively. Precision was determined for all samples and the results were lower than 2.5 percent. The total amount of coumarin in plant raw material, its extract and syrup were 0.38 percent w/w, 1.33 mg/mL and 0.143 mg/mL, respectively.

Método espectroscópico para determinação de cumarina em xarope de Mikania glomerata Sprengel / Ultraviolet spectroscopy method for coumarin quantification in Mikania glomerata Sprengel syrup

Este trabalho teve como objetivo desenvolver uma metodologia analítica por espectroscopia UV, para doseamento de cumarina em xaropes de Mikania glomerata. A técnica foi baseada na extração da cumarina utilizando solventes como o clorofórmio e hexano. Após a seleção do solvente, o comprimento de onda foi definido através da sobreposição dos espectros da cumarina, metil parabeno, diluição do xarope e solução extrativa do xarope. Foram preparadas curvas analíticas de cinco soluções de cumarina com concentração variando de 0,002 a 0,03 mg/mL. Para análise da exatidão do método, foram preparados três lotes de xarope de Mikania glomerata Sprengel e o teor de cumarina determinado pela técnica espectrofotométrica foi comparado a técnica por cromatografia líquida de alta eficiência. O solvente selecionado para extração foi o clorofórmio, o comprimento de onda 320 nm. A curva analítica apresentou R² de 0,99978, demonstrando linearidade. A comparação estatística do doseamento da cumarina pela técnica espectrofotométrica estudada com a técnica cromatográfica desenvolvida por Celeghini et al. (2001) demonstrou não existir diferenças significativas, indicativo de exatidão da técnica.

A spectrophotometric procedure for coumarin determination in Mikania glomerata Sprengel (guaco) syrup is described in this work. Due to the high number of constituents in guaco syrups, the coumarin was extracted with apolar extractors (chloroform and hexane), in which chloroform was selected, because of its higher capacity of extraction. After the solvent choice, the wavelength at 320 nm, region where there is the lower interference of syrup constituents, was selected. The calibration curve showed linearity, R² of 0.99978. The spectrophotometric assay of coumarin in three samples of Mikania glomerata Sprengel syrup showed accuracy compared with the HPLC method. The results presented suggest that the spectrophotometric method may be useful for the quantitative analysis of coumarin in Mikania glomerata Sprengel syrup.

Mikania glomerata Spreng: desenvolvimento de um produto fitoterápico / Mikania glomerata Spreng: development of a herbal medicine

Apesar da atividade farmacológica de Mikania glomerata Spreng. ser conhecida desde longa data, existem poucos estudos visando a preparação de produtos padronizados que garantam uma produção uniforme, doses eficazes e estabilidade. Nesse trabalho, foram realizados ensaios objetivando a otimização do processo extrativo; tratamento da droga vegetal para o preparo de tinturas; determinação da melhor forma de estocagem e otimização da preparação da forma farmacêutica (xarope).

Although the pharmacological activity of Mikania glomerata Spreng. has been well known for a long time, there are a few studies concerning the elaboration of phytopharmaceutical products that assure an uniform preparation, effective doses and stability. In this work, tests with the objective of the optimization of the extraction process were performed; treatment of the plant drug for preparation of tinctures; determination of the adequate form of storage and the optimization of the preparation of the pharmaceutical form (syrup).

Differences in secondary metabolites from leaf extracts of Mikania glomerata Sprengel obtained by micropropagation and cuttings / Diferenças nos metabólitos secundários acumulados nos extratos das folhas de Mikania glomerata Sprengel obtidos por micropropagação e estaquia

GC analysis of the dichloromethane extracts obtained from cultivated specimens of Mikania glomerata Sprengel possibilited to verify that cuttings technique led to production of kaurenoic acid and coumarin while the same results have not been observed by propagation process using in vitro techniques.

A análise realizada por CG dos extratos diclorometânicos das folhas de Mikania glomerata Sprengel mostrou que a planta propagada por estaca produziu cumarina e ácido caurenóico, enquanto que o material micropropagado acumulou apenas cumarina.

Antidiarrhoeal effects of Mikania glomerata Spreng. (Asteraceae) leaf extract in mice

Mikania glomerata Spreng. (Asteracae) is a plant widely used to treat gastrointestinal disorders in Brazilian traditional medicine. In the present work, an aqueous extract of the leaves of Mikania glomerata has shown a decrease in the propulsive movements of the intestinal contents in mice. Oral administration produced an inhibition of gastrointestinal transit as effective as that produced by loperamide. These findings suggested that the aqueous extract of the leaves of Mikania glomerata might elicit an antidiarrhoeal effect by inhibiting intestinal motility.

Chromatographical profiles of fluid extracts and tinctures obtained from Mikania glomerata Sprengel sterilized by gamma ray irradiation

Aerial parts of Mikania glomerata Sprengel, were irradiated with gamma rays in an apparatus with a Cesius-137 source in two different doses: 3.5 and 5.0 KGy. Double-blind HPLC studies on fluid extracts and tinctures prepared from the irradiated drug material were utilized to verify possible chemical changes. Extracts from the same plant (untreated) were used as standards. The results obtained showed that there was an increase in the coumarin content in the extracts obtained from irradiated plants (3.5 and 5.0 KGy) as well as a decrease in the o-coumaric acid concentration.

Avaliação do efeito de mikania glomerata sobre o sistema reprodutor e órgaõs de ratos wistar submetidos a tratamento subagudo / Short-term exposure to mikania glomerata on male wistar rats' organs and reproductive system

Mikania glomerata (guaco) is a plant well known in Brazil for its therapeutic properties, especially in the treatament of respiratory diseases. Coumarin and flavonoids are active compounds of M. glomerata leaves and have been reported to cause adverse effects on the organism, including antifertility activity in famale rat and male dog respectively. This work analyzes the effect of short-term administration of M.glomerata hydroalcoholic extract on vital organs, of the reproductive system and sperm concentration of mature male wistar rats. Treated animals received 1 ml of the extract at a dose of 1.1 g/kg of body weight for live days. Body and organs weights, sperm production and food consumption were evaluated. No body weigth reduction and no toxic effect on the organs, gamete production or food intake were detected in any of the groups analyzed, given the experimental protocol used.