Caracterización de la calidad del semen en hombres atendidos en un centro de reproducción asistida en Guayaquil, Ecuador / Description of the semen quality from men treated in an assisted reproduction center in Guayaquil, Ecuador

RESUMEN Con el objetivo de caracterizar la calidad seminal de hombres en un centro de reproducción asistida de la ciudad Guayaquil (Ecuador), se colectaron 204 muestras de semen de pacientes con problemas de fertilidad de entre 20 y 57 años, atendidos entre mayo de 2017 y septiembre de 2018. Se realizó un espermograma básico a cada muestra, siguiendo las recomendaciones del manual para la examinación y procesamiento de semen humano. El 27,4% de las muestras presentó normozoospermia. Dentro de las alteraciones la teratozoospermia fue de 27,9%, oligoteratozoospermia del 8,8%, evidenciándose mayor número en pacientes de 30 a 39 años. Un alto porcentaje de pacientes presentan una calidad del semen y morfología espermática por debajo los limites de referencia establecidos por la Organización Mundial de la Salud.

ABSTRACT In order to characterize the quality of semen from men in an assisted reproduction center in the city of Guayaquil (Ecuador), 204 semen samples were collected from patients with fertility disorders aged 20 to 57 years, who were admitted between May 2017 and September 2018. A basic spermogram was performed on each sample, following the fabricant recommendations for the examination and processing of human semen. It was found that 27.4% of the samples presented normozoospermia. Among the disorders, it was found that 27.9% had teratozoospermia, 8.8% had oligoteratozoospermia and a higher number of patients were found to be between 30 and 39 years old. A high percentage of patients presented sperm morphology and quality values below the reference limits established by the World Health Organization.

Semen characteristics of the amazonian jundiá (Leiarius marmoratus Gill, 1870) / Característica seminal de jundiá amazônico (Leiarius marmoratus Gill, 1870)

The study evaluated qualitative and quantitative characteristics of Amazonian jundiá semen. The experiment was carried out in February 2015 at Cia do Peixe, a company located in Goiás state, Brazil, that specialises in fish fry production. Three male L. marmoratus farmed in dugout ponds, weighing 1.34 ± 0.29 kg and measuring 39.33 ± 1.15 cm in length, were tested. The specimens were captured and transferred to a 1000-L tank at the Reproduction Laboratory of the abovementioned company. Water temperature was measured at 7:00 a.m. and 5:00 p.m., and the fish were fed twice daily. For semen collection, the fish were captured from the tank using a dip net and constrained with a wet cotton towel. Their eyes were covered and their urogenital papilla was cleaned and dried with paper towel. Semen was collected in microcentrifuge tubes that were immersed in ice and analysed immediately. On average, the sperm motility rate was 83.33%, motility duration was 5.33 min, sperm concentration was 1,795,833 cells/ mm3, and vigour was 4. The morphological analysis of the sperm revealed tail anomalies in 17.66%, midpiece anomalies in 20%, and head anomalies in 5.33%. Based on qualitative and quantitative characteristics, L. marmoratus semen was shown to be suitable for use in artificial reproduction procedures.

Objetivou-se avaliar qualitativamente e quantitativamente as características seminais do Jundiá Amazônico. O experimento foi realizado em fevereiro de 2015, a Cia do Peixe, uma empresa localizada no Estado de Goiás, Brasil, especializada em produção de alevino. Três masculino L. marmoratus cultivados em tanques de esconderijo subterrâneo, pesando 1,34 ± 0,29 kg e medindo 39.33 ± 1,15 centímetros de comprimento, foram testados. Os espécimes foram capturados e transportado para um tanque de 1000 L no Laboratório da empresa acima indicado reprodução. A temperatura da água foi medida a 07:00 e 17:00 e os peixes foram alimentados duas vezes ao dia. Para a coleta de sêmen, os peixes foram capturados a partir do tanque usando uma rede de mergulho e constrangidos com uma toalha de algodão molhado. Seus olhos estavam cobertos e sua papila urogenital foi limpo e seco com toalha de papel. O sémen foi recolhido em tubos de microcentrífuga que foram imersas em gelo e analisadas imediatamente. A taxa de motilidade média foi 83,33%, a duração de motilidade média foi 5,33 minutos, concentração espermática foi de 1.795.833 celulas/ mm3 e o vigor 4. A análise morfológica revelou 17,66% de defeitos de cauda, 20% de defeitos de peça intermediária e 5,33% de defeitos de cabeça. O Jundiá da Amazônia (Leiarius marmoratus Gill, 1870) apresenta característica seminais e espermáticas quantitativas e qualitativas que permitem sua utilização em técnicas de reprodução artificial.

Impaired protamination and sperm DNA damage in a Nellore bull with high percentages of morphological sperm defects in comparison to normospermic bulls / Deficiências de protaminação e danos de DNA no sêmen de um touro Nelore com elevada porcentagem de patologias espermáticas em comparação a touros normospérmicos

The routine semen evaluation assessing sperm concentration, motility and morphology, does not identify subtle defects in sperm chromatin architecture. Bulls appear to have stable chromatin, with low levels of DNA fragmentation. However, the nature of fragmentation and its impact on fertility remain unclear and there are no detailed reports characterizing the DNA organization and damage in this species. The intensive genetic selection, the use of artificial insemination and in vitro embryo production associated to the cryopreservation process can contribute to the chromatin damage and highlights the importance of sperm DNA integrity for the success of these technologies. Frozen-thawed semen samples from three ejaculates from a Nellore bull showed high levels of morphological sperm abnormalities (55.8±5.1%), and were selected for complementary tests. Damage of acrosomal (76.9±8.9%) and plasma membranes (75.7±9.3%) as well as sperm DNA strand breaks (13.8±9.5%) and protamination deficiency (3.7±0.6%) were significantly higher compared to the values measured in the semen of five Nellore bulls with normospermia (24.3±3.3%; 24.5±6.1%; 0.6±0.5%; 0.4±0.6% for acrosome, plasma membrane, DNA breaks and protamine deficiency, respectively) (P<0.05). Motility and percentage of spermatozoa with low mitochondrial potential showed no differences between groups. This study shows how routine semen analyses (in this case morphology) may point to the length and complexity of sperm cell damage emphasizing the importance of sperm function testing.(AU)

O exame de rotina de sêmen, o qual avalia a concentração de espermatozoides, a motilidade e a morfologia, pode não identificar defeitos sutis na arquitetura da cromatina de espermatozoides. Os touros parecem ter cromatina estável com baixos níveis de fragmentação do DNA. No entanto, a natureza da fragmentação e o seu impacto sobre a fertilidade ainda não estão claros e não há relatos que caracterizam a organização do DNA e os danos nessa espécie com mais detalhes. A seleção genética intensiva e o uso da inseminação artificial e da produção in vitro de embriões, além do processo de criopreservação, podem contribuir para o dano da cromatina, e sabe-se a importância da integridade do DNA espermático para o sucesso dessas tecnologias. Amostras de sêmen de três ejaculados de um touro Nelore com altos níveis de alterações morfológicas (55,8±5,1%) foram selecionadas para realização de exames complementares. Os danos de acrossoma (76,9±8,9%) e das membranas plasmáticas (75,7±9,3%), bem como quebras de fita de DNA de espermatozoides (13,8±9,5) e deficiência de protamina (3,7±0,6) foram significativamente maiores em comparação aos valores avaliados no sêmen de cinco touros Nelore com normospermia (24,3±3,3%; 24,5±6,1%; 0,6±0,5%; 0,4±0,6% para acrossoma, membrana plasmática, quebras de DNA e deficiência de protamina, respectivamente) (p<0,05). Motilidade e porcentagem de espermatozoides com baixo potencial mitocondrial não diferiram estatisticamente. Essas avaliações mostram que análises de sêmen de rotina (neste caso, morfologia) podem apontar para a extensão e a complexidade dos danos na célula espermática, o que indica que a deficiência de protamina e os danos no DNA podem ocorrer simultaneamente a defeitos morfológicos. Tal ocorrência enfatiza a importância das análises de sêmen clássicas e dos testes complementares.(AU)

Alteraciones morfológicas de espermatozoides humanos por microscopía electrónica de barrido / Morphological alterations of human spermatozoa detected by scanning electron microscopy

Introducción: las alteraciones morfológicas en los espermatozoides humanos con frecuencia son responsables de la infertilidad masculina. En determinados casos, muchas anormalidades no se observan en los estudios de morfología realizados en los espermogramas de rutina por microscopía óptica convencional, por lo que es necesario recurrir a técnicas alternativas que permitan visualizar con mejor precisión los detalles morfológicos. Objetivo: identificar anormalidades morfológicas mediante microscopía electrónica de barrido, en espermatozoides de hombres que consultan por infertilidad, los cuales fueron reportados como morfológicamente normales por microscopia óptica. Métodos: se utilizaron 140 muestras de semen de hombres con edades entre 20 y 45 años, procedentes de las consultas de infertilidad del Instituto Nacional de Endocrinología. Se realizó el espermograma a las muestras colectadas por masturbación, según criterio de OMS, y se seleccionaron espermatozoides de las muestras con 30 por ciento o más de morfología normal determinadas por microscopía óptica, para el estudio morfológico por microscopía electrónica de barrido. Resultados: de las 140 muestras utilizadas en el estudio, 119 resultaron morfológicamente normales por microscopía óptica. De estas últimas, se encontraron alteraciones morfológicas por microscopía electrónica de barrido en 79 (66,4 por ciento), en relación con 40 (33,6 por ciento) que no mostraron. Las alteraciones espermáticas que predominaron fueron las correspondientes a colas pequeñas y enrolladas, pieza media doblada, cabezas grandes, amorfas y elongadas, con algunos cambios en la estructura acrosomal, así como espermatozoides con cabeza de punta. Las alteraciones de cola aparecen tanto aisladas como mixtas en 47 (59,4 por ciento) de las 79 muestras. Conclusiones: mediante la microscopía electrónica de barrido fue posible identificar anormalidades morfológicas en espermatozoides de hombres que consultan por infertilidad, los cuales fueron reportados como morfológicamente normales por microscopia óptica(AU)

Introduction: morphological alterations of human spermatozoa are a common cause of infertility. Many abnormalities in certain cases are not observed in the morphological studies conducted in the routine spermograms based on the conventional optic microscopy; therefore, it is necessary to resort to alternative techniques that visualize morphological details with more precision. Objective: to identify morphological spermatozoa abnormalities through scanning electron microscopy in patients who were treated in the infertility service and whose spermatozoa had been morphologically reported as normal in the optic microscopy exam. Methods: one hundred forty semen samples taken from men aged 20 to 40 years, who were treated at the infertility service of the National Institute of Endocrinology. According to WHO criteria, the collected samples after masturbation were subjected to spermograms and those spermatozoa from the samples with 30 percent or over of their morphology being normal, according to the optic microscopy results, were selected for the scanning electron microscopy study. Results: of the 140 study samples, 119 were found morphologically normal in the optical miscroscopy. Out of the latter, 79 (66.4 percent) were found to have morphological alterations in the scanning electron microscopy results, and 40 (33.6 percent) were not. Predominant spermatic alterations were short and coiled tails, folded middle piece, big amorphous and elongated heads with some changes in their acrosomal structure as well as pointy-head spermatozoa. Both mixed and isolated tail alterations appeared in 47 (59.4 percent) of the 79 samples. Conclusions: through the scanning electron microscopy, it was possible to identify morphological anomalies in the spermatozoa from men who went to the infertility service. These spermatozoa had been reported as morphologically normal in the optical microscopy exam(AU)

Sperm morphological and morphometric evaluation in captive collared peccaries (Pecari tajacu) / Avaliação morfológica e morfométrica de espermatozoides de catetos (Pecari tajacu)

The aim of this study was to compare different staining methods for the evaluation of sperm morphology by light microscopy and also to describe the morphometry of the entire sperm in collared peccaries (Pecari tajacu). Semen from 10 males was obtained by electroejaculation and evaluated for sperm motility, vigor, and concentration. Semen smears were prepared through three different staining methods: Bengal rose, brome-phenol blue, and eosin-nigrosin. Smears were evaluated under light microscopy and sperm morphologic alterations were determined in percentage. In addition, sperm morphometric analysis was conducted by light microscopy coupled to image analyzer software. The smears stained with Bengal Rose provide the best results for the visualization of the sperm tail, midpiece, and head. The use of eosin-nigrosin stain did not allow an adequate impregnation, and some sperm presented a few contrasts with the background. A higher incidence of bent coiled tails was verified in the use of brome-phenol blue staining (P<0.05). Through morphometric evaluation, it was observed that the tail occupies the greatest proportion (89%) of the sperm which presents a discretely elongated head. According to the results, the use of the Bengal Rose stain is recommended for the morphologic evaluation of the collared peccary sperm.

O objetivo deste estudo foi comparar diferentes métodos de coloração para avaliação da morfologia espermática por microscopia de luz e também descrever a morfometria completa de espermatozoides de catetos (Pecari tajacu). Sêmen de 10 machos foi obtido por eletroejaculação e avaliado quanto à motilidade espermática, vigor e concentração. Foram preparados por três diferentes métodos de coloração: Rosa de Bengala, Azul de Bromofenol e Eosina-Nigrosina. Os esfregaços foram avaliados por microscopia de luz, e determinado o percentual das alterações morfológicas. Ainda, a análise da morfometria espermática foi realizada por microscópio de luz acoplado a um softwere de análise de imagens. Os esfregaços corados com Rosa de Bengala apresentaram melhores resultados de visualização da cauda, peça intermediária e cabeça dos espermatozoides. O uso do corante Eosina-Nigrosina não permitiu uma adequada impregnação e alguns dos espermatozoides apresentaram pouco contraste com o fundo da lâmina. Uma maior incidência de cauda fortemente enrolada foi verificada com o uso do corante Azul de Bromofenol (P<0.05). Através da avaliação morfométrica foi observada que a cauda ocupa a maior proporção (89%) do espermatozoide, e a cabeça apresenta-se discretamente alongada. De acordo com os resultados, o uso do corante Rosa de Bengala é recomendado para a avaliação morfológica de espermatozoides de catetos.

Evaluación de las técnicas de capacitación espermática y su efecto en la fragmentación del ADN / Assesment of sperm capacitation techniques and their effect on DNA fragmentation

Objetivo: evaluar el efecto de las técnicas de capacitación espermática en la fragmentación del ADN. Materiales y métodos: estudio experimental en el cual se describió el efecto de las técnicas de capacitación espermática swim up y gradientes de densidad de Isolate en la fragmentación del ADN. Se utilizaron las muestras de 41 pacientes remitidos a espermograma a la Unidad de Fertilidad del Tolima (Unifertil). Requisitos: 1) abstinencia sexual de 3 a 5 días, 2) no haber consumido medicamentos como antibióticos o antiparasitarios, 3) obtención de la muestra por masturbación, y 4) no presentar procesos virales o febriles. Después de realizar la primera evaluación de las muestras dentro de una hora posterior a su obtención se incluyeron aquellas que habían sido recolectadas completamente, que tenían una concentración mínima de 2 millones de espermatozoides/ml, y que no tenían contaminación con sangre. Se evaluaron la concentración, la movilidad, la morfología y la fragmentación del ADN de los espermatozoides, midiendo la longitud de los cometas resultantes del ensayo. Para el análisis estadístico se utilizaron análisis de varianza (ANOVA) y el coeficiente de correlación de Pearson, teniendo un valor de p < 0,05 como significativo estadísticamente. Resultados: la media de edad de los pacientes fue 35,1 ± 7,9 años. Se encontró que las técnicas de capacitación espermática, tanto swim up como gradientes de densidad de Isolate, disminuyen la fragmentación del ADN de los espermatozoides (p < 0,0001). No se encontraron diferencias significativas en cuanto a la fragmentación del ADN entre las dos técnicas de capacitación estudiadas. No se observaron correlaciones significativas entre los niveles de fragmentación del ADN espermático y los diferentes parámetros del espermograma (concentración, movilidad y morfología) (p = 0,9061). El ensayo cometa detectó diferencias en el grado de la fragmentación del ADN de los espermatozoides entre las muestras frescas y capacitadas. Conclusión: la capacitación espermática tanto por swim up como por gradientes de densidad de isolate tiene un efecto positivo al disminuir la fragmentación del ADN de los espermatozoides.

Objective: This study was aimed at evaluating the effect of sperm capacitation techniques on DNA fragmentation. Materials and methods: This was an experimental study which observed and described the effect of two sperm capacitation techniques on DNA fragmentation (i.e. swim up and isolate density gradients). Samples from 41 patients were used; these were sent for spermogram analysis at the Tolima Fertility Unit (Unifertil), taking the following requirements into account: sexual abstinence for 3 to 5 days, not having taken drugs such as antibiotics or antiparasitics, samples obtained by masturbation and not presenting viral or febrile processes. The first evaluation of the samples was made one hour after they had been obtained; those which had been collected completely, which had a minimum 2 million spermatozoid/ml concentration and which were not contaminated by blood were included. Concentration, mobility, morphology and DNA spermatic fragmentation were evaluated by measuring comet length in the comet assay in fresh samples. Analysis of variance (ANOVA) and Pearson’s correlation coefficient were used for statistical analysis (p < 0.05 being statistically significant). Results: It was found that sperm capacitation techniques reduced spermatozoid DNA fragmentation (p < 0.0001). No significant differences were found between the two different capacitation techniques studied regarding DNA fragmentation. No significant correlation was observed between sperm DNA fragmentation levels and spermogram parameters (concentrations, mobility and morphology) (p = 0.9061). The comet assay detected differences regarding the degree of spermatozoid DNA fragmentation between fresh and capacitated samples. Conclusion: Both swim up and isolate density gradient sperm capacitation had a positive effect by reducing spermatozoid DNA fragmentation.

Comparación entre Testsimplets® y Diff-Quik para la evaluación de la morfología espermática / Comparison between Testsimplets® and Diff-Quik to assess sperm morphology

Comparar la evaluación de morfología espermática mediante dos tinciones: Testsimplets® y Diff-Quik y la eficiencia de Testsimplets® y el test de peroxidasa para evaluar leucocitos en semen. Comparamos la morfología espermática de las muestras seminales de 30 pacientes infértiles, evaluada a través de las tinciones Testsimplets® y Diff-Quik. Adicionalmente, en pacientes que presentaron más de 106 de células redondas por mL de semen (n=7), comparamos la evaluación de leucocitos por Testsimplets® y el test de peroxidasa. En el Centro de fertilidad UNIFERTES, en Caracas, Venezuela. No existen diferencias significativas en el porcentaje de espermatozoides morfológicamente normales, siguiendo el criterio estricto de Kruger, entre ambas tinciones. Encontramos diferencias significativas en los porcentajes de los siguientes defectos morfológicos espermáticos, entre tinción: cabeza piriforme, pieza media doblada, irregular o con gota citoplasmática. No se encontraron diferencias significativas en la evaluación de leucocitos en semen mediante Testsimplets® y el test de peroxidasa. Testsimplets® es práctico para ahorrar tiempo y, consecuentemente, mejorar la eficiencia en el tiempo de entrega de resultados. Sin embargo, es considerablemente más costoso que Diff-Quik

To compare sperm morphology by Testsimplets® and Diff-Quik staining. To compare the efficiency of Staining cellular peroxidase and Testsimplets® to assess leukocytes in semen. We compared sperm morphology of 30 infertile patients evaluated by Testsimplets® and Diff-Quik staining. Additionally, in patients with more than 106 round cells per ml semen (n=7), we compared the assessment of leukocytes by Staining cellular peroxidase and Testsimplets®. Fertility clinic UNIFERTES, in Caracas, Venezuela. There was no significant difference in the percentage of morphologically normal sperm, according to Kruger’s strict criteria, between both stains. We found significant differences in the percentages of the following sperm morphological defects between staining: pyriform head, folded middle piece, irregular and presence of cytoplasmic droplets. There was no significant difference in the assessment of leukocytes in semen by Staining cellular peroxidase and Testsimplets®. Testsimplets® is practical for saving time and consequently, improving the efficiency in the delivery time of results. Nonetheless, it is considerably more expensive than Diff-Quik

Análisis de los parámetros del eyaculado en la rata Wistar de laboratorio: descripción de la técnica / Analysis of the parameters of the ejaculate in the laboratory Wistar rat: technical description

The number of spermatozoa, weight and size of the seminal plug has been quantified in the ejaculate of the laboratory rat and sperm viability, sperm mobility and sperm concentration in samples obtained from the epididymis. The reference values for the rat ejaculate have not been determined maybe due to the difficulty to obtain it directly from the male. Nevertheless, an approach can be obtained analyzing the ejaculate collected from the inseminated female. The objective of this study was to evaluate and propose the values of the macroscospic and microscopic parameters of the semen and seminal plug obtained from the female. The seminal analysis of the Wistar rats was performed adapting the methods used for other species. After one ejaculatory series, semen contained in the uterine horns was obtained, as well as the seminal plug from the vagina. In more than one hundred ejaculates, 94.54% were off-white with 2.35 ± 0.06 mm of viscosity and 8.13 ± 0.02 of pH. The sperm concentration was 16.3 ± 0.59 millions of spermatozoa per mL, 0.72 ± 0.01 mobility index, 64.4 ± 0.7% viability and 99.11 ± 0.20% normal morphology. From 99% of seminal plugs, 92.7% were hardened, they weighed 115.63 ± 1.54 mg, measured 12.41 ± 0.13 and 5.31 ± 0.05 mm of length and width respectively, and volume 87.70 ± 1.74 mm3 . In conclusion, the used method to obtain and to evaluate the parameters of the ejaculate is reliable, for that reason, it is suggested that the results obtained could be considered as indicative values for semen and seminal plug for the Wistar rat.

Se ha cuantificado en el eyaculado de la rata de laboratorio, el número de espermatozoides, peso y tamaño del tapón seminal, y en muestras obtenidas de epidídimo, la viabilidad, movilidad y concentración espermáticas. Los valores de referencia para el eyaculado de la rata no se han determinado quizá por la dificultad para obtenerlo directamente del macho. No obstante, puede obtenerse una aproximación al analizar el eyaculado recolectado de una hembra recién inseminada. El objetivo de este estudio fue evaluar y proponer los valores de los parámetros macroscópicos y microscópicos del semen y tapón seminal obtenidos de la hembra. El análisis del semen de ratas Wistar se realizó adecuando los métodos usados para otras especies. Después de una serie eyaculatoria, se obtuvo el semen contenido en los cuernos uterinos y el tapón seminal de la vagina. En más de 100 eyaculados, 94.54% fueron blanquecinos, con 2.35 ± 0.06 mm de viscosidad y 8.13 ± 0.02 de pH. La concentración espermática fue de 16.3 ± 0.59 millones de espermatozoides por mL, 0.72 ± 0.01 de índice de movilidad, 64.4 ± 0.7% de viabilidad y 99.11 ± 0.20% de morfología normal. Del 99% de los tapones seminales, 92.7% fueron endurecidos, pesaron 115.63 ± 1.54 mg, midieron 12.41 ± 0.13 y 5.31 ± 0.05 mm de largo y ancho, respectivamente, y de volumen 87.70 ± 1.74 mm³. En conclusión, el método utilizado para obtener y evaluar los parámetros del eyaculado es confiable, por ello se sugiere que los resultados obtenidos podrían considerarse como valores indicativos para el semen y tapón seminal de la rata Wistar.

Morfologia testicular e qualidade espermática de touros da raça Nelore, submetidos à dieta contendo gossipol / Testes morphology and sperm quality of Nelore bulls fed a gossypol-enriched diet

Com o objetivo estudar o efeito de dieta contendo gossipol sobre a qualidade seminal e morfologia dos testículos de touros da raça Nelore, utilizaram-se 16 animais, distribuídos em dois tratamentos: T1, oito touros submetidos a dieta contendo 20 por cento de caroço de algodão e T2, oito touros submetidos a dieta isenta de gossipol. Realizaram-se coletas de sêmen para avaliar a qualidade seminal. Os testículos dos animais foram retirados ao final dos 73 dias de experimento, fragmentos dos mesmos foram preparados para serem analisados em microscopia eletrônica de transmissão e outros fixados em lâminas e corados por hematoxilina-eosina. O consumo médio de caroço de algodão/animal/dia de 1,71kg interferiu na morfologia dos testículos; os túbulos seminíferos apresentaram menor espessura de parede, redução no número de camadas de células espermatogênicas e no volume dos núcleos da célula de Sertoli em relação aos do T2. Por microscopia eletrônica observouse que os touros do T1 apresentavam células de Sertoli com membrana citoplasmática enrugada, acúmulo de lipídeos no citoplasma, mitocôndrias deformadas e algumas espermátides estavam em apoptose. Touros do T1 apresentaram redução na motilidade espermática, aumento no percentual de defeitos espermáticos maiores e totais em relação aos animais do T2. O gossipol alterou a morfologia testicular e reduziu a qualidade espermática dos touros [...]

We studied the effect of a gossypol-enriched diet on the quality of semen and the morphology of testes of Nelore bulls. Sixteen animals were scheduled for 2 treatments: T1, 8 bulls fed a diet containing 20 percent cottonseed and T2, 8 bulls fed a gossypol-free diet. Semen samples were collected in order to evaluate the semen quality. At the end of the 73-day period of treatment, the testes were removed and tissue fragments were prepared for transmission electron microscopy or fixed on slides and stained with haematoxylin-eosin for light microscopy. The mean daily intake of cottonseed by T1 bulls was 1.71 kg/animal, which interfered on testes morphology; the seminiferous tubules had less thick walls, fewer layers of the spermatogenic lineage cells and reduced volumes of Sertoli cell nuclei with regard to T2 bulls. Electron microscopy analyses revealed that the Sertoli cells from T1 animals had a rough cytoplasmic membrane, lipid accumulation in the cytoplasm, deformed mitochondriae; in addition, some apoptotic spermatids were seen. T1 bulls showed reduction of sperm motility and an increase of the percentage of major and total sperm defects in relation to the animals of T2 group. It is concluded that a gossypol-enriched diet promoted alterations in the testicles morphology and it reduced the sperm quality of bulls [...]

Morfologia testicular e qualidade espermática de touros da raça Nelore, submetidos à dieta contendo gossipol / Testes morphology and sperm quality of Nelore bulls fed a gossypol-enriched diet

Com o objetivo estudar o efeito de dieta contendo gossipol sobre a qualidade seminal e morfologia dos testículos de touros da raça Nelore, utilizaram-se 16 animais, distribuídos em dois tratamentos: T1, oito touros submetidos a dieta contendo 20 por cento de caroço de algodão e T2, oito touros submetidos a dieta isenta de gossipol. Realizaram-se coletas de sêmen para avaliar a qualidade seminal. Os testículos dos animais foram retirados ao final dos 73 dias de experimento, fragmentos dos mesmos foram preparados para serem analisados em microscopia eletrônica de transmissão e outros fixados em lâminas e corados por hematoxilina-eosina. O consumo médio de caroço de algodão/animal/dia de 1,71kg interferiu na morfologia dos testículos; os túbulos seminíferos apresentaram menor espessura de parede, redução no número de camadas de células espermatogênicas e no volume dos núcleos da célula de Sertoli em relação aos do T2. Por microscopia eletrônica observouse que os touros do T1 apresentavam células de Sertoli com membrana citoplasmática enrugada, acúmulo de lipídeos no citoplasma, mitocôndrias deformadas e algumas espermátides estavam em apoptose. Touros do T1 apresentaram redução na motilidade espermática, aumento no percentual de defeitos espermáticos maiores e totais em relação aos animais do T2. O gossipol alterou a morfologia testicular e reduziu a qualidade espermática dos touros...

We studied the effect of a gossypol-enriched diet on the quality of semen and the morphology of testes of Nelore bulls. Sixteen animals were scheduled for 2 treatments: T1, 8 bulls fed a diet containing 20 percent cottonseed and T2, 8 bulls fed a gossypol-free diet. Semen samples were collected in order to evaluate the semen quality. At the end of the 73-day period of treatment, the testes were removed and tissue fragments were prepared for transmission electron microscopy or fixed on slides and stained with haematoxylin-eosin for light microscopy. The mean daily intake of cottonseed by T1 bulls was 1.71 kg/animal, which interfered on testes morphology; the seminiferous tubules had less thick walls, fewer layers of the spermatogenic lineage cells and reduced volumes of Sertoli cell nuclei with regard to T2 bulls. Electron microscopy analyses revealed that the Sertoli cells from T1 animals had a rough cytoplasmic membrane, lipid accumulation in the cytoplasm, deformed mitochondriae; in addition, some apoptotic spermatids were seen. T1 bulls showed reduction of sperm motility and an increase of the percentage of major and total sperm defects in relation to the animals of T2 group. It is concluded that a gossypol-enriched diet promoted alterations in the testicles morphology and it reduced the sperm quality of bulls...

Qualitative parameters of the piapara semen (Leporinus elongatus Valenciennes, 1850) / Parâmetros qualitativos do sêmen de piapara (Leporinus elongatus Valenciennes, 1850)

Qualitative parameters of piapara semen (Leporinus elongatus) were evaluated before and after hormonal induction with carp pituitary extract at 2.5 mg.kg-1 of live weight. The progressive motility, the spermatic vigor and the lifetime of the spermatozoa were higher before the hormonal induction (P > 0.05). The percentage of normal spermatozoa and spermatozoa with secondary pathologies did not differ (P > 0.05) between treatments: before induction (44.0 and 44.4 percent, respectively) and after-induction (44.3 and 46.7 percent, respectively). However, the percentage of primary pathologies was higher (P < 0.05) for the semen collected before induction than for the semen collected after induction; the estimates were 12.2 and 8.0 percent, respectively. The most frequent pathologies were the taillessness with the frequencies of 27.4 and 36.3 percent followed by the headlessness for which the estimates were 10.1 and 3.9 percent, before and after induction respectively. The semen collected before the hormonal induction presented better qualitative parameters.

Os parâmetros qualitativos do sêmen de piaparas (Leporinus elongatus) foram avaliados antes e após a indução hormonal com o extrato de hipófise de carpa na dosagem 2,5 mg.kg-1 de peso vivo. A motilidade progressiva, o vigor espermático e o tempo de vida dos espermatozóides apresentaram valores superiores (P < 0,05) no sêmen coletado antes da indução hormonal. Já a estimativa da porcentagem de espermatozóides normais ou com patologias leves, na pré-indução (44,0 e 44,4 por cento, respectivamente) e na pós-indução hormonal (44,3 e 46,7 por cento, respectivamente) não diferiram (P > 0,05) entre os tratamentos. Porém a estimativa de patologias graves foi maior (P < 0,05) no sêmen de pré-indução do que no pós-induzido com 12,2 e 8 por cento, respectivamente. A patologia mais freqüente foi cabeça solta com 27,4 e 36,3 por cento seguida por cauda solta com 10,1 e 3,9 por cento, antes e após a indução hormonal respectivamente. De acordo com os resultados, o sêmen de piapara coletado na pré-indução hormonal apresentou os melhores parâmetros qualitativos.

Coleta de sêmen em mico-leão-de-cara-dourada (Leontopithecus chrysomelas) (Kuhl, 1820) através da eletroejaculação Callitrichidae primates

O desenvolvimento de tecnologias capazes de aumentar a eficiência reprodutiva tem crescido nos últimos anos, mas nogênero Leontopithecus existem poucos relatos sobre suas características reprodutivas. A eletroejaculação tem sido empregadacom sucesso na colheita de sêmen de animais ameaçados, incluindo primatas não-humanos. O objetivo deste trabalho foiestabelecer um protocolo para a colheita de sêmen em Leontopithecus chrysomelas e verificar as características do sêmenem animais mantidos em cativeiro. Neste estudo foram utilizados dez machos adultos do Centro de Primatologia do Rio deJaneiro (CPRJ-FEEMA). Após a sedação, os animais foram estimulados após a introdução de um transdutor via retal para aeletroejaculação, segundo a técnica descrita por Gould et al. (1978), com algumas modificações. Os sagüis foram submetidosa 10 estímulos de cada voltagem, de forma crescente (2, 3, 4 e 6 Volts), até que se obtivesse o ejaculado. Os primatasejacularam em média após 29 ± 12,3 estimulações, em uma voltagem média de 4 Volts. Foram obtidos ejaculados em todosos animais, porém, alguns deles (17,5%) não apresentaram ereção peniana. O sêmen obtido apresentou aspecto leitoso,ligeiramente amarelado, consistindo de uma porção que rapidamente coagulava. O volume médio foi de 11,9ml ± 4,73ml everificou-se uma média de 32,71% de patologia espermática. Das alterações morfológicas do sêmen, as mais