Integridad Del ADN Espermático Y La Toxicidad Reproductiva Del Nitrato De Plomo En Ratones Machos Adultos

Introducción: La toxicidad del plomo se ha relacionado a diferentes patologías en humanos y varias evidencias sugieren una fuerte relación con el daño observado sobre la función reproductiva en humanos y roedores. Método: Se proporcionó a ratones una dosis única de nitrato de plomo (NP) (50mg/kg/pc), los cuales fueron eutanizados siete días postinyección con el objetivo de evaluar los espermatozoides que han salido de los túbulos seminíferos y están en tránsito por el epidídimo; además, se evaluó la fragmentación del ADN espermático mediante el ensayo tunel. Resultados: La disminución del peso corporal en ratones, tratados con NP (p 0,05); de igual manera, los valores fisiológicos como conteo y movilidad espermática no disminuyeron con el tratamiento (p > 0.05). El tránsito y maduración de los espermatozoides en el epidídimo no sería afectado por el NP, y al no observar aumento en la fragmentación del ADN espermático en el grupo tratado (p > 0,05), la protaminación espermática estaría cumpliendo su rol protector sobre el material genético murino, por lo que no hubo daños genotóxicos por el NP. Conclusión: La administración intraperitoneal de 50mg/kg/pc de NP, por siete días, no causa toxicidad sistémica ni efecto en la espermatogénesis en ratón.

Introduction: Lead toxicity has been linked to different diseases in humans and several evidences suggest a strong relationship with the observed damage on reproductive function in humans and rodents. Methods: Mice were given a single dose of lead nitrate (NP) (50mg/kg/bw), which were euthanized seven days post-injection with the aim of evaluating sperm to come out from the seminiferous tubules and are in transit through the epididymis. Also, the Tunel test was done to evaluate the sperm DNA fragmentation. Results: The decrease in body weight in mice treated with ln (p 0.05), in the same way physiological values such as sperm concentration and motility didn´t decrease with the treatment (p > 0.05). Transit and sperm maturation in the epididymis would not be affected by the ln, and because we did not observe increased sperm DNA fragmentation in the treated group (p > 0.05), sperm protamination would be fulfilling its protective role on murine genetic material avoiding genotoxic damage by ln. Conclusion: The intraperitoneal administration of 50mg/kg/pc of ln for seven days does not cause systemic toxicity or effect on spermatogenesis in mice.

Evaluación del potencial de membrana mitocondrial en espermatozoides humanos capacitados / Mitochondrial membrane potential evaluation in capacitated human sperm

Introducción: los espermatozoides humanos durante su viaje por el tracto reproductivo sufren el procesode capacitación espermática, evento indispensable para la fecundación y que se ha relacionado con cambios en el potencial de membrana mitocondrial. Objetivos: evaluar el efecto de la capacitaciónespermática sobre el potencial de membrana mitocondrial en espermatozoides humanos. Materiales y métodos: se realizó un estudio in vitro en el cual se seleccionaron los espermatozoides puros de nueve voluntarios, los cuales se sometieron a condiciones capacitantes durante seis horas. Posteriormente, se evaluó el efecto de la capacitación sobre el estado del potencial de membrana mitocondrial usando el colorante DiOC6(3) por citometría de flujo. Resultados: de las nueve muestras seminales evaluadas cinco presentaron mayor intensidad media de fluorescencia en el potencial de membrana mitocondrial poscapacitación. Todas las muestras seminales mostraron parámetros normales y no presentaron cambios en la movilidad y la viabilidad espermática durante la selección y la capacitación espermática in vitro. Conclusiones: las modificaciones en el potencial de membrana mitocondrial en respuesta al proceso de capacitación demuestra que existen diferentes poblaciones espermáticas en el eyaculado humano; entender cuál está relacionada con el proceso reproductivo exitoso permitirá aumentar la probabilidad de embarazos.

Introduction: human spermatozoa during their journey through the reproductive tract undergo the capacitation process, an essential event for the fertilization and which has been related with changesin membrane mitochondrial potential. Objective: To evaluate the effect of capacitation process on mitochondrial membrane potential in human sperm. Materials and methods: An in vitro study in which pure sperm from nine semen samples were incubated in capacitated conditions for six hours. Subsequently, the capacitation effect on the state of mitochondrial membrane potential using DiOC6(3) dye through flow cytometry were evaluated. Results: Nine semen samples were evaluated; five had higher mean fluorescence intensity in the mitochondrial membrane potential post capacitation.All semen samples had normal seminal parameters and none of them showed changes in motility and sperm viability during recovery and in vitro capacitation. Conclusions: Changes in the mitochondrial membrane potential in response to the capacitation process shows that there are different sperm populations in the human ejaculated; understand which are related to the successful reproductive process will increase the likelihood of pregnancy.

Efecto in vitro del pentóxido de vanadio (V2O5) sobre la calidad espermática / In vitro effect of vanadium pentoxide (V2O5) on sperm quality

El vanadio es un metal pesado considerado como un contaminante ambiental, producto de la manipulación antropogénica, que incide sobre el potencial reproductivo masculino, especialmente sobre la movilidad espermática. Esta investigación tuvo como objetivo determinar el efecto in vitro del pentóxido de vanadio sobre la calidad espermática. Se incubaron suspensiones de espermatozoides humanos por 24 horas bajo concentraciones de 0, 1 y 2 ppm V2O5, se realizó la valoración de la movilidad y vitalidad espermática, la integridad de membrana, la reacción acrosómica y la integridad de la cromatina espermática. El V2O5 alteró de manera significativa la movilidad espermática, específicamente los patrones de movilidad espermática moderado (p < 0.01), lento (p = 0.01) e inmóvil (p < 0.01). Los grupos tratados con V2O5 presentaron un porcentaje de espermatozoides vivos significativamente mayor al grupo control (p < 0.01). La integridad de membrana y reacción acrosómica no resultaron afectadas por la exposición de espermatozoides humanos a V2O5 (p > 0.05). De igual modo, no se observaron alteraciones del material nuclear (p > 0.05). El vanadio es capaz de alterar la movilidad y vitalidad espermática sin inducir cambios sobre la integridad de membrana y la cromatina espermática.

Vanadium is a heavy metal considered an environmental pollutant product of anthropogenic manipulation; it influences the masculine reproductive potential, especially the sperm motility. This research had the objective of determining the effect of vanadium pentoxide on sperm quality in vitro. Spermatozoa were incubated for 24 hours under 0, 1 and 2 ppm V2O5 concentrations, and sperm motility and vitality, membrane integrity, acrosome reaction and sperm chromatin integrity were assessed. V2O5 altered sperm motility in a significant way, specifically moderated (p < 0.01), slow (p = 0.01), and non motile (p < 0.01) sperm motility patterns. The groups treated with V2O5 had a major percentage of live spermatozoa than the control group (p < 0.01). Membrane integrity and acrosome reaction were not affected by human sperm exposition to V2O5 (p > 0.05). Similarly, we did not observe nuclear material alterations. Vanadium is able to alter sperm motility and viability without inducing changes on membrane and chromatin integrity.

La calidad espermática evaluada mediante metodologías no convencionales / Sperm quality analysis by non-conventional methodologies

Existen diferentes metodologías para evaluar la calidad seminal, siendo la valoración de la movilidad y de la morfología espermática los indicadores más comúnmente utilizados, sin embargo, los espermatozoides poseen ciertas características que no siempre pueden analizarse a través del examen tradicional. En esta revisión de la literatura se describen algunas metodologías alternativas empleadaspara observar y evaluar las características seminales. La movilidad, la viabilidad y la morfología espermática pueden evaluarse empleando metodologías manuales y análisis asistidos por computador. Otras características evaluables de la biología espermática son la producción de especies reactivas del oxígeno, la calidad mitocondrial y el ADN espermático. Esta revisión demuestra que existe una amplia disponibilidad de metodologías para el análisis seminal, sin embargo, cada día se siguen implementando nuevas técnicas, lo que impactará en el entendimiento de la fisiología espermática. En un futuro estas herramientas diagnósticas podrán incidir en el beneficio de los pacientes con infertilidad.

There are different methodologies for assessing semen quality assessment of mobility and sperm morphology are the most commonly used indicators. However, sperm have certain characteristics that cannot always be analyze through the traditional examination. In this review are describe some alternativemethodologies to observe and assess the seminal characteristics. Motility, viability and sperm morphology can be evaluated using manual methodologies and computational analysis. Other quantifiable characteristics of sperm biology are the production of reactive oxygen species, mitochondrial and DNA sperm quality. Here is shown that there are many methodologies for seminal analysis, however, each day are going to implementing new techniques, which will impact on the understanding of sperm physiology and in the future, they may improve the diagnosis of individuals.

Espermicida y espermiostático: ¿hacen referencia a lo mismo? / Spermicide and spermiostatic: Is it the same?

Antecedentes: La literatura científica ha definido los espermicidas como agentes químicos que pueden inmovilizar y algunas veces matar los espermatozoides en la vagina, sin embargo estos términos se usan de forma arbitraria y no hay un consenso que defina si la palabra espermicida debe referirse exclusivamente a una sustancia que causa la muerte espermática o a sustancias que sólo causan la inmovilización espermática y no necesariamente la muerte. Objetivo: Especificar la definición más adecuada para las sustancias que ejercen un efecto sobre la movilidad o la viabilidad espermática. Método: Revisión de la literatura en distintas bases de datos utilizando los criterios de búsqueda "espermicida" y "espermiostático", con sus equivalentes en inglés. Se seleccionaron algunos reportes en inglés y en español de los últimos 31 años, se evaluó si hacen referencia a la inhibición de la movilidad o de la viabilidad de los espermatozoides. Resultado: Se encontró que algunos reportes refieren la muerte de los espermatozoides mientras que otros sólo a su inmovilización. Conclusión: Se propone que para lograr definir si algún compuesto, extracto o sustancia con efecto sobre los espermatozoides es un agente espermiostático o espermicida es necesario que se realicen evaluaciones tanto del efecto sobre la movilidad como de la viabilidad espermática...

Background: The literature has defined spermicides as chemical agents that immobilize and occasionally kill sperm cells in the vagina, however these terms are used arbitrarily and there is no consensus that defines whether the word spermicide must refer exclusively to a substance that kills sperm or substances that only cause sperm immobilization and not necessarily the cell death. Aim: To specify the most appropriate definition for substances those have an effect on sperm motility or viability. Method: We conducted a review of the literature in different databases using the search criteria "spermicide" and "espermiostátic". We selected some reports in English and Spanish for the last 31 years, and then we evaluated if they refer to the inhibition of the mobility or sperm viability. Results: We found that some reports relate the death of sperm cells while others only affect the sperm motility. Conclusion: We propose that in order to determine whether a compound or substance extract is a spermicidal or spermiostatic agent, is necessary to conduct tests of the effect on both motility and sperm viability...

Crioconservació de semen en peces: efectos sobrela movilidad espermática y la fertliidad. / Semen Cryopreservation in Fish: Effects on Sperm Motility and Fertility.

La crioconservación de semen de peces, como de otras especies, presenta aún efectos que disminuyen la calidad espermática y comprometen directamente la capacidad de la célula para participar exitosamente en los procesos de fertilización y desarrollo embrionario. Características como movilidad y capacidad de fertilización del espermatozoide son consideradas criterios de calidad que permiten medir el éxito o fracaso del proceso, pues se consideran variables integradoras, siendo indicadores que dependen no de un solo factor sino de la estabilidad y bienestar del conjunto de estructuras, enzimas y compuestos funcionales subcelulares que dan lugar a estas características espermáticas. Daños en la membrana (adenilato ciclasa, canales iónicos, agrupamiento de otras proteínas, entre otras) y su implicación en la ruta de señalización que da lugar a la activación espermática, degradación del ATP, fragmentación del ADN nuclear y mitocondrial (genoma), degradación de enzimas Kinasas y otras proteínas citosólicas (proteoma) son considerados hoy día como algunos de los factores moleculares que más se afectan durante la crioconservación y que disminuyen ostensiblemente la capacidad fertilizante y la movilidad del espermatozoide en los peces. Propuestas sobre los mecanismos moleculares por los cuales se interrelacionan y actúan estos factores subcelulares como consecuencia de la crioconservación, son algunos de los temas tratados en la presente revisión. Comprender los principios y factores que están involucrados en el origen de dichos daños, permitirá mejorar los procesos de crioconservación, haciéndolos menos nocivos y más eficientes.

The cryopreservation of semen in fish, as in many species even shows effects that decrease sperm quality and directly engage cell ability to successfully participate in the processes of fertilization and embryonic development. The characteristics such as mobility and fertilizing capacity of fertilization of sperm are considered to be quality criteria that allow to measure the success or failure of the process, since they are considered integrative variables, being indicators that depend not on a single factor, but on the stability and welfare of all structures, enzymes and subcellular functional compounds that give place to these spermatic characteristics. Membrane damage (adenylate cyclase, ion channels, grouping of other proteins, among others) and their implication in the route of signaling pathway leading to spermatic activation, ATP degradation and fragmentation of nuclear and mitochondrial DNA (genome), degradation of kinase enzymes and other cytosolic proteins (proteome) are considered today, as some of the molecular factors that most affect during cryopreservation and markedly decreasing the fertilizing capacity and mobility of sperm in fish. Proposals on the molecular mechanisms, by which these subcellular factors interact and act as consequence of cryopreservation are some of the topics covered in this review. Understanding the principles and factors that are involved in the origin of such damages, will allow to improved cryopreservation processes, making them less harmful and more efficient.

Comparación de la sobrevida y de los patrones de movilidad de espermatozoides incubados en medios HAM´S-F10 y G-IVF / Comparison of survival and mobility patterns of sperm incubated in HAM'S-F10 and G-IVF media

Comparar la sobrevida y la movilidad de espermatozoides incubados en medios HAM’S-F10 y G-IVF. Estudio prospectivo. Se incubaron submuestras de espermatozoides recuperados por gradientes de densidad de 31 hombres normospérmicos, en los medios respectivos por 18 a 20 horas en una atmósfera de 5 por ciento CO2. Posteriormente se evaluaron la sobrevida y la movilidad espermáticas. Las direfencias encontradas se evaluaron mediante la t de Student para muestras apareadas con transformación arcoseno. Unidad de Fertilidad Unifertes, Clínica El Ávila. Caracas, Venezuela. La sobrevida y la movilidad progresiva espermáticas fueron significativamente mayores en el grupo tratado con G-IVF (P<0,01). Consecuentemente, la media del porcentaje de espermatozoides inmóviles fue significativamente menor (P<0,01). La sobrevida y la movilidad progresiva en espermatozoides incubados con G-IVF fueron significativamente mayores que con HAM’S-F10

To compare survival and motility of sperm incubated in HAM’S-F10 and G-IVF media. Subsamples of motile sperm recovered by density gradients of 31 normospermic men were incubated in each medium for 18-20 hours in 5 percent CO2 atmosphere. Subsequently, sperm survival and motility were assessed. Unidad de Fertilidad Unifertes, Clínica El Ávila. Caracas, Venezuela. Average sperm survival and progressive motility were significantly higher in G-IVF (P<0.01). Consequently, average percentage of immotile sperm was significantly lower (P<0.01). Sperm survival and progressive sperm motility were significantly higher in G-IVF medium than in HAM’S-F10.

Análisis de los parámetros del eyaculado en la rata Wistar de laboratorio: descripción de la técnica / Analysis of the parameters of the ejaculate in the laboratory Wistar rat: technical description

The number of spermatozoa, weight and size of the seminal plug has been quantified in the ejaculate of the laboratory rat and sperm viability, sperm mobility and sperm concentration in samples obtained from the epididymis. The reference values for the rat ejaculate have not been determined maybe due to the difficulty to obtain it directly from the male. Nevertheless, an approach can be obtained analyzing the ejaculate collected from the inseminated female. The objective of this study was to evaluate and propose the values of the macroscospic and microscopic parameters of the semen and seminal plug obtained from the female. The seminal analysis of the Wistar rats was performed adapting the methods used for other species. After one ejaculatory series, semen contained in the uterine horns was obtained, as well as the seminal plug from the vagina. In more than one hundred ejaculates, 94.54% were off-white with 2.35 ± 0.06 mm of viscosity and 8.13 ± 0.02 of pH. The sperm concentration was 16.3 ± 0.59 millions of spermatozoa per mL, 0.72 ± 0.01 mobility index, 64.4 ± 0.7% viability and 99.11 ± 0.20% normal morphology. From 99% of seminal plugs, 92.7% were hardened, they weighed 115.63 ± 1.54 mg, measured 12.41 ± 0.13 and 5.31 ± 0.05 mm of length and width respectively, and volume 87.70 ± 1.74 mm3 . In conclusion, the used method to obtain and to evaluate the parameters of the ejaculate is reliable, for that reason, it is suggested that the results obtained could be considered as indicative values for semen and seminal plug for the Wistar rat.

Se ha cuantificado en el eyaculado de la rata de laboratorio, el número de espermatozoides, peso y tamaño del tapón seminal, y en muestras obtenidas de epidídimo, la viabilidad, movilidad y concentración espermáticas. Los valores de referencia para el eyaculado de la rata no se han determinado quizá por la dificultad para obtenerlo directamente del macho. No obstante, puede obtenerse una aproximación al analizar el eyaculado recolectado de una hembra recién inseminada. El objetivo de este estudio fue evaluar y proponer los valores de los parámetros macroscópicos y microscópicos del semen y tapón seminal obtenidos de la hembra. El análisis del semen de ratas Wistar se realizó adecuando los métodos usados para otras especies. Después de una serie eyaculatoria, se obtuvo el semen contenido en los cuernos uterinos y el tapón seminal de la vagina. En más de 100 eyaculados, 94.54% fueron blanquecinos, con 2.35 ± 0.06 mm de viscosidad y 8.13 ± 0.02 de pH. La concentración espermática fue de 16.3 ± 0.59 millones de espermatozoides por mL, 0.72 ± 0.01 de índice de movilidad, 64.4 ± 0.7% de viabilidad y 99.11 ± 0.20% de morfología normal. Del 99% de los tapones seminales, 92.7% fueron endurecidos, pesaron 115.63 ± 1.54 mg, midieron 12.41 ± 0.13 y 5.31 ± 0.05 mm de largo y ancho, respectivamente, y de volumen 87.70 ± 1.74 mm³. En conclusión, el método utilizado para obtener y evaluar los parámetros del eyaculado es confiable, por ello se sugiere que los resultados obtenidos podrían considerarse como valores indicativos para el semen y tapón seminal de la rata Wistar.