Uso y aplicaciones de la inmunohistoquímica con el anticuerpo anti-ghrelina para el estudio de la pulpa dentaria / Use and applications of immunohistochemistry with anti-ghrelin antibody for the study of dental pulp

La expresión de ghrelina se ha detectado a nivel de los tejidos dentarios, principalmente en los odontoblastos de la pulpa dentaria, células altamente especializadas -específicas del tejido pulpar- cuya función es la formación de la dentina. La nota técnica resume, en primer lugar, aspectos conceptuales sobre una herramienta que se ha convertido en parte fundamental del desarrollo de la biomedicina contemporánea y, en segundo lugar, la transmisión de la aplicación y finalidad del empleo de los anticuerpos monoclonales, específicamente de la ghrelina en la pulpa dentaria

Transforming Growth Factor -beta 1 (TGF-beta 1) immunoreactivity in heterotopic grafts of adult dental apical papilla / Inmunoreactividad del Factor Transformador del Crecimiento-beta 1 (TGF-beta 1) en la papila apical dental adulta heterotópicamente trasplantada

To analyze the expression of transforming growth factor-beta 1 inheterotopic grafts of adult dental apical papilla. Methodology: The apical papilla of adult Wistar rats was grafted in the ear of the same donor rats. 1, 3, 7 and14 days after grafting, rats were perfused and the tissue containing the graft was processed for histological conventional technique and for immunohistochemical detection of transforming growth factor-beta 1. Results: Heterotopically grafted apical papilla developed osteoid dentine. In an early post-grafting stage, odontoblast-like cells organized themselves in palisade and synthesized dentine. However, newly formed dentine possessed the structural appearance of reactive osteoid dentine, which was systematically destroyed by the activity of osteoclaste-like cells. Transforming Growth Factor-beta 1 was observed in mesenchymal cells, extracellular matrix of the graft and surrounding host tissue, while odontoblast-like cells were systematically devoid of immunoreactivity. Conclusion: The different expression of transforming growth factor-beta 1 between normal tissue and grafted tissue development suggests that in heterotopic graft conditions the inflammatory mediation of the transforming growth factor-beta 1 prevails against its morphogenetic role...

Analizar la expresión del factor transformador del crecimiento-beta1 en trasplantes heterotópicos de papila dental del incisivo de la rata adulta. Metodología: La papila apical del incisivo de 12 ratas Wistar adultas fue trasplantada en la oreja de las mismas ratas donantes, y perfundidas 1, 3, 7 y 14 días postrasplante. El tejido fue procesado para histología convencionaly para la detección inmunohistoquímica del factor transformador del crecimiento-beta1. Resultados: La papila apical trasplantada desarrolló osteodentina. En fases tempranas postrasplante se observaron células parecidas a los odontoblastos que se organizaron en empalizada y segregaron dentina que se depositó sobre su superficie apical o secretora. Esta dentina evolucionó a osteodentina caracterizada por perder su estructura tubular e incluir a las células odontoblásticas en lagunas de su matriz. Finalmente, la osteodentina presentó procesos líticos mediados por células de tipo osteoclasto. Durante todo el proceso la expresión del factor transformador del crecimiento-beta1 se restringió a las células mesenquimales, a la matriz del trasplante y a las zonas circundantes del huésped, estando ausente en los odontoblastos, a diferencia de lo que sucede durante la odontogénesis normal. Conclusión: La diferente localización de la expresión del Factor Transformador de crecimiento beta1 entre el tejido hospedero y el trasplantado sugieren que en condiciones de trasplante heterotópico de papila dental la mediación inflamatoria del Factor Transformador de crecimiento beta1 prevalece sobre su papel morfogenético...

Expression of Mmp-20 in dental germs of human fetus / Expresion de Mmp-20 en gérmenes dentales de fetos humanos

During experiments in animal studies, it has been observed that enamelysin (MMP-20) is expressed during tooth development in the late secretory stage of amelogenesis but not in the mature enamel.The aim of this research was to determine the location of MMP-20 in human tooth germs in the different structures of the enamel organ.The detection of MMP-20 was performed by immunohistochemistry in 20 specimens obtained from human fetuses. Immunostaining of MMP-20 was observed from the presecretor stadium in stellate reticulum and intermediate stratum and in the basal portion of ameloblasts in the secretory stage in stellate reticulum, stratum intermedium, secretory ameloblasts, odontoblasts and dental papilla. The results of this research show the location of MMP-20 in tooth germ development in humans and provides the foundation for future research about the process of dental organ formation.

En estudios realizados en animales de experimentación se ha observado que la enamelisina (MMP-20) se expresa durante el desarrollo dental durante el estadio de secreción tardío de la amelogénesis pero no en el esmalte maduro. El objetivo de la presente investigación fue determinar la localización de MMP-20 en gérmenes dentarios humanos en las diferentes estructuras del órgano del esmalte. Se analizaron 20 especímenes obtenidos de fetos humanos, efectuando la detección de MMP-20 por Inmunohistoquímica. Se observó inmunolocalización de MMP-20 desde el estadio presecretor en retículo estrellado y estrato intermedio, así como en porción basal de ameloblastos; en el estadio secretor en retículo estrellado, estrato intermedio, ameloblastos secretores, odontoblastos y papila dental. Los resultados de la presente investigación muestran la localización de la MMP-20 en el desarrollo del germen dentario en humanos y aporta las bases para futuras investigaciones acerca del proceso de formación de los órganos dentales.

Caracterización estereológica de odontoblastos en pulpas dentarias humanas sanas y con pulpitis reversible / Stereological characterization of odontoblasts in normal healthy and reversible pulpitis in human dental pulps

La reacción y reparación dentinaria depende del número de odontoblastos. Los métodos para obtener estimaciones fiables sobre la cantidad de odontoblastos en la pulpa dental han sido subjetivos y sesgados, sobre todo al evaluar los cambios cuantitativos y la potencial capacidad reparativa en presencia de caries. El objetivo de este trabajo fue estimar y comparar cuantitativamente el número, densidad y volumen de odontoblastos en dientes sanos y con diagnóstico de pulpitis reversible producto de caries a través de herramientas estereológicas. Se utilizaron dientes premolares humanos obtenidos de exodoncias, divididos en un grupo sano y otro cariado. Fueron fijados y descalcificados con ácido nítrico al 5%. Siguiendo el protocolo del orientator se obtuvieron 5 secciones de 5 mm teñidas por H-E de cada diente. Se aplicó el recuento estereológico de los odontoblastos con el test multipropósito M42. Se estimaron las densidades de número (Nv), volumen (Vv) y superficie (Sv), y calcularon las Medias (±DE) por diente, y Medias (±EE) por grupo. Las diferencias entre grupos se analizaron mediante la prueba T, con un valor p 0,05 de significación estadística. En dientes sanos, la Media (±EE) para Nv de odontoblastos fue 0,409x105/mm3 (±0,018x105/mm3), para Vv 19,714% (±1,43%) y para Sv 21,016 mm2/mm3 (±1,425 mm2/mm3). En dientes cariados, la Nv fue 0,521x105 /mm3 (±0,023x105/mm3), la Vv 24,686% (±1,625%) y la Sv 23,203 mm2/mm3 (±1,364 mm2/mm3). Al comparar las Nv, los odontoblastos del grupo con caries aumentaron significativamente (p=0,0062), al igual que la Vv (p=0,0197). Existe un aumento del número de odontoblastos en los dientes con pulpitis reversible, lo que condicionaría su capacidad de respuesta. La metodología empleada puede ser aplicable para determinar el comportamiento pulpar y cuantificar variables de respuesta odontoblástica en tratamientos restauradores atraumáticos de manera imparcial y reproducible.

Dentinal reaction and repair depends on factors like the amount of odontoblasts. Methods for obtaining reliable estimates of the number of odontoblasts in the dental pulp have been subjective and biased, especially when assessing the potential quantitative changes and reparative capacity in the presence of cavities. The aim of this study was to estimate and quantitatively compare, through stereological tools, the number, density and volume of odontoblasts in healthy teeth, diagnosed with reversible pulpitis due to caries. We used human premolars obtained from extractions, divided into groups of healthy teeth and teeth with caries, fixed and decalcified in 5% nitric acid. Following the orientator protocol, five 5-µm-thick sections stained by HE were obtained from each tooth. Stereological counting for odontoblast with M42 multipurpose test was applied. Numerical density (Nv), volume density (Vv) and surface density (Sv) were estimated, and the mean (± SD) for each tooth, and Mean (± SE) per group were calculated. Differences between groups were analyzed by t test, with p 0.05 for statistical significance. In the healthy teeth group, the mean (± SE) for Nv was 0.409x105/mm3 (±0.018x105/mm3), Vv 19.714% (±1.43%) and to Sv 21.016 mm2/mm3 (±1.425 mm2/mm3) odontoblast cells. In the caries teeth group, the Nv was 0.521x105 /mm3 (±0.023x105/mm3), Vv 24.686% (±1.625%) and Sv 23.203 mm2/mm3 (±1.364 mm2/mm3). When comparing Nv, an increased in odontoblasts significantly (p = 0.0062), as well as Vv (p = 0.0197) in caries teeth group. There is an increased number of odontoblasts in teeth with reversible pulpitis, which would condition its responsiveness. The methodology can be applied to determine pulp behavior, and quantify variables of odontoblastic response in atraumatic restorative treatments in an impartial and reproducible form.