Estudo imuno-histoquímico e in vitro de proteínas do sistema ativador de plasminogênio em carcinomas de células escamosas de língua oral / Immunohistochemical and in vitro study of plasminogen activator system proteins in oral tongue squamous cell carcinomas

O carcinoma de células escamosas (CCE) é a neoplasia maligna mais frequente da cavidade oral e apresenta prognóstico desfavorável. Assim sendo, pesquisas têm buscado esclarecer o papel de biomarcadores no comportamento biológico do CCE oral. Nesta perspectiva, destacam-se o ativador de plasminogênio tipo uroquinase (uPA) e seu receptor (uPAR), além do inibidor do ativador de plasminogênio-1 (PAI-1). O presente trabalho analisou, por meio de imuno-histoquímica, a expressão das proteínas uPA, uPAR e PAI-1 no CCE de língua oral (CCELO) e sua relação com parâmetros clinicopatológicos. Este experimento também avaliou os efeitos in vitro da proteína recombinante humana PAI-1 (rhPAI-1) na linhagem celular SCC25, derivada de CCELO. A imunoexpressão de uPA, uPAR e PAI-1 foi analisada em 60 casos de CCELO, de forma semiquantitativa, nas células neoplásicas do front de invasão tumoral. Visando a associação dos achados imuno-histoquímicos com variáveis clinicopatológicas e taxas de sobrevida, os casos foram classificados nas categorias baixa expressão (≤50% das células positivas) e alta expressão (>50% das células positivas). No experimento in vitro, foram analisados os seguintes grupos: G0 (controle; células cultivadas na ausência de rhPAI-1), G10 (células tratadas com rhPAI-1 a 10 nM) e G20 (células tratadas com rhPAI-1 a 20 nM). Diferenças entre estes grupos foram investigadas através dos ensaios: viabilidade celular (Alamar Blue), ciclo celular (marcação com iodeto de propídio, PI), apoptose/necrose (marcação com Anexina V e PI), atividade migratória (Wound healing) e invasão celular (Transwell). A análise imuno-histoquímica revelou alta expressão do uPA na maioria dos CCELOs, mas sem relações significativas com parâmetros clinicopatológicos. As expressões do uPAR e do PAI-1, em nível membranar, foram associadas a recidivas locais (p=0,019) e ao elevado tumor budding (p=0,046), respectivamente. A expressão membranar do PAI-1 também apresentou associação significativa com o alto escore de risco histopatológico (p=0,043). A análise estatística evidenciou ausência de associações significativas entre as variáveis imunohistoquímicas (uPA, uPAR e PAI-1) e indicadores de prognóstico do CCELO (sobrevida específica e sobrevida livre da doença). No estudo in vitro, decorridas 24 horas da administração da rhPAI-1, os grupos G10 e G20 exibiram maior viabilidade celular em comparação ao grupo controle (p=0,020), assim como aumento da progressão para a fase S do ciclo celular (p=0,024). No que concerne aos percentuais de células apoptóticas e necróticas, não foram encontradas diferenças significativas entre os grupos. Nos grupos celulares cultivados na presença da rhPAI1, também foi constatado aumento da atividade migratória (p=0,039) e do potencial de invasão (p=0,039), respectivamente, nos intervalos de 24 horas e 72 horas. Os achados deste estudo sugerem o envolvimento das proteínas uPA, uPAR e PAI-1 na patogênese do CCELO. Entretanto, a expressão destes biomarcadores pode não estar relacionada com a sobrevida dos pacientes. Os resultados in vitro demonstram que o PAI-1 exerce efeitos estimulatórios na proliferação, migração e invasão celular, podendo assim contribuir para a agressividade biológica do CCELO (AU).

Squamous cell carcinoma (SCC) is the most frequent malignant neoplasm of the oral cavity and has an unfavorable prognosis. Thus, studies have sought to clarify the role of biomarkers in the biological behavior of oral SCC. Within this context, urokinase-type plasminogen activator (uPA) and its receptor (uPAR), as well as plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1), are particularly interesting. The present study analyzed, by means of immunohistochemistry, the expressions of uPA, uPAR and PAI-1 in oral tongue SCC (OTSCC) and their relationship with clinicopathological parameters. This experiment also evaluated the in vitro effects of recombinant human PAI-1 (rhPAI-1) on the OTSCC-derived cell line SCC-25. The immunoexpression of uPA, uPAR and PAI-1 was analyzed semiquantitatively in neoplastic cells of the invasion front of 60 OTSCC cases. Aiming to determine the association between immunohistochemical findings, clinicopathological variables and survival rates, the cases were classified as low expression (≤50% of positive cells) and high expression (>50% of positive cells). The following groups were analyzed in the in vitro experiment: G0 (control; cells cultured in the absence of rhPAI-1), G10 (cells treated with 10 nM rhPAI-1), and G20 (cells treated with 20 nM rhPAI-1). Differences between these groups were investigated using the following assays: cell viability (Alamar Blue), cell cycle (staining with propidium iodide, PI), apoptosis/necrosis (staining with Annexin V and PI), migratory activity (Wound healing), and cell invasion (Transwell). Immunohistochemical analysis revealed high expression of uPA in most OTSCC cases, but there were no significant associations with clinicopathological parameters. The high membrane expression of uPAR and PAI-1 was associated with local recurrence (p=0.019) and high tumor budding (p=0.046), respectively. Membrane expression of PAI-1 also presented a significant association with high-risk cases (p=0,043). Statistical analysis demonstrated no significant associations between the immunohistochemical variables (uPA, uPAR and PAI-1) and prognostic indicators of OTSCC (disease-specific and disease-free survival). In the in vitro experiment, 24 hours after administration of rhPAI-1, G10 and G20 exhibited greater cell viability compared to the control group (p=0.02), as well as increased progression to the S phase of the cell cycle (p=0.024). There were no significant differences in the percentages of apoptotic or necrotic cells between groups. In the groups cultured in the presence of rhPAI-1, migratory activity (p=0.039) and invasion potential (p=0.039) were found to be increased after 24 and 72 hours, respectively. The findings of this study suggest the involvement of uPA, uPAR and PAI-1 in the pathogenesis of OTSCC. Nevertheless, the expression of these biomarkers may not be related to survival of patients. The in vitro results suggest that PAI-1 exerts stimulatory effects on cell proliferation, migration and invasion and may therefore contribute to the biological aggressiveness of OTSCC (AU).

Análise da expressão imunoistoquímica de regy e de proteínas envolvidas na regulação da apoptose em carcinomas epidermoides de língua oral / Analysis of the immunohistochemical expression of regy and of proteins involved in the regulation of apoptosis in oral tongue squamous cell carcinomas

O câncer na cavidade oral é uma das lesões malignas mais frequentes na população mundial. Como o processo de desenvolvimento das neoplasias malignas remete a danos que promovem um desequilíbrio na regulação da divisão e morte celular, nos últimos anos, diversos estudos foram realizados com o intuito de verificar a influência desses danos no comportamento global das células e na evolução da doença. Nesse contexto, pesquisas recentes mostraram que alterações na expressão de REG podem desempenhar um importante papel na progressão tumoral de várias neoplasias malignas, por interferir na regulação da apoptose. Diante disso, o objetivo desse trabalho foi investigar a expressão imunoistoquímica dos marcadores REG, p53, MDM-2, Bcl-2 e Bax em carcinomas epidermoides de língua (CELs) oral, com a finalidade de promover uma análise comparativa da imunoexpressão destas proteínas com os parâmetros clínico-patológicos de agressividade da lesão, no intuito de identificar se o REG contribui para a progressão do tumor e se interfere na expressão das proteínas relacionadas a apoptose. Para tanto, foram coletadas informações clínicas de 58 pacientes acometidos por CELs. Em seguida, foi realizada análise histopatológica e imunoistoquímica dos marcadores supracitados, em amostras de material biológico parafinado da lesão. Os resultados mostraram que os tumores com metástase nodal e de alto grau histopatológico de malignidade apresentavam percentuais significativamente menores de REG (p<0,05). Em adição, a análise da expressão de p53, MDM-2 e Bax nos diferentes parâmetros clínico-patológicos avaliados nesse trabalho, não revelou diferenças significativas nos percentuais de imunopositividade desses marcadores. Com relação ao Bcl-2, foi visto que tumores de alto grau de malignidade e com óbitos relacionados a doença apresentavam percentual significativamente menor de positividade dessa proteína (p<0,05). Por fim, o teste de correlação de Spearman demonstrou existir fraca correlação positiva, estatisticamente significativa, entre os percentuais de REG e das proteínas MDM-2 e Bcl-2. Baseado nesses achados, pode-se concluir que a redução da expressão de REG parece contribuir para a progressão do CEL oral e pode influenciar na expressão das proteínas relacionadas a regulação da apoptose (AU).

Cancer of the oral cavity is one of the most common malignancies in the world. Since the development of malignant neoplasms is related to damage that causes an imbalance in the regulation of cell division and cell death, many studies have been conducted in recent years to verify the influence of this damage on overall cell behavior and on the progression of the disease. Within this context, recent studies suggest that changes in the expression of REG play an important role in the progression of different malignant tumors by interfering with the regulation of apoptosis. Therefore, the objective of the present study was to investigate the immunohistochemical expression of REG, p53, MDM-2, Bcl-2 and Bax in oral tongue squamous cell carcinoma (OTSCC), correlating the immunoexpression of these proteins with clinicalpathological parameters of tumor aggressiveness, in order to determine whether REG contributes to tumor progression and interferes with the expression of apoptosisrelated proteins. For this purpose, the clinical data of 58 patients with OTSCC were collected and paraffin-embedded tumor specimens were submitted to histopathological analysis and immunohistochemistry using the markers cited above. The results showed significantly higher expression of REG (p<0.05) in low-grade tumors and without lymph node metastases. In addition, comparison of the expression patterns of p53, MDM-2 and Bax according to the clinical-pathological parameters studied revealed no significant differences in the percentage of immunostaining for these markers. Regarding Bcl-2, a significantly lower percentage of immunostaining for this protein was observed in tumors with a high grade of malignancy and tumors associated with deaths related to the disease (p<0.05). Finally, Spearman's correlation test demonstrated a significant weak positive correlation between the percentages of REG and of MDM-2 and Bcl-2. These findings suggest that the reduced expression of REG contributes to the progression of OTSCC and may influence the expression of proteins related to the regulation of apoptosis (AU).

Prognostic Value of Volume-Based 18F-Fluorodeoxyglucose PET/CT Parameters in Patients with Clinically Node-Negative Oral Tongue Squamous Cell Carcinoma

OBJECTIVE: To evaluate the prognostic value of volume-based metabolic parameters measured with 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG) positron emission tomography (PET) in patients with clinically node-negative (cN0) oral tongue squamous cell carcinoma (OTSCC) as compared with other prognostic factors. MATERIALS AND METHODS: In this study, we included a total of 57 patients who had been diagnosed with cN0 tongue cancer by radiologic, 18F-FDG PET/CT, and physical examinations. The maximum standardized uptake value (SUVmax), average SUV (SUVavg), metabolic tumor volume (MTV), and total lesion glycolysis (TLG) for primary tumors were measured with 18F-FDG PET. The prognostic significances of these parameters and other clinical variables were assessed by Cox proportional hazards regression analysis. RESULTS: In the univariate analysis, pathological node (pN) stage, American Joint Committee on Cancer (AJCC) stage, SUVmax, SUVavg, MTV, and TLG were significant predictors for survival. On a multivariate analysis, pN stage (hazard ratio = 10.555, p = 0.049), AJCC stage (hazard ratio = 13.220, p = 0.045), and MTV (hazard ratio = 2.698, p = 0.033) were significant prognostic factors in cN0 OTSCC patients. The patients with MTV > or = 7.78 cm3 showed a worse prognosis than those with MTV < 7.78 cm3 (p = 0.037). CONCLUSION: The MTV of primary tumor as a volumetric parameter of 18F-FDG PET, in addition to pN stage and AJCC stage, is an independent prognostic factor for survival in cN0 OTSCC.