La impronta como método no invasivo de toma de muestra para el diagnóstico molecular de la leishmaniosis cutánea en población militar de colombia / The imprint as a non-invasive method of sampling for the molecular diagnosis of cutaneous leishmaniasis in colombia's military population / In print como método não invasivo de coleta de amostra para o diagnóstico molecular da leishmaniose cutânea em população militar da colômbia

Resumen Teniendo en cuenta que los métodos tradicionales de toma de muestra y diagnóstico para la leishmaniosis cutánea presentan limitaciones, como el frotis directo, cuya sensibilidad depende de la pericia del profesional, el aspirado de lesión que puede ser usado para detección de parásitos en lámina, su ADN o para cultivos es demorado y exigente, y la biopsia de la lesión que es invasiva y dolorosa se comparó con el método de impronta en papel filtro de la lesión ulcerativa contra el método tradicional de aspirado mediante la técnica de POR convencional utilizando como blanco una región del ADN del kinetoplasto del parásito. En el presente trabajo, la por obtuvo una sensibilidad para impronta del 90,07% comparado con el aspirado, el 86,3%, que, además, por ser un método de toma de muestra no invasivo, con pocas exigencias para el transporte, se puede tomar directamente en el área de operaciones a muy bajo costo, resulta ser beneficioso para ser usado en los pacientes con leishmaniosis cutánea del Ejército Nacional de Colombia, que se encuentran en las diferentes áreas de operaciones.

Abstract Taking into account that the traditional methods of sampling and diagnosis for cutaneous leishmaniasis , have limitations, such as direct smear, whose sensitivity depends on the professional's expertise, the lesion aspiration that can be used to detect parasites in the lamina, DNA or cultures takes a long time and is demanding, and the biopsy of the lesion that is invasive and painful were compared with the imprinting method on the filter paper of the ulcerative lesion against the traditional method of aspiration by means of the conventional PCR technique using as a target a DNA region of the parasite kinetoplast. In this present work, PCR obtained an imprinting sensitivity of 90.07% compared to the aspirate of 86.3%, which, besides being a non-invasive sampling method, with few transport requirements, it can be taken directly in the area of operations at a very low cost, which turns out to be beneficial to be used in patients with cutaneous leishmaniasis of the National Army of Colombia, who are in different operations areas.

Resumo Considerando que os métodos tradicionais de coleta de amostra e diagnóstico para a leishmaniose cutânea apresentam limitações, como exame direto de esfregaços, cuja sensibilidade depende da perícia do profissional, o raspado de lesão que pode ser usado para a detecção de parasitas em lâmina, seu DNA ou para culturas é demorado e exigente, e a biopsia da lesão que é invasiva e dolorosa, comparou-se com o método in print em papel filtro da lesão ulcerativa contra o método tradicional de aspirado mediante a técnica de PCR convencional utilizando como alvo uma região do DNA do cinetoplasto do parasita. No presente trabalho, a PCR obteve uma sensibilidade para in print de 90,07% comparado com o aspirado, 86,3%, que, além disso, por ser um método de coleta de amostra não invasivo, com poucas exigências para o transporte, pode ser coletado diretamente na área de operações a muito baixo custo, resulta ser benéfico para ser usado nos pacientes com leishmaniose cutânea do Exército Nacional da Colômbia, que se encontram nas diferentes áreas de operações.

Molecular diagnosis of dengue virus infections in samples collected on filter paper / Diagnóstico molecular de infecciones por virus Dengue en muestras colectadas en papel de filtro

Dengue virus infections (DENV) are a severe public health problem due to the high rates of morbidity and mortality involved, and the fact that no clinical treatment or vaccines are available. In order to strengthen the laboratory diagnosis for surveillance systems in tropical countries with low resources, we report an optimized method using filter paper for blood spotting and subsequent molecular diagnosis of DENV serotypes. Control strains of all serotypes, as well as 35 whole blood patient samples dispensed on filter paper, were stored at room temperature for as long as 36 months. RT-PCR of 5’UTR-C fragment was amplified through adapted protocols to diagnose all dengue serotypes. Results showed amplification for all four viral serotypes, including control viral strains and 88.6 % of the samples. These results allowed determining the utility of filter paper for the preservation of samples regularly obtained from patients with clinical suspicion of dengue in settings where low resources do not permit an immediate analysis of the samples. Likewise, this study evidence the possibility of molecular diagnosis of DENV from multiple areas of the world where there are no laboratories with the capacity to confirm DENV cases.

Las infecciones por virus Dengue (DENV) representan un grave problema de salud pública debido a las altas tasas de morbilidad y mortalidad que causan, además no cuentan con tratamiento clínico específico, ni vacuna. Con el fin de reforzar el diagnóstico de laboratorio para los sistemas de vigilancia epidemiológica en países tropicales con recursos económicos limitados, se optimizó una metodología utilizando papel de filtro para la recolección de muestras y el subsiguiente diagnóstico molecular de los serotipos de DENV. Se emplearon cepas controles correspondientes a todos los serotipos virales, así como 35 muestras de sangre total dispensadas en papel de filtro que fueron mantenidas a temperatura ambiente por 36 meses. Las muestras fueron analizadas mediante RT-PCR para la amplificación de la región del genoma correspondiente a 5´UTR-C de los DENV. Los resultados mostraron la amplificación de los mencionados fragmentos en 88,6% de las muestras analizadas, así como de las cepas controles. Estos resultados evidenciaron la utilidad del papel de filtro para conservación de muestras obtenidas de pacientes con sospecha clínica de dengue ubicados en zonas donde no es posible realizar análisis de laboratorio de forma inmediata, así como su uso para el diagnóstico molecular. De este modo se reforzaría la vigilancia en áreas, donde no hay laboratorios con capacidad para confirmar casos de DENV.

Diagnóstico inmunológico de la Enfermedad de Chagas a partir de muestras colectadas en papel de filtro / Immunological diagnosis of Chagas disease from samples collected on filter paper

La Enfermedad de Chagas, es producida por el parásito Trypanosoma cruzi. Los métodos de diagnóstico inmunológico son los más utilizados, pero presentan problemas de reacciones cruzadas con Leishmaniasis y Rangeliosis, por lo cual la Organización Mundial de la Salud (OMS) sugiere la ejecución de tres pruebas inmunológicas diferentes. En Venezuela la disponibilidad de las tres pruebas sólo se encuentra en centros de investigación y en laboratorios de referencia. Debido a esto, las muestras deben ser transportadas bajo estrictas condiciones de conservación y aún así pueden llegar deterioradas. El uso del papel de filtro podría ser una alternativa para la recolección y transporte de las muestras. El objetivo del presente trabajo fue comparar los resultados de las técnicas de ELISA, HAI e IFI utilizando muestras de sangre colectadas en tubo y en papel de filtro. Las muestras se procesaron mediante las técnicas de Inmunoensayo Enzimático (ELISA), Hemaglutinación Indirecta (HAI) e Inmunofluorescencia Indirecta (IFI). Para las muestras de papel se hicieron eluciones de 1/50 a diferentes tiempos para ELISA e IFI, y de 1/25 para HAI. Se obtuvo una sensibilidad de 91% y una especificad de 100% en el diagnóstico de las muestras colectadas en papel de filtro a través de las tres técnicas inmunológicas. Al compararlo con los resultados de las muestras colectadas en tubo se encontró un índice de kappa 0,91 (P<0,001), lo que indica una alta concordancia entre las dos técnicas de recolección de muestras y la confiabilidad de los resultados.

Chagas disease is produced by the parasite Trypanosoma cruzi. Immunological diagnosis methods are the most used, but they present problems of cross reactions with Leishmaniasis and Rangeliosis. For this reason, the World-Health-Organization (WHO) suggests the use of three different immunological tests. In Venezuela, the three tests are only available in research centers and laboratories of reference. Consequently, many samples must be transported under strict conditions of conservation, and despite this, they may become spoiled before arriving at the mentioned centers. The use of the filter paper could be an alternative for the collection and transportation of the samples. The aim of the present work was to compare the results of ELISA, HAI and IFI techniques using blood samples collected in tubes and in filter paper. The samples collected in tubes and filter paper were processed by ELISA, HAI and IFI techniques. For the filter paper samples elutions of 1/50 were done at various times for ELISA and IFI, and of 1/25 for HAI. Was obtained a sensibility of 91 % and specificity of 100 % in the final diagnosis of the samples collected in filter paper using the three techniques before mentioned, finding a kappa index of 0.91 (P <0.001) in both types of samples, indicating a high concordance between the two sample collection techniques and thus the reliability of the results obtained by means of three immunological techniques.

Comparação da coleta das amostras de sangue na triagem pré-natal, utilizando o papel de filtro e punção venosa na técnica de ELISA para detecção de HIV 1+2 / Comparison of the collection of blood samples in prenatal screening, using the filter paper and venipuncture technique ELISA for the detection of HIV 1+2

Apesar de o papel de filtro (PF) ter sido introduzido desde o século passado, (1963) por Guthrie e Susi, nas triagens neonatais, como alternativa para a coleta da amostra do sangue, seus benefícios na aplicação da prática médica laboratorial não foram aproveitados com eficiência nestes anos, comexceção dos recentes resultados obtidos nos trabalhos para a triagem pré-natal. O diagnóstico precoce do HIV em mulheres grávidas é de fundamental importância, sendo o aporte mais destacado para neutralizar a transmissão vertical (TV) do HIV-aids, pois ao ser detectada a presença de anticorpos anti--HIV, aplica-se o Protocolo ACTG 076 (Pediatric AIDS Clinical Trials Group Study Group), que é o tratamento das gestantes HIV-positivo no pré, intra e pós-parto. Objetivo: comparar a coleta das amostras de sangue no papel de filtro (PF) e no plasma (padrão-ouro) na triagem pré-natal, utilizando anticorposanti-HIV 1+2 no procedimento imunoquímico ELISA (Imunoscreen HIV 1+2 SS), da firma Mbiolog. Métodos: foram estudadas 1.142 grávidas de quatromunicípios do Estado do Rio de Janeiro: Itaboraí (N = 131), Itaguaí (N = 597), Niterói (N = 377) e São João de Meriti (N = 37), a partir do mês de novembro de 2008 até fevereiro de 2009. As grávidas foram submetidas a punção digital e venosa para a rotina da triagem pré-natal, sendo a primeira aplicada em PF. Foram calculados os limites de especificidade, sensibilidade, e valores preditivos positivos e negativos para o estudo. Resultados: os resultados da absorbância (homogeneização das variâncias) encontrados para as amostras não reativas e reativas, em ambas as técnicas, não mostraram diferenças significativas (P > 0,05) quando aplicado o teste T de Student no estudo de repetitividade. Os estudos de reprodutibilidade em ambas as técnicas não resultaram coeficientes de variação superiores a 10%. Conclusão: os resultados da sorologia para HIV no sangue seco coletado em PF foram semelhantes aos da coleta por punção venosa, validando esta técnica.

Although the filter paper (FP) have been introduced since the last century (1963) by Guthrie and Susi, in neonatal screening as an alternative to blood sample collection, its benefits in the application of medical laboratory practice not were used effectively in recent years, with the exception of the recent results obtained in the works for the prenatal screening. Early diagnosis of HIV in pregnant women is of paramount importance, being the most out standing support to counteract the vertical transmission (VT) of HIV-AIDS, because the determination of the presence of HIV antibodies, it applies to the ACTG 076 Protocol (Pediatric AIDS Clinical Trials Group Study Group), which is the treatment of pregnant HIV-positive in the pre-,intra and post-parto.Objetive: compare the collection of blood samples on filter paper (FP) and plasma (standard gold) in prenatal screening, using antibodies against HIV 1+2 ELISA immunochemical procedure (Imunoscreen HIV 1 +2 SS), the firm Mbiolog. Methods: we studied 1,142 pregnant women in four counties of the State of Rio de Janeiro: Itaboraí (N = 131), Itaguaí (N = 597), Niterói (N = 377) and St. John Meriti (N = 37), from November 2008 until February 2009.The pregnant women underwent fingerstick and venous for routine prenatal screening, the first being applied in PF. We calculated the limits of sensitivity,specificity and positive predictive value and negative for the study. Results: the results of absorbance (homogeneity of variances) for the samples foundnon-reactive and reactive in both techniques, showed no significant differences (P > 0.05) when using the Student's T test in the study of repeatability.Reproducibility studies for both techniques did not result in coefficients of variation above 10%. Conclusion: the results of serological tests for HIV in driedblood collected in PF were similar to the collection by venipuncture, validating this technique.

Comparação da coleta das amostras de sangue na triagem pré-natal, utilizando o papel de filtro e punção venosana técnica de ELISA para detecção de sífilis / Comparison of the collection of blood samples in prenatal screening, using the filter paperand venipuncture technique ELISA for the detection of syphilis

A sífilis é uma doença infecciosa sistêmica, de evolução crônica e causada pelo Treponema pallidum, um espiroqueta de transmissão sexuale vertical, que pode produzir, respectivamente, as formas adquirida e congênita da doença. No Brasil, segundo o Ministério da Saúde (MS), embora a subnotificação de casos de sífilis seja alta, alguns dados disponíveis indicam a elevada magnitude deste problema infeccioso. Objetivo: comparar a coletadas amostras de sangue no papel de filtro (PF) e no plasma (padrão-ouro) na triagem pré-natal, utilizando anticorpos antitreponêmicos totais (IgG + IgM) no procedimento imunoquímico ELISA, registrado pelo Imunoscreen, da firma MBiolog. Métodos: foram estudadas 1.142 grávidas de quatro municípiosdo Estado de Rio de Janeiro: Itaboraí (N = 131), Itaguaí (N = 597), Niterói (N = 377) e São João de Meriti (N = 37) a partir do mês de novembro de 2008 até fevereiro de 2009. As grávidas foram submetidas a punção venosa e digital para a rotina da triagem pré-natal, sendo a última aplicada em PF. Foram calculados os limites de especificidade, sensibilidade e valores preditivos positivo e negativo para o estudo. Resultados: os resultados da sorologia parasífilis nas amostras do município de Itaboraí apresentaram ELISA positivo em 4,58%, os municípios de Itaguaí, Niterói e São João de Meriti mostraram positividade em 3,18%, 2,65% e 0%, respectivamente. Os procedimentos realizados tiveram uma sensibilidade e especificidade de 100% e os critérios preditivos positivos e negativos para todas as grávidas, estudados nas 1.142 amostras, foram de 100%. Conclusão: os resultados da sorologia para sífilis no sangue seco coletado em PF foram semelhantes aos da coleta por punção venosa, validando esta técnica.

Syphilis is a systemic disease of chronic evolution and caused by Treponema pallidum, a spirochete of sexual and vertical transmission,which can produce, respectively, the form of acquired and congenital disease. In Brazil, according to the Ministry of Health (MoH), although the underreporting of cases of congenital syphilis is high, some available data indicate the high magnitude of this problem that especially affects the weakness of pregnant women. Congenital syphilis causes great social impact, which results in deterioration of quality of life on a important stratum of the population,and indirect costs to the economy of the country, which, added to the direct costs resulting from hospitalizations and procedures for the treatment of its complications, increasing the total costs of care of public health. Objective: to compare the collection of blood samples on filter paper (FP) and plasma(gold standard) in prenatal screening, using anti-treponema total (IgG + IgM) in ELISA immunochemical. Methods: we studied 1,142 pregnant of the following cities: Itaboraí (N = 131), Itaguaí (N = 597), Niterói (N = 377) and St. João de Meriti (N = 37). Blood samples were collected from the finger and venipuncture of pregnant women in stations of collection of these counties, calculating elapsed time from sample collection to delivery of the report to thecouncil. We calculated the limits of sensitivity, specificity, positive predictive value and negative for the study. Results: Itaboraí showed positive ELISA in4.58%, in Itaguai, Niterói and St. João de Meriti showed, respectively, 3.18%, 2.65% and 0%. The procedures performed had a sensitivity and specificity of 100%, and the positive and negative predictive criteria for all pregnant women studied in 1,142 samples were 100%. All positive cases were reported to the Municipality within 10 days of sample collection. Conclusion: we conclude that the implementation of collection of dried blood on filter paper in pregnantwomen screening, was similar to that collected by venipuncture, validating this technology.

Comparación de calidade del pepel de filtro hahnemuehle 2992 con el schleicher & schuell 903 en la conservación de la sangre seca para el estudio poblacional de anticuerpos igm e igg de la sífilis / Comparison of quality between hahnemuehle 2992 and schleucher & schuell 903 filter paper, in the preservation of dried blood for the population study of igm and igg antbodies to syphilis

Introducción: la alternativa para la colecta de las muestras de sangre en el papel de filtro (PF) muestra cada día mayor interés en los investigadores yasistentes de salud que buscan mejorar los programas de pesquisaje masivo de la población. Muchos autores desde la apertura esta posibilidad en el siglo pasado iniciaron sus proyectos con la conservación de la muestra de sangre seca para estudios masivos neonatales. . Objetivo: valorar la calidad del papel de filtro (Hahnemuehle, 2992) para la colecta de muestras de sangre para el tamisaje de sífilis, como alternativa en la conservación de sangre seca en los laboratorios que usan esta alternativa y estrategia en los estudios de terreno. Métodos: fue realizadoun diseño para el estudio comparativo de calidad entre el PF Schleicher & Schuell 903 que sirvió como patrón de oro y el PF Hahnemuehle 2992, para a coleta e almacenamiento de muestras de sangre para el estudio de anticuerpos totales (IgM e IgG) contra el Treponema pallidum con una técnica ELISA tipo Sándwich. Se compararon 140 señales de absorbancia del mismo número de muestras de mujeres embarazadas, previo consentimiento escrito, para registrar su semejanza estadísticamente según los procedimientos estadísticos del Test de Fisher y Student (Test T) con un valor de seguridad de P > 0,05. Resultados: se encontró correspondencia entre los valores de especificidad, sensibilidad y valor predictivo positivo entre el procedimiento usando con los dos PF en el universo estudiado, así como los valores de T = 0,344331 para el análisis de comparación de medias entre la absorbancia obtenida con los dos PF para de P < 0,001. Conclusión: se concluye que la comparación del PF Hahnemuehle 2992 con el Schleicher & Schuell 903 para el estudio de muestras de sangre seca para la detección de anticuerpos totales del Treponema pallidum por ensayo ELISA es significativamente semejante y cuentan con la misma calidad.

Introduction: the filter paper (dried blood spot DBS) as an alternative of blood sample collection shows an increased interest of scientific investigators and health assistants that search to improve massive research programs of the population. Since the opening of this possibility in the last century, many authors started their projects using dried blood spots for massive neonatal studies. Objective: to assess the filter paper quality (Hahnemuehle, 2992) for collecting blood samples for sifilis screening as an alternative to the conservation of dry blood in the laboratory using this alternative strategyand in camp studies. Methods: a design for a comparative study of quality between Schleicher and Schuell 903 paper used as golden standard- andHahnemuehle 2992 paper was realized, for the collection and storage of dried blood for the totals antibodies (IgM and IgG) against the Treponema pallidum study, using ELISA assay (sandwich type). A hundred and forty (140) signals of absorbance of the same number of pregnant samples, with previous written consent, to register their similarity, using statistic procedures of the Test of Fisher and Student (test T) with a security value of P > 0,05. It was also compared the absorbance values of the positive cases (according a settled cut off for each plate) and sensitivity,specificity and predictive value criteria were calculatedon a total of 604 pregnant of the study. Results: it was detected correspondence of sensitivity, specificity and positive predictive values, in the procedures using the two types of fi lter papers, as well as the value of T = 0,344331 for the analysis of the average comparison between the obtained absorbance with the two types to P < 0,001. Conclusion: it was concluded that Hahnemuehle 2992 fi lter paper compared with Schleicher and Schuell 903 shows signifi cantly similar and have the same quality for the detection of totals antibodies Treponema pallidum of using ELISA test.

Detección de títulos de Antiestreptolisina o (AELO) en una población pediátrica y rural de Antioquia / Antistreptolysin O titre detection in a rural pediatric population

Introducción: la fiebre reumática, complicación no supurativa de la amigdalofaringitis causada por Streptococcus del Grupo A (SGA), es un problema de salud pública principalmente en niños de 6 a 15 años. 15 por ciento a 20 por ciento de la población es portadora del agente causal, lo cual es un factor importante de diseminación de la infección en comunidades. En Antioquia se reportan 800 – 1000 casos de pacientes con fiebre reumática al año, quienes consultan por presentar signos y síntomas sugestivos del diagnóstico, pero los casos cuya clínica es bizarra pasan desapercibidos agravando las secuelas. La detección de Antiestreptolisinas O revela la frecuencia de la infección por SGA en grupos de riesgo. Objetivos: determinar AELO en muestras de sangre tomadas en papel de filtro. Determinar la frecuencia de títulos de AELO en niños de 6 a 14 años. Metodología: se estudiaron 506 muestras de sangre en papel de filtro de niños de 6 a 14 años procedentes de diferentes regiones de Antioquia del banco de muestras del Instituto Colombiano de Medicina Tropical. Los títulos de AELO fueron medidos en el eluido de la muestra utilizando reactivos Difco. Resultados: de las 506 muestras estudiadas, 154 (30.4 por ciento) presentaron títulos de AELO ≥320, 71 (14 por ciento) tuvieron títulos ≥ 640. Discusión: la determinación de AELO en muestras de sangre en papel de filtro facilitan y disminuyen costos en estudios poblacionales conservando las características de la técnica. La frecuencia de títulos elevados de AELO en el grupo estudiantil revela que la infección SGA en Antioquia es importante, las complicaciones y secuelas permanecen desconocidas