Effect of egg yolk-based extender and seminal plasma removal on sperm viability of cooled donkey semen / Efeito do diluente à base de gema de ovo e remoção do plasma seminal na viabilidade espermática do sêmen refrigerado de jumento

Developing effective cooled semen protocols is essential to increase pregnancy rates and reproductive efficiency in donkeys. This study aimed to evaluate the effect on sperm kinetic parameters and membrane integrity in cooled donkey semen diluted with defined milk proteins extender with 1% or 2% of egg yolk and the removal of seminal plasma. Twenty-four ejaculates from six jackasses were collected. Each ejaculate was divided into four aliquots that were diluted in extender with 1% (EY1) or 2% (EY2) egg yolk. One sample from each group was centrifuged, seminal plasma was removed (CEY1, CEY2 groups, respectively), and the samples were then refrigerated at 5 °C for 24 h. Fresh and cooled semen samples were assessed for sperm motility, morphology, and plasma membrane integrity. Total motility, progressive motility, sperm kinetic parameters, or live sperm cells were not statistically different when semen was cooled with an extender supplemented with 1% or 2% of egg yolk. Seminal plasma removal does not affect total motility or sperm kinetic parameters. However, progressive motility decreased (P<0.05) when semen was extended with 2% of egg yolk and seminal plasma was removed. Membrane integrity was affected (P<0.05) in centrifuged samples. In conclusion, the obtained results suggest that there is no difference in sperm kinetics and membrane integrity when 1% or 2% of egg yolk was added to the Equiplus extender. Also, the removal of seminal plasma by centrifugation did not have any beneficial effect on cooled donkey semen. Further studies are needed to relate these results with in vivo fertility tests with cooled donkey semen.(AU)

O desenvolvimento de protocolos de sêmen resfriado eficazes é essencial para aumentar as taxas de prenhez e eficiência reprodutiva em jumentos. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do diluente à base de proteínas do leite com 1 ou 2% de gema de ovo sobre os parâmetros cinéticos do sêmen e integridade da membrana em sêmen resfriado de jumento, com ou sem a remoção do plasma seminal. Vinte e quatro ejaculados de seis jumentos foram coletados. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas e diluído em diluente com 1% (EY1) ou 2% (EY2) de gema de ovo. Uma amostra por grupo foi centrifugada e o plasma seminal removido (grupos CEY1 e CEY2, respectivamente). Os pellets foram novamente ressuspendidos nas mesmas concentrações e diluentes. Em seguida, as quatro alíquotas foram refrigeradas a 5°C por 24 horas. Amostras de sêmen fresco e refrigerado foram avaliadas quanto à motilidade espermática e integridade da membrana plasmática. Motilidade total, motilidade progressiva, parâmetros de cinética espermática ou células espermáticas vivas não apresentaram diferença significativa quando o sêmen foi resfriado com diluente suplementado com 1% ou 2% de gema de ovo. A remoção do plasma seminal não afetou a motilidade total ou os parâmetros de cinética espermática; entretanto, a motilidade progressiva diminuiu (P<0,05) quando o sêmen foi diluído com 2% de gema de ovo e o plasma seminal removido. Nas amostras centrifugadas, a integridade da membrana foi afetada (P<0,05). Em conclusão, os resultados sugerem que não há diferença na cinética espermática e na integridade da membrana quando 1% ou 2% de gema de ovo são adicionados ao diluente Equiplus e a remoção do plasma seminal por centrifugação não teve nenhum efeito benéfico no resfriamento de sêmen de jumento. Mais estudos são necessários para relacionar esses resultados com testes de fertilidade in vivo com sêmen resfriado em jumentos.(AU)

Influence of transcervical infusion of seminal plasma on the farrowing rate and litter size in artificially inseminated sows / [Influência da infusão transcervical de plasma seminal na taxa de partos e tamanho da ninhada em porcos inseminados artificialmente]

Recent studies have focused on the use of seminal plasma to increase sow fertility after classical intracervical artificial insemination (AI). The aim of the present study was to investigate the influence of seminal plasma infusion, prior to the application of conventional AI dose, on the fertility rate in sows. A total of 114 sows were treated with intrauterine infusion of 30ml seminal plasma (SP), while 114 control sows were infused by physiological solution (PS), immediately before the application of conventional AI dose. The experiment was conducted at one commercial pig farm in Serbia, which is comprised of 1,500 sows in the breeding herd. Intrauterine infusion of seminal plasma produced significantly (P<0.05) higher farrowing rate (93.8%) and significantly (P<0.01) more live-born piglets per litter (12.27), compared with the control sows (83.33% farrowing rate and 10.48 piglets). The present results show that intrauterine infusion of seminal plasma can be a useful tool for increasing the fertility rate in artificially inseminated sows, under the conditions of practical intensive pig production.(AU)

Estudos recentes concentraram no uso de plasma seminal para aumentar a fertilidade de porcos após inseminação artificial intracervical clássica (AI). O objetivo do presente estudo foi investigar a influência da infusão de plasma seminal, antes da aplicação da dose de AI convencional, na taxa de fertilidade de porcas. 114 porcas foram tratadas com infusão intrauterina de 30ml plasma seminal, e 114 porcas de controle receberam infusão de solução fisiológica (PS) imediatamente antes da aplicação da dose convencional de AI. O experimento foi realizado em uma fazenda de porcos comercial na Serbia, que é composta de 1.500 porcas no rebanho de reprodução. A infusão intrauterina de plasma seminal produziu uma taxa de fertilidade (93,8%) significativamente maior (P<0.05), e significativamente mais (P<0.01) leitões nascidos vivos por ninhada (12,27) comparado com as porcas de controle (83,33% taxa de fertilidade e 10,48 leitões). Os resultados mostram que infusão intrauterina com plasma seminal pode ser uma ferramenta útil para aumentar a taxa de fertilidade em porcas inseminadas artificialmente, sob as condições de prática de produção intensiva de porcos.(AU)

Proteins of the canine seminal plasma / Proteínas do plasma seminal canino

ABSTRACT: Studies have been performed to identify the proteins present in canine seminal plasma (SP) and relate them to sperm quality as well as to discover molecular markers of reproductive tract diseases. There is evidence that heparin-binding proteins, zinc-binding proteins, and lactoferrin as well as the matrix metalloproteinase, superoxide dismutase, catalase, and glutathione peroxidase enzymes are associated with canine sperm quality. Other studies indicate that prolactin and enzymes like arginine esterase, acid phosphatase, and alkaline phosphatase could be successfully used as biomarkers of reproductive disorders. Thus, the present literature review aims to address aspects related to proteins of the canine SP, their influence on fertility, and their importance as biomarkers of reproductive disorders.

RESUMO: Pesquisas têm sido realizadas para identificar as proteínas presentes no plasma seminal canino, com o intuito de relacioná-las com a qualidade espermática, bem como buscar por marcadores moleculares de patologias do trato reprodutivo. Há evidências de que as proteínas ligadoras de heparina, ligadoras de zinco, a lactoferrina, bem como as enzimas matrix metalloproteinase, superoxide dismutase, catalase e a glutationa peroxidase estão relacionadas com a qualidade seminal canina. Outras pesquisas indicam que a prolactina, e as enzimas arginina esterase, fosfatase ácida e fosfatase alcalina poderiam ser utilizadas com sucesso como biomarcadores de doenças reprodutivas. Assim, esta revisão de literatura objetiva abordar aspectos relacionados às proteínas do plasma seminal canino, suas influências sobre a fertilidade, e sua importância como biomarcadores de doenças reprodutivas.

Semen parameters and seminal plasma protein and biochemical profiles of dogs with benign prostatic hyperplasia after botulinum toxin type A intraprostatic injection / Parâmetros seminais e perfis bioquímicos e proteicos do plasma seminal de cães com hyperplasia prostática benigna após a administração intra-prostática de toxina botulínica tipo A

This study aimed to determine the effects of different concentrations of botulinum toxin type A (BT-A) on semen parameters, and seminal plasma biochemical and protein profiles of dogs with benign prostatic hyperplasia (BPH). Eighteen sexually intact male dogs with BPH were randomly divided in three groups, and received an intraprostatic injection of saline solution (control group - CG), 250UI (GI) or 500UI (GII) of BT-A under transabdominal ultrasound guidance. Semen was collected at baseline, 2, 4 and 8 weeks after treatment. Semen parameters were determined and seminal plasma pH, total protein (TP), total chlorides (TC), calcium (Ca), potassium (K), and sodium (Na) concentrations were assessed. One-dimensional sodium dodecyl sulfatepolyacrilamide gel eletrophoresis (SDS- PAGE) was performed to determine seminal plasma protein profile. Sperm parameters and seminal plasma pH, TP, TC, Ca and K mean values did not change significantly at any time point and among treated groups (P>0.05). The SDS-PAGE analysis of the pooled fractions identified 31 protein bands with molecular weights ranging from 3.9 to 106.2kDA in all treatment groups during the entire evaluation period. Regardless the used dose, intraprostatic BT-A injection do not alter semen parameters and seminal plasma biochemical and protein profiles of dogs with BPH.

O objetivo do presente estudo foi determinar a ação de diferentes concentrações de toxina botulínica tipo A (TB-A) sobre os parâmetros seminais, perfis bioquímicos e proteicos do plasma seminal de cães com hiperplasia prostática benigna (HPB). Dezoito cães hígidos, não orquiectomizados com HPB foram divididos em três grupos, os quais foram submetidos à injeção intra-prostática de solução salina (grupo controle - GC), 250UI (GI) ou 500UI (GII) de TB-A. Amostras seminais foram coletadas previamente aos tratamentos e após 2, 4 e 8 semanas. Os parâmetros seminais assim como os valores de pH e concentrações de proteínas totais (TP), cloretos totais (CT), cálcio (Ca), potássio (K), sódio (Na) do plasma seminal foram mensurados após as coletas. O perfil proteico do fluido prostático foi estabelecido por meio de eletroforese SDS-PAGE. Não foram constatadas diferenças significativas quanto aos parâmetros espermáticos e perfil bioquímico do plasma seminal intragrupos e intergrupos (P>0,05). À SDS-PAGE foram identificadas 31 bandas proteicas com pesos moleculares de 3,9 a 106,2kDA, em todos os tratamentos e durante todo o período de avaliação. Dessa forma, concluiu-se que, independentemente da dose utilizada, a injeção intra-prostática de TB-A não altera os parâmetros seminais, assim como os perfis bioquímico e proteico do plasma seminal de cães com HPB.

Alergia al semen / Semen allergy

La alergia al semen comprende una variedad de síntomas tanto locales como sistémicos causados por reacciones de hipersensibilidad inmediata y caracterizados por títulos elevados de IgE. El objetivo de este estudio es describir el caso de una paciente con alergia al semen: mujer de 21 años de edad que presenta ardor y sensación de quemazón en el área genital luego de tener contacto con el semen de su pareja. El análisis seminal del compañero sexual no presenta ningún tipo de alteración. Los síntomas desaparecen con el uso de condón o con la práctica del coito interrumpido. La alergia al semen es una alteración, que si bien es poco frecuente, puede afectar los deseos de concepción de las mujeres que la presentan, es un fenómeno poco estudiado por lo que se requieren más reportes para su caracterización.

Semen allergy includes several local and systemic symptoms caused by immediate hypersensitivity reactions and it is characterized by high levels of IgE. The objective of this study was to describe the case of a patient with semen allergy. A 21 year-old woman experienced itching and burning sensation in the genital area after contact with the semen of her sexual partner. Semen analysis was normal. Symptoms disappear with the use of condom or the practice of coitus interruptus. Semen allergy is a condition, although rare, can affect the desire of conceiving in women who suffers it. It is a briefly studied phenomenon which requires more reports for proper characterization.

Cooling of ejaculated and epididymal stallion sperm / Refrigeração de espermatozoides do ejaculado e epidídimo em garanhões

After a serious injury or sudden death, epididymis cauda sperm recovery and cryopreservation may present as the last opportunity to obtain genetic material from a valuable stallion. This study evaluated the viability of cooled equine sperm collected by three different methods: sperm of ejaculated (G1), sperm recovered from the epididymal cauda immediately after orchiectomy (G2) and sperm recovered from the epididymal cauda after storage for 24 hours at 5°C (G3). To obtain G1 sperm, two ejaculates were collected. After 1 week, all stallions underwent a bilateral orchiectomy, and one of the removed epididymides was flushed to obtain G2 sperm. The contralateral epididymis was stored at 5°C for 24 hours before being flushed to obtain G3 sperm. The sperm samples were evaluated immediately after the addition of the refrigeration extender, and after 24 and 48 hours of storage at 5°C. After 24 and 48 hours of storage, the epididymal sperm demonstrated higher motility traits when compared to the ejaculated sperm (P<0.05). These results indicate that sperm recovered from the epididymal cauda of stallions are more resistant to the cooling process, with higher kinetic parameters and plasma membrane integrity when compared to the ejaculated sperm.

A recuperação de espermatozoides da cauda do epidídimo pode ser a última chance para preservação do germoplasma quando ocorre morte súbita ou lesão grave em garanhões de alto valor genético. O presente trabalho comparou a viabilidade após refrigeração dos espermatozoides do ejaculado (G1), recuperados da cauda do epidídimo imediatamente após a orquiectomia (G2) e recuperados após armazenamento do epidídimo por 24 horas a 5ºC (G3). No G1 foram colhidos dois ejaculados. Uma semana após a colheita dos ejaculados os garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral e realizada a colheita dos espermatozoides da cauda do epidídimo de um testículo de cada garanhão (G2). O testículo contralateral permaneceu a 5°C por 24 horas, antes da recuperação espermática (G3). A análise das amostras foi realizada imediatamente após a adição do meio de refrigeração, e após 24 e 48 horas de armazenamento a 5°C. Após 24 e 48 horas de armazenamento, os espermatozoides do epidídimo demonstraram características de cinética maiores que os do ejaculado (P<0.05). Estes resultados indicam que espermatozoides recuperados da cauda do epidídimo foram mais resistentes ao processo de refrigeração, com maiores parâmetros de cinética espermática e integridade da membrana plasmática quando comparados aos espermatozoides do ejaculado.

Las proteínas del plasma seminal incrementan la viabilidad espermática post-descongelación del semen de toros Sanmartinero / Seminal plasma proteins increase the post-thaw sperm viability of Sanmartinero bull’s semen

Objetivo. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la adición de proteínas del plasma seminal sobre el porcentaje de espermatozoides bovinos viables post-descongelación. Materiales y métodos. Los espermatozoides se congelaron usando dos medios (citrato-fructosa-yema y Bioxcell®) y la obtención de proteínas de plasma seminal de bajo peso molecular se realizó por medio de cromatografía líquida de baja presión. Las proteínas de interés eluyeron en las fracciones 21-25 y se sometieron a electroforésis en una y dos dimensiones. Los espermatozoides se incubaron a 37°C durante una hora, con 0.5, 1.0, 1.5 y 2.0 mg de la fracción 21-25. Se incluyeron dos tratamientos adicionales: uno con proteínas totales del plasma seminal y otro sin proteína. Resultados. La electroforésis bidimensional de las fracciones confirmó la presencia de siete puntos de proteína de bajo peso molecular (14-16 kDa y punto Isoeléctrico de 5.0 - 5.5). La adición de estas proteínas aumentó 20% (p<0.05), el porcentaje de espermatozoides viables post-descongelación en muestras congeladas en medio citrato-fructosa-yema (con dosis de 1 ó 1.5 mg de proteína/106 espermatozoides), y 25% (p<0.05) en muestras congeladas en medio Bioxcell® (con dosis de 0.5 mg de proteína/106 espermatozoides). Conclusiones. Los resultados de esta investigación sugieren el posible uso de proteínas de bajo peso molecular del plasma seminal, para disminuir el efecto deletéreo de la criopreservación en los espermatozoides.

Objective.This study was performed to evaluate the effect of the addition of proteins on the post-thawing viability of spermatozoa. Materials and methods. Spermatozoa were frozen with two different media: Citrate-fructose and Bioxcell®. The isolation of seminal plasma proteins of low molecular weight was performed through low pressure liquid chromatography. It was determined that the proteins of interest eluted in fractions 21-25, and two dimensional electrophoresis was performed. Thawed sperm was incubated at 37°C for one hour with 0.5, 1, 1.5 and 2.0 mg of 21-25 fraction protein. Two additional treatments were included: one with seminal plasma total protein, and another one without protein. Results. Two dimensional electrophoresis of protein confirmed the presence of two bands of 14 and 16 kDa and seven spots with iso-electric points between 5.0 - 5.5 respectively. Incubation of the spermatozoa with the 21-25 fraction showed that sperm viability increases by 20% with doses of 1 and 1.5 mg of protein/106 spermatozoa in the citrate-fructose medium, and 25% with 0.5 mg of protein/106 spermatozoa in Bioxcell® medium. A positive effect in sperm viability was demonstrated although it depends on the doses of protein and the cryopreservation medium used. Conclusions. This investigation suggests that the use of seminal plasma proteins can be useful for reducing the harmful effect on sperm cryopreservation.

Alergia al plasma seminal humano: ¿mito o realidad? / Human seminal plasma allergy

Antecedentes: la hipersensibilidad al plasma seminal humano abarca una amplia variedad de manifestaciones clínicas que comprenden desde prurito local y reacciones dérmicas localizadas, hasta situaciones que ponen en riesgo la vida, como la anafilaxia. Objetivo: caracterizar este fenómeno, para el estudio a profundidad del tema y enfatizar en un problema que no está siendo valorado debido al poco conocimiento del evento. Método: revisión de la literatura empleando los términos "semen allergy" y "human seminal plasma allergy" y sus equivalentes en español en diferentes bases de datos. Resultados: este desorden inmunológico es más frecuente entre los 23 y los 35 años de edad, en la mayoría de los casos los síntomas se inician dentro de la primera hora después de culminada la relación sexual o inmediatamente después de tener contacto con el semen. El método de prevención más eficaz es el condón, aunque no es una opción adecuada para las parejas que desean concebir. Conclusión: se requiere estudiar y caracterizar mejor este fenómeno para mejorar tanto su diagnóstico como su tratamiento.

Background: human seminal plasma hypersensitivity includes a wide variety of clinical manifestations comprising itching and localized dermal reactions to situations that threaten life as anaphylaxis. Aims: to characterize this phenomenon, for in-depth study of the subject and emphasize a problem that is not being assessed due to poor knowledge of the event. Method: review of the literature using the terms "semen allergy" and "human seminal plasma allergy" and their spanish equivalents in different databases. Results: this immune disorder is more common between 23 and 35 years of age, in most cases the symptoms begin within the first hour after culminating intercourse or immediately after contact with the semen and most effective prevention method is the condom, although not an adequate solution for couples who want to conceive. Conclusion: further studies are required to further characterize this phenomenon to improve both diagnosis as treatment.

Proteomics to investigate bull’s semen freezability / Proteômica para investigar a congelabilidade do semen bovino

The present study was undertaken the protein composition in 2D-electrophoretic pattern (2DE) of the seminal plasma (SP) can interfere in the semen bull freezability, and if we can use that for predicting semen bull freezability. Samples were obtained of 20 bulls (different breeds) with a minimum of 3 years history semen production in commercial semen collection Center. All animals ranged between 2 - 7 years of age. The semen freezability was calculated by # of thawed and approved ejaculates / # of ejaculates submitted to cryopreservation (after semen evaluation and approved to submitted to freeze). The bulls were divided in 3 groups: HIGH (=>80% ejaculates approved); MEDIUM (>60% and <79% ejaculates approved); LOW (=<59% ejaculates approved); the pattern and criteria were the same used in theroutine of the commercial semen Center. 68 gels were carried through by 2DE of SP samples indicated 225 detected spots with protein different amount (VION) comparing. Comparing bull´s semen freezability and VION of each spot found difference among 2 spots from High and Low, even considering just spots with % of detection frequency bigger than 75%. The taurine bulls demonstrated more homogeneous profile when comparing with zebu bulls, considering number and frequency of appearance of spots. The results showed that proteomics can be a useful tool to predict the semen freezability, but we´ll need to study better the interactions between sperm membrane, seminal plasma and extender to comprehend better which proteome phenotype interfere positive or negatively in the semen freezability.

O objetivo do presente estudo foi avaliar se a composição proteica de plasma seminal, verificada por eletroforese bidimensional (2DE), pode interferir na congelabilidade do sêmen de touros, e se existe a possibilidade de predizer tal característica em touros doadores de sêmen. Amostras de 20 touros (diferentes raças) com mínimo de três anos de histórico de produção em Central de Coleta de sêmen foram coletadas. Todos os touros tinham de 2 a 7 anos de idade. A congelabilidade do sêmen foi calculada por no de ejaculados aprovados pós-descongelação / no de ejaculados submetidos à congelação (depois do crivo do padrão de qualidade da empresa para aprovar o ejaculado para ser submetido a congelação). Os touros foram divididos em três grupos: ALTA (=>80% aproveitamento de ejaculados encaminhados à congelação); MÉDIA (>60 a 79% ejaculados aprovados) e BAIXA (=<59% ejaculados aprovados). Sessenta e oito corridas de géis 2DE foram avaliadas nas amostras de plasma seminal, que detectaram 225 spots com quantidade de proteína diferente entre as mesmas (VION). Pela estatística utilizada, comparando-se a congelabilidade do sêmen com quantidade de proteína detectada de cada spot (VION), contatouse que 2 spots apresentaram-se com quantidade significativa de proteína diferente entre os dois grupos de congelabilidade do sêmen, considerando spots que foram detectados em mais de 75% das amostras corridas. Os touros taurinos apresentaram perfil proteico mais homogêneo quando comparado com os zebuínos, considerando número e frequência de spots. Tais resultados demonstram um potencial para uso da proteômica como ferramenta preditiva da congelabilidade do sêmen de touros, porém com necessidade de maiores estudos, principalmente para melhor compreensão de interações proteicas entre membrana espermática, plasma seminal e diluidores de sêmen utilizados, já que podem interferir no fenótipo proteico avaliado e na congelabilidade do sêmen, seja de forma positiva ou negativa.

Presencia de epimastigotes de Trypanosoma cruzi en el plasma seminal de ratones con infección aguda / Trypanosoma cruzi epimastigotes in seminal plasma in acute infected mice

Se reporta la presencia de formas evolutivas de Trypanosoma cruzi en el plasma seminal (PS) de ratones NMRI, inoculados por vía subcutánea con 2x104 tripomastigotes metacíclicos cepa P6 obtenidos de Rhodnius prolixus. Al separar las muestras de sangre a los 15 días pos-infección, un ratón eyaculó espontáneamente y el examen directo del PS reveló la presencia de formas epimastigotes de T. cruzi en activo movimiento mezclados con los espermatozoides. Las preparaciones del PS coloreadas con Giemsa, mostraron formas epimastigotes libres y en división, tripomastigotes y amastigotes extracelulares y dentro de células fagocíticas. Los resultados de este estudio revelaron los diferentes estadios de T. cruzi en el PS de ratón, con morfogénesis similar a como ocurre en el insecto vector. El parasitismo encontrado en el PS del ratón con infección aguda, aporta importante información epidemiológica sobre la vía de transmisión sexual de T. cruzi, principalmente entre la población de reservorios silvestres que se encuentran en áreas endémicas y no endémicas para la enfermedad de Chagas.

We report the presence of evolving forms of Trypanosoma cruzi in the seminal plasma (SP) of NMRI mice subcutaneously inoculated with 2x104 metacyclic trypomastigotes obtained from P6 strain Rhodnius prolixus. When taking blood samples at 15 days post-infection, the mouse spontaneously ejaculated and the direct SP exam revealed the presence of active epimastigotes of T. cruzi mixed with spermatozoids. SP preparations stained with Giemsa showed free and dividing epimastigotes, extracellular trypomastigotes and amastigotes, as well as, within phagocytic cells. The results showed the presence of T. cruzi at the different stages of its life cycle in the mouse PS, observing similar morphogenesis in the PS to the one known in the insect vector. The parasitism found in the SP of this mouse with acute infection, provides important epidemiological information about the T. cruzi pathway of sexual transmission, mainly among the population of wild reservoirs found in endemic and non-endemic areas for Chagas`disease.

Topografia de ligação de proteínas do plasma seminal à membrana de espermatozoides bovinos epididimários e ejaculados / Binding patterns of seminal plasma plasma proteins on bovine epididymal and ejaculated sperm membrane

The present study was designed to investigate the topographical distribution of seminal plasma (SP) proteins on epididymal and ejaculated bovine sperm. Using immunocytochemistry and confocal microscopy the binding patterns of bovine SP proteins BSP-A3, albumin, transferrin, prostaglandin D-synthase (PGDS) and nucleobindin in ejaculated and cauda epididymal sperm from adult bulls were evaluated. Experiments were performed using sperm from 5 males. Data showed a positive signal, only detected for anti-PGDS, in the acrosomal cap of epididymal and ejaculated sperm. In ejaculated sperm, a very weak signal for nucleobindin 2 in the midpiece and equatorial regions was detected, using the anti-rat nucleobindin. BSP-A3 was detected on all sperm regions studied, with a more evidenced signal in acrosome and midpiece. However, no binding was detected for albumin or transferrin in neither epididymal nor ejaculated sperm. In conclusion, PGDS, BSP-A3 and nucleobindin interact directly with bovine sperm, with specific topographic distribution. These findings may add to the knowledge of how these proteins modulate sperm functions, thus providing fundamental support for studies designed to evaluate how they influence sperm functions.

Investigou-se a distribuição topográfica da ligação de proteínas seminais à membrana de espermatozoides bovinos epididimários e ejaculados. Utilizando imunocitoquímica e microscopia confocal, avaliaram-se a topografia de ligação das proteínas BSP-A3, albumina, transferrina, prostaglandina D sintetase (PGDS) e nucleobindina 2 (NUC2) à membrana espermática. Os experimentos foram realizados utilizando espermatozoides de cinco touros. Os resultados mostraram que, para espermatozoides epididimários, somente detectou-se a PGDS na crista do acrossomo. Nos espermatozoides ejaculados, a PGDS ligou-se de forma mais intensa à crista acrossômica, enquanto a NUC2 apresentou sinal bastante fraco na peça intermediária e região equatorial. A BSP-A3 ligou-se a todas as regiões estudadas, de forma mais intensa na peça intermediária e acrossomo. Nenhum sinal foi detectado para albumina ou transferrina, seja em espermatozoides epididimários ou ejaculados. Concluiu-se que PGDS, BSP-A3 e NUC2 interagem diretamente com espermatozoides bovinos, e mostrou distribuição topográfica específica. Estes achados permitem melhor compreensão sobre o papel desempenhado por essas proteínas na regulação da função espermática e da fertilidade.

Heparin-binding proteins of seminal plasma in Nellore bulls / Proteínas ligadoras à heparina do plasma seminal em touros Nelore

The aim of this study was to identify heparin-binding proteins (HBPs) in seminal plasma of Nellore (Bos taurus indicus) bulls. Bulls (n=4), 30-36 months old, 500-550kg with satisfactory seminal quality were selected. After the centrifugation, samples of the seminal plasma were pooled and the HBPs were isolated by heparin-affinity chromatography. The recovered HBPs fractions were pooled. One-dimensional sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE) 12.5 percent was performed in vertical minigels. Eight bands with molecular weights ranging from 15 to 63kDa were observed. Two proteins were identified (22 and 25kDa), similar to those previously described in Bos taurus taurus bulls. Other bands identified in this study (39, 53, 58 and 63kDa) have not been previously observed and possibly they are specific to Nellore semen.

O objetivo deste estudo foi identificar proteínas ligadoras à heparina no plasma seminal de touros Nelore (Bos taurus indicus). Para tanto, foram selecionados quatro touros entre 30 e 36 meses de idade e peso aproximado de 500-550kg. Após centrifugação, amostras do plasma seminal foram misturadas e as proteínas ligadoras à heparina foram isoladas por meio da cromatografia por afinidade. As frações após a eluição foram agrupadas para caracterização das bandas protéicas (SDSPAGE, 12,5 por cento). Foram identificadas oito bandas protéicas variando entre 15 e 63kDa. Duas proteínas com 22 e 25kDa foram similares às descritas em touros Bos taurus taurus. Outras proteínas identificadas com 39, 53, 58 e 63kDa ainda não foram descritas e possivelmente sejam específicas para Bos taurus indicus.

Fertilidad en ovejas de pelo inseminadas con semen congelado rediluido con plasma seminal / Fertility in hair sheep inseminated with freeze spermatozoa rediluited with seminal plasma

El objetivo del presente estudio fue determinar la viabilidad espermática del semen congelado rediluido con plasma seminal a través de la fertilidad de 146 ovejas de pelo, inseminadas vía cervical e intrauterina. La fertilidad se midió en dos tiempos; retorno a celo a los 17 días postinseminación y diagnóstico de gestación por ultrasonografia a los 45 días postinseminación. Los datos de fertilidad se analizaron mediante el test de Ji-cuadrado. Los resultados obtenidos muestran que la adición del plasma seminal en el semen fresco no mejora la fertilidad (P>0,05) obtenida vía cervical e intrauterina, por el contrario, el semen congelado rediluido con plasma seminal, tanto en su aplicación cervical como intrauterina, mejora (P<0,01) los índices de fertilidad en un 41 vs 20% y un 50 vs 16%, respectivamente, a los 17 días postinseminación, resultados que persisten a los 45 días de gestación. Estos resultados permiten concluir que la redilución del semen congelado con plasma seminal proporciona una mayor recuperación de los espermatozoides dañados por choque frío, lo cual se ve reflejado en un mayor porcentaje de fertilidad.

The objective of this study was to determine the spermatozoa viability of the frozen semen rediluted with seminal plasma through the fertility of 146 hair sheep inseminated cervical and intrauterine way. The fertility was measured in two times; return to estrus to the 17 days postinsemination and pregnancy diagnostic by ultrasound scanning to the 45 days postinsemination. The data of fertility were analyzed by means of the Chi-Square test. The obtained results showed that the addition of the seminal plasma in the semen fresh does not improve the fertility (P>0.05) obtained cervical and intrauterine way, on the contrary, the semen frozen rediluted with seminal plasma, so much in its cervical application as intrauterine, improvement (P<0.01) the fertility in a 41% and 50%, respectively to the 17 days postinsemination, results that persist to the 45 days of gestation. The results permit to conclude that the rediluted of the frozen semen with seminal plasma provides a greater recovery of the spermatozoa damaged by cold shock, which it is seen reflected in a greater percentage of fertility.