Efecto in vitro del D-003 sobre la actividad enzimática de la 5-lipoxigenasa (5-LOX) / Effect in vitro of D-003 on 5-lipooxygenase (5-LOX) enzyme activity

Introducción: el D-003, mezcla de ácidos alifáticos primarios superiores purificada de la cera de la caña, inhibe la síntesis de colesterol. Trabajos recientes han demostrado que el D-003 resulta efectivo en modelos experimentales de osteoartritis y que inhibe la actividad de las enzimas COX1 y COX2, preferentemente la COX1, sin producir gastrotoxicidad. Ha sido referido que los inhibidores duales de las enzimas COX y 5-LOX presentan efectos antinflamatorios desprovistos de gastrotoxicidad o que incluso, pueden resultar gastroprotectores. De acuerdo con estos antecedentes, el D-003 podría ser un inhibidor dual de dichas enzimas. Objetivo: investigar el efecto in vitro del D-003 sobre la actividad enzimática de la 5-LOX, utilizando la fracción citosólica de leucocitos polimorfonucleares de ratas. Métodos: se utilizaron las condiciones de ensayo siguientes: fracción citosólica (50 µg de proteína) disuelta en solución reguladora borato 0,2 mol/L (pH 9) y ácido linoleico (7,8-250 mmol/L) como sustrato, ensayándose muestras paralelas incubadas con Tween-20/H2O (2 por ciento) (vehículo), D-003 (0,6-6 000 µg/mL) o extracto de Perna canaliculus (50 µg/mL) (sustancia de referencia). Se evaluó la actividad enzimática mediante el cambio de absorbancia a 234 nm producido por la formación de dienos conjugados y medido en espectrofotómetro UV-visible. Resultados: la adición de D-003 produjo una inhibición dosis dependiente de la actividad enzimática de la 5-LOX (r= 0,975; p< 0,05) (CI50= 23,06 µg/mL) in vitro. La magnitud de esta inhibición fue moderada, ya que la inhibición máxima, alcanzada a partir de 1 250 µg/mL, resultó de solo un 30 por ciento. Conclusiones: el estudio demuestra que el D-003 es capaz de inhibir la actividad enzimática de la 5-LOX in vitro, pero moderadamente(AU)

Introduction: D-003, a mix of higher primary aliphatic acids purified from sugarcane, inhibits cholesterol synthesis. Recent studies have demonstrated that D-003 is effective in experimental models of osteoarthritis and inhibits the enzymatic activities of COX1 and COX2, mainly that of COX1, without causing gastrotoxicity. It has been mentioned that the dual inhibitors of COX and 5-LOX enzymes present with anti-inflammatory effects and no gastrotoxicity or even they can have gastroprotective actions. According to this background, D-003 could be a dual inhibitor of COX and 5-LOX enzymes. Objective: to study the effects of D-003 on the enzymatic activity of 5-LOX in vitro, by using the cytosolic fraction of polymorphonuclear leukocytes of rats. Methods: the following testing conditions were used: cytosolic fraction (50 µg of protein) dissolved into 0,2 mol/L borate buffer solution (pH 9) and linoleic acid (7,8-250 mmol/L) as substrate. Parallel samples were incubated with Tween-20/H2O (2 percent) only (vehicle), D-003 (0,6-6 000 µg/mL) or green-lipped mussel (Perna canaliculus) extract (50 µg/mL) (reference substance). The enzymatic activity, evaluated by the conjugated diene formation, was assessed by the absorbance changes at 234 nm (5-LOX) measured in a UV-visible spectrophotometer. Results: by adding D-003, produced a dose dependent (r= 0,975; p< 0,05) (IC50= 23,06 µg/mL) in vitro inhibition of 5-LOX enzyme activity. The size of the inhibition was moderate, since the maximal inhibition, achieved from 1 250 µg/mL) on was only 30 percent. Conclusions: this study demonstrates that D-003 may inhibit in vitro the 5-LOX enzymatic activity, but in a moderate way(AU)

Efectos del D-003, mezcla de àcidos alifáticos en el ensayo de aberraciones cromosómicas in vivo / Effects of D-003, a mixture of aliphatic acids in a trial of in vivo chromosomal aberrations

El D-003 es una mezcla de àcidos alifàticos primarios de alto peso molecular purificada de la cera de caña de azúcar, cuyo componente principal es el àcido octacosanoico, con efectos antiosteoporóticos, hipolipemiantes y antioxidantes. El objetivo de este trabajo fue determinar si el tratamiento oral con D-003 durante 14 días induce aberraciones cromosómicas in vivo en médula ósea de ratones. Se formaron 5 grupos experimentales (5 ratones/grupo/sexo): un grupo control solvente, tres tratados con D-003 (500, 1 000 y 2 000 mg/kg) y un control positivo tratado con ciclofosfamida (50 mg/kg, ip), 24 h antes del sacrificio. El D-003 no aumentó la frecuencia de aparición de aberraciones (estructurales o numéricas) ni modificó el índice mitótico con respecto a los controles negativos, mientras que la ciclofosfamida, como era esperado sí aumentó ambas frecuencias. En conclusión, el D-003 no presentó potencial genotóxico ni citotóxico sobre las células de la médula ósea de ratones NMRI.

The D-003 is a mixture of high-molecular weight primary aliphatic acids purified from the sugar cane wax, whose main component is the octacosanic acid with antiosteoporotic, hypolipidemic and antioxidant effects. The aim of present paper was to determine if the oral treatment with D-003 for 14 days induces in vivo chromosomal aberrations in bone marrow of mice. Animals were randomized into 5 groups (5 mice/group/sex): one solvent control group, 3 D-003- treated with Ciclophosphamide (50 mg/kg), intraperitoneal route) 24 hours before sacrifice. D-003 neither increase the frequency of aberrations appearance (Structural or numerical) nor modified the mitotic index with regard to negative controls, whereas the cyclophosphamide increase both frequencies as expected. In conclusion, the D-003 has neither genotoxic potential nor cytotoxic on the bone marrow cells of NMRI mice.