Terapia a laser de baixa potência no manejo da cicatrização de feridas cutâneas / Low-level laser therapy in the management of skin wound healing

Introdução: O reparo tecidual e a cicatrização de feridas cutâneas são processos complexos que envolvem uma série de eventos dinâmicos, incluindo coagulação, inflamação, formação de tecido de granulação, contração da ferida e remodelação tecidual. A necessidade de cuidar de pacientes com dificuldades na cicatrização de feridas é um desafio crescente e requer estratégias inovadoras. Uma abordagem que se destaca no tratamento dessas lesões é a laserterapia de baixa potência. Este estudo tem como objetivo demonstrar a aplicabilidade e os resultados de um protocolo de laserterapia de baixa potência no manejo da cicatrização de feridas cutâneas. Métodos: Trata-se de estudo retrospectivo de revisão de casos relatando o uso de laser no tratamento de feridas cutâneas em um centro único. Resultados: Avaliamos os resultados do uso de laserterapia de baixa potência e relatamos cinco casos de pacientes com feridas cutânea que não apresentaram melhora com o tratamento convencional. As lesões eram localizadas em sítios diversos, com lesão no tronco, membro superior e membro inferior. Os cinco casos apresentaram uma boa resposta com a terapia a laser, evoluindo com a cicatrização das feridas em um curto período de tempo, com período médio de cicatrização de 48 dias. Conclusão: Conclui-se que a laserterapia de baixa potência quando aplicada sobre feridas cutâneas sugere uma ação benéfica, promissora e tem um potencial para aumentar as opções terapêuticas disponíveis para o cirurgião, porém, como relatamos um número de cinco casos, há necessidade de mais estudos para verificar a eficiência do laser em feridas.

Introduction: Tissue repair and skin wound healing are complex processes that involve a series of dynamic events, including coagulation, inflammation, granulation tissue formation, wound contraction and tissue remodeling. The need to care for patients with difficulties in wound healing is a growing challenge and requires innovative strategies. One approach that stands out in the treatment of these injuries is low-power laser therapy. This study aims to demonstrate the applicability and results of a low-power laser therapy protocol in the management of skin wound healing. Methods: This is a retrospective case review study reporting the use of laser in the treatment of skin wounds in a single center. Results: We evaluated the results of the implementation of this low-power laser therapy protocol and reported five cases of patients with skin wounds that did not improve with conventional treatment. The lesions were located in different places, with lesions on the trunk, upper limb and lower limb. The five cases showed a good response to laser therapy, evolving with wound healing in a short period of time, with an average healing time of 48 days. Conclusion: It is concluded that low power laser therapy when applied to skin wounds suggests a beneficial, promising action and has the potential to increase the therapeutic options available to the surgeon, however as we report a number of five cases, further studies are needed for check laser efficiency on wounds.

Valproic acid and bladder healing: an experimental study in rats / Ácido valpróico e cicatrização em bexiga: estudo experimental em ratos

ABSTRACT Purpose: to recognize the effects of valproic acid (VPA), an epigenetic drug, on the bladder healing process, in rats. Method: twenty male Wistar rats were divided in two groups: experimental (A), treated with VPA (150mg/Kg/day), and control (B) with 0.9% sodium chloridrate. Healing was analyzed on the third and seventh days, evaluating the inflammatory reaction, collagen synthesis and angiogenesis. Results: inflammatory reaction on the third day was minimal and acute in both groups. On the seventh day, it was subacute in both groups, moderate intensity in group A and minimal in group B (p=0.0476). Collagen III intensity, marked by immunohistochemistry, was similar in both groups. Collagen I intensity on the third day was similar in both groups, but on the seventh day it was higher in experimental than control (p=0.0476). Collagen evaluation by picrosiriusred allowed to verify that the presence of collagen III was similar in both groups (p=0.3312) on the third day, and it was higher in control on the seventh day (p=0.0015). Collagen I showed similarity on the third day (p=0.3100), and it was higher in control on the seventh day (p=0.0015). Vessel marked with anti-SMA counting showed fewer vessels on the third (p=0.0034) and seventh day (p=0.0087) in experimental group. The lower intensity of angiogenesis was confirmed with anti-CD34, on the third day (p=0,0006) and on the seventh day (p=0,0072). Conclusion: VPA determined alterations in the bladder healing process, in rats, with lower collagen density and less angiogenic activity, but without compromising the integrity of the organ.

RESUMO Objetivo: reconhecer os efeitos do ácido valpróico (VPA), uma droga epigenética, no processo de cicatrização da bexiga, em ratos. Método: vinte ratos Wistar machos foram divididos em dois grupos: experimental (A), utilizando VPA (150mg/Kg/dia), e controle (B), tratados com cloreto de sódio 0,9% por gavagem. A cicatrização da bexiga foi analisada no terceiro e sétimo dia, estudando-se a reação inflamatória, síntese de colágeno, reepitelização e angiogênese. Resultados: a reação inflamatória no terceiro dia foi mínima e aguda em ambos os grupos. No sétimo dia, foi subaguda em ambos os grupos com intensidade moderada no grupo A e mínima no grupo B (p=0,0476). A intensidade do colágeno III, marcada pela imuno-histoquímica, foi semelhante nos dois grupos, nos dois tempos estudados. A intensidade de colágeno I no terceiro dia foi semelhante nos dois grupos, e maior no sétimo dia no grupo experimental (p=0,0476). A avaliação do colágeno pelo picrosiriusred mostrou que a presença de colágeno III foi semelhante em ambos os grupos (p=0,3312) no terceiro dia, e maior no controle no sétimo dia (p=0,0015). O colágeno I foi semelhante no terceiro dia (p=0,3100), e maior no controle no sétimo dia (p=0,0015). A contagem de vasos marcados pelo anti-SMA mostrou menos vasos no terceiro (p=0,0034) e sétimo dia (p=0,0087) no grupo experimental, confirmado pelo anti-CD34, no terceiro (p=00006) e no sétimo dia (p=0,0072). Conclusão: o VPA determinou alterações no processo de cicatrização da bexiga, em ratos, com menor densidade de colágeno e menor atividade angiogênica, mas sem comprometer a integridade do órgão.

A Adiponectina Previne a Reestenose pela Inibição da Proliferação Celular em um Modelo de Enxerto Venoso em Ratos / Adiponectin Prevents Restenosis Through Inhibiting Cell Proliferation in a Rat Vein Graft Model

Resumo Fundamento: O enxerto de bypass na artéria coronária (CABG) continua a ser eficiente como tratamento para pacientes portadores de doença arterial coronariana; entretanto, o enxerto venoso tende a apresentar reestenose ou oclusão. A adiponectina (ADP) é uma proteína hormonal plasmática com a função de regular a proliferação celular. Objetivo: Foram utilizadas duas doses diferentes da proteína ADP em um modelo de enxerto venoso em ratos para estimular a alteração do enxerto venoso. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da ADP sobre a reestenose em enxerto venoso. Métodos: Veias jugulares autólogas foram implantadas como enxertos interposicionais de carótida pela técnica de anastomose de manga em ratos Sprague Dawley. A adiponectina (2,5 μg e 7,5 μg) foi entregue ao enxerto venoso por bypass de forma perivascular, suspensa em gel Pluronic-F127 a 30%. O grupo tratado apenas com bypass e o grupo tratado com gel veículo carregado apenas com Pluronic funcionaram como controle. Foram feitas comparações com análise de via única de variância e teste post-hoc, com p <0,05 sendo considerado significativo. Resultados: A proliferação celular (índice de PCNA) foi significativamente baixa no grupo tratado com adiponectina em comparação com o grupo de controle e o grupo tratado com o gel veículo na íntima e na adventícia dos enxertos a partir do dia 3 (p <0,01). VCAM-1 e ICAM-1 avaliados por imuno-histoquímica diminuíram significativamente em enxertos venosos tratados com adiponectina na quarta semana (p <0,01). O tratamento de enxertos venosos com gel carregado com adiponectina reduziu a espessura da íntima, da média e da adventícia, em comparação com os enxertos de controle e tratados com gel veículo no dia 28 (p <0,01). Conclusões: Este estudo oferece evidências adicionais do possível papel terapêutico da adiponectina na modulação de lesão vascular e seu reparo.

Abstract Background: Coronary artery bypass grafting (CABG) continues to be an effective therapy for coronary artery disease patients, but the vein graft is prone to restenosis or occlude. Adiponectin (ADP) is a plasma hormone protein with the function of regulating cell proliferation. Objective: This study used two different doses of ADP protein in a rat vein graft model to stimulate vein graft change. The aim of our study was to investigate the effect of ADP on vein graft restenosis. Methods: Autologous jugular veins were implanted as carotid interposition grafts through the anastomotic cuff technique in Sprague Dawley rats. Adiponectin (2.5 μg and 7.5 μg) was delivered to the vein bypass grafts in a perivascular fashion, suspended in a 30% Pluronic-F127 gel. No treatment (bypass only) and vehicle loaded Pluronic gel served as controls. Comparisons were made with one-way analysis of variance and a post-hoc test, with p < 0.05 considered significant. Results: Cell proliferation (PCNA index) was significantly low in adiponectin-treated versus control and vehicle-gel-treated grafts, both in intima and adventitia, as of day 3 (p < 0.01). VCAM-1 and ICAM-1 evaluated by immunohistochemistry significantly down-regulated in the adiponectin-treated vein grafts in the fourth week (p <0.01). Treatment of vein grafts with adiponectin-loaded gels reduced intimal, media, and adventitia thickness when compared with the control and vehicle-gel-treated vein grafts at day 28 (p < 0.01). Conclusions: Our studies provide further support for the potential therapeutic role of adiponectin in modulating vascular injury and repair.

The role of diffusion-weighted mri of patients with spine metastases / O papel da rm ponderada por difusão de pacientes com metástases da coluna vertebral / El papel de la rm ponderada por difusión de pacientes con metástasis de la columna vertebral

ABSTRACT Objective: The role of diffusion-weighted MRI in differential diagnostics and predicting the survival of patients with spine metastases was studied. Methods: The study included data from MRI and morphological studies of 23 patients with spine metastases. Results: The values obtained for the apparent diffusion coefficient (ADC) of tumors were compared with their histological type, cell density and Ki-67 proliferation index. The effect of ADC values on overall patient survival was also assessed. A reliable inverse correlation was established between ADC values and Ki-67 proliferation index for various types of spine metastases (r=-0.753, p=0.017). The dependence of ADC values and overall survival of patients with metastases in the spine is shown. Conclusion: The technique of diffusion-weighted MRI can be used as part of a comprehensive assessment in the preoperative planning of surgical treatment, and as a prognostic factor of overall survival for this group of patients. Level of Evidence II. Prognostic retrospective study,

RESUMO Objetivos: O papel da RM ponderada por difusão nos diagnósticos diferenciais e na previsão da sobrevida dos pacientes com metástases da coluna vertebral foram analisados. Métodos: O estudo incluiu dados da RM e estudos morfológicos de 23 pacientes com metástases da coluna vertebral. Resultados: Os valores obtidos para o coeficiente de difusão aparente (ADC) dos tumores foram comparados com seu tipo histológico, densidade celular e índice de proliferação Ki-67. Além disso, avaliou-se o efeito dos valores de ADC na sobrevida global dos pacientes. Foi estabelecida uma correlação inversa confiável entre os valores de ADC e o índice de proliferação Ki-67 para diversos tipos de metástases da coluna vertebral (r =-0,753, p=0,017). A dependência dos valores de ADC e a sobrevida global dos pacientes com metástases na coluna vertebral é demostrada. Conclusão: A técnica da RM ponderada por difusão pode ser utilizada como parte de uma avaliação abrangente do planejamento pré-operatório do tratamento cirúrgico e como fator prognóstico da sobrevida global para esse grupo de pacientes. Nível de Evidência II. Estudo retrospectivo prognóstico.

RESUMEN Objetivos: Fueron analizados el papel de la RM ponderada por difusión en los diagnósticos diferenciales y en la previsión de la sobrevida de los pacientes con metástasis de la columna vertebral. Métodos: El estudio incluyó datos de RM y estudios morfológicos de 23 pacientes con metástasis de la columna vertebral. Resultados: Los valores obtenidos para el coeficiente de difusión aparente (ADC) de los tumores se compararon con su tipo histológico, densidad celular e índice de proliferación Ki-67. Además, se evaluó el efecto de los valores de ADC en la sobrevida global de los pacientes. Se estableció una correlación inversa confiable entre los valores de ADC y el índice de proliferación Ki-67 para diversos tipos de metástasis de la columna vertebral (r =-0,753, p=0,017). Es demostrada la dependencia de los valores de ADC y la sobrevida global de los pacientes con metástasis en la columna vertebral. Conclusión: La técnica de RM ponderada por difusión puede utilizarse como parte de una evaluación integral de la planificación preoperatoria del tratamiento quirúrgico y como un factor pronóstico de la sobrevida global para este grupo de pacientes. Nivel de Evidencia II. Estudio retrospectivo pronóstico.

Hsp27 expression and ratio between cell proliferation rate and apoptosis in breast cancer with and without axillary metastases / Expressão de Hsp27 e razão entre os índices de proliferação celular e apoptose em carcinoma de mama com e sem metástases axilares

ABSTRACT Introduction: The involvement of the immune system in the process of neoplasms has been increasingly studied due to its potential in antitumor therapy. Objectives: To evaluate the expression of heat shock protein 27 (Hsp27) in tissue samples from invasive ductal carcinomas with and without the presence of axillary sentinel lymph node metastasis, as well as to study the relationship of cell proliferation rate (Ki-76) and apoptosis (caspase 3) compared with samples of fibrocystic change in breast tissue. Methods: Cross-sectional study with tissue samples collected at the Hospital São Lucas, between September 2001 and October 2009, divided into three groups: 1. fibrocystic breast change (control group); 2. invasive ductal carcinoma of the breast with presence of lymph node metastasis; and 3. absence of lymph node metastasis. Results: Increased Hsp27 expression was observed in the group of non-metastasis carcinomas when compared to the other groups. There was difference in Ki-67 protein expression and in the ratio between cell proliferation and apoptosis among the carcinoma groups compared to the control group. However, there was no significant difference between the carcinoma groups or between the expressions of caspase 3 in the three groups, when compared to each other. Conclusion: Quantitative analysis of Hsp27 demonstrated increased protein expression in primary neoplasm tissues and in lymph nodes in carcinomas without axillary sentinel lymph node metastasis. Although the methodology and the number of cases do not allow concluding that this behavior in metastatic disease is a constant finding, this justifies the need to evaluate this finding in future studies.

RESUMO Introdução: O envolvimento do sistema imunológico no processo de neoplasias vem sendo cada vez mais estudado devido ao seu potencial em terapia antitumorais. Objetivos: Avaliar a expressão de heat shock protein 27 (Hsp27) em amostras teciduais de carcinomas ductais invasores com e sem presença de metástase em linfonodo sentinela axilar, bem como estudar a relação da taxa de proliferação celular (Ki-76) e apoptose (caspase 3) em comparação com amostras de alteração fibrocística no tecido mamário. Métodos: Estudo transversal com amostras de tecidos coletados no Hospital São Lucas, entre setembro de 2001 e outubro de 2009, divididas em três grupos: 1. alteração fibrocística da mama (grupo-controle); 2. carcinoma ductal invasor de mama com presença de metástase linfonodal; e 3. sem presença de metástase linfonodal. Resultados: Observou-se expressão aumentada da Hsp27 no grupo de carcinomas sem metástase, quando comparado com os demais grupos. Houve diferença na expressão da proteína Ki-67 e na razão entre proliferação celular e apoptose entre os grupos com carcinoma quando comparados com o grupo-controle. Contudo, não houve diferença significativa entre os grupos com carcinoma ou entre a expressão de caspase 3 nos três grupos, quando comparados entre si. Conclusão: A análise quantitativa da Hsp27 demonstrou maior expressão da proteína nos tecidos da neoplasia primária e nos linfonodos em carcinomas sem metástase em linfonodo sentinela axilar. Embora a metodologia e o número de casos não permitam concluir que esse comportamento na doença metastática seja um achado constante, justifica-se a necessidade de avaliar esse achado em estudos futuros.

Tissue immunostaining of growth, pro- and anti-apoptotic biomarkers in myocardial samples from newborns with hypoxic injury / Imunoexpressão tecidual de biomarcadores de crescimento, pró e antiapoptóticos, em amostras de miocárdio de recém-nascidos com lesão hipóxica

ABSTRACT Introduction: Despite the importance of cardiovascular diseases to population health, there is limited knowledge about how neonatal hypoxia, related or not with prematurity, may cause cell injury to cardiomyocytes in the neonatal period and what the consequences to adult life are. Objective: To analyze the tissue immunostaining of biomarkers involved in the process of cell death and growth in the myocardium of hypoxic newborns. Method: Human myocardium samples (left ventricle) from necropsies of hypoxic newborns were organized in multi-sample blocks and submitted to immunohistochemical reactions by the immunoperoxidase technique. The primary antibodies used were anti-B-cell lymphoma 2 (Bcl2)-associated X protein (BAX), anti-mitofusin-2 (Mfn2), anti-tumor necrosis factor receptor-associated protein 1 (TRAP1), anti-Bcl2, anti-angiotensin II, anti-serine/threonine (Akt) 1, anti-Akt2 and anti-Akt3. Tissue immunostaining data were correlated with clinical data (gender, weight, gestational age, first-minute and fifth-minute Apgar score, arterial blood pH and survival time) and pathological data (death cause and primary disease). Results: The average tissue immunostaining of BAX was 25.61%; TRAP1 was 7.86%, angiotensin II was 1.24%, Akt2 was 16.35% and Akt3 was 20.61%. The biomarkers Akt1, Mfn2 and Bcl2 presented very low or absent tissue immunostaining in most cases of this study. There was no correlation between the average biomarker tissue immunostaining and the survival time or any other clinical or pathological factor studied. Conclusion: These data seem to strengthen the coordinated action of the pro-apoptotic, anti-apoptotic and cell growth biomarkers in the myocardium of hypoxic newborns in order to determine the degree of lesion or cell death and the tissue recovery capacity.

RESUMO Introdução: Apesar da importância de novas descobertas em patofisiologia das doenças cardiovasculares para a saúde da população, ainda existe pouco conhecimento sobre como a hipóxia neonatal, relacionada ou não com a prematuridade, pode causar lesão celular nos cardiomiócitos no período perinatal e quais são as consequências para a vida adulta. Objetivo: Analisar a imunoexpressão tecidual de biomarcadores envolvidos no processo de morte e crescimento celular em miocárdio de recém-nascidos hipoxemiados. Método: Amostras de miocárdio humano (ventrículo esquerdo), provenientes de necrópsias de neonatos hipoxemiados, foram organizadas em blocos multiamostrais e submetidas a reações imuno-histoquímicas pela técnica da imunoperoxidase. Os anticorpos primários utilizados foram antilinfoma de células B tipo 2 (Bcl2), antiproteína X associada ao Bcl2 (BAX), antimitofusina 2 (Mfn2), antiproteína 1 relacionada com o receptor ao fator de necrose tumoral (TRAP1), antiangiotensina II, antiproteína quinase 1 (Akt1), antiproteína quinase 2 (Akt2) e antiproteína quinase 3 (Akt3). Os dados de imunoexpressão tecidual foram correlacionados com os dados clínicos (gênero, peso, idade gestacional, índice de Apgar do primeiro e quinto minuto, pH do sangue arterial e sobrevida) e anatomopatológicos (causa da morte e doença de base). Resultados: A média de imunoexpressão tecidual do BAX foi 25,61%; do TRAP1, 7,86%; da angiotensina II, 1,24%; do Akt2, 16,35%; e do Akt3, 20,61%. Os biomarcadores Akt1, Mfn2 e Bcl2 apresentaram imunoexpressão tecidual muito baixa ou ausente na maioria dos casos deste estudo. Não houve correlação da média de imunoexpressão tecidual dos biomarcadores com o tempo de sobrevida ou outro fator clínico ou anatomopatológico estudado. Conclusão: Esses dados parecem fortalecer a ação coordenada de biomarcadores pró e antiapoptóticos e de crescimento celular em miocárdio de recém-nascidos hipoxemiados a fim de determinar o grau de lesão ou morte celular e a capacidade de recuperação tecidual.

Estudo in vitro do padrão de crescimento e proliferação celular de pré-osteoblastos humanos com bio-oss® e genox® / In vitro study of growth and proliferation of human pre-osteoblast on bio-oss® and genox®

Objetivo: O presente trabalho avaliou o padrão de crescimento, o índice de proliferação celular e morfologia de pré-osteoblastos humanos cultivados com Bio-Oss® e GenOx®. Material e Método: Pré-osteoblastos humanos MC3T3-E1 foram cultivados em contato com os biomateriais por 1, 24 e 72horas para avaliação da proliferação celular, medido com o teste colorimétrico MTS. Para a avaliação do padrão de crescimento e da morfologia celular, as células foram cultivadas por 24 e 72 horas, respectivamente e avaliadas sob microscopia de contraste de fase e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Para verificação de diferenças no crescimento celular entre os grupos foi utilizado o teste one-way de ANOVA, sendo considerados significantes valores de p<0,05. Resultados: A proliferação celular foi maior na primeira hora nas amostras em contato com os biomateriais em comparação ao grupo controle. Nos períodos de 24 e 72 horas de cultivo celular, a curva de crescimento não mostrou diferença estatisticamente significante entre os grupos (p>0.05). Na microscopia de contraste de fase observou-se que as células cresceram em proximidade aos biomateriais, iniciando a formação da monocamada de maneira semelhante. Quando analisadas no MEV, as células cultivadas sobre os biomateriais apresentaram-se com formato fusiforme e núcleo arredado. Conclusão: Com a comparação do comportamento biológico de Bio-Oss® e GenOx®, realizada in vitro neste estudo, pôde-se observar que apesar das diferenças físico-químicas, o padrão, índice de crescimento e morfologia celular de Bio-Oss® e GenOx® se mostraram semelhantes, e que ambos materiais são biocompatíveis e representam uma boa opção como substitutos ósseos.

Objective: The present study aimed to evaluate the growth pattern, cell proliferation index and morphology of human preosteoblasts cultured with Bio-Oss® and GenOx®. Material and Methods: MC3T3-E1 human pre-osteoblasts were cultured in contact with biomaterials for 1, 24 and 72 hours for the cell proliferation assay with the colorimetric test MTS. For the growth pattern and cell morphology analysis, the cells were cultured for 24 and 72 hours, respectively, and evaluated under phase contrast microscopy and scanning electron microscopy. To verify differences in cell growth among the groups, the one-way ANOVA test was used (p <0.05). Results: In the first hour of cell culture the cell proliferation was pronounced in samples in contact with the biomaterials. At 24 and 72 hours of cell culture, no significant differences between the groups was observed in respect of cell proliferation. In phase contrast microscopy it was noted that the cells grew in proximity to the biomaterials, initiating the formation of a monolayer. When analyzed in the scanning electron microscopy, the cells cultured on the biomaterials presented a fusiform morphology and a round nucleus. Conclusion: Despite the physico-chemical differences between Bio- Oss® and GenOx®, these two biomaterials presented a similar growth index and cell morphology analysis, showing that both biomaterials are biocompatible and represent a good choice as bone substitutes.

Efeito de campos magnéticos estáticos e compensados na proliferação celular in vitro / Proteomics of the effect of compensated and static magnetic fields on cell proliferation in vitro

Inserido no paradigma da transdisciplinaridade, o presente trabalho foi desenvolvido em etapas, com os seguintes objetivos: a) Construir um dispositivo com base de metal não magnético para ímãs permanentes, visando à geração de um Campo Magnético Estático (CME) ou de um Campo Magnético Compensado (CMC); b) Expor culturas de células mesenquimais a um CME e a um CMC, ou a nenhum campo (controle); c) Analisar a influência destes campos na viabilidade e proliferação celular e nos casos em que houve alteração em pelo menos um destes parâmetros, utilizar a análise proteômica como ferramenta para a compreensão dos mecanismos envolvidos. O dispositivo foi construído utilizando aço inoxidável, capaz de gerar dois tipos de Campos Magnéticos: Compensado (CMC) com intensidade de aproximadamente 0 mT e Estático (CME) com intensidade média de 165 mT. Estes campos foram aplicados a culturas de células mesenquimais de medula óssea de camundongos AJ (MSC/AJ), nos períodos de 0, 24, 48, 72 e 96 h (CMC) e 24 h (CME). Os efeitos sobre a proliferação e a viabilidade foram avaliados por método de contagem manual de células com marcação por azul de tripan. A análise proteômica foi realizada para os experimentos com CMC, com o objetivo de descrever as proteínas envolvidas nas alterações encontradas. A exposição ao CMC tendeu a reduzir a proliferação das células de medula óssea MSC/AJ em relação ao controle em 96 h, porém sem diferença significativa, o que poderia estar relacionado a proteínas que inibem a transcrição, como a Forkhead box protein P2 Foxp2. Este mesmo campo aumentou a viabilidade celular em relação ao baseline para todos os tempos experimentais, o que poderia estar relacionado a proteínas relacionadas à ligação ao Ca+2. Esses mecanismos, entretanto, precisam ser estudados mais profundamente para que possam ser comprovados ou não. Já a exposição ao CME levou a uma tendência à diminuição da proliferação e viabilidade celular em relação ao grupo controle, embora sem diferenças significativas, provavelmente por conta do tamanho amostral e tempo de avaliação (24 h).(AU)

Inserted in the transdisciplinarity paradigm, the present work was developed by steps with the following aims: a) To build a device of non-magnetic metal to hold permanent magnets for the generation of a Static Magnetic Field (SMF) or a Compensated Magnetic Field (CMF); b) To expose mesenchimal cells to the SMF and to CMF or to none of the fields (control); c) To analyze the influence of these fields on cell viability and cell proliferation and in the case where it occurred alteration in at least one of these parameters, to use proteomics as a tool for the comprehension of the involved mechanisms. The device was built in stainless steel, able to generate two kinds of Magnetic Fields: Compesated (CMF) with an intensity of nearly zero mT and Static (SMF) with a mean intensity of 165 mT. These fields were applied to bone marrow mesenchimal cell cultures from AJ mice (MSC/AJ), for 0, 24, 48, 72 and 96 h (CMF) and 24 h (SMF) periods. The effects on the proliferation and viability were assessed by tripan blue dying and manual counting of the cells. Proteomics was done for the experiments with CMF, aiming to describe the involved proteins on found alterations. The exposition to CMF tends to reduce the bone marrow cell proliferation of MSC/AJ in relation to control in 96 h, but with no significant difference, which may be related to proteins that inhibit the transcription, like Forkhead box protein P2 Foxp2. This very field raised the cell viability in relation to the baseline for all the experimental times that could be related to proteins connected to Ca2+ binding. However, these mechanisms need more experiments, so they can be confirmed or not. The exposition to the SMF tends to decrease both cell proliferation and viability in relation to the control group, although with no significant difference, probably because of the sample number and the exposition time (24h).(AU)

Immunohistochemical analysis of apoptosis and cell proliferation in lungs of premature infants with chronic lung disease (bronchopulmonary dysplasia) / Análise imuno-histoquímica da apoptose e proliferação celular em pulmões de prematuros com doença pulmonar crônica (displasia broncopulmonar)

ABSTRACT Introduction: The pathophisiology of chronic lung disease (CLD), clinically known as bronchopulmonary dysplasia is not clear. It is believed that protective mechanisms, such as the release of inflammatory mediators and the activation of apoptotic and/or proliferative processes are activated in the lung tissue of premature infants in an attempt to repair tissue injury caused by exposure to oxygen and mechanical ventilation. Objective: Assess the presence of apoptosis and cell proliferation in the lungs of premature infants with CLD, exposed to oxygen and/or mechanical ventilation, by analyzing the proteins expression: proliferating cell nuclear antigen (PCNA), phosphatase and tensin homolog (PTEN), B-cell lymphoma 2 (Bcl-2), tumor necrosis factor receptor family member (Fas), fas-associated protein with death domain (FADD), tumor necrosis factor receptor type 1-associated death domain protein (TRADD), Caspase 3 and Caspase 8. Material and methods: We analyzed 32 infants autopsies at gestational age of less than 34 weeks exposed to oxygen therapy. The study was divided into three groups: "classic" CLD, "new" CLD and "without" CLD. Immunohistochemical analysis was performed. Results and discussion: A higher proliferation rate was observed in infants with CLD suggesting that longer exposure to mechanical ventilation may stimulates cell proliferation. The PTEN and Caspase 8 expressions were higher in the "new" CLD group, compared to the "without" CLD group, indicating that the "new" CLD form is more susceptible to apoptosis. Conclusion: Apoptosis and cell proliferation are involved in the pathophisiology of CLD. The "new" CLD form is more susceptible to apoptosis, while cell proliferation is more evident in the groups with CLD.

RESUMO Introdução: A fisiopatologia da doença pulmonar crônica, clinicamente conhecida como displasia broncopulmonar (DBP), ainda é incerta. Acredita-se que mecanismos de proteção, como liberação de mediadores inflamatórios e ativação de processos apoptóticos e/ou proliferativos, são acionados no tecido pulmonar de prematuros na tentativa de reparar os danos teciduais causados pela exposição ao oxigênio e à ventilação mecânica. Objetivo: Avaliar a existência de apoptose e proliferação celular em pulmões de neonatos prematuros com DBP, expostos ao oxigênio e/ou à ventilação mecânica, por meio do estudo da expressão das proteínas: antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA), homólogo da fosfatase e tensina (PTEN), linfoma de células B 2 (Bcl-2), membro da família de receptor do fator de necrose tumoral (Fas), proteína de domínio de morte associada ao Fas (FADD), proteína do domínio de morte associada ao receptor do fator de necrose tumoral (TRADD), Caspase 3 e Caspase 8. Material e método: Foram analisadas 32 autópsias de recém-nascidos, com idade gestacional inferior a 34 semanas, expostos ao oxigênio. O estudo foi dividido em três grupos: DBP "clássica", DBP "nova" e "sem" DBP; realizou-se estudo imuno-histoquímico. Resultados e discussão: Um índice de proliferação mais elevado foi observado nos recém-nascidos com DBP, sugerindo que o maior tempo de exposição à ventilação mecânica pode estimular a proliferação celular. A expressão das proteínas PTEN e Caspase 8 foram maiores no grupo da DBP "nova" em relação ao grupo sem DBP, indicando que a DBP "nova" é mais suscetível à apoptose. Conclusão: A apoptose e a proliferação celular estão envolvidas na fisiopatologia da DBP, sendo a apoptose mais evidente no grupo com DBP "nova".

Etapas da progressão do carcinoma espinocelular cutâneo: estudo imuno-histoquímico das proteínas p53 e Ki-67 e de marcadores endoteliais / Steps of progression in cutaneous squamous cell carcinoma: an immunohistochemical study of p53 and Ki67 proteins and endothelial markers

As etapas cruciais da carcinogênese cutânea incluem disfunção da proteína supressora tumoral p53 e angiogênese. A contribuição de tais eventos, individual e sinergicamente, ainda não está bem estabelecida na cascata de fenômenos que resultam no carcinoma espinocelular cutâneo. Objetivou-se avaliar a expressão imuno-histoquímica da p53, o índice proliferativo e a angiogênese nos estádios evolutivos do carcinoma espinocelular cutâneo, e investigar a relação da expressão da p53 com as demais variáveis. Foram estimadas as porcentagens de células imunomarcadas para p53 e Ki-67 em três grupos de cânceres: 30 queratoses solares, 30 carcinomas espinocelulares superficialmente invasores e 30 carcinomas espinocelulares invasores. O método Chalkley foi utilizado para quantificar a área microvascular, empregando-se marcador de neoangiogênese (CD105) e pan-endotelial (CD34) em cada grupo. A área microvascular em amostras marcadas pelo CD105 aumentou, significantemente, com a progressão do carcinoma espinocelular cutâneo. O mesmo não ocorreu com o uso do CD34. Contudo, nos três grupos (queratose solar, carcinoma espinocelular superficialmente invasor e invasor) encontrou-se aumento significante da área microvascular, com ambos os marcadores (CD34 e CD105), em comparação à respectiva pele adjacente. Não houve diferença significante na taxa de células positivas para p53 e Ki-67 entre os grupos. Encontrou-se correlação positiva e significante entre a área microvascular marcada pelo CD105 e o índice de marcação para a p53 no carcinoma espinocelular superficialmente invasor, bem como entre o índice de marcação para p53 e para o Ki-67 no carcinoma espinocelular invasor. A conversão angiogênica é um evento precoce no carcinoma espinocelular cutâneo, e a neovascularização é paralela à progressão do tumor. O uso do CD105 permite avaliar a atividade angiogênica no tumores escamosos. A angiogênese no estádio inicial da invasão e a atividade proliferativa na fase francamente invasora estão associadas com a expressão imuno-histoquímica da proteína p53. A perda da função supressora tumoral da p53, em etapas progressivas, atua diretamente na carcinogênese cutânea. (AU)

Multistep skin carcinogenesis crucially involves loss of function of p53 tumor suppressor protein and angiogenesis. The contribution of such events, individually and synergically, is not well established in the cascade of phenomena that results in cutaneous squamous cell carcinoma. We aimed to evaluate the immunohistochemical expression of p53, the proliferative index and angiogenesis in spectral stages of cutaneous squamous cell carcinoma, and investigate the relationship between p53 expression with the other variables. We estimated the percentages of immunostained cells for p53 and Ki-67 (proliferation marker) in three groups of cancer: 30 solar keratoses, 30 superficially invasive squamous cell carcinomas and 30 invasive squamous cell carcinomas. The Chalkley method was used to quantify the microvascular area by neoangiogenesis (CD105) and panendothelial (CD34) immunomarker in each group. The microvascular area in CD105-stained specimens significantly increased with cutaneous squamous cell carcinoma progression. However, no differences between groups were found in CD34 sections. Solar keratosis, superficially invasive squamous cell carcinoma and invasive squamous cell carcinoma samples showed significant increases in microvascular area for both CD34- and CD105-stained specimens compared with the respective adjacent skin. There was no significant difference for the rate of p53- and Ki-67-positive cells between the groups. Significant positive correlation was found between the CD105 microvascular area and the rate of p53 positive cells in superficially invasive squamous cell carcinoma as well as between the rate of p53- and Ki-67-positive cells in invasive squamous cell carcinoma. The angiogenic switch is an early event in cutaneous squamous cell carcinoma, and the rate of neovascularization is parallel to tumor progression. In contrast to panendothelial markers, CD105 use allows evaluating angiogenic activity in squamous tumors. Neovascularization in the initial stage of invasion and proliferative activity in the frankly invasive stage were both associated with p53 immunoexpression. Loss of p53 tumor suppressor function through progressive steps is directly involved in skin carcinogenesis.(AU)

Gene expression profile of ABC transporters and cytotoxic effect of ibuprofen and acetaminophen in an epithelial ovarian cancer cell line in vitro / Perfil da expressão gênica dos transportadores ABC e efeito citotóxico do ibuprofeno e acetaminofen em uma linhagem celular de câncer epitelial de ovário in vitro

PURPOSES: To determine the basic expression of ABC transporters in an epithelial ovarian cancer cell line, and to investigate whether low concentrations of acetaminophen and ibuprofen inhibited the growth of this cell line in vitro. METHODS: TOV-21 G cells were exposed to different concentrations of acetaminophen (1.5 to 15 μg/mL) and ibuprofen (2.0 to 20 μg/mL) for 24 to 48 hours. The cellular growth was assessed using a cell viability assay. Cellular morphology was determined by fluorescence microscopy. The gene expression profile of ABC transporters was determined by assessing a panel including 42 genes of the ABC transporter superfamily. RESULTS: We observed a significant decrease in TOV-21 G cell growth after exposure to 15 μg/mL of acetaminophen for 24 (p=0.02) and 48 hours (p=0.01), or to 20 μg/mL of ibuprofen for 48 hours (p=0.04). Assessing the morphology of TOV-21 G cells did not reveal evidence of extensive apoptosis. TOV-21 G cells had a reduced expression of the genes ABCA1, ABCC3, ABCC4, ABCD3, ABCD4 and ABCE1 within the ABC transporter superfamily. CONCLUSIONS: This study provides in vitro evidence of inhibitory effects of growth in therapeutic concentrations of acetaminophen and ibuprofen on TOV-21 G cells. Additionally, TOV-21 G cells presented a reduced expression of the ABCA1, ABCC3, ABCC4, ABCD3, ABCD4 and ABCE1 transporters. .

OBJETIVOS: Determinar a expressão básica dos transportadores ABC em uma linhagem celular do câncer epitelial de ovário, e investigar se o acetaminofen e o ibuprofeno em baixas concentrações são capazes de inibir o crescimento desta linhagem celular in vitro. MÉTODOS: A linhagem celular TOV-21 G foi exposta a diferentes concentrações de acetaminofen (1,5 a 15 µg/mL) e ibuprofeno (2,0 a 20 µg/mL), de 24 a 48 horas. O crescimento celular foi avaliado utilizando-se um ensaio de viabilidade celular. A morfologia celular foi determinada por meio da microscopia de fluorescência. O perfil de expressão gênica foi estabelecido por um painel de 42 genes da superfamília de transportadores ABC. RESULTADOS: Observou-se um decréscimo significativo no crescimento das células TOV-21 G expostas a 15 µg/mL de acetaminofen durante 24 (p=0,02) e 48 horas (p=0,01), ou a 20 µg/mL de ibuprofeno por 48 horas (p=0,04). Ao avaliar a morfologia das células cultivadas, não foi observada evidência de apoptose extensiva. A linhagem de células estudada subexpressa os genes de ABCA1, ABCC3, ABCC4, ABCD3, ABCD4 e ABCE1 na superfamília de transportadores ABC. CONCLUSÕES: Este estudo fornece evidências in vitro referentes aos efeitos inibidores do crescimento de concentrações terapêuticas do acetaminofen e ibuprofeno na linhagem celular testada. Além disso, as células TOV-21 G apresentaram uma expressão reduzida de genes dos transportadores ABCA1, ABCC3, ABCC4, ABCD3, ABCD4 e ABCE1. .

Histologic correlation of expression of Ki-67 in squamous cell carcinoma of the glottis according to the degree of cell differentiation / Correlação histológica da expressão do Ki-67 no Carcinoma Epidermoide Glótico de acordo com grau de diferenciação celular

INTRODUCTION: Squamous cell carcinoma is the most common neoplasm of the larynx and glottis, and its prognosis depends on the size of the lesion, level of local invasion, cervical lymphatic spread, and presence of distant metastases. Ki-67 (MKI67) is a protein present in the core, whose function is related to cell proliferation. AIM: To evaluate the expression of marker Ki-67 in squamous cell carcinoma of the larynx and glottis and its correlation to pathological findings. METHODS: Experimental study with immunohistochemistry analysis of Ki-67, calculating the percentage of the cell proliferation index in glottic squamous cell carcinomas. RESULTS: Sixteen cases were analyzed, with six well-differentiated and 10 poorly/moderately differentiated tumors. There was a correlation between cell proliferation index and degree of cell differentiation, with higher proliferation in poorly/moderately differentiated tumors. CONCLUSION: The cell proliferation index, as measured by Ki-67, may be useful in the characterization of histological degree in glottic squamous cell tumors. .

INTRODUÇÃO: O carcinoma de células escamosas é a neoplasia mais frequente da laringe e da região glótica, seu prognóstico depende do tamanho da lesão, do nível de invasão local, disseminação cervical linfática e da existência de metástases à distância. Ki-67 (MKI67) é uma proteína presente no núcleo, cuja função está relacionada com a proliferação celular. OBJETIVOS: Avaliar a expressão do marcador Ki-67 em carcinoma de células escamosas da laringe glóticos e correlacionar sua expressão com os achados anatomopatológicos. MÉTODO: Trabalho experimental de análise imunohistoquímica do Ki 67 através do cálculo percentual do índice de proliferação celular em produtos de carcinomas epidermóides glóticos. RESULTADOS: Dezesseis casos foram analisados, sendo seis bem diferenciados e dez pouco/moderadamente diferenciados. Houve correlação entre o índice de proliferação celular e o grau de diferenciação celular, sendo a proliferação maior nos pouco/moderadamente diferenciados. CONCLUSÃO: O índice de proliferação celular, medido pelo Ki-67 pode ser útil na caracterização do grau histológico em tumores glóticos de células escamosas. .

Low-level laser irradiation induces in vitro proliferation of mesenchymal stem cells / Laser de baixa intensidade induz à proliferação in vitro de células-tronco mesenquimais

Objective : To evaluate the effect of low-level laser irradiation on the proliferation and possible nuclear morphological changes of mouse mesenchymal stem cells. Methods : Mesenchymal stem cells derived from bone marrow and adipose tissue were submitted to two applications (T0 and T48 hours) of low-level laser irradiation (660nm; doses of 0.5 and 1.0J/cm2). The trypan blue assay was used to evaluate cell viability, and growth curves were used to analyze proliferation at zero, 24, 48, and 72 hours. Nuclear alterations were evaluated by staining with DAPI (4’-6-diamidino-2-phenylindole) at 72 hours. Results : Bone marrow-derived mesenchymal stem cells responded to laser therapy in a dose-dependent manner. Higher cell growth was observed when the cells were irradiated with a dose of 1.0J/cm2, especially after 24 hours (p<0.01). Adipose-derived mesenchymal stem cells responded better to a dose of 1.0J/cm2, but higher cell proliferation was observed after 48 hours (p<0.05) and 72 hours (p<0.01). Neither nuclear alterations nor a significant change in cell viability was detected in the studied groups. Conclusion : Low-level laser irradiation stimulated the proliferation of mouse mesenchymal stem cells without causing nuclear alterations. The biostimulation of mesenchymal stem cells using laser therapy might be an important tool for regenerative therapy and tissue engineering. .

Objetivo : Avaliar o efeito da terapia com laser de baixa intensidade sobre a proliferação e as possíveis alterações morfológicas nucleares em células-tronco mesenquimais de camundongos. Métodos : Células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea e do tecido adiposo foram submetidas a duas aplicações (T0 e T48 horas) de laser de baixa intensidade (660nm; doses de 0,5 e 1,0J/cm2). O ensaio de azul de tripan foi utilizado para a avaliação da viabilidade celular, e curvas de crescimento foram usadas para avaliar a proliferação das células em zero, 24, 48, e 72 horas. Alterações nucleares foram avaliadas por coloração com DAPI (4-6-diamidino-2-fenilindolo) em 72 horas. Resultados : As células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea responderam a terapia com laser de forma dose-dependente. Um maior crescimento celular foi observado quando as células foram irradiadas com dose de 1,0J/cm2, especialmente depois de 24 horas (p<0,01). As células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo responderam melhor à dose de 1,0J/cm2, com maior proliferação após 48 (p<0,05) e 72 horas (p<0,01). Nem alterações nucleares nem a mudança significativa na viabilidade celular foi detectada nos grupos estudados. Conclusão : Laser de baixa intensidade estimulou a proliferação de células-tronco mesenquimais sem causar alterações nucleares. A bioestimulação de células-tronco mesenquimais por laserterapia pode ser uma ferramenta importante para a terapia regenerativa e a engenharia tecidual. .

Effects of nandrolone decanoate on the viability of muscle satellite cells during the differentiation process / Influencia del anabolizante decanoato de nandrolona en la viabilidad de las células satélites musculares en el proceso de diferenciación / Influência do anabolizante decanoato de nandrolona sobre a viabilidade de células satélites musculares em processo de diferenciação

Studies indicate that the anabolic nandrolone decanoate (Deca-Durabolin(r)) can modulate cell cycle regulation, but little is known about its effects on muscle cells. Anabolic steroids are used, especially by athletes, to improve muscle mass and performance in the practice of exercises. The aim of this study was to evaluate the effect of the anabolic Deca-Durabolin(r) on the proliferation of skeletal muscle precursor cells C2C12. Cells were grown in Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), being supplemented with 10% Fetal Bovine Serum (FBS) and subjected to differentiation by the addition of 2% horse serum. They were incubated with anabolic at concentrations of 5, 10, 25 and 50 µM. The groups that received no anabolic or vehicle served as controls. The viability (proliferation) was evaluated by the MTT method (3-[4,5-Dimethylthiazol-2yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide; Thiazolyl blue) after one, three and five days of incubation. Three independent experiments were performed in each of the mentioned conditions, and the results were submitted to statistical analysis with significance level of p≤0.05 (ANOVA/Dunnett). Results showed no difference in viability between muscle cells treated with anabolic and the control cultures in all parameters. In conclusion, nandrolone, at the used concentrations, was not able to alter the viability of muscle C2C12 satellite cells...

Se utilizan los anabolizantes, en particular por atletas con el objetivo de aumentar la masa muscular y mejoría del desempeño. Este estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto del anabolizante Deca- Durabolin(r) sobre la viabilidad (proliferación) de las células satélites musculares C2C12 inducidas a la diferenciación, imitando el proceso de reparación tras una lesión. Las células fueron cultivadas en medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con 10% de suero fetal bovino (SFB) y sometidas a diferenciación mediante la adición de 2% de suero de caballo y, simultáneamente, incubadas con el anabolizante en las concentraciones de 5 , 10 , 25 y 50 µM. En los grupos que no recibieron el anabolizante, ni el vehículo sirvió como controle . La viabilidad (proliferación) se evaluó después de uno, tres y cinco días, utilizando el método de MTT (3 - [4,5 - dimetiltriazol - 2 - il ] -2,5 difeniltetrazolio) . Se realizaron tres experimentos independientes, en cada condición citada, y los resultados sometidos al análisis estadístico con nivel de significación de p≤0,05% (ANOVA/Dunnett). Los resultados permitieron verificar que no hubo diferencia en la viabilidad entre células musculares tratadas con anabolizante e inducidas a diferenciación y culturas de controles que sólo fueron inducidas a diferenciación en todos los parámetros evaluados. En conclusión, el anabolizante decanoato de nandrolona, en las concentraciones evaluadas, no fue capaz de alterar la viabilidad de células musculares C2C12 durante el proceso de diferenciación...

Os anabolizantes são utilizados, especialmente por atletas, com o intuito de aumento da massa muscular e melhora do desempenho. Este estudo objetivou avaliar o efeito do anabolizante Deca-Durabolin(r) sobre a viabilidade (proliferação) de células satélites musculares C2C12 induzidas à diferenciação, mimetizando o processo de reparo após lesão. As células foram cultivadas em Meio Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de Soro Fetal Bovino (SFB) e submetidas à diferenciação pela adição de 2% de soro de cavalo e concomitantemente incubadas com o anabolizante nas concentrações de 5, 10, 25 e 50 µM. Os grupos que não receberam o anabolizante nem o veículo serviram como controle. A viabilidade (proliferação) foi avaliada após um, três e cinco dias, utilizando o método de MTT (3-[4,5-dimetiltriazol-2-il]-2,5 difeniltetrazólio). Foram realizados três experimentos independentes, em cada condição citada, e os resultados submetidos à análise estatística com nível de significância de p≤0,05% (ANOVA/Dunnet). Os resultados permitiram verificar que não houve diferença na viabilidade entre células musculares tratadas com o anabolizante e induzidas à diferenciação e as culturas controles que somente foram induzidas à diferenciação, em todos os parâmetros avaliados. Em conclusão, o anabolizante decanoato de nandrolona, nas concentrações avaliadas, não foi capaz de alterar a viabilidade de células musculares C2C12 durante o processo de diferenciação...

A sinalização do co-ativador de transcrição PGC-1beta e sua relevância para a proliferação celular e desenvolvimento de melanoma / The PGC- 1beta signaling transcription co- activator and its relevance to cell proliferation and development of melanoma

PGC-1 beta é um co-ativador de transcrição gênica responsável pela regulação do metabolismo celular, principalmente na biogênese e função mitocondrial, disponibilidade de substrato e síntese de lipídios. Nos últimos anos, outras isoformas de PGC-1 têm sido descritos como participantes na gênese e manutenção de tumores. Portanto, nosso objetivo foi determinar se o PGC-1beta está relacionado ao aumento da proliferação celular de células de melanoma. Inicialmente, foi demonstrado que os níveis de RNAm e proteína de PGC-1beta são muito mais elevados em linhagens de células de melanoma (Tm1 e Tm5) do que na linhagem parental de melanócitos não tumorais (Melan-a) como detectado por PCR quantitativa e western blotting. A fim de descobrir uma relação causal entre a expressão de PGC-1? e crescimento celular da linhagem Tm5, células de tal linhagem foram transfectadas com um oligonucleotídeo antisense (ASO) contra PGC-1beta. As células tratados com ASO apresentaram níveis mais baixos de RNAm e proteína PGC-1beta, além de redução em sua atividade avaliada pela expressão de genes PGC-1beta dependentes. Além disso, as células transfectadas apresentaram uma taxa de proliferação inferior em comparação com células de controle Tm5. Este fenômeno também foi observado in vivo. Quando injetadas em camundongos, as células Tm5 desenvolvem-se em um tumor que atinge 1,34 ± 0,20 cm3 após nove dias. Tumores tratados com ASO após o mesmo tempo apresentaram volume tumoral de 0,75 ± 0,05 cm3. Este crescimento não estava relacionada à necrose tumoral, mas sim com a proliferação reduzida de células. Finalmente, verificamos se o mesmo fenômeno seria observado em humanos. A expressão PGC-1beta foi muito maior em amostras de melanoma do que em nevos, alterações não-malignas da pele com alto conteúdo de melanina. Por conseguinte, conclui-se que a expressão PGC-1? está aumentada no melanoma, tanto murino e humano, e que o bloqueio da sua atividade leva à diminuição da...

PGC-1beta is a co-activator of gene transcription primarily responsible for the regulation of cellular metabolism, mainly in mitochondrial biogenesis and function and also substrate and lipid synthesis. In recent years, other isoforms of PGC-1 have been described as participating in the genesis and maintenance of tumors. Therefore, our objective was to determine whether PGC-1beta is related to increased proliferation of melanoma cells. Initially, it was demonstrated that mRNA and protein levels of PGC-1beta are much higher in melanoma cell lines (Tm1 and TM5) than in the non-tumoral parental lineage melanocytes (melan-a) as detected by quantitative PCR and Western blotting. In order to find a causal relationship between the expression of PGC-1beta and cell growth, Tm5 lineage cells were transfected with an antisense oligonucleotide (ASO) against PGC-1beta. The cells treated with ASO had lower levels of PGC-1beta mRNA and protein, as well as reduction in its activity detected by quantitation of PGC-1beta dependent genes expression. Furthermore, transfected cells showed a lower rate of proliferation compared to Tm5control cells. This phenomenon was also observed in vivo. When injected into mice, Tm5 cells develop a tumor which reaches 1.34 ± 0.20 cm3 after nine days. Tumors treated with ASO, after the same time, presented tumor volume of 0.75 ± 0.05 cm 3. This growth was not related to tumor necrosis, but with reduced cell proliferation. Finally, we checked whether the same phenomenon would be observed in humans. The PGC-1beta expression was much higher in melanoma samples than in nevi, a non-malignant skin alteration filled with melanin. Therefore, we concluded that PGC-1beta expression in melanoma is increased, both in murine and human, and that blocking its activity leads to decreased cell proliferation and tumor growth.

Efeitos do cetoconazol e seus mecanismos de ação in vitro sobre linhagens hipofisárias tumorais imortalizadas / Effects of ketoconazole and its mechanisms of action in pituitary tumoral immortalizaded cell lines

O cetoconazol, inicialmente descrito como um agente antifúngico, revelou-se um potente inibidor da esteroidogênese adrenal, podendo, assim, ser utilizado no manejo da doença de Cushing, como terapia primária ou após insucesso cirúrgico, enquanto aguarda o efeito da radioterapia. Durante o tratamento com cetoconazol, uma redução dos níveis de cortisol é observada, usualmente não acompanhada por uma elevação do ACTH plasmático, como poderia ser esperada. Este fenômeno paradoxal, caracterizado pela redução do cortisol com níveis de ACTH inadequadamente normais ou não elevados, pode estar relacionado a uma ação adicional do cetoconazol nas células hipofisárias produtoras de ACTH. Para se testar essa hipótese, alguns estudos in vitro realizados na década de 80, avaliando a secreção de ACTH na vigência do cetoconazol, sugeriram a sua ação em células adenohipofisárias. Em adição, foi evidenciado que o cetoconazol ativou vias de apoptose em linhagens tumorais não hipofisárias. O presente estudo tem como objetivo avaliar o efeito in vitro do cetoconazol na viabilidade celular e na expressão de genes envolvidos na apoptose e replicação do DNA em linhagens tumorais hipofisárias imortalizadas corticotróficas (AtT-20), gonadotróficas (alfaT3.1), mamossomatotróficas (GH3) e mamotróficas (MMQ), utilizando-se a técnica de RT-qPCR. Os resultados mostraram que, na presença do cetoconazol, ocorreu uma redução da viabilidade celular nas linhagens hipofisárias, de forma concentração-dependente, às custas do estímulo da via extrínseca e intrínseca da apoptose, com aumento da expressão dos receptores de morte celular (ex.: Fas, TNFR) e/ou caspases (ex.: -2, -3, -6 ,-7 ,-9). Estes resultados foram associados a um aumento da expressão gênica dos inibidores do ciclo celular p21 (nas linhagens GH3 e alfaT3.1) e p27 (nas linhagens GH3 e MMQ), com uma redução acentuada da expressão destes genes após retirada do cetoconazol do meio de cultura...

Ketoconazole, initially described as an antifungal agent, proved to be a potent inhibitor of steroidogenesis, allowing its use in the management of Cushing's disease as primary or after unsuccessfully surgery and waiting the effect of radiotherapy. During treatment with ketoconazole, there a reduction in the cortisol levels is observed, usually not accompanied by an elevation of plasmatic ACTH, as could be expected. This paradoxical phenomenon, characterized by reduced cortisol with ACTH levels inappropriately normal or not elevated, could be related to an additional action of ketoconazole on ACTH-producing pituitary cells. In agreement with this hypothesis, some in vitro studies in the 80's, evaluating ACTH secretion in the presence of ketoconazole, suggested its action in pituitary cells. In addition, ketoconazole activated apoptosis pathways in non-pituitary tumor cell lines. Therefore, the present study aims to revisit this topic and evaluate the in vitro effect of ketoconazole on cell viability and expression of genes involved in apoptosis and DNA replication by RT-qPCR in immortalized pituitary tumoral corticotroph (AtT-20), gonadotroph (alphaT3.1), mammosomatotroph (GH3), mammotroph (MMQ) cell line. As a result, there was a reduction in pituitary cell viability with ketoconazole, in a concentration-dependent manner, due to stimulation of the extrinsic and intrinsic pathway of apoptosis, with increased expression of cell death receptors (eg. Fas, TNFR) and/or caspases (eg. -2, -3, -6, -7, -9). These results were associated with an increased gene expression of the cell cycle inhibitors p21 (in GH3 and alphaT3.1 cell line), and also p27 (in GH3 and MMQ cell line), with a significant reduction in the expression of these genes after removal of ketoconazole in the media. In conclusion, the ketoconazole have the potential of reduce cell viability in pituitary tumoral lineages possibly due to a cytotoxic effect (by increasing...

In vitro effects of caffeine in growth cartilage of rats / Efeitos in vitro da cafeína na cartilagem de crescimento de ratos

OBJETIVO: Avaliar os efeitos in vitro da cafeína na proliferação, apoptose e expressão de transcriptos gênicos de diferenciação condrogênica na cartilagem de crescimento.MÉTODO: As epífises cartilaginosas de fêmures de ratos neonatos foram divididas em dois subgrupos: os tratados com cafeína e o grupo controle, ambos observados nos tempos de 0, 7, 14 e 21 dias. As epífises cartilaginosas de fêmures de cada subgrupo e de cada tempo foram submetidas à histomorfometria, análise imunoistoquímica, técnica de túnel e RT-PCR em tempo real.RESULTADO: A diminuição da atividade proliferativa e o aumento de condroblastos em apoptose aos 21 dias foram encontrados em ambos os subgrupos. Entretanto a diminuição da proliferação celular causada pela cafeína foi menor quando comparada ao grupo controle e aumentou significativamente a expressão de transcriptos gênicos para diferenciação condrogênica, representada pelo SOX-9 e pelo RUNX-2. Entretanto o cultivo in vitro com cafeína demostrou efeitos antagônicos: apesar dos efeitos positivos na proliferação e diferenciação de condroblatos, cafeína aumentou a apoptose, caracterizada pelo aumento da expressão de caspase-3 e do numero de células em apoptose (p< 0.05).CONCLUSÃO: A cafeína apresenta efeitos antagônicos in vitro na cartilagem em crescimento, aumentando a proliferação, diferenciação e apoptose celular. Estudo experimental.

OBJECTIVE: To evaluate the in vitro effetcs of caffeine on proliferation, apoptosis and gene transcripts expression of chondrogenic differentiation in growth cartilage.METHODS: The cartilaginous epiphyses of femurs of newborn rats, which were divided into two subgroups: treated with caffeine and control group, both observed over the time periods of 0, 7, 14 and 21 days. The cartilaginous epiphyses of femurs of each subgroup and each time span were subjected to histomorphometric, immunohistochemical analysis, Tunel technique and RT-PCR in real time.RESULTS: The decrease in proliferative activity and the increase of apoptotic chondroblasts at 21 days were found regardless of the subgroup. However, the decrease in cell proliferation caused by caffeine was lower than in the control group and significantly increased the expression of gene transcripts for chondrogenic differentiation, represented by SOX-9 and RUNX-2. However, the in vitro culture with caffeine revealed antagonistic effects: despite the positive effect on chondroblasts proliferation and differentiation, caffeine increased apoptosis, characterized by increased expression of caspase 3 and of the number of cells undergoing apoptosis (p<0.05).CONCLUSION: Caffeine presents antagonistic effects in vitro on growth cartilage, increasing the proliferation, differentiation and cell apoptosis. Experimental Study.

AZT on telomerase activity and cell proliferation in HS 839.T melanoma cells / AZT na atividade da telomerase e na proliferação de células de melanoma HS 839.T

PURPOSE: To evaluate telomerase activity and proliferation of HS839.T melanoma cells, subjected to the action of AZT. METHODS: Cells were grown in triplicate, AZT at different concentrations: 50, 100 and 200μM, was added and left for 24 and 48 hours, and its effects were compared with the control group. Telomerase activity was detected by PCR and cell proliferation was evaluated by MTT. RESULTS: After 24 hours, there was no inhibition of cell proliferation or telomerase activity when compared to the control group. After 48 hours, there was a momentary decrease, suggesting that the cell lines used in this study are sensitive to AZT, but quickly recover both the enzyme activity and cell proliferation. CONCLUSION: The action of AZT on the melanoma cells studied, at the concentrations and times tested, did not inhibit telomerase activity nor affect cell proliferation.

OBJETIVO: Avaliar a atividade da telomerase e da proliferação de células de melanoma HS839.T submetidas à ação do AZT. MÉTODOS: As células foram cultivadas, em triplicata, com diferentes concentrações de AZT: 50, 100 e 200µM, por 24h e 48h, seus efeitos comparados com o grupo controle. A atividade da telomerase foi detectada por PCR e a proliferação celular avaliada por MTT. RESULTADOS: No tempo de 24 horas, não houve inibição da proliferação celular e da atividade da telomerase em comparação com o grupo controle. No período de 48 horas, houve uma diminuição momentânea, sugerindo que as células das linhagens utilizadas neste estudo são sensíveis ao AZT, mas que recuperam a atividade enzimática e proliferativa. CONCLUSÃO: Nas células de melanoma HS839.T estudadas e nas concentrações e tempos propostos, a ação do AZT não inibiu a atividade da telomerase e não afetou a proliferação celular.

Rendimento de células mesenquimais do ligamento periodontal humano submetidas a diferentes protocolos de criopreservação / Yield of human periodontal ligament mesenchymal cells under different protocols of cryopreservation

Introdução: A técnica de criopreservação tem como característica cessar reversivelmente todas as funções biológicas dos tecidos vivos em baixas temperaturas e tem sido aplicada a diversas células humanas, visando à sua utilização posterior. Objetivo: Avaliar a proliferação de células mesenquimais do ligamento periodontal humano após a criopreservação por dois diferentes protocolos. Método: As células do ligamento periodontal foram obtidas a partir de dois dentes (terceiros molares) hígidos, com indicação de remoção cirúrgica. Após o processamento, as células foram cultivadas em placas de Petri e mantidas a 37 °C em 5% de CO2, até atingirem 70-90% de confluência, com troca de meio a cada três dias. Na primeira passagem, as células foram divididas em dois grupos e criopreservadas: Grupo -80 °C - criopreservação em ultrafreezer por 45 dias; Grupo -196 °C - criopreservação em nitrogênio líquido por 45 dias. Decorrido esse tempo, as células dos dois grupos foram descongeladas e plaqueadas para o experimento. A curva de crescimento dos grupos estudados foi traçada a partir de contagem em Câmara de Neubauer e pelo método de ensaio do MTT, nos intervalos de 24, 48 e 72 horas. Os resultados foram analisados por meio do teste de Mann-Whitney, com nível de significância de 5%. Resultado: Verificou-se um crescimento ascendente nos dois protocolos utilizados, porém uma maior taxa proliferativa foi verificada no grupo criopreservado em nitrogênio líquido (p < 0,05). Conclusão: Ambos os protocolos de criopreservação estudados foram eficazes, porém a criopreservação em nitrogênio líquido (-196 °C) manteve uma maior taxa de proliferação celular em todos os intervalos de tempo.

Introduction: Cryopreservation aims to stop reversibly the biological functions of living tissues at low temperatures, and is an important resource for the storage of human cells for later use. Aim: To assess the proliferation of mesenchymal cells from human periodontal ligament cryopreserved by two different protocols. Method: Periodontal ligament cells were obtained from third molars with an indication for surgical removal. After processing, cells were grown and maintained at 37 °C in 5% CO2 until they reached 70-90% confluency, with medium changing every three days. In the first passage cells were divided into two groups, according to the protocol used: Group -80 °C - cryopreserved in ultrafreezer for 45 days, Group -196 °C - cryopreserved in liquid nitrogen for 45 days. After this time, cells from both groups were thawed and plated for the experiment. The growth curve of the groups was drawn from counting cells in a Neubauer chamber and by the MTT assay method, in the intervals of 24, 48 and 72 hours. The data were analyzed using the Mann-Whitney test with a significance level of 5%. Result: There was an upward cell growth in both protocols used, but a higher proliferative rate was observed in group cryopreserved in liquid nitrogen (p < 0.05). Conclusion: Cryopreservation has proven to be an effective technique for the storage and of mesenchymal cells from the periodontal ligament, especially when stored at a temperature of -196 °C.