Marcadores de inmunohistoquímica P63 y Ki67 como factores pronósticos en recurrencia temprana y malignidad en paciente con lesiones premalignas en laringe / Immunohistochemical markers P63 and Ki67 as prognostic factors for early recurrence and malignancy in patients with precancerous lesions in the larynx

No existe un consenso sobre el manejo de las lesiones premalignas de laringe, en especial cuando se trata de displasias severas y carcinomas in situ. Por esto, se decidió evaluar el papel de los marcadores de inmunohistoquímica en displasias epiteliales, con el fin de definir su rol como factor de pronóstico durante el seguimiento. Se presenta una cohorte de pacientes mayores de 18 años, con diagnóstico de displasias laríngeas leves, moderadas y severas, con seguimiento mínimo de 6 meses. Se encontraron 4 pacientes con marcadores positivos con recidiva antes de los 6 meses, uno de ellos con malignización temprana. Un paciente adicional con recidiva y malignización 25 meses después del procedimiento inicial, 4 pacientes con marcadores positivos sin recidiva y un paciente con marcadores negativos sin recidiva. Tras más de 36 meses de seguimiento, se encontró una baja incidencia de displasias laríngeas, sin poder determinar la efectividad de los marcadores como factores pronósticos. Se analizan los datos como serie prospectiva, sentando una base para un estudio multicéntrico.

There is no consensus on the management of premalignant lesions of the larynx, especially when talking about severe dysplasia and carcinoma in situ. Therefore, we decided to evaluate the role of immunohistochemical markers as prognostic factors in epithelial dysplasia. A cohort of patients, 18 years old and older, diagnosed with mild, moderate and severe laryngeal dysplasia was followed since 2012 for up to at least 6 months. Four patients with positive markers had recurrence before 6 months of follow up, with one of them having an early malignancy. An additional patient had malignant recurrence identified 25 month after surgery. We found 4 markerpositive patients without recurrence, and one patient with negative markers with no recurrence. At 36 months follow-up, we found a low incidence of laryngeal dysplasia, therefore these results cannot rule out the effectiveness of immunohistochemical markers as prognostic factors for laryngeal dysplasia. The data are analyzed as a prospective series, laying the ground for an upcoming multicenter study.

Clinical-pathological and p53 protein expression study in dysplasia associated with ulcerative colitis / Estudo clínico-patológico e da expressão da proteína p53 nas displasias associadas à retocolite ulcerativa

Background: The association between ulcerative colitis and adenocarcinoma determined strategies for patient follow-up and early detection of dysplastic and neoplastic lesions. Aims: To analyze the incidence of dysplasia in patients with ulcerative colitis, comparing clinical data of patients with and without dysplasia and check immunohistochemical expression of p53 protein in dysplasias. Materials and methods: We analyzed biopsy samples and clinical data of 124 patients with ulcerative colitis at Hospital de Clínicas, Federal University of Paraná, Curitiba, Brazil. Results: Dysplasia incidence was low (9.67%) and all cases with low-grade dysplasia. Patients clinical data comparison with and without dysplasia did not show significant statistical differences with regard to the race, age at the start of the disease, age at last biopsy, duration and anatomic extent of ulcerative colitis. Significant difference was found between males and females with predominance of males (58.34%) for dysplasia. Seventeenth biopsy samples of 12 patients with dysplasia, 5 (29.4%) were p53 positive. Conclusions: From these results it is concluded that the incidence of dysplasia was low, higher in males and there was positivity of p53 protein in dysplasia. .

Racional: A associação entre retocolite ulcerativa e adenocarcinoma determinou estratégias para seguimento dos pacientes e detecção precoce das lesões displásicas e neoplásicas. Objetivos: Analisar a incidência de displasia nos pacientes com retocolite ulcerativa, comparar dados clínicos dos pacientes com e sem displasia e verificar a expressão imunoistoquimica da proteína p53 nas displasias. Material e Métodos: Foram estudados os exames anatomopatológicos e dados clínicos de 124 pacientes com e sem displasia, portadores de retocolite ulcerativa no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná. Resultados: A incidência de displasia foi de 9,67% e todos os casos foram de displasia de baixo grau. Na comparação dos dados clínicos dos pacientes com e sem displasia não houve diferença estatisticamente significativa com relação à cor, idade no início da doença, idade na última biópsia, extensão da doença e tempo de evolução da doença. Houve diferença estatística com predomínio de pacientes do sexo masculino (58,34%) em relação ao feminino para displasia. Dos 17 exames avaliados de 12 pacientes com displasia, em 5 exames (29,4%) a expressão da proteína p53 foi positiva. Conclusões: Desses resultados conclui-se que a incidência de displasia foi baixa, maior no sexo masculino e houve positividade da proteína p53 nas displasias. .

Validação de construção de tissue microarray para estudo da displasia intraepitelial tubular renal / Validation of tissue microarray technique for intratubular epithelial dysplasia study

INTRODUÇÃO E OBJETIVO: O carcinoma de células renais (CCR) é umas das doenças urológicas de maior malignidade, correspondendo a 1 por cento-3 por cento de todos os tumores sólidos dos adultos. As lesões pré-malignas do CCR ainda não foram totalmente descritas. Achados de displasia intraepitelial tubular renal (DIETR) em áreas próximas ao tumor, livres de neoplasia, sugerem que esta alteração possa ser a precursora biológica de alguns tipos de CCR. O objetivo deste estudo é avaliar a possibilidade do uso de tissue microarray (TMA) no estudo da DIETR e do CCR e os parâmetros para sua utilização imuno-histoquímica (IHQ) utilizando os anticorpos anti-Ki-67 e p53 para confirmar a evidência de DIETR como precursora biológica do CCR. MATERIAL E MÉTODOS: O estudo foi realizado em 10 peças cirúrgicas de nefrectomias realizadas em pacientes com diagnóstico de CCR selecionadas no período de 2000 a 2005, em material arquivado no Instituto Nacional de Câncer (INCA). DISCUSSÃO: A utilização da técnica de TMA permite amostragem de várias áreas e realização da IHQ utilizando apenas duas lâminas, uma para cada marcador. Como não há na literatura descrição de utilização de TMA para estudo da DIETR, foi necessário inicialmente realizar estudo de validação para saber se haveria representatividade de lesões focais no TMA. RESULTADOS: A análise estatística não mostrou diferença entre a utilização de TMA com dois ou quatro cilindros de tecido ou o corte inteiro. CONCLUSÃO: O teste de validação de técnica artesanal de TMA autorizou o uso de dois cilindros de 1 mm² por caso.

INTRODUCTION AND OBJECTIVE: Renal cell carcinoma is one of the most malignant urological diseases, corresponding to 1 percent-3 percent of solid tumors in adults. The finding of intratubular epithelial dysplasia (IED) next to tumor areas suggests that this can be the biological precursor of some types of renal cell carcinoma (RCC). The objective of this study is to evaluate the use of tissue microarray (TMA) to study IED and RCC by immunohistochemistry (IHC) with Ki-67 and p53 protein to confirm the evidence that IED is the biological precursor of RCC. MATERIAL AND METHOD: This study was performed in archival material from ten nephrectomy surgical specimens from Instituto Nacional de Câncer, between 2000 and 2005. DISCUSSION: TMA technique allows to sample and study several different areas from many patients in the same slide, using just one slide for each IHC marker. Once there was no previous study on IED by TMA, a validation test was needed first. RESULTS: There was no statistical difference between 2 or 4 tissue cores and the whole section analysis. CONCLUSION: TMA validation assay demonstrated that the use of two tissue cores with 1 mm² each was suitable to evaluate RCC and IED.

Gentamicin induces renal morphopathology in Wistar rats / Gentamicina induce morfopatología renal en ratas Wistar

Due to its prominent role in major excretory pathways, the kidney is particularly sensitive especially to toxicity for antimicrobials drugs. Storage of these drugs in the renal cortex, their effect on renal cells, have consequences on the renal function, and then reabsorbed by renal tubules induce nephrotixicity. Our objective was to show the renal morphopatological alterations induced by gentamicin through the histochemical methods of routine periodic acid de Schiff (PAS) staining and imunohistochemical staining for the expression of the protein P53, which is considered as a marker for cellular apoptosis. This allows the early detection of tubular lesions. The renal morphopathologic findings were cell apoptosis, basal membrane interruption, mesangial proliferation cells, decreased Bowman's space. This result clearly shows that gentamicin administration induces renal morphopatological alterations.

Debido a su importante rol en la función de excreción mayor, el riñon es especialmente propenso a la toxicidad por los antibióticos bactericidas. La acumulación de los antibióticos aminoglicosidos en la corteza renal tiene como consecuencia efectos en las células renales y en la función renal y cuando son reabsorbidos por los túbulos renales, pueden conducir a toxicidad renal. Nuestro objetivo fue mostrar alteraciones morfopatológicas renales causadas por la administración de gentamicina, a través de métodos histoquímicos de rutina con ácido periódico de Schiff (PAS) y tinción inmunohistoquímica para la expresión de la proteína P53, la cual es considerada como un marcador para la apoptosis celular, permitiendo la detección precoz de lesiones tubulares. Los resultados morfopatológicos renales fueron apoptosis celular, interrupción de la membrana basal, proliferación de células mesangiales y disminución del espacio de Bowman. Los resultados mostraron claramente que la administración de gentamicina induce alteraciones morfopatológicas renales.

Coexpressão da proteína p53 e proteínas relacionadas a resistência a múltiplas drogas em diferentes tipos de leucemias: associação predominante nos estágios avançados da doença / Coexpression of p53 protein and multidrug resistance proteins in diferents types of leukemias: the predominant association in advanced status of disease

Um dos mais bem caracterizados mecanismos de resistência às drogas (MDR) nas leucemias são os mediados pela glicoproteína P (PGP) e proteína relacionada a múltiplas drogas (MRP). Diversos relatos têm demonstrado que a superexpressão dessas proteínas podem ser medianas pela superexpressão da proteína p53 inativada. O objetivo deste estudo foi investigar a co-expressão da p53, PGP e MRP em diferentes tipos de leucemias pela citometria de fluxo. Analisou-se amostras de 223 pacientes leucêmicos: 64 leucemia linfocítica crônica (LLC), 43 leucemia mielóide aguda (LMA), 44 leucemia linfoblástica aguda (LLA), e 72 leucemia mielóide crônica (LMC). A p53 foi observada em 23,6% na LMC, 21,8% na LLC, 44,2% na LMA e 29,4% na LLA. A Pgp em 46,4% na LMC, 47,5% LLC, 62,8% LMA e 20% LLA e a MRP em 31,9% na LMC, 40,6% na LLC, 44,2% na LMA e 40,1% na LLA. Observou-s co-expressão estatisticamente significativa entre p53 e Pgp na LMC (p=0,0066) e na LMA (p=0,0013) e p53 e MRP na LMC (p=0,000066), na LLC (p=0,0079) e LMA (0,00044), sendo observado predomínio dessas associações nos estágios avançados dessas doenças. Estes resultados demonstraram que as pesquisas desses marcadores possam servir como indicadores de evolução clínica e prognóstico para estas leucemias.

Expresión inmunohistoquímica de la proteína p53 en relación con el grado histológico y riesgo de recidivas en meningiomas intracraneanos

Los meningiomas son neoplasias primarias frecuentes del sistema nervioso central, usualmente benignas y susceptibles de curación mediante cirugía. El grado histológico de la Organización Mundial de la Salud y la extensión de la resección quirúrgica inicial son factores pronósticos determinantes en estos tumores. Sin embargo, una tasa de recidiva cercana al 20 por ciento en meningiomas benignos totalmente resecados plantea la necesidad de considerar nuevos factores pronósticos. Un total de 93 casos fueron seleccionados para el estudio inmunohistoquímico de la proteína p53 en relación con el grado histológico y riesgo de recidivas en los meningiomas. El índice de marcaje inmunohistoquímico de la proteína p53 se incrementó con la progresión del grado histológico (promedios de 37,15 por ciento para el grado I, 44,49 por ciento para el II y 57,81 por ciento para el III) y fue significativamente superior en meningiomas recidivantes (46,19 por ciento vs 32,29 por ciento de los no recidivantes). El punto de corte de 40 por ciento resultó estadísticamente útil para separar a los meningiomas benignos (grado I) de los no benignos (grados II-III) y a los tumores recidivantes de los no recidivantes. De esta manera, un índice de marcaje de la proteína p53 igual o mayor de 40 por ciento puede indicar la posibilidad de un grado más alto en casos histológicamente ambiguos o un riesgo mayor para desarrollar recidivas en meningiomas de un grado histológico en particular (especialmente en tumores benignos)

Meningiomas are frequent primary neoplasms of the central nervous system, usually benign and susceptible to healing through surgery. The histological grade of the World Health Organization and the extension of the initial surgical resection, are determining prognostic factors in these tumors. Nevertheless, a recurrence rate close to 20 percent in benign meningiomas completely resected arises the need of considering new prognostic factors. A total of 93 cases were selected for the immunohistochemical study of p53 protein in relation to the histological grade and the risk of recurrences in meningiomas. The immunohistochemical labeling index of p53 protein increased with the progression of the histological grade (means of 37,15 percent for grade I, 44,49 percent for grade II, and 57,81 percent for grade III) and was significantly superior in recurrent meningiomas (46,19 percent vs 32,29 percent of non recurrent). The cut off of 40 percent became statistically useful to separate the benign meningiomas (grade I) from the non benign (grade II and III) and the recurrent tumors from the non recurrent. In this way, a labelling index of p53 protein equal or superior to 40 percent can indicate the possibility of a higher grade in histologically ambiguous cases or a higher risk to develop recurrencies in meningiomas of a particular histological grade (specially in benign tumors)

Glioblastoma pediátrico: estudo clínico patológico de 12 casos com imunoistoquímica para proteína p53 / Pediatric glioblastoma: a clinicopathological study of 12 cases with p53 protein immunohistochemistry

Glioblastoma é um dos tumores primários mais letais do sistema nervoso central (SNC). Apesar dos significativos progressos, há poucas análises em crianças. Com o objetivo de avaliar localização, idade, sexo, sobrevida e imunoistoquímica para proteína p53, foram coletados casos de glioblastomas pediátricos do "Banco de Tumores do SNC de Curitiba", durante 1987-2003 e do Hospital Municipal Jesus, Rio de Janeiro, de 1970 a 1988. Doze preencheram os critérios de inclusão. A idade variou até 12 anos (média 7), sendo sete do sexo feminino e cinco do masculino. A sobrevida média foi 7,9 meses. Localizavam-se em hemisférios cerebrais (58,4 por cento), mesencéfalo e tronco (33,3 por cento) e um no cerebelo. A imunoistoquímica demonstrou p53 positivo em 9 (75 por cento). Em conclusão, glioblastoma tem comportamento semelhante entre crianças e adultos, sendo nestas menos freqüentes. Acomete hemisférios cerebrais com maior freqüência que estruturas infratentoriais, mostrando alta sensitividade com a imunomarcação para proteína p53, sendo nestes casos mais agressivos, com menor sobrevida.

Glioblastoma is one of the most lethal central nervous system (CNS) primary tumor. Although significant progress, only few analysis have been made in pediatric glioblastoma, which are less common and have worse prognosis than in adults. To evaluate gender, site, age, survival, and immunohistochemistry to p53, we selected cases of pediatric glioblastoma of "CNS Tumors Database in Curitiba", 1987-2003 and of the Hospital Municipal Jesus, Rio de Janeiro, 1970-1988. Twelve tumors were included. The age ranged from up to 12 years (median 7). There were 7 females and 5 males. The median survival was 7.9 months. Location was: cerebral hemispheres (58.4 percent), mesencephalon and brainstem (33.3 percent) and one case in the cerebellum. Immunostained to p53 in 9 (75 percent) cases. In conclusion, glioblastoma behaves similarly in children and adults. It is rare in children, affects both cerebral hemispheres more than brainstem and cerebellum and shows strong immunohistochemistry to p53.

Fatores clínicos e biológicos para recidivas em tumores de Wilms localizados / Clinical and biological factors for relapse in localized wilms' tumor

Apesar do excelente prognóstico dos tumores de Wilms (TW) localizados (estádios I e II) e de histologia favorável (HF), 10% deles recidivam. Em 122 pacientes com TW com essas características, diagnosticados de 1976 e 2001, analisamos alguns fatores clínicos, como a idade por ocasião do diagnóstico e peso do tumor, em todos os pacientes; fatores biológicos, como o TP53 e a glicoproteína-p, em 40 deles; e variáveis histológicas de microestadiamento (invasão de seio renal, cápsula tumoral, vasos intra-renais e pseudocápsula inflamatória) em 28 com TW em estádio I. Correlacionando todos esses fatores com a presença de recidiva, observamos que a chance maior de recidiva estatisticamente significativa somente foi verificada em pacientes com duas ou mais variáveis de microestadiamento e/ou peso tumoral maior que 550 g.

In spite of the excellent prognosis of localized favorable histology (FH) of Wilms' tumor (WT), 10% of them will relapse. In 122 TW patients with these characteristics, diagnosed between 1976 and 2001, some clinical factors have been analyzed, such as age at diagnosis and tumor weight in all patients; biological factors, like TP53 and p-glycoprotein, in 40 of them; and microsubstaging histological variables (invasion of renal sinus, tumor capsule, intrarenal vessels, and inflammatory pseudocapsule). Correlating all of those factors with relapse, we have observed that only patients with the association of two or more microsubstaging variables and/or tumor weight over 550 g showed a statistically significant higher chance of relapse.

Relevância clínica e biológica das alterações do gene e proteína p53 nas leucemias

As mutações do gene TP53 e/ou inativação da proteína p53 são as alterações genéticas mais comuns nas neoplasias de humanos. Nas leucemias, estas alterações são observadas com menor freqüência, predominado nas formas mais graves de doenças e nos casos resistentes ao tratamento. O objetivo desse trabalho foi avaliar a expressão da proteína p53 em diversos tipos de leucemias e a mutação do gene TP53 nos pacientes com leucemias mielóide crônica (LMC). Foram avaliadas amostras de sangue periférico e de medula óssea de 64 pacientes com leucemias linfóide crônica (LLC), 43 com leucemia mielóide aguda (LMA), 44 com leucemia linfóide aguda (LLA) e 72 com LMC. A pesquisa da proteína p53 foi realizada pela citometria de fluxo (CF) após marcação com anticorpo monoclonal anti p53 e a detecção da mutação do gene TP53 para os exons 5 a 9 pelo polimorfismo conformacional de fita simples (SSCP). Adicionalmente foram obtidos dados clínicos e laboratoriais referentes aos pacientes, sendo também infestigado o fenótipo de resistência a multiplas drogas (expressão da gpP, MRP e teste de efluxo da rhodamina 123), expressão das proteínas MDM2, p16, e Bcl-2 e o antígeno Ki-67 pela CF. Paralelamente, foram testados linfócitos de 40 indivíduos sadios e células de linhagens tumorais que serviram como controle de marcação positiva e negativa para a proteína p53 pela CF. a expressão da proteína p53 foi detectada em 63/223 amostras dos pacientes: 14/64 LLC (21,9%), 13/44 LLA (29,5%), 19/43 LMA (44,2%) e 17/72 LMC (23,6%), com níveis mais acentuados nas fases avançadas de LLC, LLA e LMC. As alterações do SSCP foram observadas em 11/71 casos de LMC estando mais presentes nas fases mais avançadas, correlacionando-se com a expressão da proteína p53 na maioria dos casos. Observamos correlação entre a expressão das proteínas p53 e gpP na LMC e LMA; p53 e MRP na LMC, LLC e LMA; p53 e Bcl-2 na LMC e LMA; p53 e MDM2 na LLA, LMA e LLC, p53, e p16 na LLA e co-expressão p53 e fenótipo funcional MDR LMC. Houve também correlação entre a expressão da proteína p53 e alguns fatores prognósticos desfavoráveis: tempo de duplicação de linfócitos, expressão de CD38, níveis de LDH e , beta 2 microglobulina e plaquetopenia na LLC, plaquetopenia, contagem de blastos no sangue periférico maior que 30%, esplenomegalia e hepatomegalia na LMC; plaquetopenia e anemia severa na LMA. Nossos dados mostram que a expressão da proteína p53 foi observada em todos os tipos de leucemias, entretanto, a sua presença predominou nas formas mais graves da doença, sugerindo que essa proteína possa ser um indicador de agravamento da evolução clínica

Mutations of p53 gene and/or inactivation of p53 protein are the most common alterations observed in human tumors. In leukemias these alterations are not very frequent, but are they prevail in more serious or refractory cases. The objective of this study was to evaluate p53 protein expression in leukemias and TP53 gene mutations in patients with chronic myeloid leukemia. Peripheral blood and bone marrow samples from 64 patients with chronic lymphoid leukemia (CLL), 43 with acute myeloid leukemia (AML), 44 with acute lymphoid leukemia (ALL) and 72 with chronic lymphoid leukemia (CML) were evaluated. To the study of p53 protein, flow cytometry was performed after labeling with monoclonal antibody anti-p53. The TP53 mutations to exons 5 to 9 were detected by single strand conformational polymorphism (SSCP). Additionally, clinical and laboratorial data from patients were collected, and the multi drug resistance phenotype (gpP and MRP expression, rhodamine 123 efflux test), the expression of MDM-2, p16 and Bcl-2 proteins and Ki–67 antigen by FC were also investigated. Lymphocytes from 40 healthy donors and tumor lineage cells were used as positive and negative controls to p53 protein by FC. Expression of p53 protein was observed in 63/223 patients’ samples: 14/64 CLL (21.9%), 13/44 ALL (29.5%), 19/43 AML (44.2%) and 17 / 72 LMC (23.6%) with the highest levels in the advanced phases of CLL, ALL and CML. SSCP alterations were observed in 11/71 samples of LMC, most of them in the advanced phases of CML and these alterations were correlated with p53 protein expression in most cases. Correlations between p53 and gpP expression was in CML and AML; p53 and MRP in CML, CLL and AML, p53 and Bcl-2 in CML and AML; p53 and MDM-2 in ALL, AML and CLL and p53 and p16 in ALL and co-expression of p53 and MDR functional phenotype LMC. We also observed correlations between p53 protein expression and some unfavorable prognostic factors: lymphocytes duplication time, CD38 expression, LDH and beta 2 micro globulin levels and thrombocytopenia in CLL; thrombocytopenia, count of blasts in peripheral blood higher than 30% , and hepatosplenomegaly in LMC, thrombocytopenia and severe anemia in LMA Our data show that p53 protein expression was observed in all kind of leukemia. However, its presence was higher in the severe forms of the disease, suggesting that this protein can be used as an indicator aggravation of clinical evolution

Expressão imuno-histoquímica dos marcadores pcna, KI67 e p53 em carcinomas epidermóides do trato aerodigestivo superior / Immunohistochemical expression of markers pcna, Ki67 and p53 in squamous cell carcinomas of upper aerodigestive tract

Objetivo: Os carcinomas epidermóides do trato aerodigestivo superior são tumores de comportamento biológico heterogêneo. O objetivo deste trabalho é verificar se a expressão imuno-histoquímica dos marcadores Ki67, PCNA e P53 apresenta correlações com parâmetros prognósticos clínico-patológicos. Métodos: Determinação da expressão imuno-histoquímica dos antígenos Ki67, PCNA e P53 em espécimes tumorais fixados e embebidos em parafina de 53 pacientes com carcinoma epidermóide em diferentes sítios primários do trato aerodigestivo superior. Resultados: Os marcadores tiveram altos índices de expressão imuno-histoquímica, sendo 46,5% para o Ki67, 66,5% para o PCNA e 36,5% para o P53. Não houve correlação da expressão do Ki67 e do PCNA com o estadiamento TNM (AJCC), nem com o grau de malignidade. Aexpressão do Ki67 apresentou correlação positiva com a expressão do PCNA (p = 0,037). O mesmo aconteceupara o PCNA e o número de mitoses por campo (p = 0,001). Conclusões: De acordo com estes resultados, concluiu-se que a determinação da imunorreatividade dos marcadores Ki67 e PCNA é um método objetivo e quantificável para avaliar proliferação celular que pode subsidiar as informações prognósticas.

Background: Squamous cell carcinomas of upper aerodigestive tract are tumors with heterogeneous biological behaviour. The aim of present study is to assess whether any correlation exists between immunohistochemical expression of Ki67, PCNA and P53 markers and clinicopathologic parameters. Methods: Immunohistochemical determination of Ki67, PCNA and P53 antigens in fixated and paraffinembedded tumour especimens from 53 patients with squamous cell carcinoma in different primary locations of upper aerodigestive tract. Results: The markers had high evidence average rates with 46,5% forKi67, 66,5% for PCNA and 36,5% for P53. There was neither correlation of Ki67 and PCNA evidence nor with TNM staging nor with malignancy degree. The expression of Ki67 demonstrated correlation with the expression of PCNA (p = 0,037). The same ocurred to PCNA and the number of mitoses (p = 0,001). Conclusions: According to these results, it has been concluded that the determination of immunoreactivityof Ki67 and PCNA proliferation markers is an accurate and quantitative method which may provide prognostic information.