Use of MALDI-TOF for identification and surveillance of gramnegative bacteria in captive wild psittacines / Uso do MALDI-TOF para identificação e monitoramento de bactérias Gram negativas em psitacídeos cativos

Microbiological studies of the sanitary and health status of psittacine birds that will be reintroduced is important in evaluating whether these animals act as carriers of pathogenic agents to other animals and humans. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) is a faster and more accurate method to identify bacteria than conventional microbiology methods. The aim of this study was to evaluate the health status of psittacines housed in captivity, by assessment of Gram-negative bacteria from fecal microbiota through MALDI- TOF MS identification. The results indicate high frequency of Gram-negative bacteria in feces (96.5%), especially from the Enterobacteriaceae family (88.7%). The most prevalent bacteria were Escherichia coli (39.0%), Proteus vulgaris (12.2%), Klebsiella spp. (12.1%) and Raoultella ornithinolytica (8.7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. and Escherichia hermannii were isolated with lower frequency. . All these agents are potentially pathogenic for parrots and can cause systemic infections in other animals and humans. These findings reinforce that MALDI- TOF MS proved to be a rapid and accurate method of identification of the microorganism and evaluation of the health status of psittacines, providing relevant data to assist decision-making regarding the sanitary protocols in wildlife centers, and possible future reintroduction of wild birds.

Estudos microbiológicos da sanidade de psitacídeos que serão reintroduzidos são importantes para avaliar se esses animais atuam como portadores de agentes patogênicos para outros animais e humanos. A espectrometria de massa por ionização/dessorção de matriz assistida por laser/tempo de vôo (MALDI-TOF MS) é um método mais rápido e preciso para identificar bactérias na comparação com métodos convencionais de microbiologia. O objetivo deste estudo foi avaliar o estado de saúde de psitacídeos cativos, identificando bactérias Gram-negativas da microbiota fecal por MALDI -TOF MS. Os resultados indicaram alta frequência de bactérias Gram-negativas nas fezes (96,5%), principalmente da família Enterobacteriaceae (88,7%). As mais prevalentes foram Escherichia coli (39,0%), Proteus vulgaris (12,2%), Klebsiella spp. (12,1%) e Raoultella ornithinolytica (8,7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. e Escherichia hermannii foram isolados com menor frequência. Todos esses agentes são potencialmente patogênicos para os papagaios e podem causar infecções sistêmicas em outros animais e seres humanos. Esses achados reforçam que o MALDI- TOF MS é um método rápido e preciso de identificação do microrganismo e avaliação do estado de saúde dos psitacídeos, fornecendo dados relevantes para auxiliar na tomada de decisões sobre os protocolos sanitários em centros de triagem de animais selvagens e sobre a possibilidade de reintrodução futura.

Use of MALDI-TOF for identification and surveillance of gram-negative bacteria in captive wild psittacines

Abstract Microbiological studies of the sanitary and health status of psittacine birds that will be reintroduced is important in evaluating whether these animals act as carriers of pathogenic agents to other animals and humans. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) is a faster and more accurate method to identify bacteria than conventional microbiology methods. The aim of this study was to evaluate the health status of psittacines housed in captivity, by assessment of Gram-negative bacteria from fecal microbiota through MALDI- TOF MS identification. The results indicate high frequency of Gram-negative bacteria in feces (96.5%), especially from the Enterobacteriaceae family (88.7%). The most prevalent bacteria were Escherichia coli (39.0%), Proteus vulgaris (12.2%), Klebsiella spp. (12.1%) and Raoultella ornithinolytica (8.7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. and Escherichia hermannii were isolated with lower frequency. . All these agents are potentially pathogenic for parrots and can cause systemic infections in other animals and humans. These findings reinforce that MALDI- TOF MS proved to be a rapid and accurate method of identification of the microorganism and evaluation of the health status of psittacines, providing relevant data to assist decision-making regarding the sanitary protocols in wildlife centers, and possible future reintroduction of wild birds.

Resumo Estudos microbiológicos da sanidade de psitacídeos que serão reintroduzidos são importantes para avaliar se esses animais atuam como portadores de agentes patogênicos para outros animais e humanos. A espectrometria de massa por ionização/dessorção de matriz assistida por laser/tempo de vôo (MALDI-TOF MS) é um método mais rápido e preciso para identificar bactérias na comparação com métodos convencionais de microbiologia. O objetivo deste estudo foi avaliar o estado de saúde de psitacídeos cativos, identificando bactérias Gram-negativas da microbiota fecal por MALDI -TOF MS. Os resultados indicaram alta frequência de bactérias Gram-negativas nas fezes (96,5%), principalmente da família Enterobacteriaceae (88,7%). As mais prevalentes foram Escherichia coli (39,0%), Proteus vulgaris (12,2%), Klebsiella spp. (12,1%) e Raoultella ornithinolytica (8,7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. e Escherichia hermannii foram isolados com menor frequência. Todos esses agentes são potencialmente patogênicos para os papagaios e podem causar infecções sistêmicas em outros animais e seres humanos. Esses achados reforçam que o MALDI- TOF MS é um método rápido e preciso de identificação do microrganismo e avaliação do estado de saúde dos psitacídeos, fornecendo dados relevantes para auxiliar na tomada de decisões sobre os protocolos sanitários em centros de triagem de animais selvagens e sobre a possibilidade de reintrodução futura.

Use of MALDI-TOF for identification and surveillance of gram-negative bacteria in captive wild psittacines / Uso do MALDI-TOF para identificação e monitoramento de bactérias Gram-negativas em psitacídeos cativos

Microbiological studies of the sanitary and health status of psittacine birds that will be reintroduced is important in evaluating whether these animals act as carriers of pathogenic agents to other animals and humans. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) is a faster and more accurate method to identify bacteria than conventional microbiology methods. The aim of this study was to evaluate the health status of psittacines housed in captivity, by assessment of Gram-negative bacteria from fecal microbiota through MALDI- TOF MS identification. The results indicate high frequency of Gram-negative bacteria in feces (96.5%), especially from the Enterobacteriaceae family (88.7%). The most prevalent bacteria were Escherichia coli (39.0%), Proteus vulgaris (12.2%), Klebsiella spp. (12.1%) and Raoultella ornithinolytica (8.7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. and Escherichia hermannii were isolated with lower frequency. . All these agents are potentially pathogenic for parrots and can cause systemic infections in other animals and humans. These findings reinforce that MALDI- TOF MS proved to be a rapid and accurate method of identification of the microorganism and evaluation of the health status of psittacines, providing relevant data to assist decision-making regarding the sanitary protocols in wildlife centers, and possible future reintroduction of wild birds.

Estudos microbiológicos da sanidade de psitacídeos que serão reintroduzidos são importantes para avaliar se esses animais atuam como portadores de agentes patogênicos para outros animais e humanos. A espectrometria de massa por ionização/dessorção de matriz assistida por laser/tempo de vôo (MALDI-TOF MS) é um método mais rápido e preciso para identificar bactérias na comparação com métodos convencionais de microbiologia. O objetivo deste estudo foi avaliar o estado de saúde de psitacídeos cativos, identificando bactérias Gram-negativas da microbiota fecal por MALDI -TOF MS. Os resultados indicaram alta frequência de bactérias Gram-negativas nas fezes (96,5%), principalmente da família Enterobacteriaceae (88,7%). As mais prevalentes foram Escherichia coli (39,0%), Proteus vulgaris (12,2%), Klebsiella spp. (12,1%) e Raoultella ornithinolytica (8,7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. e Escherichia hermannii foram isolados com menor frequência. Todos esses agentes são potencialmente patogênicos para os papagaios e podem causar infecções sistêmicas em outros animais e seres humanos. Esses achados reforçam que o MALDI- TOF MS é um método rápido e preciso de identificação do microrganismo e avaliação do estado de saúde dos psitacídeos, fornecendo dados relevantes para auxiliar na tomada de decisões sobre os protocolos sanitários em centros de triagem de animais selvagens e sobre a possibilidade de reintrodução futura.

Antimicrobial susceptibility profile of enterobacteria isolated from wild grey-breasted parakeets (Pyrrhura griseipectus) / Perfil de susceptibilidade antimicrobiana de enterobactérias isoladas de periquitos-de-cara-suja (Pyrrhura griseipectus)

The grey-breasted parakeet (Pyrrhura griseipectus) is an endangered psittacine species that have been affected by illegal trade and deforestation. Currently, this endemic species is only found in three areas in Ceará state, in Brazil. This study aimed to investigate the frequency and diversity of Enterobacteriaceae in wild adult grey-breasted parakeets and determine their susceptibility to antimicrobial agents. Cloacal swab samples were collected from 27 individuals and environmental swabs (drag swabs) from five nests used by these birds. Twenty-seven strains from nine species of Enterobacteriaceae were recovered from cloacal swabs, and the most prevalent bacteria strains were Hafnia alvei (22%) and Pantoea agglomerans (22%). From environmental nest samples, seven strains from three bacterial species were isolated, being the P. agglomerans the most frequent species (100%). Twenty-two of the 27 isolates (81.4%) exhibited antibiotic resistance, varying from one to eight of the 12 antimicrobials commonly used. Resistance to amoxicillin was the most prevalent (70.4%), followed by azithromycin (22.2%) and ceftriaxone (18.5%). None of the strains were resistant to gentamicin, tobramycin, ciprofloxacin or tetracycline. The H. alvei was the main species presenting multidrug resistance, including resistance against meropenem, which is an important finding. These results could provide interesting information on the health of these endangered wild grey-breasted parakeets. They could also indicate that the obtained isolates are part of a group of bacteria that are typical components of the enteric microbiota of birds, which present elevated rates of resistance to amoxicillin.(AU)

O periquito-de-cara-suja (Pyrrhura griseipectus) é uma espécie de psitacídeo considerado pela IUCN como ameaçado de extinção, resultado do comércio ilegal e do desmatamento. Atualmente, essa espécie endêmica é encontrada apenas em três áreas no estado do Ceará, Brasil. O objetivo deste estudo foi investigar a frequência e a diversidade de Enterobacteriaceae em periquitos de peito cinza adultos selvagens e determinar sua suscetibilidade a agentes antimicrobianos. Amostras de suabes cloacais foram coletadas de 27 indivíduos e de suabes ambientais (suabes de arrasto) de cinco ninhos utilizados por essas aves. Vinte e sete cepas de nove espécies de Enterobacteriaceae foram isoladas a partir de suabes cloacais, sendo as cepas bacterianas mais prevalentes Hafnia alvei (22%) e Pantoea agglomerans (22%). Das amostras ambientais de ninhos foram isoladas sete linhagens de três espécies bacterianas, sendo P. agglomerans a espécie mais frequente (100%). Vinte e dois dos 27 isolados (81,4%) exibiram resistência a antibióticos, variando de um a oito dos 12 antimicrobianos comumente usados. A resistência a amoxicilina foi a mais prevalente (70,4%), seguida por azitromicina (22,2%) e ceftriaxona (18,5%). Nenhuma das cepas era resistente à gentamicina, tobramicina, ciprofloxacina ou tetraciclina. H. alvei foi a principal espécie que apresentou resistência a múltiplas drogas e que também esteve associada a um outro achado relevante desta pesquisa, que foi a detecção de um caso de resistência ao meropenem. Esses dados fornecem informações relevantes sobre a saúde desses periquitos selvagens ameaçados e permite concluir que os isolados obtidos fazem parte de um grupo de bactérias que normalmente compõe a microbiota entérica das aves, sendo a amoxicilina envolvida em elevadas taxas de resistência.(AU)

Antimicrobial susceptibility profile of enterobacteria isolated from wild grey-breasted parakeets (Pyrrhura griseipectus)

ABSTRACT: The grey-breasted parakeet (Pyrrhura griseipectus) is an endangered psittacine species that have been affected by illegal trade and deforestation. Currently, this endemic species is only found in three areas in Ceará state, in Brazil. This study aimed to investigate the frequency and diversity of Enterobacteriaceae in wild adult grey-breasted parakeets and determine their susceptibility to antimicrobial agents. Cloacal swab samples were collected from 27 individuals and environmental swabs (drag swabs) from five nests used by these birds. Twenty-seven strains from nine species of Enterobacteriaceae were recovered from cloacal swabs, and the most prevalent bacteria strains were Hafnia alvei (22%) and Pantoea agglomerans (22%). From environmental nest samples, seven strains from three bacterial species were isolated, being the P. agglomerans the most frequent species (100%). Twenty-two of the 27 isolates (81.4%) exhibited antibiotic resistance, varying from one to eight of the 12 antimicrobials commonly used. Resistance to amoxicillin was the most prevalent (70.4%), followed by azithromycin (22.2%) and ceftriaxone (18.5%). None of the strains were resistant to gentamicin, tobramycin, ciprofloxacin or tetracycline. The H. alvei was the main species presenting multidrug resistance, including resistance against meropenem, which is an important finding. These results could provide interesting information on the health of these endangered wild grey-breasted parakeets. They could also indicate that the obtained isolates are part of a group of bacteria that are typical components of the enteric microbiota of birds, which present elevated rates of resistance to amoxicillin.

RESUMO: O periquito-de-cara-suja (Pyrrhura griseipectus) é uma espécie de psitacídeo considerado pela IUCN como ameaçado de extinção, resultado do comércio ilegal e do desmatamento. Atualmente, essa espécie endêmica é encontrada apenas em três áreas no estado do Ceará, Brasil. O objetivo deste estudo foi investigar a frequência e a diversidade de Enterobacteriaceae em periquitos de peito cinza adultos selvagens e determinar sua suscetibilidade a agentes antimicrobianos. Amostras de suabes cloacais foram coletadas de 27 indivíduos e de suabes ambientais (suabes de arrasto) de cinco ninhos utilizados por essas aves. Vinte e sete cepas de nove espécies de Enterobacteriaceae foram isoladas a partir de suabes cloacais, sendo as cepas bacterianas mais prevalentes Hafnia alvei (22%) e Pantoea agglomerans (22%). Das amostras ambientais de ninhos foram isoladas sete linhagens de três espécies bacterianas, sendo P. agglomerans a espécie mais frequente (100%). Vinte e dois dos 27 isolados (81,4%) exibiram resistência a antibióticos, variando de um a oito dos 12 antimicrobianos comumente usados. A resistência a amoxicilina foi a mais prevalente (70,4%), seguida por azitromicina (22,2%) e ceftriaxona (18,5%). Nenhuma das cepas era resistente à gentamicina, tobramicina, ciprofloxacina ou tetraciclina. H. alvei foi a principal espécie que apresentou resistência a múltiplas drogas e que também esteve associada a um outro achado relevante desta pesquisa, que foi a detecção de um caso de resistência ao meropenem. Esses dados fornecem informações relevantes sobre a saúde desses periquitos selvagens ameaçados e permite concluir que os isolados obtidos fazem parte de um grupo de bactérias que normalmente compõe a microbiota entérica das aves, sendo a amoxicilina envolvida em elevadas taxas de resistência.

Companion psittacine birds as reservoir of gentamicin and vancomycin-resistant Enterococcus spp / Psitacídeos de companhia como reservatórios de Enterococcus spp. gentamicina e vancomicina-resistentes

Enterococcus are recognized worldwide as significant nosocomial agents that have been continuously envolving to adapt to different niches and acquire resistance to several antibiotic classes. Vancomycin and gentamicin-resistant strains of E. faecalis and E. faecium have been associated with nosocomial human infections. Some epidemiological studies suggest the participation of pets as reservoirs of vancomycin and gentamicin-resistant Enterococcus strains. However, the role of companion birds as reservoirs of these strains has been poorly studied. In this study, 126 psittacine birds were evaluated and 26.9% carried Enterococcus spp., including the species E. faecalis, E. faecium, E. hirae, E. phoeniculicola, E. gallinarum and E. casseliflavus. The antibiotic resistance profile showed four high-level gentamicin-resistance (HLGR) strains. In addition, two strains presented intermediate levels of vancomycin resistance. Resistant strains were isolated from fecal and oropharynx samples of sick and clinically healthy birds, suggesting that psittacine birds may act as reservoirs of HLGR Enterococcus spp. However, sick birds appear to be more implicated in the enterococci transmission than healthy birds.(AU)

Enterococcus são reconhecidos mundialmente como significantes agentes nosocomiais, que têm continuamente se adaptado a diferentes nichos e adquirido resistência a várias classes de antibióticos. Cepas de E. faecalis e E. faecium vancomicina e gantamicina-resistentes têm sido associadas a infecções nosocomiais em humanos. Alguns estudos epidemiológicos sugerem a participação de aves como reservatórios de cepas de Enterococcus vancomicina e gentamicina-resistentes. Entretanto, a relação das aves de companhia como reservatórios destas cepas tem sido pouco estudada. Neste estudo, 126 psitacídeos foram avaliados, e 26,9% destes eram portadores de Enterococcus spp., incluindo as espécies E. faecalis, E. faecium, E. hirae, E. phoeniculicola, E. gallinarum e E. casseliflavus. O perfil de resistência antibiótica mostrou quatro cepas com alto nível de resistência a gentamicina (ANRG). Além de duas cepas com nível intermediário de resistência a vancomicina. As cepas resistentes foram isoladas de amostras fecais e de orofaringe de aves doentes e clinicamente saudáveis, sugerindo que psitacídeos podem estar atuando como reservatórios para Enterococcus spp. com ANRG. Contudo, Aves doentes parecem estar mais relacionadas à transmissão de enterococcus, do que aves saudáveis.(AU)

Investigação de Salmonella spp. em Psittaciformes exóticos e nativos mantidos em cativeiro na região central do Rio Grande do Sul / Investigation of Salmonella spp. in exotic and native Psittaciformes kept in captivity in the central region of Rio Grande do Sul

As doenças infecciosas são reconhecidamente causadoras de declínios populacionais de animais silvestres e algumas delas podem representar ameaça à saúde pública. O presente estudo objetivou investigar a ocorrência de Salmonella spp. em Psittaciformes exóticos e nativos mantidos em cativeiro na região central do Rio Grande do Sul, além de comparar os resultados obtidos por meio do método bacteriológico convencional e da reação em cadeia da polimerase (PCR), mediante a utilização de material fecal do ambiente, evitando-se o estresse da contenção. Durante os meses de agosto/2016 e setembro/2016 foram coletadas amostras de fezes frescas de 90 gaiolas em dois criatórios, representando 180 aves. Com as duas técnicas empregadas nas análises, as amostras foram negativas para Salmonella spp., contudo foram detectadas bactérias da família Enterobacteriaceae: Escherichia coli, Cedecea sp. e Citrobacter freundii. Considera-se importante a continuidade do monitoramento dos criatórios, já que o patógeno investigado pode estar em aves portadoras e se manifestar em situações de estresse, representando riscos enquanto zoonose e prejuízos à saúde das aves.(AU)

Infectious diseases are known to cause decline in wildlife population and some of them may represent a threat to public health. This study aimed to investigate the occurrence of Salmonella spp. in exotic and native Psittaciformes kept in captivity in the central region of Rio Grande do Sul, Brazil, and to comparing the results obtained through the conventional bacteriological method and the polymerase chain reaction (PCR), using fecal matter collected from the environment, avoiding the containment stress. From August to September 2016, samples of fresh feces were collected from 90 cages in two breeding grounds, representing 180 birds. According to both analysis techniques the samples were negative for Salmonella spp., however, bacteria from the Enterobacteriaceae family: Escherichia coli, Cedecea sp. and Citrobacter freundii were detected. Continuous monitoring of breeding grounds is important since the pathogen investigated can be found in carrier birds and manifest itself in stressful situations presenting risks such as zoonosis and reduced bird health.(AU)

Proventricular dilatation disease (PDD) outbreak in blue-and-gold macaws (Ara ararauna) in the State of Santa Catarina, southern Brazil / Surto de doença da dilatação proventricular em araras-canindé (Ara ararauna) no estado de Santa Catarina, sul do Brasil

Proventricular dilatation disease (PDD) is a lethal and important disease of captive psittacine birds, and affects a wide range of species, including endangered ones, and lacks an effective treatment. This report describes PDD in three blue-and-gold macaws (Ara ararauna) in southern Brazil. All three macaws originated from the same aviary and presented similar clinical signs including anorexia, apathy, emaciation and prostration. At necropsy, one of the macaws presented an enlarged proventriculus. Histologically, lymphoplasmacytic infiltrates was observed in the ganglia and nerves of the esophagus, crop, proventriculus, ventriculus, heart, adrenal glands, and adrenal medulla of all three cases. Two macaws had meningoencephalomyelitis and one had myocarditis. Immunohistochemistry identified PaBV antigen in the brain, proventricular, ventricular ganglia, and epicardial ganglia, and cardiomyocytes of all three macaws.(AU)

A doença da dilatação proventricular (PDD) e uma importante e fatal doença de psitacídeos de cativeiro, que afeta uma grande variedade de espécies e não tem um tratamento efetivo até o momento. Este relato descreve PDD em três araras canindé (Ara ararauna) no sul do Brasil. Todas as três araras eram provenientes do mesmo criatório e apresentaram sinais clínicos semelhantes incluindo anorexia, apatia, emaciação e prostração. Na necropsia, uma das araras apresentou proventrículo dilatado. No exame histopatológico, infiltrados linfoplasmacitários foram observados em gânglios e nervos do esôfago, inglúvio, proventrículo, moela, coração, glândulas adrenais e rins de todos os casos. Adicionalmente, meningoencefalomielite foi observada em duas araras e miocardite em uma. A imuno-histoquímica identificou antígenos de PaBV no encéfalo, coração, proventrículo e moela de todos os casos.(AU)

Genetic similarity between APEC and Escherichia coli strains isolated from Guaruba guarouba in a survey on healthy captive psittacine birds / Similaridade genética entre APEC e cepas de Escherichia coli isoladas de Guaruba guarouba em um estudo com psitacídeos hígidos de cativeiro

The role of psittacine birds as a reservoir of avian pathogenic Escherichia coli (APEC) is not known but would be helpful in understanding the human – animal interface, since the enteric microbiota of these birds consists of Gram positive bacteria. The aim of this study was to identify the presence of APEC in feces of clinically healthy Guaruba guarouba. To do this, we isolated and analyzed E. coli from cloacal fecal samples taken from 87 psittacine birds from six zoologic parks, three commercial breeders and one conservation breeder. Of the 87 birds examined, 46 (52.87%) presented E. coli in feces. The presence of the following eight virulence genes was determined by the polymerase chain reaction (PCR): irp2, iucD, iss, vat, cvi/cva, tsh, astA, and papC, and 29 (63.04%) of 46 E. coli isolates tested were positive at least one of the eight genes studied. The frequency of virulence genes observed in isolates of E. coli were 32.6% (15/46) irp2, 26% (12/46) iucD, 19.5% iss (9/46), 17.4% vat (8/46), 17.4% cvi/cva (8/46), 8.7% tsh (4/46), 4.4% astA (2/46) and 0% papC (0/46). The isolates were grouped in 13 genotypic profiles according to virulence gene combinations, but only 2 isolates were classified as APEC, with the pattern iuc, iss, cvi/cva, irp + and iuc, iss, cvi/cva, irp, tsh, vat +. This study reveals the presence of APEC in clinically healthy captive G. guarouba, suggesting that these psittacine birds may act as reservoir for pathogenic microorganisms. Epidemiological studies are needed to determine the relevance of this species as a reservoir and the implications for conservation of endangered species G. guarouba.

O papel dos psitacídeos como reservatório de Escherichia coli patogênicas para aves (APEC) não é conhecido, mas será útil para a compreensão da interface humano-animal, uma vez que a microbiota entérica destas aves é composta por bactérias Gram-positivas. O objetivo deste estudo foi identificar a presença de APEC em fezes de Guaruba guarouba clinicamente saudáveis. Para isso, foram isoladas e analisadas E. coli presentes em fezes cloacais coletadas de 87 psitacídeos, alojados em seis zoológicos, três criatórios comerciais e um criatório conservacionista. Das 87 aves examinadas, 46 (52,87%) apresentaram E. coli nas fezes. A presença de oito genes de virulência foi determinada pela reação em cadeia pela polimerase (PCR): irp2, iucD, iss, vat, cvi/cva, tsh, astA, e papC, e 29 (63,04%) dos 46 isolados foram positivos para pelo menos um dos oito genes estudados. A frequência dos genes de virulência observada nos isolados de E. coli foi 32.6% (15/46) irp2, 26% (12/46) iucD, 19.5% iss (9/46), 17.4% vat (8/46), 17.4% cvi/cva (8/46), 8.7% tsh (4/46), 4.4% astA (2/46) e 0% papC (0/46). Os isolados foram agrupados em 13 perfis genotípicos de acordo com combinações de genes de virulência, mas apenas duas amostras foram classificadas como APEC, com o perfil iuc, iss, cvi/cva, irp + e iuc, iss, cvi/cva, irp, tsh, iuc, iss, +. Este estudo revela a presença de APEC em aves de cativeiro (G. guarouba) clinicamente saudáveis, sugerindo que estes psitacídeos possam atuar como reservatórios de micro-organismos patogênicos. Estudos epidemiológicos são necessários para determinar a relevância desta espécie como reservatório e as implicações para a conservação da espécie ameaçada G. guarouba.

Sorogrupos e genes de virulência em Escherichia coli isoladas de psitacídeos / Serogroups and virulence genes of Escherichia coli isolated from psittacine birds

Escherichia coli isolates from 24 sick psittacine birds were serogrouped and investigated for the presence of genes encoding the following virulence factors: attaching and effacing (eae), enteropathogenic E. coli EAF plasmid (EAF), pili associated with pyelonephritis (pap), S fimbriae (sfa), afimbrial adhesin (afa), capsule K1 (neu), curli (crl, csgA), temperature-sensitive hemagglutinin (tsh), enteroaggregative heat-stable enterotoxin-1 (astA), heat-stable enterotoxin -1 heat labile (LT) and heat stable (STa and STb) enterotoxins, Shiga-like toxins (stx1 and stx2), cytotoxic necrotizing factor 1 (cnf1), haemolysin (hly), aerobactin production (iuc) and serum resistance (iss). The results showed that the isolates belonged to 12 serogroups: O7; O15; O21; O23; O54; O64; O76; O84; O88; O128; O152 and O166. The virulence genes found were: crl in all isolates, pap in 10 isolates, iss in seven isolates, csgA in five isolates, iuc and tsh in three isolates and eae in two isolates. The combination of virulence genes revealed 11 different genotypic patterns. All strains were negative for genes encoding for EAF, EAEC, K1, sfa, afa, hly, cnf, LT, STa, STb, stx1 and stx2. Our findings showed that some E. coli isolated from psittacine birds present the same virulence factors as avian pathogenic E. coli (APEC), uropathogenic E. coli (UPEC) and Enteropathogenic E. coli (EPEC) pathotypes.

Amostras de Escherichia coli isoladas de 24 psitacídeos doentes foram sorogrupadas e investigadas para a presença de genes que codificam os seguintes fatores de virulência: attaching e effacing (eae), plasmídeo EAF (EAF), pili associado à pielonefrite (pap), fímbria S (sfa), adesina afimbrial (afa), cápsula K1 (neu), curli (crl, csgA), hemaglutinina termosensível (tsh), enterotoxina termo-estável 1 de E. coli enteroagregativa (astA), toxina termolábil (LT) e toxina termoestável (STa e STb), Shiga-like toxinas (stx1 e stx2), fator citotóxico necrotizante 1 (cnf1), hemolisina (hly), produção de aerobactina (iuc) e resistência sérica (iss). Os resultados mostraram que os isolados pertenciam a 12 sorogrupos: O7; O15; O21; O23; O54; O64; O76; O84; O88; O128; O152 e O166. Os genes de virulência encontrados foram: crl em todos os isolados, pap em 10 isolados, iss em sete isolados, csgA em cinco isolados, iuc e tsh em três isolados e eae em dois isolados. A combinação dos genes de virulência revelou 11 perfis genotípicos distintos. Todas as amostras foram negativas para os genes que codificam EAF, EAEC, K1, sfa, afa, hly, cnf, LT, STa, STb, stx1 e stx2. Estes resultados demonstraram que algumas amostras de E. coli isoladas de psitacídeos apresentam os mesmos fatores de virulência presentes nos patotipos de E. coli patogênicas para aves (APEC), uropatogênicas (UPEC) e E. coli enteropatogênicas (EPEC).

Detección de anticuerpos IgG contra Chlamydophila psittaci en aves psitácidas en cautiverio: Maracay, Venezuela / Detection of IgG antibodies against Chlamydophila psittaci in captive psittacine birds: Maracay, Venezuela

La clamidiosis es una enfermedad cosmopolita muy conocida en aves de la familia Psitacidae, cuyo agente etiológico es Chlamydophila psittaci. Puede causar desde una leve neumonía hasta la muerte del animal; además es posible su transmisión a otros animales y al humano a través de la inhalación del microorganismo, produciendo cuadros severos de neumonía y otras patologías. Las poblaciones con mayor riesgo de adquirir esta zoonosis son veterinarios, criadores de aves y toda persona en contacto con aves infectadas. En Venezuela no existen registros epidemiológicos de esta enfermedad en psitácidos ni en humanos. El objetivo de este trabajo fue detectar la presencia de anticuerpos contra Chlamydophila psittaci en aves psitácidas del parque Zoológico Las Delicias y el Zoocriadero Canaima por medio de la técnica de ELISA en fase sólida. Para ello se analizaron 24 muestras de suero de aves encontrándose 17 positivas, lo que se traduce en una prevalencia de anticuerpos IgG contra Cp. psittaci de 71%. Con estos resultados se pretende llamar la atención de las autoridades sanitarias respectivas sobre el impacto e importancia de la enfermedad en Venezuela.

Chlamydiosis is a well known cosmopolitan disease in birds belonging to the Psittacidae family whose etiologic agent is Chlamydophila psittaci. It can produce from mild pneumonia to the death of the animal; its transmission to other animals and to humans is also possible through the inhalation of the microorganism, producing severe pneumonia episodes, as well as other pathologies. The populations with the highest risk of acquiring this zoonosis are those of veterinaries, bird keepers and all persons in contact with infected birds. In Venezuela there are no epidemiologic registries of this disease in psittacine birds or in humans. The purpose of this study was to detect the presence of antibodies against Chlamydophila psittaci in psittacine birds from the Las Delicias zoo and the Canaima Zoogrower through a solid phase ELISA technique. Twenty-four serum samples taken from birds were analyzed and 17 were found to be positive, which results in a 71% prevalence of IgG antibodies against C. psittaci. With these results we intend to call the attention of the respective public health authorities on the impact and importance of this disease in Venezuela.

Infecção por C. psittaci: uma revisão com ênfase em psitacídeos / C. psittaci infection: a review with emphasis in psittacines

A clamidiose ou ornitose é uma doença infecciosa, causada pela bactéria Chlamydophila psittaci, que acomete aves e mamíferos. Trata-se de uma das principais zoonoses de origem aviária. A transmissão ocorre principalmente por inalação de secreções contaminadas. Os sinais clínicos mais comuns incluem alterações no sistema gastrointestinal, respiratório e ocular, porém é possível encontrar aves infectadas sem sinais aparentes, dificultando a identificação da doença. O diagnóstico definitivo em aves vivas pode ser difícil, devido às características da infecção pela bactéria. Há duas principais abordagens para o diagnóstico, a primeira envolve a detecção direta da bactéria e a segunda implica a detecção de anticorpos anti-Chlamydophila sp. O tratamento é longo e envolve o uso de tetraciclinas, quinolonas ou macrolídeos, durante 21-45 dias, dependendo da espécie e do fármaco de escolha. Atualmente, o Brasil não dispõe de medidas padronizadas que visam a guiar o clínico na identificação, manejo e tratamento para a doença. Tais medidas tornam-se necessárias, bem como a pesquisa de novos métodos diagnósticos e auxiliares para a doença.

Chlamydiosis or ornitosis is an infectious disease which affects birds and mammals caused by the bacteria Chlamydophila psittaci. It is one of the most important avian zoonosis. The transmission occurs through inhalation of infected secretions. The most common clinical signs include problems in the gastrointestinal, respiratory and ocular tracts. However, it is possible to find infected birds with no clinical signs, which hinders the diagnosis. Definitive diagnosis in live birds can be difficult, because of the bacteria's infection characteristic. There are two main approaches to the diagnosis, the first one involves the direct detection of the bacteria, the second one involves the detection of antibodies anti-Chlamydophila sp. The treatment is long and includes the use of tetraciclines, quinolones and macrolides, during 21-45 days, depending of the specie or drug of choice. Currently, Brazil has no standardized procedures to guide clinicians in the identification, management, and treatment of the disease. Such measures become necessary, as well as research on new diagnostic methods.