Use of Schirmer strips and conjunctival swabs for virus detection on the ocular surface of adults: a scoping review / Fitas de Schirmer e swab conjunctival para detecção de vírus na superfície ocular de adultos: scoping review

ABSTRACT Schirmer strips and conjunctival swabs are used in ophthalmology for the collection of tears and fluids. One of the biggest challenges during the COVID-19 pandemic has been accurate diagnosis and, in some cases, ocular manifestations are among the first symptoms. In this context, this study aimed to collect evidence to support the use of Schirmer strips and conjunctival swabs as a method of sample collection for viral analysis. A literature search was conducted following the Scoping Review protocol defined by The Joanna Briggs Institute. Studies were analyzed regarding virus research, collection methods, and sample analysis. The findings support that viruses can be detected on the ocular surface through analysis of Schirmer strips and conjunctival swabs. However, additional studies with larger samples and time data are necessary to confirm these conclusions.

RESUMO A fita de Schirmer e o swab conjunctival são utilizados na oftalmologia como métodos de coleta para lágrimas e fluidos. Durante a pandemia da COVID-19, um dos desafios foi o diagnóstico correto e se sabe que, em alguns casos, as manifestações oculares podem ser um dos primeiros sintomas. Nesse contexto, este estudo tem como objetivo levantar evidência que destaque o uso de fitas de Schirmer e de swabs conjuntivais como método de coleta para análise viral. Conduziu-se uma revisão de literatura seguindo o protocolo para Scoping Review definido pelo Joanna Briggs Institute. Os pesquisadores analisaram os estudos em busca do vírus pesquisado, os métodos de coleta e os métodos de análise. Vírus podem ser detectados na superfície ocular através da análise de fitas de Schirmer e de swabs conjuntivais, entretanto novos estudos com populações maiores e com definições claras de tempo são necessários para conclusões mais assertivas no tema.

Staphylococcus hominis: a rare cause of endophthalmitis / Staphylococcus hominis: uma causa rara de endoftalmite

ABSTRACT Staphylococcus hominis (S. hominis) is a coagulase-negative Staphylococci and an infrequent cause of endophthalmitis. Due to its ability to produce biofilm, especially in diabetic patients, strains may acquire antibiotic resistance. We present two cases of S. hominis endophthalmitis, one with acute endophthalmitis after intravitreal bevacizumab injection and one with chronic endophthalmitis following undiagnosed penetrating ocular trauma. Although there are only four published S. hominis endophthalmitis cases in the literature, to the best of our knowledge, there has been no previously published case after intravitreal bevacizumab.

RESUMO Staphylococcus hominis (S. hominis) é um estafilococo coagulase-negativo e uma causa pouco frequente de endoftalmite. Devido à sua capacidade de produzir biofilme, especialmente em pacientes diabéticos, cepas dessa bactéria podem adquirir resistência a antibióticos. Este relato apresenta dois casos de endoftalmite por S. hominis: um de endoftalmite aguda após injeção intravítrea de bevacizumabe e outro de endoftalmite crônica após trauma ocular penetrante não diagnosticado. Embora existam apenas quatro casos de endoftalmite por S. hominis publicados na literatura, até onde sabemos não houve nenhum caso publicado anteriormente após bevacizumabe intravítreo.

Relación estructura-función de la enzima uroporfirinógeno descarboxilasa: implicancias para la comprensión y el tratamiento de la porfiria cutánea tarda / Structure-function relationship of the enzyme uroporphyrinogen decarboxylase: implications for the understanding and treatment of porphyria cutanea tarda / Relação estrutura-função da enzima uroporfirinogênio descarbioxilase: implicações para a compreensão e tratamento da porfiria cutânea tardia / Reconocimiento a la trayectoria del Prof. Dr. Juan Miguel Castagnino†

Resumen La uroporfirinógeno descarboxilasa humana (UROD-h) es la quinta enzima del camino biosintético del hemo y su actividad deficiente, relacionada a mutaciones en su gen, se encuentra asociada a un subgrupo de porfirias. El objetivo de este trabajo fue estudiar la relación entre la dimerización de la enzima y su actividad enzimática y comprobar si la dimerización de UROD-h es imprescindible tanto para la primera etapa de la reacción (urogen→heptagen), como para la segunda etapa (heptagen→coprogen). Con ese objetivo, se expresó y purificó la UROD-h hasta homogeneidad, se analizó el comportamiento dímero-monómero bajo distintas condiciones que pudieran desplazar el equilibrio de dimerización y se evaluó la actividad enzimática en dichas condiciones. Los resultados obtenidos sugieren que la especie activa para la primera etapa de la reacción es el homodímero y que tanto el dímero como el monómero se comportan como especies activas para la segunda etapa de la reacción. Se propone que mutaciones clínicas como la Y311C, existentes en pacientes con porfiria cutánea tarda, podrían afectar la estabilidad del dímero y podrían ser el blanco para futuras terapias génicas.

Abstract Human uroporphyrinogen decarboxylase (UROD-h) is the fifth enzyme in the heme biosynthetic pathway and its deficient activity, related to mutations in its gene, is associated with a subset of porphyrias. The objective of this work was to study the relationship between the dimerisation of the enzyme and its enzymatic activity and to verify if the dimerisation of UROD-h is essential both for the first stage of the reaction (urogen→heptagen), and for the second stage (heptagen→ coprogen). With this objective, the UROD-h was expressed and purified to homogeneity, the dimer- monomer behaviour was analysed under different conditions, which could shift the dimerisation equilibrium, and the enzymatic activity was evaluated under these conditions. The results obtained suggest that the active species for the first stage of the reaction is the homodimer, and both the dimer and the monomer behaved as active species for the second stage of the reaction. It is proposed that clinical mutations such as Y311C, existing in porphyria cutanea tarda patients, could affect dimer stability and could be the target of future gene therapies.

Resumo A enzima uroporfirinogênio descarboxilase humana (UROD-h) é a quinta enzima da via biossintética do heme e sua atividade deficiente, relacionada com mutações em seu gene, está associada a um subgrupo de porfirias. O objetivo deste trabalho foi estudar a relação entre a dimerização da enzima e sua atividade enzimática e comprovar se a dimerização da UROD-h é imprescindível tanto para a primeira etapa da reação (urogênio→heptagênio), quanto para a segunda etapa (heptagênio→coprogênio). Com esse objetivo, a UROD-h foi expressa e purificada até a homogeneidade, o comportamento de dímero-monômero foi analisado sob diversas condições, que puderam deslocar o equilíbrio de dimerização, e a atividade enzimática foi avaliada em tais condições. Os resultados obtidos sugerem que a espécie ativa para a primeira etapa da reação é o homodímero, e tanto o dímero quanto o monômero se comportam como espécies ativas para a segunda etapa da reação. Propõe-se que mutações clínicas como Y311C, existentes em pacientes com porfiria cutânea tardia, poderiam afetar a estabilidade do dímero e poderiam ser o alvo de futuras terapias gênicas em porfiria cutânea tardia.

The importance of considering the possibility of ocular sporotrichosis in areas with high incidence rates of sporotrichosis / Esporotricose ocular: a importância de ser considerada em áreas com grande incidência de esporotricose

ABSTRACT Ocular sporotrichosis involving adnexa can present in 4 types: granulomatous conjunctivitis, dacryocystitis, Parinaud oculoglandular syndrome, and bulbar conjunctivitis. The incidence of ocular sporotrichosis has increased in regions with high incidence rates of sporotrichosis. We present a series of three cases of ocular involvement by the fungus Sporothrix species, including its manifestations, approaches, and relevance in areas where sporotrichosis has considerable incidence rates.

RESUMO A esporotricose ocular envolvendo anexos pode se apresentar de quatro formas: conjuntivite granulomatosa, dacriocistite, Síndrome Oculoglandular de Parinaud e conjuntivite bulbar. A esporotricose ocular, apesar de incomum, tem aumentado em regiões com alta incidência de esporotricose. Apresentamos uma série de três casos de envolvimento ocular pelo fungo Sporothrix sp.: suas manifestações, abordagem e sua relevância em áreas com alta incidência de esporotricose.

Produção e uso de filtros de água com carvão ativado derivado de matérias sustentáveis / Production and use of water filters with activated carbon derived from sustainable materials

Objetivo: avaliar a eficiência de filtros de tratamento de água, usando carvão ativado de diferentes fontes de resíduo de biomassa. Métodos: trata-se de um estudo experimental, descritivo, de caráter quantitativo, realizado no Centro Universitário Católica de Quixadá, Ceará-Brasil, durante o período de janeiro a junho de 2018. Foram preparados filtros de carvão ativados e, posteriomente, sua eficiência no tratamento de água foi avaliada. Resíduos de descarte de madeira, a entrecasca do coco verde, a casca do fruto do caju e do colmo de bambu foram usados como fonte de matéria-prima. O filtro de tratamento de água foi montado, usando o método coluna de cromatografia, adicionando areia e algodão como outros meios filtrantes. Parâmentros físico-químicos foram utilizados na avaliação da eficiência dos filtros construídos. Resultados: a análise de componente principal selecionou dois componentes da qualidade de água, explicando 80,081% da variância total. O coeficiente de correlação cofenética de r=0.9572 indica que o dendograma estimado foi bom, considerando os parâmetros de qualidade da água. Entre os filtros, o bambu apresentou-se como melhor resposta entre filtros testados, sendo responsável pela redução de diversos fatores como cor, turbidez, dureza total e sódio. Conclusão: os fitros de carvão ativado derivado do descarte de madeira e da entrecasca do fruto do caju obtiveram pouca influência na melhoria da qualidade da água, em relação à amostra controle.

Objective: to evaluate the efficiency of water treatment filters using activated carbon from different sources of biomass residue. Methods: this is a descriptive experimental study of a quantitative nature carried out at the Centro Universitário Católica de Quixadá, Ceará-Brazil, during the period from January to June 2018. Activated carbon filters were prepared, and subsequently, their efficiency in water treatment was evaluated. Wood waste, green coconut husk, cashew nut shell, and bamboo stem were used as a source of raw material. The water treatment filter was assembled using the column chromatography method by adding sand and cotton as other filter media. Physicochemical parameters were used to evaluate the efficiency of the built filters. Results: principal component analysis selected two water quality components, explaining 80.081% of the total variance. The cophenetic correlation coefficient of r=0.9572 indicates that the estimated dendrogram was good, considering the water quality parameters. Among the filters, bamboo showed the best response among the filters tested, being responsible for the reduction of several factors such as color, turbidity, total hardness, and sodium. Conclusion: activated carbon filters derived from discarded wood and cashew nut shells had little influence on improving water quality compared to the control sample.

Desenvolvimento de jogos didáticos para o ensino de Bioquímica / Development of educational games for biochemical education

A Pesquisa de Educação em Bioquímica investiga aspectos relacionados ao ensino-aprendizagem, principalmente no ensino superior. Dentre as alternativas às aulas expositivas, os jogos didáticos apresentam-se como recursos que promovem a elaboração de estratégias, a tomada de decisão, o intercâmbio de informações entre os pares, etc. Estas características configuram os jogos didáticos como ferramentas importantes para a aprendizagem ativa. O objetivo deste trabalho foi desenvolver jogos didáticos para o ensino de bioquímica. Para elaboração dos objetos de ensino, utilizou-se uma estratégia baseada em três etapas: definição das características educativas, elaboração do design conceitual e desenvolvimento do jogo e pré-avaliação. A partir da gravação e transcrição de áudio de algumas partidas dos jogos e, quando possível, por questionários, foram feitas avaliações preliminares a fim de inferir o potencial educacional dos recursos didáticos. Dois jogos didáticos foram desenvolvidos: "Pura Proteína! Uma Experiência no Laboratório de Bioquímica" e "Perfil Lipídico". O objetivo principal do primeiro jogo foi desenvolver competências de planejamento e teste de hipóteses cientificas a partir da simulação de experimentos de purificação de proteínas. A construção deste material foi fundamentada em preceitos teóricos do Ensino por Investigação. Pura Proteína é constituído por um tabuleiro e cerca de 4000 cartas e fichas. Os jogadores, ao início do jogo, recebem um desafio: obter uma determinada quantidade de uma proteína específica, purificada a partir de uma solução composta por uma mistura de proteínas. Para a consecução desse objetivo os estudantes recebem informações sobre alguns métodos de purificação de proteínas mais utilizados. Para vencer, os participantes devem combinar métodos de forma eficaz a obter, antes dos outros jogadores, a quantidade de proteína pura desejada. O jogo foi aplicado com estudantes de graduação em Biomedicina e foi feita uma análisedo processo investigativo que empregavam. Verificou-se que o jogo foi capaz de promover a elaboração de um plano de trabalho, tomada de decisão a partir de argumentações, teste e verificação de hipóteses, ao mesmo tempo em que promovia a diversão. O segundo jogo desenvolvido foi "Perfil Lipídico", por meio do qual pretendeu-se explorar a diversidade das estruturas de lipídeos e os grupos químicos que os compunham. O jogo dispõe de quinze lipídeos, distribuídos em ácidos graxos e lipídeos complexos e, para vencer, os jogadores devem descobrir a identidade de um lipídeo a partir de dicas e desenhar sua estrutura. A prática do jogo permitiu diagnosticar pequenos erros conceituais dos jogadores, revelados ao desenhar as estruturas. Ao responder um questionário, os participantes atestaram que este jogo era motivador, de fácil aplicação em sala de aula e que permitiu revisar a estrutura dos lipídeos. Os dois jogos, com objetivos educacionais muito diferentes, foram desenvolvidos a partir de uma estratégia rigorosa, que permitiu o equilíbrio entre as funções lúdicas e educativas, necessário para o sucesso desta estratégia em sala de aula. Em razão da pandemia da COVID-19, os jogos não puderam ser aplicados com o público apropriado, o que impediu uma avaliação mais robusta do potencial educacional. Os dados coletados, no entanto, forneceram indícios de que ambos os objetos de ensino são eficazes para promover o aprendizado de bioquímica, ao mesmo tempo que a diversão própria do jogo

Biochemical Education research focuses on aspects related to teaching and learning, mostly in higher education. Among several methodological alternatives to traditional classes, educational games are tools that promote the development of problem-solving strategies, decision-making, peer exchange of information, etc. These features make educational games valuable tools for active learning. The main goal of the work herein presented was to develop educational games for Biochemical Education. For this purpose, a three-step based strategy was designed: definition of educational features, conceptual game design and development and evaluation. To assess educational potential, qualitative data were obtained by recording and transcribing audio captured during plays, and, when possible, questionnaires were applied. Two educational games were developed: "Pure Protein! An Experiment in the Biochemistry Lab" and "Ten Questions - Lipids". The main learning purpose of the first game was to develop skills in planning and testing scientific hypotheses through a simulation of a protein purification experiment. The game development was based on an Inquirybased learning approach. Pure Protein is a board game set-up with ca. 4000 cards. Players are challenged to obtain an amount of a specific protein, purified from a protein solution. To achieve this goal, students receive general information about common methods used to purify proteins. To win, contestants should efficiently combine methods to obtain the needed protein before their adversaries. The game was applied to Biomedicine undergraduate students, and an analysis of the inquiry process they went through was done. It was verified that the game promotes elaboration of a working plan, decision-making supported by arguments, testing and verifying hypotheses while being a fun and enjoyable activity. The second game is called "Ten Questions - Lipids", by which we intended to explore the structural diversity of lipids and the chemical groups in their composition. The game is based on fifteen molecules, ranging from fattyacids to complex lipids. The goal is to figure out the identity and the structure of a given lipid, using clues given throughout the gameplay. The game application allowed us to assess players conceptual mistakes revealed by their drawings of chemical structures. In questionnaire answers, students stated that the game was motivating, suitable for the classroom and that it promoted the review of lipid structures. Both games, with different learning objectives, were developed using a rigorous strategy, which enables the balance between the ludic and educational functions needed to achieve educational game success. Due to the COVID-19 pandemic, the games werent properly evaluated with different, larger groups. Nevertheless, the collected data suggest that the teaching objects are efficient both in promoting biochemical learning and fun

Characterization and distribution of viridans group streptococci isolated from infectious endophthalmitis and keratitis / Caracterização e distribuição de estreptococos do grupo viridans isolados de endoftalmite infecciosa e ceratite

ABSTRACT Purpose: The aims of this study were to characterize alpha-hemolytic streptococci among isolates from cases of infectious endophthalmitis and keratitis and to determine their distributions. Methods: The sample included 27 and 35 nonduplicated isolates of alpha-hemolytic streptococci recovered from patients with infectious endophthalmitis (2002-2013) and keratitis (2008-2013), respectively. Isolates were identified by the optochin susceptibility and bile solubility tests, using a biochemical identification system. The minimum inhibitory concentration was determined by the broth microdilution method. Molecular identification was performed by analyses of three constitutive genes and the complementary multilocus sequence. The molecular epidemiology of Streptococcus pneumoniae was investigated using multilocus sequence typing, and the presence of the capsular polysaccharide-encoding gene was assessed using conventional polymerase chain reaction. Outcomes were evaluated using the patients' medical records. Results: Phenotypic tests differentiated S. pneumoniae from other alpha-hemolytic streptococci, consistent with later molecular identifications. Streptococcus oralis was significantly prevalent among the endophthalmitis isolates, as was S. pneumoniae in the keratitis isolates. High levels of susceptibility to antibiotics were observed, including vancomycin, cephalosporins, and fluoroquinolones. High genetic variability was detected among the 19 S. pneumoniae strains, with 15 predicted to be encapsulated. The medical records of patients with infectious endophthalmitis were reviewed (n=15/27; 56%), and final visual acuity was assessed in 12 cases (44%). Many patients progressed to a final visual acuity state of "no light perception" (6/12; 50%), "light perception" (3/12; 25%), or "hand motion" (1/12; 8%). The medical records of patients with infectious keratitis were also reviewed (n=24/35; 69%), and final visual acuity was assessed in 18 cases (51%). Similarly, most patients progressed to a final visual acuity state of "no light perception" (6/18; 33%), "light perception" (1/18; 6%), or "hand motion" (6/18; 33%). Overall, the majority of patients progressed to a final visual acuity state of "no light perception" (12/30), "light perception" (4/30), or "hand motion" (7/30). Conclusions: The distribution of alpha-hemolytic streptococci in ocular infections suggested the presence of a species-specific tissue tropism. The prognoses of patients with ocular streptococcal infections were highly unfavorable, and antibiotic resistance did not contribute to the unfavorable clinical progressions and poor outcomes.

RESUMO Objetivo: O objetivo deste estudo foi caracterizar os estreptococos alfa-hemolíticos isolados de endoftalmite infecciosa e ceratite e determinar sua distribuição. Métodos: A amostra incluiu 27 e 35 isolados não-duplicados de estreptococos alfa-hemolíticos recuperados de pacientes com endoftalmite infecciosa (2002-2013) e ceratite (2008-2013), respectivamente. Os isolados foram identificados pelos testes de suscetibilidade à optoquina e bile solubilidade, utilizando um sistema de identificação bioquímica. A concentração inibitória mínima foi determinada pelo método de microdiluição em caldo. A identificação molecular foi realizada pela análise de três genes constitutivos e análise complementar de sequências multilocus. A epidemiologia molecular do Streptococcus pneumoniae foi investigada por tipagem de sequência multilocus, e a presença do gene codificador do polissacarídeo capsular foi avaliada por reação em cadeia da polymerase convencional. Os resultados foram avaliados utilizando os prontuários médicos dos pacientes. Resultados: Os testes fenotípicos diferenciaram S. pneumoniae dos outros estreptococos alpha-hemolíticos, consistentes com identificações moleculares posteriores. S. oralis foi significativamente prevalente entre os isolados de endoftalmite, assim como S. pneumoniae nos isolados de ceratite. Foram observados altos níveis de suscetibilidade a antibióticos, incluindo vancomicina, cefalosporinas e fluoroquinolonas. Alta variabilidade genética foi detectada entre as 19 cepas de S. pneumoniae, com 15 previstas para serem encapsuladas. Os prontuários médicos dos pacientes com endoftalmite infecciosa foram revisados (n=15/27; 56%), e a acuidade visual final foi avaliada em 12 casos (44%). Muitos pacientes evoluiram para um estado final de acuidade visual de "sem percepção luminosa" (6/12; 50%), "percepção luminosa" (3/12; 25%) ou "movimentos de mãos" (1/12; 8%). Também foram revisados os prontuários médicos dos pacientes com ceratite infecciosa (n=24/35; 69%), e a acuidade visual final foi avaliada em 18 casos (51%). Da mesma foram, a maioria dos pacientes evoluiu para um estado final de acuidade visual de "sem percepção luminosa" (6/18; 33%), "percepção luminosa" (1/18; 6%) ou "movimentos de mãos" (6/18; 33%). No geral, a maioria dos pacientes evoluiu para um estado final de acuidade visual de "sem percepção luminosa" (12/30), "percepção luminosa" (4/30) ou "movimentos de mãos" (7/30). Conclusões: A distribuição de estreptococos alfa-hemolíticos nas infecções oculares sugeriu a presença de um tropismo de tecido específico da espécie. Os prognósticos dos pacientes com infeções oculares por estreptococos foram altamente desfavoráveis e a resistência a antibióticos contribuiu não para as progressões clínicas des­favoráveis e os maus resultados.

Effectiveness of vertical subsurface wetlands for iron and manganese removal from wastewater in drinking water treatment plants / Eficacia de humedales subsuperficiales verticales en la remoción de hierro y manganeso de aguas residuales de plantas potabilizadoras / Eficácia das zonas úmidas subsuperficiais verticais na remoção de ferro e manganês das águas residuais de estações de tratamento de água potável

Abstract Population growth and urbanization pose a greater pressure for the treatment of drinking water. Additionally, different treatment units, such as decanters and filters, accumulate high concentrations of iron (Fe) and manganese (Mn), which in many cases can be discharged into the environment without any treatment when maintenance is performed. Therefore, this paper evaluates the effectiveness of vertical subsurface wetlands for Fe and Mn removal from wastewater in drinking water treatment plants, taking a pilot scale wetland with an ascending gravel bed with two types of plants: C. esculenta and P. australis in El Hormiguero (Cali, Colombia), as an example. The pilot system had three upstream vertical wetlands, two of them planted and the third one without a plant used as a control. The wetlands were arranged in parallel and each formed by three gravel beds of different diameter. The results showed no significant difference for the percentage of removal in the three wetlands for turbidity (98 %), Fe (90 %), dissolved Fe (97 %) and Mn (98 %). The dissolved oxygen presented a significant difference between the planted wetlands and the control. C. esculenta had the highest concentration of Fe in the root with (103.5 ± 20.8) μg/g; while P australis had the highest average of Fe concentrations in leaves and stem with (45.7 ± 24) μg/g and (41.4 ± 9.1) μg/g, respectively. It is concluded that subsurface wetlands can be an interesting alternative for wastewater treatment in the maintenance of drinking water treatment plants. However, more research is needed for the use of vegetation or some technologies for the removal or reduction of the pollutant load in wetlands, since each drinking water treatment plant will require a treatment system for wastewater, which in turn requires a wastewater treatment system as well

Resumen El crecimiento de la población y la urbanización imponen una mayor presión al tratamiento de agua potable. Por otra parte, las diferentes unidades de tratamiento, como decantadores y filtros, acumulan altas concentraciones de hierro (Fe) y manganeso (Mn), las cuales, en muchos casos, son descargadas en el ambiente sin ningún tratamiento cuando se hace mantenimiento. Este artículo evalúa la efectividad de humedales subsuperficiales de flujo vertical para la remoción de Fe y Mn provenientes de agua residual en plantas de tratamiento de agua potable, tomando como ejemplo un humedal de flujo ascendente a escala piloto, con un lecho de grava y dos tipos de plantas: C. esculenta y P. australis en El Hormiguero (Cali, Colombia). El sistema piloto consistió en tres humedales verticales de flujo ascendente, dos de ellos plantados y el tercero sin plantas, como control. Los humedales se organizaron en paralelo, cada uno formado por tres lechos de grava de diferente diámetro. Los resultados mostraron que no hubo diferencia significativa en el porcentaje de remoción en los tres humedales para turbidez (98 %), Fe (90 %), Fe disuelto (97 %) y Mn (98 %). El oxígeno disuelto presentó una diferencia significativa entre los humedales plantados y el control. C. esculenta tuvo la concentración más alta de Fe en la raíz, con (103.5 ± 20.8) μg/g; mientras que P. australis tuvo el promedio más alto de concentraciones de Fe en hojas y tallos, con (45.7 ± 24) μg/g y (41.4 ± 9.1) μg/g, respectivamente. Se concluye que los humedales subsuperficiales pueden ser una alternativa interesante para el tratamiento de aguas residuales en el mantenimiento de plantas de tratamiento de agua potable. Sin embargo, se requiere más investigación sobre el uso de vegetación u otras tecnologías para la remoción o reducción de la carga contaminante en humedales, ya que cada planta de tratamiento de agua potable o su sistema de tratamiento de aguas residuales con humedales mantendrá el contaminante en el sistema.

Resumo O crescimento da população e da urbanização impõem uma maior pressão ao tratamento de água potável. Adicionalmente, as diferentes unidades de tratamento, como decantadores e filtros, acumulam altas concentrações de ferro (Fe) e manganês (Mn), as quais, em muitos casos, são liberadas no ambiente durante a manutenção, sem receber nenhum tipo de tratamento. Este artigo avaliou a eficácia de zonas úmidas subsuperficiais de fluxo vertical na remoção de Fe e Mn provenientes das águas residuais de estações de tratamento de água potável, usando como exemplo uma zona úmida a escala piloto com fluxo ascendente, leito de cascalho e dois tipos de plantas, C. esculenta e P. australis, localizada em El Hormiguero (Cali, Colombia). O sistema piloto usou três zonas úmidas verticais de fluxo ascendente, duas delas com plantas e a terceira sem plantas, como controle. As zonas húmidas foram organizadas em paralelo, cada uma sendo formada por três leitos de cascalho de diferente diâmetro. Os resultados mostraram que não houve diferença significativa na porcentagem de remoção das três zonas úmidas em termos de turbidez (98 %), Fe (90 %), Fe dissolvido (97 %) e Mn (98 %). O oxigênio dissolvido apresentou uma diferença significativa entre as zonas úmidas plantadas e a controle. C. esculenta teve a concentração mais alta de Fe na raiz, (103.5 ± 20.8) μg/g, em quanto P. au tralis teve a maior média de concentrações de Fe nas folhas e nos talos, (45.7 ± 24) μg/g e (41.4 ± 9.1) μg/g, respetivamente. Concluiuse que as zonas úmidas subsuperficiais podem ser uma alternativa interessante para o tratamento de águas residuais durante a manutenção de estações de tratamento de água potável. No entanto, mais pesquisa é necessária para determinar a importâncias do uso da vegetação ou outras tecnologias para a remoção ou diminuição da carga contaminante nas zonas úmidas, pois cada estação de tratamento de água potável ou sistema de tratamento de águas residuais com zonas úmidas irá manter oconaminante no sistema.

Enzymatic purification of glucomannan from Amorphophallus oncophyllus using α-Amylase / Purificação enzimática de glucomanan de amorphophallus oncophyllus usando α -amilasas

The international standards for top glucomannan flour require a minimum of 70% glucomannan. The glucomannan content of Amorphophallus oncophyllus flour was approximately 60%, with starch as the major impurity. Elimination of starch was expected to increase the purity of glucomannan. The purpose of this research was to study starch hydrolysis of the flour using α-amylase. Temperature (35.5-84.5oC), time (0.4-3.6 h) and pH (2.2-8.8) of hydrolysis were selected as independent variables. A central composite design of response surface methodology (RSM) was performed to obtain the optimum condition. This approach was a novelty of this enzymatic purification of A. oncophyllus. Glucomannan content, starch content, and solubility were chosen as the response variables. The models were reliable for predicting the responses (R2≥ 0.771). It was predicted that the highest glucomannan content (93.0%) obtained at the lowest starch content (1.14%), which hydrolysed at pH 6.17, 84.5oC and 3.6 h. Prior the verification of the optimum hydrolysed condition from the model, the glucomannan and starch content was 81.59% and 2.27%, respectively. After purification, the absorbance of the ß-1,4 glycosidic bond increased as a sign of higher glucomannan purity. A less rough surface and irregular shape of the grain morphology was observed after purification.

Os padrões internacionais para a farinha de alta calidade de glucomanan requerem um mínimo de 70% de glucomanan. O conteúdo de glucomanano da farinha de Amorphophallus oncophyllus foi de aproximadamente 60%, com o amido como a maior impureza. Esperava-se que a eliminação do amido aumentasse a pureza do glucomanan. O objetivo desta pesquisa foi estudar a hidrólise do amido da farinha usando α-amilase. A temperature (35,5-84,5oC), o tempo (0,4-3,6 h) e o pH (2,2-8,8) da hidrólise foram selecionados como variáveis independentes. Um desenho central composto pertencente á metodologia da superfície de resposta (MSR) foi realizado para obter a condição ótima. Esta abordagem foi uma novidade desta purificação enzimática de A. oncophyllus. O conteúdo de glucomanan, conteúdo de amido e solubilidade foram escolhidos como as respostas. Os modelos foram confiáveis para predizer as respostas (R2≥ 0,771). Os modelos indicaram que o maior conteúdo de glucomanan (93,0%) foram obtidos no menor conteúdo de amido (1,14%),que hidrolisou a um pH 6,17, 84,5ºC e 3,6 h. Antes da verificação da condição hidrolisada ótima do modelo, o conteúdo de glucomanan e amido foi de 81,59% e 2,27%, respectivamente. Após a purificação, a absorbância da ligação ß-1,4 glicosídica aumentou com um sinal de maior pureza de glucomanan. Uma superfície mais lisa e forma irregular da morfologia do grão foi observada após a purificação.

PEGylation strategy to the development of analytical and therapeutic proteins / Potencial da PEGuilação para o desenvolvimento de proteínas para fins terapêuticos e analíticos

Protein PEGylation is the covalent bonding of polyethylene glycol (PEG) polymers to amino acid residues of the protein and it is one of the most promising techniques for improving the therapeutic effect of biopharmaceuticals and long-term stability of protein-based biosensors. This chemical modification brings advantages to biopharmaceuticals, such as an increased half-life, enhanced stability, and reduced immunogenicity. Moreover, in the analytical field, PEGylation improves the multiple properties of protein-based biosensors including biocompatibility, thermal and long-term stability, and solubility in organic solvents. However, the use of PEGylated conjugates in the analytical and therapeutic fields has not been widely explored. The limited industrial application of PEGylated bioconjugates can be attributed to the fact that the reaction and separation steps are currently a challenge. The correct selection of the PEGylation reaction design and the purification process are important challenges in the field of bioconjugation. In this sense, the design and optimization of site-specific PEGylation reactions and application of aqueous biphasic systems (ABS) as purification platforms for PEGylated conjugates are the two main objectives of this thesis. Regarding the purification step, the efficient fractionation (i) of the PEGylated conjugates from the native protein and (ii) of the PEGylated conjugates based on their degree of PEGylation was studied. Centrifugal partition chromatography (CPC) was applied as a continuous regime platform based on ABS technology to efficiently purify the PEGylated proteins. The two proteins under study are L-asparaginase, an important biopharmaceutical applied in the treatment of acute lymphoblastic leukemia and cytochrome c, a promising biosensor. The current work developed in this thesis demonstrates the great potential of ABS in the fractionation of PEGylated proteins, under batch and continuous regime. In addition, in situ recovery of the PEGylated products through one-pot bioconjugation and ABS purification was successfully demonstrated for both enzymes studied. Although further research on scale-up is still required, the results presented show the relevance of ABS platforms for the development of separation processes of PEGylated proteins

A PEGuilação de proteínas é a ligação covalente de polímeros de polietilenoglicol (PEG) a resíduos de aminoácidos da proteína e é uma das técnicas mais promissoras para melhorar o efeito terapêutico dos biofármacos e a estabilidade a longo prazo de biossensores proteícos. Esta modificação química traz vantagens aos produtos biofarmacêuticos, como um aumento da meia-vida, maior estabilidade e imunogenicidade reduzida. Além disso, no campo analítico, a PEGuilação melhora as múltiplas propriedades dos biossensores baseados em proteínas, incluindo biocompatibilidade, estabilidade térmica e a longo prazo, e solubilidade em solventes orgânicos. No entanto, o uso de conjugados PEGuilados em campos analíticos e terapêuticos não tem sido amplamente explorado. A aplicação industrial limitada dos bioconjugados PEGuilados pode ser atribuída ao facto de as etapas de reacção e separação serem atualmente um desafio. A seleção correcta do design da reacção de PEGuilação e do processo de purificação são importantes desafios no campo da bioconjugação. Neste sentido, a concepção e otimização de reações de PEGuilação sítio-específicas e aplicação de sistemas aquosos bifásicos (ABS) como plataformas de purificação de conjugados PEGuilados são os dois principais objetivos desta tese. No que concerne à etapa de purificação foi estudado o eficiente fracionamento (i) dos conjugados PEGuilados, da proteína nativa e (ii) dos conjugados PEGuilados baseados no seu grau de PEGuilação. A cromatografia por partição centrífuga (CPC) foi aplicada como uma plataforma de regime contínuo baseada na tecnologia de ABS para purificar eficientemente as proteínas PEGuiladas. As duas proteínas em estudo são a L-asparaginase, importante biofármaco aplicado no tratamento da leucemia linfoblástica aguda e o citocromo c, um potencial biossensor. A partir dos trabalhos desenvolvidos, é possível confirmar o grande potencial dos ABS no fracionamento de proteínas PEGuiladas, em regime contínuo e descontínuo. Além disso, a recuperação in situ dos produtos PEGuilados através da integração em uma única etapa de bioconjugação e purificação por ABS foi comprovada com sucesso para ambas as enzimas estudadas. Embora ainda sejam necessários estudos adicionais sobre a viabilidade destes sistemas em larga escala, os resultados aqui apresentados demonstram a relevância dos ABS para o desenvolvimento de processos de separação de proteínas PEGuiladas

Expressão da L-asparaginase II de Saccharomyces cerevisiae recombinante extracelular com glicosilação humanizada em Pichia pastoris / Extracellular expression of Saccharomyces cerevisiae's L-asparaginase II in Pichia pastoris with humanized glycosylation

L-asparaginase é um inibidor eficiente do crescimento tumoral, usado em sessões de quimioterapia contra a Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA), resultando na remissão completa da doença em 90% dos pacientes tratados. A L-asparaginase II de Saccharomyces cerevisiae (ScASNaseII) tem alto potencial de superar os efeitos adversos da L-asparaginase de bactéria, porém sua produção endógena resulta em uma proteína hipermanosilada e, consequentemente, imunogênica. A cepa de Pichia pastoris Glycoswitch tem a maquinaria para expressar e secretar altas quantidades de enzima com glicosilação humanizada. Nesse trabalho, descrevemos o processo genético para expressar a ScASNaseII no meio extracelular pela P. pastoris Glycoswitch, e também os parâmetros bioquímicos, perfil cinético, citotoxicidade contra células leucêmicas e a interferência da glicosilação na atividade da enzima obtida. Nossos dados mostram que a cepa aplicada foi capaz de expressar ScASNaseII no meio extracelular passível de purificação de proteínas contaminantes com apenas um passo cromatográfico. A atividade específica para asparagina foi 218,2 UI/mg e a atividade glutaminásica representou 3,1% da atividade asparaginásica. Os parâmetros cinéticos foram KM = 120,5 µM e a eficiência catalítica de 3,8 x 105 M-1s-1. Análises por meio de gel nativo sugerem uma conformação tetramérica de aproximadamente 150 kDa. Essa é uma nova estratégia de produzir essa enzima de forma extracelular, com mais facilidade de purificação e com melhores propriedades biotecnológicas

L-asparaginase is an efficient inhibitor of tumor development, used in chemotherapy sessions against acute lymphoblastic leukemia (ALL) tumor cell; its use results in 90% complete remission of the disease in treated patients. Saccharomyces cerevisiae's L-asparaginase II (ScASNaseII) has a high potential to overcome the side effects of bacteria L-asparaginase, but the endogenous production of it results in hypermannosylated immunogenic enzyme. However, Pichia pastoris Glycoswitch strain has the machinery to express and secrete high quantity of the enzyme and with humanized glycosylation. Here we describe the genetic process to acquire the ScASNaseII in the extracellular medium expressed by P. pastoris Glycoswitch, and the biochemical properties of the resultant enzyme, kinetic profile, cytotoxicity against ALL cell line and the interference of glycosylation in its activity. Our data show that the strain employed is able to express extracellular asparaginase active and possible to be purified of contaminant proteins using a single chromatographic step. The specific activity using asparagine was 218.2 IU.mg-1 and the glutaminase activity represents 3.1% of its asparaginase activity. The kinetics parameters were KM=120.5 µM and a catalytic efficiency of 3.8x105 M-1s-1. The Native-PAGE suggested a tetrameric protein conformation, with approximately 150 kDa. This is a novel strategy to produce this enzyme extracellularly, easier to purify and with better biotechnological properties

Interpretação fenomenológica do poema "noite escura" de João da Cruz / Phenomenological interpretation of the Poema "The Dark Night" of John of the Cross / Interpretación fenomenológica del Poema "Noche Oscura" de Juan de la Cruz

Este artigo tem por escopo expor, analisar e interpretar, a partir do método fenomenológico, a obra Noite escura (Noche oscura), do místico cristão João da Cruz (1542-1591). Busca-se um aprofundamento no texto-base, bem como de comentadores especializados. O horizonte fenomenológico é demarcado pelas anotações heideggerianas sob o título "Os fundamentos filosóficos da mística medieval", datadas de 1918/1919, e publicados no volume 60 da Obra completa pelo título Fenomenologia da vida religiosa. A interpretação aqui realizada permite discernir em que medida o símbolo "noite escura" pode ser comunicado e entendido pelo homem religioso e pelo homem não-religioso, uma vez que Noite escura refere-se a um estado muito particular de experiência mística, o qual conduz à divina união de amor com Deus.

This article aims to expose, analyze and interpret, from the phenomenological method, the work Dark Night (Noche oscura), by the Christian mystic John of the Cross (1542-1591). We look for a deepening in the base text, as well as of specialized commentators. The phenomenological horizon is demarcated by the Heideggerian notes under the title "The Philosophical Foundations of Medieval Mysticism", dated 1918/1919, and published in volume 60 of the Complete Work by the title Phenomenology of religious life. The interpretation here makes it possible to discern to what extent the symbol "dark night" can be communicated and understood by religious man and non-religious man, since Dark Night refers to a very particular state of mystical experience, which leads to the divine union of love with God.

Este artículo tiene por objeto exponer, analizar e interpretar, a partir del método fenomenológico, la obra Noche oscura, del místico cristiano Juan de la Cruz (1542-1591). Se busca una profundización en el texto base, así como de comentaristas especializados. El horizonte fenomenológico es demarcado por las anotaciones heideggerianas bajo el título "Los fundamentos filosóficos de la mística medieval", datados de 1918/1919, y publicados en el volumen 60 de la Obra completa por el título Fenomenología de la vida religiosa. La interpretación aquí realizada permite discernir en qué medida el símbolo "noche oscura" puede ser comunicado y entendido por el hombre religioso y el hombre no religioso, ya que la noche oscura se refiere a un estado muy particular de experiencia mística, a la divina unión de amor con Dios.

Nitrate detoxification using antioxidants and probiotics in the water for rabbits / Detoxificación de nitrato usando antioxidantes y probióticos en el agua para conejos / Detoxificação de nitrato usando antioxidantes e probióticos na água para coelhos

Abstract Background: Agricultural practices increase groundwater pollution from nitrate. High nitrate intake could negatively affect animal growth. Objective: To determine the effects of different levels of nitrate in drinking water on digestive, liver, and kidney functions, and on water and feed intake, and to determine the ability of vitamin C, vitamin E + selenium (Se) or probiotics to overcome the effects of nitrate in New Zealand White rabbit bucks. Methods: Forty-two male rabbits were randomly distributed into six treatment groups: 1) control group (with no nitrate); 2) 350 ppm nitrate; 3) 700 ppm nitrate; 4) 700 ppm + 200 ppm vitamin C; 5) 700 ppm + 200 ppm vitamin E + Se; and 6) 700 ppm + 1000 ppm probiotic. Productive performance, digestive, liver, and kidney functions, and hepatic and renal histology were evaluated. Results: Water intake was reduced (p<0.05) by the 350 ppm nitrate treatment. Rabbits given 700 ppm nitrate showed lower (p<0.05) dry matter intake, nutrient digestibility, and increased (p<0.05) water and nitrate intake, as well as urea concentration, and aspartate aminotransaminase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) activity. Vitamin C, vitamin E + Se and probiotics improved (p<0.05) feed intake and nutrient digestibility, and reduced (p<0.05) water and nitrate intake, urea concentration, and AST and ALT activities. Conclusion: Rabbits may tolerate up to 350 ppm of nitrate, but 700 ppm of nitrate negatively affect digestive, liver, and kidney functions, which are improved by vitamin C, vitamin E + Se and probiotic supplementation.

Resumen Antecedentes: Las prácticas agrícolas aumentan la polución de aguas subterráneas con nitratos. Una alta ingestión de nitratos posiblemente afecta negativamente el crecimiento animal. Objetivo: Determinar los efectos de diferentes niveles de nitrato en el agua de bebida sobre las funciones digestivas, hepáticas y renales, ingestión de agua y alimento, y determinar la habilidad de la vitamina C, vitamina E + Selenio (Se) o probióticos en superar los efectos del nitrato en conejos Nueva Zelanda Blanco. Métodos: Cuarenta y dos conejos machos se distribuyeron al azar entre seis tratamientos: 1) grupo control (sin nitrato), 2) 350 ppm nitrato, 3) 700 ppm nitrato, 4) 700 ppm + 200 ppm vitamina C, 5) 700 ppm + 200 ppm vitamina E + Se, y 6) 700 ppm + 1000 ppm probiótico. Se evaluó el desempeño productivo, las funciones digestivas, hepáticas y renales, y la histología renal y hepática. Resultados: La ingestión de 350 ppm de nitrato disminuyó (p<0,05) la ingestión de agua. Los conejos que consumieron 700 ppm de nitrato presentaron menor (p<0,05) ingestión de materia seca y digestibilidad de nutrientes, y mayor (p<0,05) ingestión de agua y nitrato, concentración de urea, y mayores actividades de aspartato aminotransferasa (AST) y alanina aminotransferasa (ALT). Las vitaminas C, E + Se y el probiótico mejoraron (p<0,05) el consumo de alimento y la digestibilidad de nutrientes, y redujeron (p<0,05) la ingestión de agua y nitrato, la concentración de urea, y las actividades de AST y ALT. Conclusión: Los conejos pueden tolerar hasta 350 ppm de nitrato, pero 700 ppm de nitrato afectan negativamente las funciones digestivas, hepáticas y renales, las cuales mejoran con la suplementación de vitamina C, vitamina E + Se y del probiótico.

Resumo Antecedentes: As práticas agrícolas aumentam a contaminação de águas subterrâneas a partir de nitrato e a alta ingestão desta substância pode afetar negativamente o crescimento animal. Objetivo: Determinar os efeitos de diferentes níveis de nitrato na água de bebida sobre as funções digestivas, hepáticas e renais, ingestão de água e ração e determinar a habilidade da vitamina C, vitamina E + Selênio (Se) ou probiótico em sobrepor os efeitos do nitrato em coelhos Nova Zelândia Branco. Métodos: Quarenta e dois coelhos machos foram distribuídos ao acaso em seis tratamentos: 1) grupo controle (sem nitrato), 2) 350 ppm de nitrato, 3) 700 ppm de nitrato, 4) 700 ppm + 200 ppm de vitamina C, 5) 700 ppm + 200 ppm vitamina E + Se e 6) 700 ppm + 1000 ppm de probiótico. Foram avaliados o desempenho produtivo, as funções digestivas, hepáticas e renais além da histologia hepática e renal. Resultados: A ingestão de 350 ppm de nitrato diminuiu (p<0,05) a ingestão de água. Coelhos que receberam 700 ppm de nitrato apresentaram menor (p<0,05) ingestão de matéria seca, menor digestibilidade de nutrientes, e maior (p<0,05) ingestão de água e de nitrato, maior concentração plasmática de ureia e maiores atividades de aspartato aminotransferase (AST) e alanina aminotransferase (ALT). A adição de vitaminas C ou vitamina E + Se e probiótico melhorou (p<0,05) o consumo de ração, a digestibilidade de nutrientes e reduziram (p<0,05) a ingestão de água e de nitrato, a concentração de ureia e as atividades de AST e ALT. Conclusão: Coelhos podem tolerar até 350 ppm de nitrato, mas 700 ppm de nitrato afeta negativamente as funções digestivas, hepáticas e renais, as quais são melhoradas a partir da suplementação de vitamina C, vitamina E + Se ou ainda probiótico.

Método preparativo para la obtención de ácido ursólico a partir de Clinopodium revolutum / Preparative method to obtain ursolic acid from Clinopodium revolutum / Método preparativo para a obtenção do ácido ursólico a partir de Clinopodium revolutum

Resumen En este trabajo se propuso un método para obtener ácido ursólico de manera fácil, rápida y económica teniendo como materia prima la planta medicinal Clinopodium revolutum endémica del Perú, conocida y comercializada con el nombre de flor de arena o té indio. La técnica de recristalización selectiva que se empleó resultó ser eficiente debido a que se obtuvieron cristales de AU sin la necesidad de métodos cromatográficos de purificación ni el uso de solventes tóxicos. La pureza determinada por HPLC es mayor a 95%. Así, la flor de arena se convierte en una importante biofuente de este compuesto.

Abstract A method to obtain ursolic acid (UA) in an easy, fast, and economical way was proposed, having as raw material the medicinal plant Clinopodium revolutum from Peru. This plant is known and marketed as flor de arena or té indio. The selective recrystallization technique used was efficient since UA crystals were obtained without the need for chromatographic purification methods or the use of toxic solvents. The purity determined by HPLC is greater than 95%. Thus, the flor de arena becomes an important biosource of this compound.

Resumo Este trabalho apresenta um método para a obtenção de ácido ursólico de forma fácil, rápida e barata tendo como matéria prima a planta medicinal Clinopodium revolutum endêmica do Perú, conhecida e comercializada pelo nome de flor de arena ou té indio. A técnica seletiva de recristalização resultou ser eficiente, devido os cristais da AU foram obtidos sem a necessidade de métodos cromatográficos de purificação nem a utilização de solventes tóxicos. A pureza determinada pela HPLC é superior a 95%. Assim, a flor de arena torna-se uma biofonte importante deste composto.

Bacteriocin-like inhibitory substance in aquaculture: a classic method of protein precipitation for a new aplicability / Substância inibidora tipo bacteriocina na aquicultura: método clássico de precipitação de proteínas para novas aplicações

Techniques to decrease losses from bacterial diseases are always important to improve the fish production. The use of antagonistic substances (bacteriocins) has been proven to be a viable option. The aim of this study was to evaluate different methods of purification for bacteriocin like inhibitory substances (BLIS). For the purification process, we isolated and used two Gram-positive bacilli that produce antagonistic substances for pathogens in aquaculture. Tests for detection of interfering factors were also performed. After the confirmation that the antagonistic action was due the BLIS activity, we carried out the purification methods. The methods tested were: cell free supernatant, acid extraction and ammonium sulfate precipitation at two concentrations (20 and 50%). Salmonella Tiphy CFP/IAL1472 and Aeromonas hydrophila (isolated in a tilapia production environment) were used as indicators of the efficiency of extracts in controlling pathogenic potentials. Ammonium sulfate precipitation at 50% was the most appropriate for purifying the antagonistic substance for both indicators. The extracts of the two isolates remained active for 22 days at 25ºC. These are promising results regarding the water and fish health without the use of antibiotics, in this manner being a safer environmental practice.

Técnicas para diminuir as perdas causadas por doenças bacterianas são importantes para melhorar continuamente a produção de pescado. O uso de substâncias antagônicas (bacteriocinas) tem-se mostrado uma opção viável. O objetivo do trabalho foi avaliar diferentes métodos de purificação de bacteriocinas como substâncias inibidoras (BLIS). Dois bacilos Gram-positivos, produtores de substâncias antagonistas para agentes patogênicos da aquicultura, foram utilizados em processos de purificação. Depois de confirmada a ação antagônica pela atividade de BLIS, os métodos de purificação foram realizados. Os métodos testados foram: células livres de sobrenadante, extração ácida e precipitação por sulfato de amônia em duas concentrações (20 e 50%). Salmonella Typhi PCP/IAL1472 e Aeromonas hydrophila (isolada de um ambiente de tilapicultura) foram utilizadas como indicadores de eficiência dos extratos. O precipitado por sulfato de amônio a 50% foi o mais adequado para purificar a substância antagonista para ambos os isolados indicadores. Os extratos dos dois isolados permaneceram ativos por 22 dias em 25ºC. Estes resultados são promissores do ponto de vista da manutenção da sanidade da água e dos peixes, sem uso de antibióticos, constituindo uma prática ambientalmente mais segura.

Production of L-asparaginase of pharmaceutical nterest from yeasts isolated from the Antarctic continent / Produção de L-asparaginase de interesse farmacêutico a partir de leveduras isoladas do continente Antártico

The L-asparaginase (ASNase) obtained from yeasts species has been poorly studied and a new yeast ASNase could be an alternative to minimize the side effect in the treatment of lymphoblastic leukemia. The Antarctic ecosystems have a great potential to obtain novel enzymes produced from psychrophilic and psychrotolerant microorganisms. Yeasts isolated from samples collected in the Antarctic Peninsula by the PROANTAR expedition team were tested for the production of ASNase and L-glutaminase (GLNase). From this screening, the strain Leucosporidium scottii L115 presented the highest ASNase activity (6.24 U g-1 of dried cell weight (dcw)) with a combination of low GLNase activity (0.41 U g-1 dcw). The ASNase belonging to L. scottii L115 (LsASNase) was purified 227 fold with a specific activity of 137.01 U mg-1 at 37 ºC, and with 0.93 U mg-1 for GLNase. Moreover, the maximum activity was observed at pH 7.5 at 55 ºC. The enzyme is a multimer presenting a single band of 54.5 kDa of molecular weight in reduced conditions and 462 kDa by size exclusion chromatography. The LsASNase is a glycosylated enzyme that presented a band lower at 25 kDa when was treated with PGNase F. The enzymatic kinetic reveals an allosteric regulation of the enzyme and the kinetic parameters were determined at 37º C, pH 7.0 as K0.5 = 233 µM, kcat = 54.7 s-1 and nH = 1.52 demonstrating a positive cooperativity by the enzyme and the substrate. The ASNase production by L. scottii L115 was improved by applying DoE for the culture medium development. The PB and CDD designs were used to optimize the ASNase production providing the nutrient values of 6.15 g L-1 of proline, 28.34 g L-1 sucrose, and 15.61 g L-1 of glycerol for a maximal production. The synthetic medium containing the optimized quantities was added with the salts: KCl, 0.52 g L-1; MgSO4.7H2O, 0.52 g L-1; CuNO3.3H2O, 0.001 g L-1; ZnSO4.7H2O, 0.001 g L-1; FeSO4.7H2O, 0.001 g L-1.The optimized medium produces a 23.75 ULh-1 of ASNase in shake flask culture. Furthermore, L. scottii is characterized as an oleaginous yeast that accumulates lipids with a suitable fatty acid profile. The production of ASNase and lipids were scaled up in the 1 L bioreactor to evaluate the initial cell concentration, carbon source, and oxygen transfer rate (kLa).The experiments were performed at 15ºC in the bioreactor BIOSTAT®Q plus (Sartorius Stedim, Germany) in batch mode, using 0.5 L of the optimized medium culture in phosphate buffer 50 mM pH 7.0. The initial cell concentration was evaluated at 1%, 3%, and 5% (v/v). Sucrose and glycerol were tested alone to examine if the combination of both is mandatory to produce ASNase. All these assays were carried in duplicate. The kLa was assessed through a CCD design in the range of 1.42 - 123.0 h-1. The performance in bioreactor showed the productivity of 36.95 ULh-1of ASNase under the optimized conditions (growth temperature 15º C, X0: 5 g L-1, pH 7.0, 48 h, kLa 89-92 h-1). The cultivation of L. scottii L115 at 15ºC in sucrose and glycerol as carbon sources generate an interesting lipid profile, where it presents monounsaturated and polyunsaturated lipids

A L-asparaginase (ASNase) obtida a partir de espécies de leveduras tem sido pouco estudada e uma nova ASNase de levedura pode ser uma alternativa para minimizar os efeitos adversos no tratamento da leucemia linfoblástica. Os ecossistemas Antárticos têm um grande potencial para obter novas enzimas produzidas a partir de microorganismos psicrofílicos e psicotrolerantes. As leveduras isoladas de amostras coletadas na Península Antártica pela equipe de expedição do PROANTAR foram testadas para a produção de ASNase e L-glutaminase (GLNase). A partir desta triagem, a cepa Leucosporidium scottii L115 apresentou a maior atividade de ASNase (6,24 U g-1 dcw) com uma combinação de baixa atividade de GLNase (0,41 U g-1 dcw). A ASNase pertencente a L. scottii L115 (LsASNase) foi purificada 227 vezes com uma atividade específica de 137,01 U mg-1 a 37 ºC e com 0,93 U mg-1 de GLNase. A atividade máxima foi observada a pH 7,5 a 55 ºC. A enzima é um multímero que apresenta uma banda única de 54,5 kDa de peso molecular em condições redutoras e 462 kDa por cromatografia de exclusão molecular. A LsASNase é uma enzima glicosilada que apresentou uma banda menor a 25 kDa quando tratada com PGNase F. A cinética enzimática revela uma regulação alostérica da enzima e os parâmetros cinéticos foram determinados a 37º C, pH 7,0 como K0,5 = 233 µM, kcat = 54,7 s-1 e nH = 1,52 demonstrando uma cooperatividade positiva pela enzima e o substrato. A produção de ASNase por L. scottii L115 foi melhorada aplicando DoE para o desenvolvimento do meio de cultura. Os desenhos experimentais de PB e CDD forma usados para otimizar a produção de ASNase e forneceram os valores de nutrientes de 6,15 gL-1 de prolina, 28,34 gL-1 de sacarose e 15,61 gL-1 de glicerol para uma produção máxima. O meio sintético contendo as quantidades otimizadas foi adicionado com os sais: : KCl, 0.52 g L-1; MgSO4.7H2O, 0.52 g L-1; CuNO3.3H2O, 0.001 g L-1; ZnSO4.7H2O, 0.001 g L-1; FeSO4.7H2O, 0.001 g L-1.O meio otimizado produz 23.75 ULh-1 de ASNase em cultivo em frasco agitado. Além disso, L. scottii é caracterizada como uma levedura oleaginosa que acumula lipídios com um perfil adequado de ácidos graxos. A produção de ASNase e lipídios foi ampliada no biorreator de 1 L para avaliar a concentração celular inicial, fonte de carbono e taxa de transferência de oxigênio (kLa). Os experimentos foram realizados a 15ºC no biorreator BIOSTAT®Q plus (Sartorius Stedim) em modo batelada, utilizando 0,5 L da cultura de meio otimizado em tampão fosfato 50 mM pH 7,0. A concentração celular inicial foi avaliada em 1%, 3% e 5% (v / v). Sacarose e glicerol foram testados isoladamente para examinar se a combinação de ambos é obrigatória para produzir ASNase. Todos esses ensaios foram realizados em duplicado. O kLa foi avaliado através de um planejamento CCD na faixa de 1,42-123,0 h-1. O desempenho no biorreator mostrou a produtividade de 36,95 ULh-1 de ASNase sob condições otimizadas (temperatura de crescimento 15º C, X0: 5 g L-1, pH 7,0, 48 h, kLa 89-92 h-1). O cultivo de L. scottii L115 a 15ºC em sacarose e glicerol como fontes de carbono gera um perfil lipídico interessante, onde apresenta lipídios monoinsaturados e poliinsaturados

Current use and acceptability of novel diagnostic tests for active tuberculosis: a worldwide survey / Uso atual e aceitabilidade de novos testes diagnósticos para tuberculose ativa: um inquérito mundial

ABSTRACT Objective: To determine the current use and potential acceptance (by tuberculosis experts worldwide) of novel rapid tests for the diagnosis of tuberculosis that are in line with World Health Organization target product profiles. Methods: A multilingual survey was disseminated online between July and November of 2016. Results: A total of 723 individuals from 114 countries responded to the survey. Smear microscopy was the most commonly used rapid tuberculosis test (available to 90.9% of the respondents), followed by molecular assays (available to 70.7%). Only a small proportion of the respondents in middle- and low-income countries had access to interferon-gamma-release assays. Serological and lateral flow immunoassays were used by more than a quarter (25.4%) of the respondents. Among the respondents who had access to molecular tests, 46.7% were using the Xpert assay overall, that proportion being higher in lower middle-income countries (55.6%) and low-income countries (76.6%). The data also suggest that there was some alignment of pricing for molecular assays. Respondents stated they would accept novel rapid tuberculosis tests if available, including molecular assays (acceptable to 86.0%) or biomarker-based serological assays (acceptable to 81.7%). Simple biomarker-based assays were more commonly deemed acceptable in middle- and low-income countries. Conclusions: Second-generation molecular assays have become more widely available in high- and low-resource settings. However, the development of novel rapid tuberculosis tests continues to be considered important by tuberculosis experts. Our data also underscore the need for additional training and education of end users.

RESUMO Objetivo: Determinar o uso atual e a aceitação potencial (por especialistas em tuberculose em todo o mundo) de novos testes rápidos para o diagnóstico de tuberculose que estão alinhados com os perfis de produtos alvo da Organização Mundial da Saúde. Métodos: Um inquérito multilingue foi divulgado on-line entre julho e novembro de 2016. Resultados: Um total de 723 indivíduos de 114 países respondeu ao inquérito. A baciloscopia foi o teste rápido para tuberculose mais utilizado (disponível para 90,9% dos entrevistados), seguida de ensaios moleculares (disponível para 70,7%). Apenas uma pequena proporção dos entrevistados de países de renda média e baixa tinha acesso a ensaios de liberação de IFN-γ. Imunoensaios de fluxo lateral e testes sorológicos eram utilizados por mais de um quarto dos entrevistados (25,4%). Entre os entrevistados que tinham acesso a testes moleculares, 46,7% utilizavam o teste Xpert de forma geral, sendo essa proporção maior em países de renda média baixa (55,6%) e renda baixa (76,6%). Os dados também sugerem que houve algum alinhamento de preços para testes moleculares. Os entrevistados afirmaram que aceitariam novos testes rápidos para tuberculose, se disponíveis, incluindo testes moleculares (aceitáveis para 86,0%) ou testes sorológicos baseados em biomarcadores (aceitáveis para 81,7%). Testes simples baseados em biomarcadores foram mais comumente considerados aceitáveis nos países de renda média e baixa. Conclusões: Os testes moleculares de segunda geração tornaram-se mais amplamente disponíveis em locais tanto com poucos quanto com muitos recursos. No entanto, o desenvolvimento de novos testes rápidos para tuberculose continua a ser considerado importante por especialistas em tuberculose. Nossos dados também ressaltam a necessidade de maior formação e educação dos usuários finais.

Fonsecaea pedrosoi as a rare cause of acute conjunctival ulceration / Fonsecaea pedrosoi como agente raramente associado à úlcera conjuntival aguda

ABSTRACT Conjunctival ulceration accompanied with secretion and pain was observed in a 30-year-old male, 3 days after a perforating corneal trauma. Cultures of conjunctival ulcer samples grew Fonsecaea pedrosoi, a major causative agent of chromoblastomycosis that is typically transmitted during trauma. The conjunctival ulcer was successfully treated with amphotericin B, itraconazole, and fluconazole. This case report summarizes the diagnosis and treatment of a conjunctival ulcer due to F. pedrosoi, which is a rare complication of contaminated ocular trauma. To the best of our knowledge, this is the first reported case of F. pedrosoi causing acute conjunctival ulceration in the literature.

RESUMO O quadro clínico de uma úlcera conjuntival acompanhada de secreção e dor foi observado em homem de 30 anos de idade, 3 dias após um trauma perfurante da córnea. As culturas de uma amostra retirada da úlcera conjuntival foi positiva para Fonsecaea pedrosoi, uma cromoblastomicose, geralmente transmitido após traumatismos. O caso foi tratado com sucesso com a anfotericina B, itraconazol e fluconazol. Este relato de caso reporta o diagnóstico e tratamento de uma úlcera conjuntival causada por F. pedrosoi, que raramente é visto nos olhos expostos a traumatismos contaminados. Até onde sabemos, este é o primeiro caso relatado na literatura de F. pedrosoi causando úlcera conjuntival aguda.

A case of atypical nocardia asteroides sclerouveitis resistant to fourth-generation fluoroquinolones / Um caso atípico de esclero-uveíte por Nocardia Asteroides resistente a fluorquinolona de quarta-geração

ABSTRACT We describe an unusual case of Nocardia spp scleritis in a health girl resistant to topical fourth-generation fluoroquinolones. Clinically, there was only partial response of the scleritis to initial therapy. Treatment was changed to meropenem intravenously and topical amikacin. Following several weeks of antibiotic treatment, the patient's infection resolved but her vision was reduced to no light perception. Nocardia asteroides must be considered as a possible agent in cases of necrotizing scleritis in patients without a clear source. Antibiotic sensitivity testing has a definitive role in view of the resistance to these new medications.

RESUMO Nós descrevemos um raro caso de esclerite por Nocardia spp em uma criança sadia resistente a utilização tópica de fluorquinolona de quarta-geração. Clinicamente, a paciente apresentou apenas uma resposta parcial do quadro de esclerite a terapêutica inicial. O tratamento foi então modificado para meropenem intravenoso e amicacina tópica. Após várias semanas de tratamento com antibiótico, o quadro infeccioso regrediu porém a visao da pacientes evoluiu para perda da percepção luminosa. Em casos de esclerite necrotizante em pacientes sem fatores de risco aparente é necessário considerer a Nocardia Asteroides como possível agente causador. Os testes de sensibilidade medicamentosa apresentam importância significativa em virtude do aparecimento de resistência aos novos medicamentos.

PVA-Glutaraldehyde as support for lectin immobilization and affinity chromatography / PVA-Glutaraldeído como suporte para imobilização de lectina e cromatografia de afinidade

Immobilized lectins are a powerful biotechnological tool for separation and isolation of glycoconjugates. In the present study, polyvinyl alcohol (PVA) and glutaraldehyde (GA) were used as a support for Concanavalin A (Con A) covalent immobilization and for entrapment of Parkia pendula seed gum (PpeG). Con A immobilization yielded approximately 30% and 0.6 M glucose solution was the minimum concentration able to elute fetuin from column. PVA-GA-PpeG column was efficiently recognized by pure P. pendula lectin (PpeL) . These findings indicate that PVA-GA interpenetrated network showed to be an efficient support for lectin covalent immobilization and as affinity chromatography matrix after trapping of PpeG.

Lectinas imobilizadas são uma poderosa ferramenta biotecnológica para a separação e isolamento de glicoconjugados. No presente trabalho álcool polivinílico (PVA) e glutaraldeído (GA) foram utilizados como um suporte para a imobilização covalente da Concanavalina A (Con A) e para aprisionamento da goma de semente de Parkia pendula (PpeG). A eficiência da imobilização da Con A foi aproximadamente 30 % e a concentração mínima de glucose capaz de eluir a fetuína da coluna foi 0,6 M. Coluna de PVA - GA - PpeG foi eficientemente reconhecida pela lectina de P. pendula (PpeL) pura. Estes resultados indicam que a rede interpenetrada de PVA-GA mostrou-se um suporte eficiente para a imobilização covalente de lectina e como matriz de cromatografia de afinidade após aprisionamento de PpeG.