Changes in sperm motility of amazonian fish Tambaqui Colossoma macropomum (Cuvier 1816) (Characiformes: Serrasalmidae) exposed to two pesticides / Alterações na motilidade espermática do peixe amazônico Tambaqui Colossoma macropomum (Cuvier 1816) (Characiformes: Serrasalmidae) exposto a dois pesticidas

Abstract The great biodiversity of neotropical fish species that have external fertilization as a reproductive strategy, like the tambaqui, requires more careful analyzes in toxicological tests of the various pesticides implemented in Brazilian agriculture over the last few years. In this context, the objective of the present work was to evaluate possible sperm alterations in tambaqui (Colossoma macropomum) semen exposed to two different pesticide residues. Seminal samples of sexually mature tambaqui males from a local fish farm were used. Semen was collected eight hours after hormone induction into graduated glass tubes. After initial assessment of the lack of prior activation, the experiment was carried out in a factorial scheme, testing two pesticides widely used in agricultural systems (glyphosate and fenitrothion). For each pesticide, five concentrations were tested (6, 12, 24, 120 and 240 mg/L), with motility analysis at times 0, 30 and 60 seconds after activation. As a control, activation with 0.9% NaCl solution and motility analysis at the same times described for pesticides were used. Results indicate that in natura samples exhibited initial motility of 89.2 ± 4.9% and mean duration of 100 seconds (up to 10% sperm motility). The reduction in sperm motility occurred significantly (p < 0.05) after 30 seconds in all concentrations tested, except for the concentration of 240 mg/L because no activation was observed. The tests described here demonstrate that tambaqui semen was sensitive to the process of exposure to pesticide residues, and can be used in biomonitoring analyzes of the aforementioned agricultural pesticides.

Resumo A grande biodiversidade das espécies de peixes neotropicais que possuem a fertilização externa como estratégia reprodutiva, a exemplo do tambaqui, exige análises mais criteriosas em testes toxicológicos dos diversos defensivos agrícolas implementados na agricultura brasileira ao longo dos últimos anos. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar possíveis alterações espermáticas no sêmen de tambaqui (Colossoma macropomum) exposto a resíduos de dois diferentes pesticidas. Foram utilizadas amostras seminais de machos de tambaqui sexualmente maduros provenientes de uma piscicultura local. O sêmen foi coletado oito horas pós indução hormonal em tubos de vidro graduados. Após avaliação inicial de inexistência de ativação prévia, foi realizado o experimento em esquema fatorial, sendo testados dois pesticidas muito utilizados em sistemas agrícolas (glifosato e fenitrotiona). Para cada pesticida foram testadas cinco concentrações (6, 12, 24, 120 e 240 mg/L), com análise da motilidade nos tempos 0, 30 e 60 segundos pós ativação. Como controle, foi utilizada a ativação com solução de NaCl a 0,9% e análise da motilidade nos mesmos tempos descritos para os pesticidas. Resultados indicam que as amostras in natura exibiram motilidade inicial de 89,2 ± 4,9% e tempo de duração médio de 100 segundos (até 10% de motilidade espermática). A redução da motilidade espermática ocorreu de forma significativa (p < 0,05) após 30 segundos em todas as concentrações testadas, exceto na concentração de 240 mg/L por não ter sido observada ativação. Os testes aqui descritos demonstram que o sêmen de tambaqui se mostrou sensível ao processo de exposição aos resíduos de pesticidas, podendo ser utilizado em análises de biomonitoramento dos referidos defensivos agrícolas.

Effect of racial crossing on the seminal parameters of rams submitted to heat stress / Efeito do cruzamento racial nos parâmetros seminais de carneiros submetidos ao estresse de calor

The aim of this study was to evaluate the effect of racial crossing on seminal parameters of eight Santa Inês and crossbred (Santa Inês x Dorper) rams submitted to heat stress, and to monitor the return of these parameters to previously reported. Before to place the insulation bags, two collects of semen through electroejaculation were performed. The insulation pouches were made with double-layer plastic, internally lined with cotton, and fixed around the spermatic funiculus and scrotum with adhesive tape and bandage remaining on the testes of the animals for seven days. The first collect was performed on the day that the pouches were taken (day 0) and thereafter, every seven days, totalizing 15 measurements. Data were submitted to analysis of variance (ANOVA). The analyzed variables were subjected to Dunnett test at 5% probability to compare the values obtained before treatment with those obtained in the following days. In this study it was found that the animals restored normal seminal parameter after the insulation effects, however, the return rate differed slightly among the studied breeds. The crossbred animals restored the seminal patterns, on average, a week before Santa Inês. It is concluded that the racial crossing influences the semen parameters of rams submitted to heat stress.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do cruzamento racial sobre parâmetros seminais de oito carneiros Santa Inês e mestiços, submetidos ao estresse térmico e monitorar o retorno desses parâmetros aos relatos anteriormente. Antes de colocar as bolsas de insulação, foram realizadas duas coletas de sêmen por meio de eletroejaculação. As bolsas de insulação foram confeccionadas com plástico de camada dupla, revestidas internamente com algodão, fixadas ao redor do funículo espermático e escroto com fita adesiva e bandagem, permanecendo nos testículos dos animais por sete dias. A primeira coleta foi realizada no dia em que as bolsas foram retiradas (dia 0) e a partir daí, a cada sete dias, totalizando 15 coletas. Os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA). As variáveis analisadas foram submetidas ao teste de Dunnett a 5% de probabilidade para comparar os valores obtidos antes do tratamento com aqueles obtidos nos dias seguintes. Neste estudo verificou-se que os animais restauraram os parâmetros seminais normais após os efeitos da insulação, porém, a taxa de retorno diferiu ligeiramente entre as raças estudadas. Os animais mestiços restauraram os padrões seminais, em média, uma semana antes da Santa Inês. Conclui-se que o cruzamento racial influencia os parâmetros seminais de carneiros submetidos ao estresse térmico.

Characterization of Boar Studs in Brazil / Caracterização das centrais de coleta e processamento de sêmen no Brasil

ABSTRACT: Understanding the flow of processes in swine production systems and how they work is fundamental to improving reproductive performance. We surveyed 32 boar studs in Brazil, representing 61.53% of the total in the country. Commercial lines were the most common breed (59.38%) used in the studs. Individual pens and stalls were the most commonly used as housing system (71.9%), and 81.25% of the studs reported having some form of thermal control system. For most of the studs (62.51%), average weekly sperm concentration was higher than 200 million cells per mL. Also, for most studs (71.88%) average weekly ejaculate volume was more than 250 mL. In 46.88% of the studs each ejaculate yielded 26 to 40 semen doses. In 6.25% of the studs, 3.5 billion sperm cells per dose were used for artificial, intracervical insemination. Sperm concentration in 46.88% of the studs was determined using a computer-assisted system analysis. The assessment of sperm quality was conducted using morphology, concentration, and microbiological testing. Employees working on semen collection had formal education of elementary/middle school (34.38%) and high school (37.5%). Most of the laboratory technicians had frequented high school (75%). The most time-consuming task was semen processing, taking 16 to 25 h a week (46.8%) and 6 to 10 h was allotted for the cleaning of stud facilities (46.8%). The data collected in the present study allow greater knowledge of this important part in the pig production chain in Brazil.

RESUMO: O entendimento dos processos na suinocultura e como estes funcionam é fundamental para o incremento da performance reprodutiva. Por via eletrônica, foi realizada uma investigação com 32 centrais de coleta e processamento de sêmen no Brasil, representando 61,53% do total no país. O número médio de reprodutores por central foi de 122. Reprodutores da linhagem comercial foram os mais frequentemente (59,38%) utilizados nas centrais. As baias para alojamento individual dos reprodutores foram as mais comuns (71,9%) e 81,25% das centrais relataram possuir algum sistema de climatização. Na maioria das centrais (62,51%), a média da concentração espermática foi maior que 200 milhões de espermatozoides/mL. Da mesma forma, a maioria das centrais (71,88%) apresentaram um volume do ejaculado superior a 250 mL. Em 46,88% das centrais um ejaculado produziu de 26 a 40 doses inseminantes. Em 6,25% das centrais eram utilizadas uma concentração de 3,5 bilhões de espermatozoides por dose inseminante na inseminação intracervical. A concentração espermática em 46,88% das centrais era determinada através do sistema CASA. A avaliação da qualidade espermática era realizada através da análise de morfologia, concentração e exame microbiológico das doses inseminantes. Os colaboradores envolvidos com a coleta de sêmen tinham nível de instrução fundamental (43,38%) e médio (37,5%). A maioria dos técnicos no laboratório das centrais tinham ensino médio (75%). A atividade que mais consumia tempo foi o processamento do sêmen, com 16 a 25 horas/semana (46,8%) e 6 a 10 horas era utilizada na limpeza das instalações (46,8%). Os dados coletados no presente estudo permitem um maior conhecimento desse elo da cadeia produtiva da suinocultura no Brasil.

Parâmetros reprodutivos de touros Nelore (Bos taurus indicus) criados a pasto, em de diferentes faixas etárias / Reproductive parameters of pasture-raised Nelore bulls (Bos taurus indicus) in different age

Este estudo teve o objetivo de demonstrar o efeito da idade sobre as características de circunferência escrotal, cor de pelagem e qualidade seminal, desde a puberdade até após a maturidade sexual. Foram utilizados dados de 6607 exames andrológicos de touros da raça Nelore criados a pasto. Os animais eram de diferentes faixas etárias, variando de 12 até 80 meses. O exame andrológico consistiu em exame clínico reprodutivo, perímetro escrotal (PE), avaliação do sêmen e nota para cor do pelame (COR; 1-4). Estabeleceram-se quatro faixas etárias, que foram comparadas pelo teste de Bonferroni. Os parâmetros seminais PE e COR variaram (P<0,05) conforme a faixa etária dos animais: A) 12-18m: COR=1,45±0,64a, PE=31,63±3,51cma, motilidade total (Mot)=67,73±17,99%a, total de defeitos espermáticos (TDE)=16,22±16,95%a; B) 18-24m: COR=1,50±0,57b, PE=32,00±3,47cma, Mot=69,60±29,13%a, TDE=14,49±15,00%b; C) 24-36m: COR=1,51±0,66b, PE=33,56±3,91cmb, Mot=69,46±15,52%a, TDE=12,29±12,92%c; D) 36-48m: COR=1,60±0,57c, PE=36,66±3,50cmc, Mot=71,04±16,19%b, TDE=10,87±12,97%d; E) >48m: COR=1,64±0,72c, PE=38,00±3,22d, Mot=71,54±15,30b, TDE=9,70±16,95d. Concluiu-se que a faixa etária influencia o tamanho testicular, a cor da pelagem e os parâmetros de qualidade seminal. Com o avançar da idade, ocorre escurecimento do pelo, aumento do perímetro escrotal, da motilidade e do vigor, e redução dos defeitos espermáticos de touros Nelores criados a pasto, avaliados a partir de 12 meses de idade.(AU)

This study aimed to demonstrate the effect of age on bull traits such as scrotal circumference, pelage color, and semen quality, from puberty to post sexual maturity. Data from 6607 breeding soundness examinations of pasture raised Nelore bulls were used. The animals presented different age groups ranging from 12 to 80 months. The andrological examination consisted in reproductive clinical evaluation, assessment of scrotal perimeter (PE). In addition, color of pelage (COR; 1-4) was recorded for each animal. Four age groups were established, which were compared by Bonferroni test. Semen parameters, scrotal circumference (PE) and color of the pelage (COR) varied (P< 0.05) according to the age range: A) 12-18m: COR=1.45±0.64 a , PE=31.63±3.51cm a , Total Motility (Mot)=67.73±17.99% a , Total os sperm defects (TDE)=16.22±16.95% a ; B) 18-24m: COR=1.50±0.57 b , PE=32.00±3.47cm a , Mot=69.60±29.13% a , TDE=14.49±15.00% b ; C) 24-36m: COR=1.51±0.66 b , PE=33.56±3.91cm b , Mot=69.46±15.52% a , TDE=12.29±12.92% c ; D) 36-48m: COR=1.60±0.57 c , PE=36.66±3.50cm c , Mot=71.04±16.19% b , TDE=10.87±12.97% d ; E) >48m: COR=1.64±0.72 c , PE=38.00±3.22 d , Mot=71.54±15.30 b , TDE=9.70±16.95 d . It was concluded that age influences testicular size, pelage color, and semen quality parameters. As the age progresses, there is an increase in scrotal perimeter, hair darkening, sperm motility and vigor, and reduction of sperm morphological defects of pasture raised Nelore bulls, assessed as from as 12 months of age.(AU)

Evaluación de los parámetros de calidad seminal y cinemática espermática en tres razas ovinas de lana en condiciones de trópico alto colombiano / Evaluation of semen quality parameters and sperm kinematics in three wool sheep breeds in conditions of high tropics in Colombia / Avaliação dos parâmetros de qualidade seminal e cinemática espermática em três raças ovinas de lã em condições de trópico alto colombiano

Resumen El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto del eyaculado, la raza y las colectas sobre los parámetros de calidad seminal y cinemática en 3 tipos raciales ovinos de lana bajo condiciones de trópico alto colombiano. Se colectó semen de 12 machos de la raza criollo, romney marsh y hampshire de 2 a 5 años de edad, con vagina artificial, durante 4 colectas con un tiempo de abstinencia de 3 d. Se realizó el análisis de la motilidad con ayuda de un sistema computarizado de análisis seminal (CASA) en combinación con una tinción de fluorescencia Hoeschst 33259 para el estudio de la viabilidad y la morfología. Se realizó un análisis de medidas repetidas en el tiempo con el paquete estadístico SAS, empleando el método Proc Mixed. No hubo diferencias significativas (p > 0,05) en el porcentaje de motilidad total y motilidad progresiva para el primer y segundo eyaculado, pero sí hubo diferencias (p < 0,05) para la concentración, volumen y viabilidad; el primer eyaculado fue significativamente superior al segundo, independiente de la raza y la colecta. Las variables de cinemática espermática relacionadas con el movimiento progresivo y la velocidad (ALH, VAP, LIN) no difieren entre eyaculados, pero sí hay un efecto racial (p > 0,05) en el que la raza criolla es superior en estas variables, lo que podría sugerir que las células espermáticas de esta raza tienen la capacidad de recorrer mayor distancia en menor tiempo, comparado con los espermatozoides de las otras dos razas, en las condiciones del presente experimento.

Abstract This study aimed to evaluate the effect of the ejaculate, race, and sperm collections on semen quality and kinematic parameters in three wool sheep breeds in conditions of high tropics in Colombia. Semen was collected from 12 males of Creole, Romney marsh, and Hampshire sheep breeds ranging from 2 to 5 years of age, with artificial vagina, during 4 collections with a time of abstinence of 3 days. Motility analysis was performed with the help of a computer-assisted semen analysis (CASA) in combination with a fluorescent Hoechst 33259 stain for the study of viability and morphology. An analysis of measures repeated over time was performed with the SAS statistical package, using the Proc Mixed method. There were no significant differences (p > 0.05) in the percentage of total motility and progressive motility for the first and second ejaculates, but there were differences (p < 0.05) for concentration, volume, and viability; the first ejaculate was significantly superior to the second, independent of breed and collection. Sperm kinematic variables related to progressive movement and speed (ALH, VAP, LIN) do not differ between ejaculates, but there is a racial effect (p > 0.05), since the Creole breed is superior in all these variables, which could suggest that the sperm cells of this breed have the ability to travel greater distance in less time, compared with sperm from the other two breeds, under the conditions of the present experiment.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da ejaculação, a raça e as coletas sobre os parâmetros de qualidade seminal e cinemática em 3 tipos raciais ovinos de lã sob condições de trópico alto colombiano. Foram colhidas amostras de sêmen de 12 machos da raça crioulo, romney marsh e hampshire de 2 a 5 anos de idade, com vagina artificial, durante 4 coletas com um tempo de abstinência de 3 d. Realizou-se a análise da motilidade com ajuda de um sistema computarizado de análise seminal (CASA) em combinação com uma tinção de florescência Hoeschst 33259 para o estudo da viabilidade e a morfologia. Realizou-se um análise de medidas repetidas no tempo com o paquete estadístico SAS, empregando o método Proc Mixed. Não houve diferenças significativas (p > 0,05) na porcentagem de motilidade total e motilidade progressiva para a primeira e segunda ejaculação, mas, sim houve diferenças (p < 0,05) para a concentração, volume e viabilidade; a primeira ejaculação foi significativamente superior ao segundo, independente da raça e da coleta. As variáveis de cinemática espermática relacionadas com o movimento progressivo e velocidade (ALH, VAP, LIN) não diferem entre as ejaculações, mas sim há um efeito racial (p > 0,05) no que a raça crioula é superior em estas variáveis, o que poderia sugerir que as células espermáticas desta raça têm a capacidade de percorrer maior distância em menor tempo, comparado com os espermatozoides das outras dois raças, nas condições desta experiência.

Cholesterol-loaded cyclodextrin in fresh goat sperm improves cryosurvival rates / Colesterol em sêmen caprino melhora a criopreservação

Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito da adição do colesterol carreado com a ciclodextrina (CCC) sobre a melhoria da qualidade espermática após a descongelação. Trinta ejaculados foram diluídos, centrifugados e ressuspendidos com Tris para concentração de 120 x 106 células/mL. O sêmen foi tratado com 0, 0,75, 1,5, 3,0, 4,5, 6,0 ou 7,5 mg de CCC. Em seguida, as amostras foram resfriadas a 4°C durante 2 horas, diluídas com Tris-Gema de ovo e 2% de glicerol, envasadas e colocadas sobre o vapor do nitrogênio líquido (N2 ) por 20 min e depois mergulhadas no N2 . As amostras foram descongeladas a 37°C por 30s, e avaliadas quanto: o teste de termorresistência (TRT); motilidade progressiva utilizando CASA; teste hiposmótico e a capacidade de ligação dos espermatozoides à membrana perivitelina (MP). As variáveis foram analisadas por meio da ANOVA e os tratamentos comparados a 5% de probabilidade. A motilidade dos espermatozoides (50,4; 33,8 e 22,5%) foi maior nas amostras tratadas com 0,75 mg de CCC após 0, 60 e 120 min de incubação quando comparado com demais tratamentos (P<0,05). As amostras tratadas com 6,0 e 7,0 mg de CCC apresentaram maior dobramento de cauda que os demais tratamentos (P<0,05). A capacidade de ligação dos espermatozoides a MP foi maior no tratamento com 0,75 mg CCC comparado ao controle (166 vs 65; P <0,05). No entanto, quando o potencial de ligação dos espermatozoides foi determinado dividindo o número médio de espermatozoides ligados a MP sobre o percentual de espermatozoides móveis, o tratamento com CCC proporcionou maior eficiência (1,52) do que o controle (1,00; P < 0,05). A adição de 0,75 mg de CCC no sêmen fresco de caprino antes da criopreservação melhorou a motilidade espermática após a criopreservação até 2 horas.

Increase in post-thaw viability by adding seminal plasma proteins to Sanmartinero and Zebu sperm / Incremento en la viabilidad espermática post-descongelación por la adición de proteínas del plasma seminal a semen de toros Sanmartinero y Cebú / Aumento da viabilidade espermática pós-descongelamento, com a adição de proteínas do plasma seminal de sêmen de touros das raças Sanmartinero e Zebu

Background: cryopreservation decreases sperm viability by approximately 50%. Objective: the objective of this study was to determine the effect of the addition of seminal plasma proteins on post-thawing sperm viability in Sanmartinero and Zebu semen. Methods: semen samples from 10 bulls of each breed were used, and seminal plasma was subjected to two-dimensional electrophoresis to establish the relationship between the relative amount of each protein spot and sperm viability. Then, seminal plasma was subjected to exclusion chromatography to separate the fraction containing these proteins. This fraction was added in doses of 0.5, 1.0, 1.5 and 2.0 mg, to 1 x 10(6). Sperm was thawed and incubated at 37 °C for 1 h to determine its effect on postthaw viability. Sperm were frozen using two media (citrate-fructose-yolk and Bioxcell®). Results: we found one protein spot (16.20 kDa, PI 5.5) in Sanmartinero seminal plasma that correlated (r = 0.64 p<0.001) with viability. This spot was found in 21-25 chromatography fractions. The percentage of post-thaw viable sperm increased 20% (p<0.05) at 1.0 and 1.5 mg of the fraction when sperm was frozen using citrate-fructose-yolk; it increased 25% (p<0.01) with 0.5 mg when it was frozen with Bioxcell® media. Addition of 0.5 mg of the fraction to semen cryopreserved with Bioxcell® resulted in a greater (p<0.05) percentage increase of viable sperm in Sanmartinero semen (23 ± 8.3%) compared with Zebu semen (6.0 ± 2.0%). Conclusions: these results show that seminal plasma proteins decrease cryopreservation damage in sperm. The effect depends on the cryoprotectant dose as well as the breed of bull.

Antecedentes: la criopreservación disminuye la viabilidad espermática por debajo del 50%. Objetivo: el objetivo de esta investigación fue determinar el efecto de la adición de proteínas del plasma seminal sobre la viabilidad espermática post-descongelación de semen de toros Sanmartinero y Cebú. Métodos: se colectó semen de 10 toros de cada raza, y el plasma seminal se sometió a electroforesis bidimensional, para establecer la relación entre la cantidad relativa de cada punto de proteína y la viabilidad espermática. Identificados dichos puntos, el plasma seminal se sometió a cromatografía de exclusión para separar la fracción que contenía estas proteínas. Esta se adicionó en dosis de 0,5, 1,0, 1,5 y 2,0 mg, a muestras de 1 x 10(6) espermatozoides, descongelados e incubados a 37 °C durante 1 hora, para determinar su efecto en la viabilidad post-descongelación. Los espermatozoides se congelaron usando dos medios (citrato-fructosa-yema y Bioxcell®). Resultados: se encontró un punto de proteína (16,20 kDa, punto Isoeléctrico 5,5) en plasma de toros Sanmartinero, que correlacionó (r = 0,64 p<0,001) con la viabilidad. Este punto de proteína se encontró en la fracción 21-25 de la cromatografía. El porcentaje de espermatozoides viables post-descongelación aumentó 20% (p<0,05) con dosis de 1 y 1,5 mg de la fracción, cuando los espermatozoides se congelaron en medio citrato-fructosa-yema; y 25% (p<0,01) con dosis de 0,5 mg cuando se congelaron en medio Bioxcell®. La adición de 0,5 mg de la fracción a semen descongelado previamente criopreservado en medio Bioxcell®, evidenció un incremento mayor (p<0,05) en el porcentaje de espermatozoides viables de semen de toros Sanmartinero (23 ± 8,3 %), que en semen de toros Cebú (6,0 ± 2,0%). Conclusiones: los resultados anteriores demuestran que las proteínas del plasma seminal disminuyen el daño en los espermatozoides por la criopreservación, y que el efecto de estas proteínas depende del medio de congelación, la dosis adicionada y la raza de los toros.

Antecedentes: a criopreservação diminui a viabilidade espermática abaixo de um 50%. Objetivo: o objetivo desta pesquisa foi determinar o efeito da adição de proteínas do plasma seminal na viabilidade espermática pós-descongelamento de sêmen de touros das raças Sanmartinero y Zebú. Métodos: coletou-se sêmen de 10 touros de cada raça, as amostras do plasma seminal foram submetidas à eletroforese bidimensional, para estabelecer a relação entre a quantidade relativa de cada ponto de proteína e a viabilidade espermática. Ao serem identificados os pontos, o plasma seminal também foi submetido ao processo de cromatografia por exclusão para separar a fração que continha as proteínas. A fração foi adicionada nas doses de 0,5, 1,0, 1,5 y 2,0 mg, amostras de 1 x 106 espermatozoides, em descongelamento e incubados à temperatura de 37 ° C durante 1 hora, para determinar o efeito na viabilidade pós-descongelamento. Os espermatozoides foram congelados utilizando dois meios (Citrato- frutose-gema e Bioxcell®). Resultados: encontrou-se um ponto de proteína (16,20 kDa, ponto Isoelétrico 5,5) no plasma de touro Sanmartinero, que correlacionou (r=0,64 p<0,001) com a viabilidade. Esse ponto de proteína foi encontrado na fração 21-25 da cromatografia. O percentagem de espermatozoides viáveis pós-descongelamento aumentou em 20% (p<0,05) nas doses de 1 y 1,5 mg da fração, quando os espermatozoides foram congelados em meio de citrato-frutose-gema; e 25% (p<0,01) com doses de 0,5 mg congelados em meio Bioxcell®. A adição de 0,5 mg da fração ao sêmen descongelado e previamente criopreservado em meio Bioxcell®, evidenciou um incremento maior (p<0,05) no percentagem de espermatozoides viáveis do sêmen de touros Sanmartinero (23 ± 8,3 %), do que em sêmen de touros zebu (6,0 ± 2,0%). Conclusões: os anteriores resultados demonstram que as proteínas do plasma seminal diminuem o dano nos espermatozoides pela criopreservação e que o efeito destas proteínas depende do meio de congelação, a dose adicionada e a raça dos touros.

Concentração de lactato de cálcio e tempo de incubação sobre a capacidade de adesão e penetração de espermatozoides suínos na membrana perivitelina do ovo da galinha / Calcium lactate concentration and incubation period on the binding and penetration capacity of swine sperm in the perivitelline membrane of chicken egg

Este estudo testou o efeito de diferentes concentrações de lactato de cálcio e tempos de incubação sobre a capacidade de adesão e a penetração dos espermatozoides suínos nas membranas perivitelinas (MP) de ovos de galinhas, na expectativa de desenvolver um teste para estimar o potencial de fertilidade de machos doadores de sêmen. No primeiro experimento, amostras de sêmen (n=12) foram incubadas em meio TCM com lactato de cálcio a 1,1 e 2,2µg mL-1. Posteriormente, após definida a concentração de 1,1µg mL-1 de lactato de cálcio, um segundo experimento comparou três períodos de incubação a 39°C: 10, 15 e 20min. As respostas testadas foram: a taxa de adesão (TA) e o número de espermatozoides aderidos (NA) na MP externa, e a taxa de penetração (TP) e o número de orifícios (NO) na MP interna. A TA na MP externa foi de 100 por cento, independentemente da concentração e dos períodos testados. Com a concentração de lactato de cálcio de 1,1µg mL-1, o NA na membrana perivitelina externa e TP e NO na membrana perivitelina interna foram superiores (P<0,05) aos com 2,2µg mL-1. O NA foi superior com incubação por 20min, em comparação aos períodos mais curtos (P<0,05). No período de incubação por 10min, não houve penetração na MP interna. Porém, com 20min de incubação, a TP na MP interna e o NO foram superiores aos obtidos com a incubação por 15min (P<0,05). A concentração de 1,1µg mL-1 de lactato de cálcio e o perídodo de incubação por 20min permitem a execução eficiente de testes in vitro usando MP para verificar etapas importantes do processo de fertilização.

This study tested the effect of different calcium lactate concentrations and incubation periods on the binding and penetration capacity of swine sperm to the perivitelline layers (PL) of chicken eggs, with the expectation of developing a test to estimate the potential fertility of boars used as sperm donors. In the first experiment, semen samples (n=12) were incubated with TCM medium ant two calcium lactate levels: 1.1 and 2.2µg mL-1. After the set up of fixed calcium lactate level (1.1µg mL-1), the second experiment compared three incubation periods: 10, 15 and 20min. The observed variables were binding rate (BR) and number of bound sperm (NB) in the outer PL, and penetration rate (PR) and number of holes (NH) in the inner PL. The BR to the outer MP was 100 percent, regardless of the tested concentrations and incubation periods. The NB to the outer perivitelline layer and the PR and the NH in the inner perivitelline layer were greater with 1.1µg mL-1 calcium lactate than 2.2µg mL-1. The NB in the outer PL was greater with 20min incubation than with shorter period (P<0.05). Using 10min incubation, there was no penetration in the inner PL, but, with incubation for 20min, the PR and the NH in the inner PL were greater than those with incubation for 15 min (P<0.05). Using 1.1µg mL-1 calcium lactate and incubation for 20min, the in vitro test using PL can be efficiently conducted to assess important steps of the fertilization process.