Sexually transmitted infections detected by multiplex real time PCR in asymptomatic women and association with cervical Intraepithelial neoplasia / Infecções sexualmente transmissíveis detectadas por PCR multiplex em tempo real em mulheres assintomáticas e associação com neoplasia intraepitelial cervical

Abstract Objective To determine the frequency of sexually transmitted infections (STIs) in asymptomatic women and the association of STIs with cervical intraepithelial neoplasia (CIN). Methods A cross-sectional studywas performed, enrollingwomen examined in a general gynecology clinic and in a colposcopy referral center fromOctober 2014 to October 2015. The colposcopy groupconsisted of 71women, and the general gynecologygroupconsisted of 55 women. Cervical samples were collected for cervical cytology and a multiplex realtime polymerase chain reaction (PCR) was developed to detect human papillomavirus (HPV) and the STIs caused by the following microorganisms: Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum, and Neisseria gonorrhoeae. A multivariate analysis was performed by logistic regression, considering the significance level of 0.05. Results The general frequency of STIs was: 46.8% (HPV); 27.8% (C. trachomatis); 28.6% (M. genitalium); 0.8% (M. hominis); 4.8% (U. urealyticum); and 4.8% (N. gonorrhoeae). The significant risk factors for CIN were: HPV infection (odds ratio [OR] = 2.53; p = 0.024); C. trachomatis (OR = 3.04; p = 0.009); M. genitalium (OR = 2.37; p = 0.04); and HPV and C. trachomatis coinfection (OR = 3.11; p = 0.023). After the multivariate analysis, a significant associationwas found betweenHPVand CIN(OR = 2.48; 95% confidence interval [95%CI]: 1.04-5.92; p = 0.04); and between C. trachomatis and CIN (OR = 2.69; 95%CI: 1.11-6.53; p = 0.028). Conclusion The frequency of STIs was high in asymptomatic patients. Infections by HPV and C. trachomatis were independently associated with the presence of CIN. The high frequency of STIs in asymptomatic women suggests the need for routine screening of these infections.

Resumo Objetivo Determinar a frequência de infecções sexualmente transmissíveis (ISTs) em mulheres assintomáticas e a associação destas infecções com a neoplasia intraepitelial cervical (NIC). Métodos Foi realizado um estudo transversal recrutando mulheres atendidas em uma clínica ginecológica geral e em um centro de referência para colposcopia, de outubro de 2014 a outubro de 2015. O grupo de colposcopia consistiu de 71 mulheres, e o grupo de ginecologia geral consistiu de 55 mulheres. Amostras cervicais foram coletadas para citologia cervical e uma reação em cadeia de polimerase (RCP) multiplex em tempo real para detecção do vírus do papiloma humano (HPV) e das ISTs provocadas pelos seguintes micro-organismos: Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum e Neisseria gonorrhoeae. Foi realizada uma análise multivariada por regressão logística, considerando-se o nível de significância de 0,05. Resultados A frequência geral de ISTs foi: 46,8% (HPV); 27,8% (C. trachomatis); 28,6% (M. genitalium); 0,8% (M. hominis); 4,8% (U. urealyticum); e 4,8% (N. gonorrhoeae). Os fatores de risco significantes para NIC foram: infecção pelo HPV (razão de probabilidades [RP] = 2,53; p = 0,024); C. trachomatis (RP = 3,04; p = 0,009); M. genitalium (RP = 2,37; p = 0,04); e coinfecção por HPV e C. trachomatis (RP = 3,11; p = 0,023). Após a análise multivariada, foi encontrada uma associação significante entre HPV e NIC (RP = 2.48; intervalo de confiança de 95% [IC95%]: 1,04-5,92; p = 0,04) e entre C. trachomatis e NIC (RP = 2,69; IC95%: 1,11-6,53; p = 0,028). Conclusões A frequência de ISTs foi alta em mulheres assintomáticas. Infecções por HPV e C. trachomatis foram independentemente associadas com a presença de NIC. A alta frequência de ISTs em mulheres assintomáticas sugere a necessidade de rastreamento rotineiro dessas infecções.

Occurrence of anti-Toxoplasma gondii antibodies and parasite DNA in backyard chicken breeding in Northeast, Brazil / Ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii e DNA do parasita em galinhas de criações domésticas no Nordeste, Brasil

Abstract The aim of the present study was to investigate the occurrence of anti-Toxoplasma gondii antibodies and parasite DNA in backyard chickens bred in the metropolitan area of Recife, Brazil. In total, 212 serum samples were collected from 16 properties, and 12 backyard chickens were collected in the six sanitary districts of Recife. An indirect immunofluorescence assay (IFA) was used to investigate the occurrence of anti-Toxoplasma gondii antibodies. Polymerase chain reaction (PCR) was used to detect T. gondii DNA in brain, heart, liver and lung specimens. Of the samples analyzed by serology, 86/212 (40.56%) were positive; of the samples analyzed by PCR, 2/12 (16.7%) were positive, with both samples positive by both tests (serological and molecular). The presence of antibody anti-T. gondii and parasite DNA in tissues of these animals are worrying aspects for public health because there is a risk of transmission of the parasite to humans through eating undercooked or raw meat. Based on the results, the adoption of preventive measures to prevent the cats access to the chickens creations should be encouraged, since these animals were identified in most of the studied properties.

Resumo O objetivo do presente estudo foi investigar a ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii e de DNA do parasito em galinhas de criações domésticas, na região metropolitana de Recife, Brasil. No total, 212 amostras de soro foram coletadas de aves de 16 estabelecimentos e de 12 galinhas de criações domésticas nos seis distritos sanitários de Recife. Para a pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii foi utilizada a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) foi utilizada para detectar o DNA de T. gondii em fragmentos de cérebro, coração, fígado e pulmão. Das amostras analisadas por sorologia, 86/212 (40,56%) foram positivas. Das amostras analisadas por PCR, 2/212 (16,7%) foram positivas, em ambos os testes (sorológicos e moleculares). A presença de anticorpos anti-T. gondii e de DNA parasitário nos tecidos desses animais são aspectos preocupantes para saúde pública, porque há o risco de transmissão do parasita para humanos através da ingestão de carne mal cozida ou crua. Com base nos resultados obtidos, a adoção de medidas preventivas que evitem o acesso de gatos às criações de galinhas deve ser incentivada, uma vez que esses animais foram identificados na maioria das propriedades estudadas.

Prevalence of hemoglobinopathies in school children: the importance of using confirmatory methods / Prevalência das hemoglobinopatias em crianças em idade escolar: a importância do uso de métodos de confirmação

The hemoglobinopathies are included among the most common genetic diseases in the world. In Brazil, hemoglobinopathies are related to the diversity of racial backgrounds and the degree of interbreeding. The study focused on the prevalence of hemoglobinopathies using conventional and confirmatory laboratory tests in children from public schools in Ribeirão Preto-SP. The study involved the participation of 427 children between six and nine years of age. Hematologic evaluation, hemoglobin electrophoresis on cellulose acetate at alkaline pH, quantification of hemoglobin fractions by high performance liquid chromatography (HPLC) and detection of -α^3.7 deletion for α thalassemia by polymerase chain reaction were performed. The results of hemoglobin electrophoresis on cellulose acetate and HPLC of the children studied showed the presence of 30 children (7%) with hemoglobinopathies. Eleven children presented results indicating suspicion of S/β-thalassemia; their parents and/or siblings were evaluated and confirmed the presence of only Hb S. The analysis of deletion -α^3.7to characterize α-thalassemias sampling performed on 207 participants identified 26 children (12.6%) with deletion -α^3.7. Thus, 54 (12.6%) of the children studied present this genetic alteration. For the detection of α-thalassemias it is necessary to use confirmatory methods such as molecular analysis and evaluation of family members in doubtful cases to facilitate genetic counseling in families, in which deletion -α^3.7 is more frequent in Brazil...

As hemoglobinopatias estão incluídas nas doenças genéticas mais comuns no mundo. No Brasil, as hemoglobinopatias são relatadas pela diversidade racial e o grau de miscigenação. O estudo focou a prevalência das hemoglobinopatias usando métodos laboratoriais convencionais como a eletroforese de hemoglobina em acetato de celulose em pH alcalino e confirmatório por reação em cadeia de polimerase (PCR) em crianças de escolas públicas de Ribeirão Preto-SP. O estudo envolveu a participação de 427 crianças entre 6-9 anos de idade. Determinaram-se os valores hematológicos, efetuou-se eletroforese de hemoglobina em acetato de celulose em pH alcalino, quantificação das frações de hemoglobina por HPLC e a detecção da deleção -α^3,7 pela PCR. Os resultados da eletroforese de hemoglobina em acetato de celulose e do HPLC, nas crianças estudadas, mostraram a presença de 30 crianças (7%) com hemoglobinopatias. Onze crianças apresentaram resultado indicando a suspeita de S/β-talassemia; seus pais e/ou irmãos confirmaram a presença de apenas a Hb S. A análise da deleção -α^3,7, uma das alterações que estão presentes na α-talassemia, realizada em 207 participantes, identificou 26 crianças (12,6%) com a deleção -α^3,7. Dessa forma, 54 (12,6%) das crianças estudadas apresentam hemoglobinopatias. Para a deleção da α-talassemias é necessário utilizar métodos confirmatórios como as análises moleculares e avaliação de membros da família, em casos duvidosos, facilitando o aconselhamento genético nas famílias, sendo a deleção -α^3,7 mais frequente no Brasil...

Desarrollo y validación de una PCR múltiple para el diagnóstico de Bordetella spp / Development and validation of a multiplex PCR for diagnosis of Bordetella spp / Desenvolvimento e validação de uma PCR múltipla para o diagnóstico de Bordetella spp

El objetivo del trabajo consistió en diseñar y validar una PCR en formato convencional que permita confirmar la presencia o ausencia de Bordetella pertussis y detectar otras especies del género, como Bordetella parapertussis y Bordetella bronchiseptica, que pudieran estar involucradas en el cuadro clínico de coqueluche. A tal fin se diseñó una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) múltiple que amplifica una secuencia del promotor del gen de Toxina Pertussis y otra del gen de la Toxina Adenilato Ciclasa-Hemolisina. Se validó la metodología siguiendo esquemas publicados anteriormente. Se optimizaron las condiciones de la PCR. Se validó la metodología obteniéndose un límite de detección para ambas secuencias de 0,5 bacterias por reacción. Se validó, además, la especificidad y robustez de la técnica. Se presenta una nueva herramienta diagnóstica optimizada y validada, que permite detectar la presencia de las especies de Bordetella más frecuentemente involucradas en el cuadro clínico de coqueluche. Su uso combinado con alguna de las PCR habituales en diagnóstico, como la PCR IS481, permite aumentar la sensibilidad del diagnóstico de esta en­fermedad, la especificidad del mismo discriminando los resultados falsos positivos/negativos y aumentar el conocimiento sobre los agentes etiológicos implicados en esta patología.

The aim of the present work was to design and validate a conventional PCR that enables to confirm the presence or absence of Bordetella pertussis and to detect other Bordetella species, such as Bordetella parapertussis metoand B. bronchiseptica, that may be involved in this pathology. To this aim, a multiplex PCR that amplifies a sequence of the promoter of the Pertussis Toxin gene and a sequence of the Adenylate Cyclase Toxin-Hemolysin gene were designed. The PCR was validated following previously published schemes. PCR conditions were optimized. The methodology was validated obtaining a detection limit of 0.5 bacteria per reaction, for both sequences. Specificity and robustness of the technique were also validated. A new optimized and validated tool to detect the presence of the Bordetella species most frequently responsible of pertussis was presented. The combined use with some of the usual PCR, such as IS 481, may increase the sensitivity of the diagnosis of this disease, its specificity discriminating false positive/negative results and increase awareness of the etiologic agents involved in this pathology.

O objetivo do trabalho foi desenhar e validar uma reação em cadeia da polimerase (PCR) em formato convencional que permita confirmar a presença ou ausência de Bordetella pertussis e detectar outras espécies do gênero, como Bordetella parapertussis e Bordetella bronchiseptica, que pudessem estar envolvidas no quadro clínico de coqueluche. Para tal, foi desenhada uma PCR múltipla que amplifica uma sequência do promotor do gene de Toxina Pertussis e outra do gene da Toxina Adenilato Ciclase-Hemolisina. A metodologia foi validada seguindo esquemas publicados anteriormente. Foram otimizadas as condições da PCR. Validou-se a metodologia obtendo-se um limite de detecção para ambas as sequências de 0,5 bactérias por reação. Validou-se também a especificidade e robustez da técnica. Apresenta-se uma nova ferramenta diagnóstica otimizada e validada, que permite detectar a presença das espécies de Bordetella mais frequentemente envolvidas no quadro clínico de coqueluche. Seu uso combinado com alguma das PCR habituais em diagnóstico, como a PCR IS481, permite aumentar a sensibilidade do diagnóstico desta doença, a especificidade do mesmo discriminando os resultados falsos positivos/negativos e aumentar o conhecimento sobre os agentes etiológicos envolvidos nesta patologia.

Molecular characterization of hemoglobin D Punjab traits and clinical-hematological profile of the patients / Caracterização molecular dos traços de hemoglobina D Punjab e perfil clínico-hematológico dos pacientes

CONTEXT AND OBJECTIVE: Hemoglobin (Hb) D hemoglobinopathies are widespread diseases in northwestern India and usually present with mild hemolytic anemia and mild to moderate splenomegaly. The heterozygous form of Hb D is clinically silent, but coinheritance of Hb D with Hb S or beta-thalassemia produces clinically significant conditions like thalassemia intermedia of moderate severity. Under heterozygous conditions with coinheritance of alpha and beta-thalassemia, patients show a degree of clinical variability. Thus, our aim was to molecularly characterize the Hb D trait among individuals who were clinically symptomatic because of co-inheritance of alpha deletions or any beta-globin gene mutations. DESIGN AND SETTING: This was a cross-sectional study conducted in an autonomous tertiary-care hospital. METHODS: Complete blood count and red cell indices were measured using an automated cell analyzer. Quantitative assessment of hemoglobin Hb F, Hb A, Hb A2 and Hb D was performed by means of high performance liquid chromatography (HPLC). DNA extraction was done using the phenol-chloroform method. Molecular analyses on common alpha deletions and common beta mutations were done using the Gap polymerase chain reaction and Amplification Refractory Mutation System, respectively. RESULTS: We evaluated 30 patients and found clinical variation in the behavior of Hb D traits. In six patients, the Hb D traits were clinically symptomatic and behaved like those of thalassemia intermedia. Molecular characterization showed that three out of these six were IVS-1-5 positive. CONCLUSIONS: HPLC may not be the gold standard for diagnosing symptomatic Hb D Punjab traits. Hence, standard confirmation should include molecular studies.

CONTEXTO E OBJETIVO: Hemoglobinopatias da hemoglobina (Hb) D são doenças amplamente disseminadas no noroeste da Índia e geralmente se apresentam com anemia hemolítica leve e esplenomegalia leve a moderada. A forma heterozigótica de Hb D é clinicamente silenciosa, mas co-herança de Hb D com Hb S ou beta-talassemia produzem condições clinicamente significativas, como talassemia intermediária de gravidade moderada. Em condição heterozigótica com co-herança de alfa e beta-talassemia, pacientes mostram variabilidade clínica. Assim, nosso objetivo foi a caracterização molecular dos traços da Hb D em individuos clinicamente sintomáticos, devido à co-herança de deleções de alfa ou quaisquer mutações gênicas de beta-globina. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo transversal; realizado em um hospital de cuidado terciário autônomo. MÉTODOS: Hemograma completo e índices de células vermelhas foram medidos pelo analisador automatizado de células. Avaliação quantitativa de hemoglobina Hb F, Hb A, Hb A2 e Hb D foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência. Extração de DNA foi feita pelo método de fenol-clorofórmio. Estudo molecular para deleções comuns de alfa e mutações comuns de beta foi feito por Gap-reação em cadeia da polimerase e amplificação refratária de mutação, respectivamente. RESULTADOS: Avaliamos 30 pacientes e verificamos variação clínica no comportamento dos traços da Hb D. Em seis pacientes, os traços da Hb D foram clinicamente sintomáticos e se comportavam como os de talassemia intermédia. A caracterização molecular mostrou que três desses seis pacientes eram IVS-1-5 positivos. CONCLUSÕES: HPLC pode não ser o padrão ouro para o diagnóstico de traços de Hb D Punjab sintomáticos. Assim, a confirmação padrão ouro deve incluir estudos moleculares.

Prevalência do herpes-vírus humano tipo 1 em neoplasias cutâneas epiteliais malignas / Prevalence of human herpes virus type 1 in epithelial skin cancer

FUNDAMENTOS - O DNA viral pode atuar como oncogene, favorecendo o desenvolvimento de neoplasias, como as linfoides e da pele. Entre esses vírus, encontram-se alguns herpes-vírus humanos. OBJETIVO - Identificar a presença de DNA do herpes-vírus humano tipo 1 em neoplasias epiteliais pré-malignas,malignas e pele normal de indivíduos controle, avaliando seu papel na carcinogênese. MÉTODOS - Identificação, por reação em cadeia da polimerase, do DNA viral do tumor e pele sã de 41 pacientes e comparação com grupo controle, sem neoplasia. Análise estatística: Testes de Fisher e de McNemar. RESULTADOS - O vírus foi identificado em 20 indivíduos sem e em 21 com neoplasia. Destes últimos, 11 o expessaram apenas nas células tumorais. A diferença, entretanto, não foi estatisticamente significante. CONCLUSÕES - Parece não haver relação direta entre o encontro do DNA viral na pele sã e na pele tumoral. Sua presença pode facilitar o desenvolvimento da neoplasia ou apenas coincidir de se localizar onde esta já ocorreu.

BACKGROUND - Viral DNA may act as an oncogene, especially in skin and lymphoid organs. This group includes some human herpes virus. OBJECTIVE - To identify human herpes virus type 1 DNA in pre-malignant and malignant skin samples of epithelial tumors comparing to normal skin to determine its role in carcinogenesis. METHODS - Forty-one patients with epithelial tumors were submitted to biopsies from tumor and normal skin. The control group comprised 41 biopsies from patients with other dermatoses than cancer. After DNA extraction, polymerase chain reaction was performed to identify 199-bp band. The results were statistically evaluated by Fisher and McNemar tests. RESULTS - The virus was identified in 20 subjects without cancer and in 21 with skin cancer. From these, 11 expressed it only in tumor cells. This difference was not significant. CONCLUSION - There seem to be no direct relation between viral findings in normal skin and skin cancer cells. It may act as a promoter or just coexist at the same site where a neoplastic transformation has already occurred.

Detecção da carga viral dos herpesvirus HHV-5 (citomegalovirus) e HHV-6 pela reação em cadeia da polimerase em tempo real e transcrição reversa acoplada a nested-PCR em pacientes receptores de transplante de celulas tronco hematopoieticas / Detection of herpesvirus HHV-5 (cytomegalovirus) and HHV-6 viral load by real time polymerase chain reaction and reverse transcription nested polymerase chain reaction in hematopoietic stem cell transplantation recipients

O cytomegalovirus humano (HCMV) e o herpesvirus humano 6 (HHV-6) são β-herpesvirus com homologia superior a 67 por cento e alta soroprevalência na população adulta. A infecção primaria por estes herpesvirus ocorre comumente na infância e é normalmente subclinica, ou pode causar mononucleose (HCMV) ou exantema súbito (HHV-6) sendo resolvidos na maioria dos casos sem complicações. Após a infecção primária os vírus permanecem no hospedeiro por toda vida podendo ser reativado de seu estado de latência em indivíduos adultos imunocomprometidos como os receptores de células tronco hematopoiéticas (TCTH). A reativação ou reinfecção por estes vírus causam serias complicações em pacientes submetidos ao transplante de células tronco hematopoiéticas como pneumonia intersticial, febre, gastroenterite, mielossupressão, encefalite e doença do enxerto contra o hospedeiro (GVHD). A reativação do HHV-6 após o transplante é associada com o desenvolvimento de infecções oportunistas, doença causada pelo citomegalovírus humano e possíveis episódios de rejeição aguda. Com efetivos tratamentos antivirais disponíveis, um monitoramento adequado destes vírus distinguindo entre latência e reativação é critico para estes pacientes. Monitoramos 30 pacientes submetidos à TCTH quanto a infecção ativa por HCMV e HHV-6 pelas técnicas de nested-PCR em soro e células, PCR- em tempo real em soro e células e transcrição reversa acoplada a nestedPCR (RT-nPCR). 29 pacientes (96,66 por cento) apresentaram infecção ativa por HCMV sendo 21 pacientes (70 por cento) pela nested-PCR em células, 17 pacientes(56,66 por cento) pela neste-PCR em soro, 23 pacientes(76,67 por cento) pela PCR em tempo real em células,19 pacientes (63,33 por cento) pela...

Human cytomegalovirus (HCMV) and human herpesvirus type 6 (HHV-6) are β-herpesvirinae extremely closely related with a homology > 67 per cent with a high seroprevalence in the adult population. Primary infection commonly appears in early childhood and is usually subclinical, or may cause mononucleosis (HCMV) or febrile illness, including exanthema subitum (HHV-6), solving, in the majority of cases, without complications. After primary infection, the viruses persist in the infected individual through life and can be reactivated from their state of latency in immunocompromised hosts. Reactivation or reinfection causes severe clinical diseases in patients who underwent hematopoietic stem cell transplantation, like interstitial pneumonia, fever, gastroenteritis, myelossupression, encephalitis and graft-versus-host-disease (GVHD). A potential increase in virulence of HHV-6 in the course of a simultaneous CMV reactivation, leading to a great risk of CMV-associated disease. In this present study, 30 patients who received HSCT were monitoring for active HCMV and HHV-6 infection by Nested PCR in serum and peripheral blood leukocytes (PBL) samples, real time PCR in serum and PBL and RT-nPCR. In 29 patients (96,66 per cent) active HCMV infection was detected: 21 patients (70 per cent) by PBL nested-PCR, 17 patients (56,66 per cent) by serum neste-PCR, 23 patients (76,67 per cent) by PBL nested real-time-PCR, 19 patients (63,33 per cent) by...

Detecção e monitorização da infecção ativa pelo citomegalovirus humano (HCMV) pelas tecnicas de antigenemia, Nested-PCR e Real-time PCR em pacientes submetidos a transplante alogenico de celulas tronco hematopoeticas / Detection and monitoring of active human cytomegalovirus infectio (HCMV) by antigenemia, Nested-PCR and Real-time PCR assays in allogenic hematopoietic stem cell transplantation patients

O citomegalovírus humano (HCMV) é um vírus cosmopolita pertencente à família Herpesviridae, subfamília Betaherpesvirinae. É amplamente disseminado na população, com soroprevalência entre 40 e 100 por cento. Sua transmissão se dá através do contato direto com secreções contendo o vírus como: sêmen, secreção cervical, urina, saliva, leite materno, hemoderivados e também através de transplante de órgãos e tecidos. Durante a infecção primária o HCMV apresenta intensa replicação e em seguida estabelece um estágio de latência no hospedeiro. Periódicas reativações ocorrem em situações de estresse, imunossupressão, doenças auto-imunes e uso de quimioterápicos. O impacto desta infecção em receptores de Transplante de Células Tronco Hematopoéticas (TCTH) é grande podendo causar pneumonia intersticial, doença no trato gastrointestinal, hepatite, mielossupressão, retinite, nefrite, encefalite, atraso da pega medular, doença do enxerto contra hospedeiro, infecções por outros organismos oportunistas, aceleração da perda do enxerto e óbito. Por este motivo, é de suma importância o uso de técnicas laboratoriais, suficientemente sensíveis e específicas, capazes de fazer o diagnóstico precoce da infecção ativa pelo HCMV e estudos mais aprofundados sobre a real relação e correlação clínica que estas técnicas apresentam a fim de prevenir o aparecimento da doença pelo HCMV e demais complicações associadas ao HCMV. Neste estudo foram monitorizados semanalmente, 30 pacientes submetidos a TCTH do tipo alogênico desde o dia do transplante até o dia 150 pós-transplante pelas técnicas de antigenemia, Nested-PCR e Real-time PCR. O tratamento precoce com medicamento antiviral foi iniciado a partir dos seguintes resultados: = 1 célula pp65 positiva/3x105 leucócitos e/ou...

Human cytomegalovirus (HCMV) is a member of the Herpesviridae family and Betaherpesvirinae subfamily. HCMV is distributed worldwide, with prevalence of HCMV-positive antibodies of 40% to 100%. Transmission occurs during close personal contact with secretions of infected persons such as: semen, cervical secretions, urine, saliva, breast milk, blood products and transplanted organs and hematopoietic stem cell. During primary infection occurs intense replication followed by latent infection in host. Periodic reactivations occur in stress situations, immunosuppression, autoimmune diseases and use of chemotherapy. The impact of HCMV infection on recipients HSCT is large and can cause pneumonitis, gastrointestinal diseases, hepatitis, marrowsuppression, retinitis, nephritis, encephalitis, delay of bone marrow engraftment, severe acute graft-versus host disease (GVHD), opportunistic infections, chronic rejection and death. For this reason it is extremely important the use of sensitive and specific methods for early diagnostic of active HCMV infection and deeper studies about the real clinical relation and correlation these techniques show in order to prevent the disease through HCMV and further complications connected to HCMV. In this study 30 patients recipients of allogenic HSCT were monitored at weekly intervals from D+0 to D+150 post-transplant by antigenemia, Nested-PCR and Real-time PCR. Antiviral preemptive therapy was initiated upon a result = 1 positive pp65 cell/3x105 of PML and/or...

Diagnostico molecular de doença de Chagas em pacientes soronegativos portadores de megaesofago / Molecular diagnosis of Chagas disease in seronegative patients with megaesophagus

A doença de Chagas, cujo agente etiológico é o protozoário Trypanosoma cruzi, completa 100 anos de descoberta. Apesar da implementação de programas visando ao controle da transmissão vetorial, a infecção chagásica segue como um importante problema de saúde pública na América Latina. A globalização da doença de Chagas, consequente à migração de pessoas infectadas para países onde a doença não é endêmica, traz à tona a necessidade de instituição de medidas de controle e vigilância em algumas áreas da Europa e da América do Norte. A patologia caracteriza-se por uma fase aguda geralmente assintomática com elevada parasitemia e uma fase crônica, em que os parasitos dificilmente são detectados no sangue periférico por métodos parasitológicos convencionais. O curso clínico da infecção por T. cruzi é variável, sendo que boa parte dos infectados permanece na formaindeterminada da doença enquanto outros desenvolvem a forma cardíaca, digestiva ou nervosa. A prevalência do comprometimento do trato digestivo na doença de Chagas varia conforme a área endêmica, podendo alcançar até 14% no Brasil central. A forma digestiva caracteriza-se por lesão dos plexos nervosos intramurais e disfunção motora principalmente do esôfago e do cólon, levando à dilatação progressiva desses órgãos. Em nosso país, a doença de Chagas é o único fator etiológico comprovado para o megaesôfago. Devido à parasitemia baixa e intermitente, o diagnóstico na fase crônica baseia-se na detecção de anticorpos específicos anti-T.cruzi por metodologias sorológicas convencionais. Apesar de serem considerados métodos sensíveis e que apresentam boa especificidade, há relatos de resultados falso-positivos devido à reação cruzada com outros tripanosomatídeos que circulam na mesma...

After 100 years of research and despite control programs launched in endemic areas, Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi, still remains an important public health problem in Latin America. Immigration of infected persons from endemic to nonendemic areas leads to Chagas disease spread and it increases the need for establishment of control programs and surveillance in North America and some European countries. Acute phase of Chagas disease is usually free of symptoms and a high parasitemia is observed. Following the acute phase, the chronic stage is characterized by low and intermittent parasitemia. Presentation of chronic chagasic infection is pleomorphic ranging from absence of symptoms to severe cardiac involvement. Symptomatic chronic phase is usually characterized by cardiac or digestive commitment and its current diagnosis relies on the measurement of T. cruzi-specific antibodies produced in response to the infection. Motility disorders and enlargement of digestive organs (commonly esophagus and colon) are consequences of neuronal destruction caused by the persistence of T. cruzi. Since idiopathic megaesophagus is a rare condition in Brazil, Chagas disease is considered the main etiology of megaesophagus. Despite its high sensitivity, conventional serology may present false-positive results due to cross-reactivity to other trypanosomes. On the other hand, false-negative results have been described in patients from endemic areas with suggestive signs of chagasic infection. In order to clarify this controversial situation, alternative methods such as PCR (polymerase chain reaction) have been employed for...

Estudo da atividade biológica e da expressão do gene da prolactina linfocitária e avaliação do nível de prolactina sérica em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico / Study of biological activity and lymphocytic prolactin gene expression and evaluation of serum prolactin level in patients with systemic lupus erythematosus

INTRODUÇÃO: Estudos indicam uma prevalência de 20 a 30% de hiperprolactinemia discreta em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico (LES), sugerindo um possível papel da prolactina (PRL) na sua etiopatogenia. Como a expressão do gene da PRL é encontrada na maioria das células do sistema imunológico, onde atua como citocina, de forma parácrina e autócrina, a origem linfocitária desta PRL tem sido aventada. OBJETIVOS: estudar a expressão do gene da PRL linfocitária de pacientes com LES em atividade e inatividade de doença e de controles normais, e sua atividade biológica em bioensaios com células Nb2 e Ba/F-LLP; Determinar o nível sérico de PRL e a prevalência de macroprolactinemia numa população nossa com LES. MÉTODOS: grupo 1, composto de 73 pacientes (66 mulheres e 7 homens), sendo 28 pacientes com LES em atividade e 45 em inatividade de doença, onde foi avaliado o nível de PRL sérica e a prevalência da macroprolactinemia; grupo 2, derivado do grupo 1, com 30 pacientes: 18 com LES em atividade e 12 em inatividade e um grupo controle com 10 indivíduos normais, dos quais foram extraídos linfócitos do sangue periférico e colocados em cultura por 72 horas. Em seguida, o sobrenadante da cultura foi utilizado como amostra de PRL linfocitária em ensaios com células Nb2 (heterólogo) e Ba/F-LLP (homólogo) para avaliação da bioatividade. Os RNAs totais destes linfócitos foram extraídos e usados na RT-PCR em tempo real (método quantitativo), para comparar a expressão do gene da PRL em linfócitos de pacientes com LES em atividade e inatividade, utilizando pool de indivíduos normais como calibrador. RESULTADOS: hiperprolactinemia discreta foi encontrada em 21,9% (16 de 73 pacientes do grupo 1): 7 de 28 pacientes com LES em atividade (25%), e 9 de 45 em inatividade (20%). A presença de macroprolactinemia foi encontrada em 3 pacientes, todos com LES em inatividade. O nível de PRL sérica: grupo 1 (LES em atividade) teve mediana de 10,8 (4,9 38,9) ng/mL e o grupo 1...

INTRODUCTION: Studies point to a prevalence of 20-30% of discrete hyperprolactinemia in patients with systemic lupus erythematosus (SLE), suggesting a possible implication of prolactin (PRL) in the pathogenesis of this disorder. As the lymphocytic PRL gene expression is found in the majority of the immune cells, where it acts as citokine, by paracrine and autocrine regulation, the lymphocytic source of this PRL has been suggested. OBJECTIVES: 1) to study the lymphocytic PRL gene expression of patients with active and inactive SLE and normal controls, as well as its biological activity in bioassays using Nb2 (heterologous) and Ba/F-LLP cells (homologous); 2) To assess serum PRL level and the prevalence of macroprolactinemia in our population with SLE. METHODS: group 1, composed of 73 patients (66 women and 7 men), 28 patients with active and 45 with inactive SLE, where the serum PRL level and prevalence of macroprolactinemia were evaluated; group 2, a subset of group 1, with 30 patients: 18 with active and 12 with inactive SLE and 10 normal individuals as control group, from whom lymphocytes were extracted from peripheral blood and were set on culture for 72 hours. After that, the supernatant was taken as lymphocytic PRL samples in bioassays with Nb2 cells (heterologous) and Ba/FLLP (homologous) in order to assess its bioactivity. Total RNA from these lymphocytes was extracted and a comparison was made between lymphocytic PRL gene expression of patients with active and inactive SLE by real time RT-PCR, using normal pool as calibrator. RESULTS: mild hyperprolactinemia was found in 21.9% (16 of 73 patients of group 1), 7 of 28 patients in activity (25%), and 9 of 45 in inactivity (20%). Macroprolactinemia was found in 3 patients, all with inactive SLE. Regarding serum PRL levels group 1 (active SLE) had median of 10.8 (4.9 38.9) ng/mL and the group 1 (inactive SLE) median of 7.6 (1.9 49.6) ng/mL, without significant difference between the two sub-groups...

Avaliação do efeito do laser de Er: YAG no tratamento da doença periodontal crônica em humanos: análises clínica, imunológica e microbiológica / Effects of scaling and root planning with Er: YAG laser in chronic periodontitis: a controlled clinical, immune and microbiological human study

Introdução: O objetivo do presente estudo foi de comparar o efeito do laser de Er:YAG (100mJ/pulso, 10Hz, 12,9J/cm2), associado ou não, à raspagem e alisamento radicular (RAR), com a RAR sozinha no tratamento de pacientes com doença periodontal crônica, por meio de parâmetros clínicos, imunológico e microbiológico. Metodologia: Vinte e um pacientes apresentando 4 bolsas entre 5 e 9 mm, em sítios não vizinhos foram selecionados. Em um estudo de boca dividida, cada sítio foi randomizado e divididos nos grupos: 1)RARL - RAR e Laser; 2)L - Laser somente; 3)RAR - RAR somente e 4)C - sem tratamento algum. Os índices de placa (IP) e gengival (IG), sangramento à sondagem (SS), níveis de interleucina 1 Beta (IL-1β – pelo teste ELISA) e a presença de bactérias (Aa, Pg, Pi, Pn e Tf pela técnica PCR) foram avaliados no inicial 12, 30, 90 e 180 dias pós-tratamentos, enquanto profundidade de sondagem (PS), recessão gengival (RG) e nível de inserção (NI) foram avaliados antes, 30, 90 e 180 dias após os tratamentos. Análise estatística dos dados foi realizada (p<0,05) intra e inter grupos. Resultados: Doze dias após os tratamentos, IP reduziu para RARL e RAR (p<0,05); IG aumentou em L, RAR e C (p<0,05) e SS reduziu para RARL, L e RAR (p<0,05). Aos 30 dias, o IP reduziu RARL e RAR (p<0,05), o IG reduziu para RARL (p<0,05) e aumentou para C (p<0,05). Os grupos RARL, L e RAR apresentaram redução no SS e ainda, reduziram significantemente o SS quando comparados ao C (p<0,05). A PS reduziu para os grupos RARL, L e RAR (p<0,05), o NI aumentou para RAR (p<0,05) e RG aumentou para RARL e L (p<0,05). Após 90 dias, o IP reduziu para todos os grupos do estudo (p<0,05); o IG reduziu para o grupo RARL e RAR (p<0,05); o SS reduziu para todos os grupos do estudo (p<0,05). A PS reduziu para os grupos RARL, L e RAR (p<0,05), o NI aumentou para RARL, L e RAR (p<0,05) e RG aumentou para RARL e L (p<0,05).

Background: The Er:YAG laser has recently been used for periodontal therapy. This study compared Er:YAG laser irradiation (100 mJ/pulse, 10 Hz, 12.9 J/cm2) with or without conventional scaling and root planing (SRP), versus SRP only for treatment of periodontal pockets affected with chronic periodontitis. Methods: Twenty-one patients, with pockets from 5 to 9 mm in non-adjacent sites, were studied. In a split-mouth design, each site was randomly allocated to a treatment group: 1) SRPL - SRP and laser; 2) L - laser only; 3) SRP - only SRP; 4) C - no treatment. Plaque index (PI), gingival index (GI), bleeding on probing (BOP), and interleukin-1 levels in crevicular fluid (IL-1β) were evaluated at baseline, 12, 30, 90 and 180 postoperatively, while probing depth (PD), gingival recession (GR), and clinical attachment level (CAL) were evaluated at baseline, 30, 90 e 180 days after treatment. Statistical analysis was conducted (p<0.05) inter and intra groups. Results: Twelve days postoperatively, PI decreased for SRPL and SRP (p<0,05); GI increased for L, SRP and C (p<0,05) and BOP reduces for SRPL, L and SRP (p<0,05). Thirty days after treatments, PI decreased for SRPL and SRP (p<0,05), GI decreased for SRPL (p<0,05) and increased for C (p<0,05). BOP decreased for SRPL, L and SRP groups and data showed BOP reduction when compared the C (p<0,05). Values of PD decreased in SRPL, L and SRP groups (p<0,05), CAL gain showed an improvement for SRP (p<0,05) and GR increased for SRPL and L (p<0,05). Ninety days postoperatively, PI decreased for all treated groups (p<0,05); GI reduced for SRPL and SRP (p<0,05); BOP decreased for all treated groups (p<0,05). Data of PD showed a reduction for SRPL, L and SRP groups (p<0,05); CAL gain was significant for SRPL, L and SRP groups (p<0,05); GR values increased for SRPL and L groups (p<0,05).