Robustness of germination analysis methods for Copaifera langsdorffii Desf. (Fabaceae) seeds / Robustez de métodos para análise da germinação de sementes de Copaifera langsdorffii Desf. (Fabaceae)

Germination of Copaifera langsdorffii Desf. seeds is non-uniform and asynchronous and there is still no consensus on the factors affecting it. Thus, the goal was to measure the robustness of pre-germination methods used to determine germination rates of C. langsdorffii seeds of different levels of quality and to present criteria for seedling classification that culminate in the officialization of one of these methods. Pre-germination methods were tested and the scarification of seeds sterilized with 0.05% NaClO was the most efficient for maximizing germination potential. Seeds of different quality were then treated with this method and collaborative tests evaluated by Ministry of Agriculture laboratories. These evaluations were based on normal seedlings produced from each seed lot. Morphofunctional classification was used throughout to determine essential seedling structures. Robustness of the method was measured by variance and the coefficient of variation of repeatability and reproducibility. Scarification and sterilization with sodium hypochlorite made it possible to both estimate the germination potential of seeds of different quality levels and reduce seedling infection and seed mortality. To analyze germination based on seedling criteria, normal seedlings of this species were defined as having thick cotyledons that are detached from the seed coat, developed hypocotyls and epicotyls and primary roots. These seedlings have woody primary roots and thick, sometimes poorly developed hypocotyls. Even though C. langsdorffii is a forest species and subject to high variability, the proximity of the percentages of normal seedlings among repetitions (low repeatability) and low inter-laboratory reproducibility reflecting the uniformity generated by the method.

A germinação de sementes de Copaifera langsdorffii Desf. - Fabaceae é descrita na literatura como desuniforme, assíncrona e com alto grau de incerteza, permanecendo controversos os fatores que a afetam. Diante disso, os objetivos foram determinar, por princípios metrológicos, a robustez de métodos pré-germinativos para as sementes da espécie com qualidades distintas e apresentar os critérios para a classificação das plântulas que culminaram com a oficialização de um dos métodos. Na primeira etapa, métodos pré-germinativos literatura foram testados e a escarificação das sementes desinfestadas com NaClO a 0,05% foi o mais eficiente para determinar o potencial de germinação das sementes. Na segunda etapa, esse método aplicado a lotes com qualidades distintas foi submetido a avaliação colaborativa entre laboratórios credenciados pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento e avaliado com base nos percentuais de plântulas normais. Nas duas etapas, a classificação morfofuncional determinou as estruturas essenciais das plântulas da espécie no decorrer da análise de germinação. A robustez do método foi medida pela variância e coeficiente de variação de repetitividade e reprodutibilidade. A escarificação e desinfestação das sementes com hipoclorito de sódio permitem estimar o potencial de germinação das sementes de Copaifera langsdorffii com qualidades distintas, reduzindo a infecção das plântulas e a mortalidade das sementes. Na análise da germinação baseada no critério de plântulas, as plântulas normais da espécie devem apresentar cotilédones espessos e liberados do tegumento, hipocótilo e epicótilo desenvolvidos, além de raiz primária. São particularidades das plântulas da espécie, a raiz primária sublenhosa e o hipocótilo espesso, e pouco desenvolvido. Mesmo sendo Copaifera langsdorffii uma espécie florestal e sujeita à alta variabilidade, a proximidade dos percentuais de plântulas normais entre repetições, baixa repetitividade, e entre laboratórios, baixa reprodutibilidade, refletem a uniformidade gerada pelo método.

Evaluación de los parámetros de desempeño de un contador hematológico / Evaluation of performance parameters of an automated hematology analyzer / Avaliação dos parâmetros de desempenho de um analisador da hematologia

El primer paso para obtener seguridad en los resultados emitidos por el laboratorio clínico es confirmar que los procedimientos de medida utilizados tienen un desempeño analítico aceptable. Para conseguirlo se verificó el contador hematológico Beckman Coulter LH 750 de acuerdo con las especificaciones del fabricante y con los requisitos de calidad de este laboratorio. Los parámetros de desempeño evaluados, tanto en modo manual como automático, fueron: porcentaje de arrastre, según protocolo CLSI H26-A2, precisión en condiciones de repetibilidad, precisión en condiciones de precisión intermedia y veracidad, según protocolo CLSI EP15-A2 utilizando controles BIO-RAD, intervalo de medición, según protocolo CLSI EP6-A, límite de cuantificación, según protocolo CLSI EP17-A2 e intervalos de referencia, según protocolo CLSI EP28-A3C. Los datos se analizaron mediante LinChecker y GraphPad 5. En los ensayos realizados se cumplió con las especificaciones estipuladas por el fabricante, como así también con el requisito de calidad de este laboratorio que es variabilidad biológica mínima. También se verificaron los intervalos de referencia para individuos adultos. De esta manera, se logró realizar la verificación del contador hematológico, evidenciando que los parámetros analíticos evaluados tienen un desempeño aceptable.

The first step for safety in the results issued by the clinical laboratory is to confirm that all analytical measurement procedures have shown an acceptable analytical performance. A quality performance evaluation of automated hematology analyzer Beckman Coulter LH 750 was performed according to the quality requirements of our laboratory and manufacturer's specifications. The performance parameters evaluated by both manual and automatic mode were: carryover according to CLSI H26-A2 protocol; repeatability, intermediate precision and trueness according to CLSI EP15-A2 protocol and using BIO-RAD controls; linearity according to CLSI EP6-A protocol; quantification limits according to CLSI EP17-A2 protocol; and reference intervals according to CLSI EP28-A3C protocol. Data were analyzed using LinChecker and GraphPad5 programs. The tests performed complied with the requirements stipulated by the manufacturer and the quality requirements of our laboratory like minimal biological variability. Reference intervals for adult individuals were also checked. Consequently, performance evaluation of the automated hematology analyzer showed that the assessed laboratory parameters have acceptable performance.

O primeiro passo para obter segurança nos resultados emitidos pelo laboratório clínico é confirmar que os processos de medição utilizados tenham um desempenho analítico aceitável. Para obtê-los foi verificado o analisador hematológico Beckman Coulter LH 750 de acordo com as especificações do fabricante e os requisitos de qualidade deste laboratório. Os parâmetros de desempenho avaliados, tanto em modo manual quanto automático, foram: percentual de arrastamento, de acordo com o protocolo CLSI H26-A2, em condições de repetitibidade, precisão em condições de precisão intermediária e veracidade, conforme o protocolo CLSI EP15-A2 usando controles Bio-Rad, intervalo de medição segundo o protocolo CLSI EP6-A, limite de quantificação, de acordo com CLSI EP- 17-A2 e intervalos de referência, de acordo com o protocolo CLSI EP28-A3C. Os dados foram analisados através de LinChecker e GraphPad 5. Nos ensaios realizados foram obsevadas as especificações estabelecidas pelo fabricante, bem como a exigência de qualidade deste laboratório que é variabilidade biológica mínima. Os intervalos de referência para indivíduos adultos também foram verificados. Desta forma, foi possível realizar a verificação do analisador hematológico, que demonstra que os parâmetros analíticos avaliados têm um desempenho aceitável.