ABSTRACT
Introducción: El complejo enzimático emisor de luz de las bacterias luminiscentes es una poderosa herramienta bioquímica, con una amplia variedad de aplicaciones, incluyendo el control de la calidad ambiental. Objetivos: Identificar taxonómicamente dos bacterias luminiscentes de las aguas de la plataforma cubana, así como seleccionar los medios de cultivo que favorezcan su crecimiento y luminiscencia. Métodos: La identificación taxonómica de las bacterias luminiscentes se llevó a cabo utilizando métodos tradicionales y moleculares. Cuatro medios de cultivo (LM, Boss, Chalk, ZoBell) fueron evaluados en función de la tasa de crecimiento específico (μ) y la luminiscencia utilizando un espectrofotómetro Genesys 10UV y un espectro fluorómetro Shimadzu RF-5301pc, respectivamente. Resultados: La caracterización bioquímica y fisiológica de los aislamientos de CBM-976 y CBM-992 mostró similitudes con las especies de Vibrio harveyi. El análisis del posicionamiento taxonómico confirmó una alta correspondencia con las cepas de V. harveyi aisladas de entornos acuáticos, utilizando secuencias parciales de los genes 16S rRNA, gyrB y pyrH. Se seleccionaron los medios de cultivo LM y ZoBell por tener una alta tasa de crecimiento específico de las cepas CBM-976 y CBM-992; así como por mostrar altos valores de luminiscencia. Los resultados permitirán profundizar en la caracterización fisiológica y son el punto de partida para el desarrollo de métodos de detección de contaminantes. Conclusiones: La combinación de las características fisiológicas y bioquímicas, así como las técnicas de biología molecular contribuyeron a determinar la posición taxonómica de las cepas CBM-976 y CBM-992 aisladas de las aguas marinas cubanas como Vibrio harveyi. Además, se seleccionaron los medios de cultivo LM y ZoBell como los más adecuados para el crecimiento y la emisión de luminiscencia de ambas cepas.
Introduction: The light-emitting enzyme complex of luminescent bacteria is a powerful biochemical tool, with a wide variety of applications including environmental quality monitoring. Objectives: To identify taxonomically two luminescent bacteria from Cuban shelf waters, as well as select the culture media that favor their growth and luminescence. Methods: The taxonomic location of the luminescent bacteria was carried out using traditional and molecular methods. Four culture media (LM, Boss, Chalk, ZoBell) were evaluated as a function of specific growth rate (μ) and luminescence, using a Genesys 10UV spectrophotometer and a Shimadzu RF-5301pc spectrofluorometer, respectively. Results: Biochemical and physiological characterization of CBM-976 and CBM-992 isolates showed similarities with Vibrio harveyi species. Phylogenetic positioning analysis confirmed a high correspondence with V. harveyi strains isolated from aquatic environments, using partial sequences of 16S rRNA, gyrB and pyrH genes. LM and ZoBell culture media were selected for having a high specific growth rate of CBM-976 and CBM-992 strains, as well as for showing high luminescence values. The results will allow deepening the physiological characterization and are the starting point for the development of contaminant detection methods. Conclusions: The rational combination of physiological and biochemical characteristics, as well as the molecular approach, contributed to determine the taxonomic position of CBM-976 and CBM-992 strains isolated from Cuban marine waters as Vibrio harveyi. Furthermore, LM and ZoBell culture media were selected as the most suitable for growth and luminescence emission for both strains.
ABSTRACT
Bovine rotaviruses are one of the main agents involved in the presentation of Bovine Neonatal Diarrhea (BND), a disease that affects calves in the first month of life. Objective: The present study aimed to determine the types of bovine rotaviruses that affect dairy herds in the Sabana region of Bogotá, Colombia. Materials and methods: 132 fecal samples were obtained from calves of less than five weeks of age and subjected to an ELISA test. MA104 cell cultures were infected with positive samples in order to isolate rotaviruses. The presence of the viral genome was confirmed by amplification and sequencing of a region of the viral VP7 protein-encoding gene. Results: Of the 132 samples, 26 (19, 7%) were ELISA-positive and nine samples were used for viral isolation. PCR amplification was achieved in all infected cultures. Sequencing showed homology of five samples to the G6 genotype. In addition, the presence of the G10 genotype was first determined for the country. Discussion: A greater presence of the G6 genotype from lineage V was found in the Sabana region of Bogota, showing a high prevalence in cattle and association with the presence of BND. The presence of the G10 genotype is a new report for the country and constitutes a new element of investigation in these viruses.
Los rotavirus bovinos son unos de los principales agentes involucrados en la presentación del síndrome de Diarrea Neonatal Bovina (DNB), una enfermedad que afecta terneros en el primer mes de vida. Objetivo: El presente estudio buscó determinar los tipos de rotavirus que afectan los hatos ganaderos de leche en la región de la Sabana de Bogotá, Colombia. Materiales y métodos: Se evaluaron a través de una prueba de ELISA, 132 muestras de materia fecal provenientes de terneros de menos de cinco semanas de edad. Con las muestras positivas, se infectaron células MA 104 con el fin hacer aislamiento. La presencia del genoma viral se verificó por amplificación de una región del gen que codifica para la proteína viral VP-7 y luego se secuenció. Resultados: De las 132 muestras evaluadas, 26 (19,7%) fueron positivas por ELISA. De estas, 9 muestras se emplearon para aislamiento viral. La amplificación de genoma viral por PCR se obtuvo en todos los cultivos infectados. La secuenciación evidenció una homología de 5 muestras con el genotipo G6 y la presencia del genotipo G10, que se encontró por primera vez en el país. Discusión: En la Sabana de Bogotá se encontró una mayor presencia del genotipo G6, linaje V, que tiene alta prevalencia en bovinos y está asociado mayoritariamente con la presencia de DNB. La presencia del genotipo G10 constituye un elemento nuevo de investigación en estos virus.