Human cornea conservation in coconut water solution / Conservação de córneas humanas em solução de água de coco

ABSTRACT Purpose: The aim of this study was to evaluate the physical and chemical characteristics of coconut water and to analyze the use of coconut water solution for the conservation of human corneas. Methods: This was an experimental and controlled study performed at the Eye Bank of the General Hospital of Fortaleza. The coconut water-based solution was prepared at the Goat Seed Technology Laboratory of the Department of Veterinary Medicine of the State University of Ceará. Discarded corneas from the Eye Bank were divided into two groups for sequential experiments: G1, coconut water-based solution (experimental group), and G2, conservative treatment with OPTISOL GS® (control group). The osmolality of corneas in G1 was analyzed sequentially at 275, 300, 325, 345, 365, and 400 mOsm/L. The viability of the corneas was determined by specular microscopy and biomicroscopy on the first, third, and seventh days. Results: Corneas preserved in a solution of 365 and 345 mOsm/L had a transparency of 8 mm until the third day and had diffuse edema in the periphery, central folds, and partial epithelium loss until the seventh day. The 365-mOsm/L solution was associated with the worst results during follow-up. Corneas placed in Optisol-GS retained their original aspects. Conclusions: Coconut water-based preservative partially maintained corneal transparency and epithelial integrity, especially during the first three days of follow-up. The coconut water-based solutions used were not effective for use as preservatives in a human eye bank.(AU)

RESUMO Objetivos: As características físico-químicas e o baixo custo da água de coco foram fundamentais para o este estudo. Analisar o uso de solução a base de água de coco como meio de conservação de córneas humanas em banco de olhos. Métodos: Estudo experimental e controlado realizado no Banco de Olhos do Hospital Geral de Fortaleza. Utilizou-se solução à base de água de coco preparada no laboratório de Tecnologia de Sêmen de Caprinos do Departamento de Medicina Veterinária da Universidade Estadual do Ceará. Foram usadas córneas de descartes divididas em dois grupos: G1 (Conservante com água de coco) - grupo experimental e G2 (grupo Conservante com OPTISOL GS®) grupo controle, em experimentos sequenciais. A osmolaridade do G1 foi analisada sequencialmente com 275, 300, 325, 345, 365 e 400 mOsm/L. A viabilidade das córneas foram realizadas por microscopia especular e biomicroscopia nos 1º, 3º e 7º dias. Resultados: As córneas em solução de 365 e 345 mOsm/L apresentavam transparência nos 8mm centrais até o 3º dia, com edema em toda periferia, dobras centrais e edema 2+, com perda parcial do epitélio até 7º dia, sendo o de maior osmolaridade com melhor transparência durante o seguimento. Grupo com 275, 300 e 400 mOsm/L, córnea opaca, edema difuso, perda total do epitélio no 3º dia. As córneas em Optisol mantiveram seus aspectos. Conclusões: O conservante à base de água de coco manteve em parte a transparência corneana e a integridade epitelial, especialmente nos primeiros 3 dias de seguimento. A solução conservante com água de coco nas formulações utilizadas não se mostrou eficaz para o uso em banco de olhos humanos.(AU)

Imersão do pâncreas por 24 horas em solução de colagenase a 4ºC no isolamento de ilhotas de Langerhans / Immersion of pancreas for 24 hours in collagenase solution at 4ºC in Langerhans islets isolation

Objetivos: testar se a imersão do pâncreas em solução de 1 ou 2 mg/ml de colagenase em 4ºC por 24 horas, no isolamento experimental de ilhotas de Langerhans, aumenta o rendimento de ilhotas por grama de tecido pancreático. Métodos: estudo experimental com camundongos, realizado no Laboratório de Nefrologia do Instituto de Pesquisas Biológicas do Hospital São Lucas da PUCRS, Porto Alegre, RS. Após sacrifício dos animais sob anestesia, os pâncreas foram retirados e triturados, sendo divididos em quatro grupos, conforme a técnica utilizada para isolar as ilhotas. A) colagenase 1mg/mL, a 4ºC por 24 horas e posterior aquecimento a 39ºC por 15 minutos. B) colagenase 2mg/mL com as mesmas etapas anteriores. C) colagenase 1mg/mL com aquecimento da solução no mesmo dia da retirada, a 39ºC por 15 minutos. D) colagenase 2mg/mL com aquecimento da solução no mesmo dia da retirada, a 39ºC por 15 minutos. Verificamos a viabilidade das ilhotas através do teste do azul tripano. Resultados: as medianas da quantidade de ilhotas isoladas nos grupos A, B, C e D foram 9.142, 8.285, 2.813 e 3.199 respectivamente. O teste de Kruskal- Wallis demonstrou diferença significativa, com valor de H = 17,44 com a = 0,01 e, na comparação dos grupos entre si, demonstrou que não há diferença entre as soluções de colagenase com concentrações de 1 e 2 mg/dL. Os grupos com a imersão do tecido pancreático em solução de colagenase por 24 horas obtiveram três vezes mais ilhotas, quando comparados aos submetidos à digestão imediata, conforme teste de Dunn com a<0,05. O teste do azul tripano demonstrou uma vitalidade maior que 95% em todos os grupos. Conclusões: sugere-se que a imersão em colagenase por tempo mais prolongado melhora o processo de digestão do tecido pancreático, aumentando o rendimento de ilhotas isoladas por grama de tecido pancreático. A diferença de concentração entre as soluções de colagenase não afetou o resultado.

Aims: To test whether the immersion of the pancreas in solutions of 1 or 2 mg/mL of collagenase in 4°C for 24 hours, for the isolation of Langerhans islets, rises the yield of islets/ grams of pancreatic tissue. Methods: Experimental study with mouses, performed in the Laboratory of Nephrology of the Instituto de Pesquisas Biológicas do Hospital São Lucas da PUCRS, Porto Alegre, RS. After the animals have been sacrified under anesthesia, the pancreas were removed and divided in four groups, according the technique used for isolating the islets. A) collagenase 1mg/mL, in 4ºC for 24 hours and heating for 39ºC for 15 minutes. B) collagenase 2mg/mL with the same previous described steps. C) collagenase 1mg/ mL and heating of the solution in the same day, in 39ºC for 15 minutes. D) collagenase 2mg/mL and heating of the solution in the same day, in 39ºC for 15 minutes. We verified the viability of the islet through the trypan blue test. Results: The median numbers of isolated islets in the groups A, B, C and D were 9142, 8285, 2813 e 3199, respectively. Kruskal-Wallis test showed significant difference, with the value of H = 17,44 with a = 0,01, and in the comparison between the groups, there was o difference in the solutions of collagenase with concentrations of 1 and 2 mg/dL. Groups with immersion of pancreatic tissue in collagenase solution for 24 hours had three times more islets when compared to groups submitted to immediate digestion, according to Dunn test with a <0,05. The trypan blue test showed viability higher than 95% in all groups. Conclusions: We suggest that the immersion in solution of collagenase for longer time improves the process of digestion of pancreatic tissue, rising the yield of islets/ grams of pancreatic tissue. Different concentration between the collagenase solutions did not affect the final result.