Diagnóstico laboratorial da COVID-19 no Brasil / The laboratory diagnosis of COVID-19 in Brazil

Apesar da grande emergência desta pandemia causada pelo vírus SARS-CoV-2 em nosso país e no mundo, várias opções de metodologias diagnósticas têm sido criadas para nos auxiliar na detecção desse agente, contribuindo para evitar a sua disseminação, detectar quem já teve a doença e, em alguns casos, favorecer o tratamento precoce. O diagnóstico sorológico da COVID-19 disponível atualmente detecta a presença de anticorpos, IgA, IgM e IgG, que são proteínas específicas produzidas em resposta a infecções, mostrando então uma resposta imunológica do indivíduo ao vírus. Ressalta-se que o diagnóstico final da Covid-19 deve ser estabelecido pela combinação de vários exames com as informações clínico-epidemiológicas. Os resultados destes testes são importantes também para detectar infecções em pessoas que apresentaram poucos ou nenhum sintoma, e apesar da possibilidade de resultados falsos, seu custo-benefício é bastante positivo frente ao padrão-ouro de diagnóstico que é o RT-PCR, de elevado custo, já que, por ser mais acessível, a sorologia proporciona também uma ideia da epidemiologia global da doença quando ocorre testagem em massa.

Despite the great emergence of this pandemic caused by the SARSCoV-2 virus in our country and in the world, several options of diagnostic methodologies have been created to assist us in the detection of this agent, helping to prevent spread, detect who has had the disease and, in some cases, help to start early treatment. The serological diagnosis of Covid-19 currently available, detects the presence of antibodies, IgA, IgM and IgG, which are specific proteins produced in response to infections, thus showing an immune response to the virus. We emphasize that the definitive diagnosis of Covid-19 must be established by combining several tests with clinicalepidemiological information. The results of these tests are also important for detecting infections in people who had few or no symptoms, and despite the possibility of false results, its cost-benefit is quite interesting compared to the gold standard of diagnosis which is the high-cost, RT-PCR, since being more accessible, serology also provides an estimate of the global epidemiology of the disease, when mass testing occurs.

Revisão sistemática dos métodos sorológicos utilizados em gestantes nos programas de triagem diagnóstica pré-natal da toxoplasmose / Systematic review of serological methods used in prenatal screening of toxoplasmosis in pregnant women

Informações sobre a melhor estratégia para triagem sorológica da toxoplasmose em gestantes são escassas e poucos estudos mencionam o uso de amostras de sangue capilar. Realizou-se uma revisão sistemática para pesquisar os métodos sorológicos empregados em programas de triagem pré-natal da toxoplasmose no mundo e as características principais destes programas, com busca nas bases de dados PUBMED e LILACS. Foram selecionados artigos referentes a programas de triagem sorológica pré-natal da toxoplasmose que descrevessem a amostra (sangue capilar ou soro) e o teste sorológico utilizado. Foram encontrados 1554 trabalhos no PUBMED e 242 na LILACS, sendo 58 em duplicata. Foram analisados 47 artigos finais. Os testes sorológicos de triagem citados com maior frequência foram os imunoenzimáticos para detecção de IgG (19 ou 40,4%) e IgM (18 ou 38,3%) e, entre os testes confirmatórios, o mais utilizado foi o teste de avidez de IgG (14 ou 29,8%). Todos os estudos analisados utilizaram amostras de soro para a triagem pré-natal da toxoplasmose.

The best strategy for toxoplasmosis serological screening in pregnant women is not completely defined and few studies mention the use of capillary blood samples. A systematic review of the literature was conducted to investigate the serological methods used in prenatal screening programs of toxoplasmosis in the world and the main features of these programs, with search in PubMed and LILACS databases. We selected articles that described their serological prenatal screening programs, with mention of the sample (capillary blood or serum) and of the serological tests used. We found 1554 articles in PubMed database and 242 articles in LILACS, with 58 duplicates. 47 final articles were analyzed. The serological screening tests most frequently cited were immunoassays for the detection of IgG (19, 40.4%) and IgM (18, 38.3%) and between confirmatory tests, the most used was IgG avidity test (14, 29.8%). All analyzed studies used serum samples for toxoplasmosis prenatal screening. There is need for studies assessing and testing different samples in longitudinal studies.

Desenvolvimento e padronização do Dot-ELISA usando peptídeos recombinantes para o diagnóstico sorológico de Neospora caninum / Development and standardization of Dot-ELISA using recombinant peptides for serological diagnosis of Neospora caninum

A neosporose é reconhecida como uma das maiores causas de aborto e perdas neonatais em bovinos de leite e corte em todo o mundo. Nos últimos anos esta doença tem atraído o interesse de pesquisadores com foco na epidemiologia e métodos eficazes de diagnóstico desta doença. No presente estudo objetivou-se desenvolver e padronizar um teste Dot-ELISA para o diagnóstico sorológico de Neospora caninum com um peptídeo recombinate como antígeno, visando o desenvolvimento de um kit para diagnóstico a campo. O peptídeo recombinante (rNcGRA1) foi desenhado com base na metodologia de genética reversa de epítopos antigênicos originados de uma proteína de grânulos densos de N. caninum, e sintetizado pela GenScript (USA). Produzido mediante o processo fermentativo em leveduras Pichia pastoris KM71. Para a padronização do Dot-ELISA, membranas de nitrocelulose de 0.22µm foram sensibilizadas com 1µL do antígeno e posteriormente os soros foram diluídos em solução de lavagem e incubados durante 1 hora. A revelação foi feita mediante a adição de Proteína G marcada com peroxidase por 30 minutos, seguido da solução reveladora a base de 3,3’-Diaminobenzidine (DAB). Logo após a padronização foram testados 44 soros bovinos diagnosticados por imunofluorescência indireta (RIFI), obtendo-se uma concordância nos resultados do teste de 95,5% e uma sensibilidade e especificidade de 100% e 92% respectivamente. Quanto ao Kit para diagnóstico a campo na Plataforma Tecnológica RapidFlow-Through Miriad®, o peptídeo rNcGRA1 apresentou marcações visíveis ao reagir com os soros positivos, e não apresentou marcações usando os soros negativos. Este estudo é o primeiro a utilizar peptídeos recombinantes e mostrar-se eficiente para o diagnóstico sorológico de bovinos naturalmente infetados por N. caninum...

Neosporosis is recognized as a major cause of abortion and neonatal loss in cattle worldwide, both for dairy cattle and beef cattle. In recent years this disease has attracted the interest of researchers and studying the epidemiology and effective methods of diagnosis of this disease. The present study aimed to develop and standardize on a Dot-ELISA for the serological diagnosis of Neospora caninum by using recombinant peptide as antigen for the development of a diagnostic kit used on the field. The recombinant antigen (rNcGRA1) was designed based on the method of reverse genetics derived antigenic epitopes of dense granules protein of N. caninum and synthesized by GenScript (USA). It was produced by the fermentation in yeasts Pichiapastoris KM71. The serological technique was used for the Dot-ELISA detection of IgG specific for N. caninum in which 0.22μm nitrocellulose membranes were sensitized with 1μL of antigen and subsequently the plasmas were diluted in a washing solution and incubated for 1 hour. The results will revealed by the addition of Protein G labeled with peroxidasse for 30 minutes, followed by the developing solution based on 3,3’-Diaminobenzidine (DAB). Soon after standardization tested 44 bovine plasmas were diagnosed by indirect immunofluorescence assay (IFA), agreeing with the results on a 95.5% and a sensitivity and specificity of 100% and 92% respectively. In regard to the diagnostic kit for the Technology Platform Rapid Flow-Through Miriad®, the peptide presented rNcGRA1 visible markings to react with positive plasma, and showed no markings using the negative plasma. This study is the first to use recombinant peptides and prove to be efficient for the serological diagnosis of cattle naturally infected...

Soroprevalência da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) canina e fauna de Flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) em Bela Vista do Paraíso, Paraná / Seroprevalence of Cutaneous Leishmaniasis (LC) in dogs and identification of vectors (Diptera: Psychodidae) in Bela Vista do Paraíso, Parana state

O trabalho teve como objetivo determinar a soroprevalência da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) canina no município de Bela Vista do Paraíso, Paraná, comparar as técnicas de imunofluorescência indireta (IFI) e ensaio imunoenzimático (ELISA) e identificar as espécies de flebotomíneos presentes, possivelmente envolvidas no ciclo do parasito. Amostras de sangue de 489 cães foram submetidas à pesquisa de anticorpos anti-Leishmania sp. pela IFI e ELISA. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram título ≥ 40 na IFI e densidade ótica ≥ 0.174 no ELISA. Entre as amostras analisadas, 222 (45,4%) foram reagentes pela IFI e 189 (38,7%) pelo ELISA. Comparando-se os testes foram encontradas 176 amostras positivas (36,0%) e 254 negativas (51,9%) para ambas as técnicas. A sensibilidade do ELISA foi de 79,3% e a especificidade foi de 95,1%. O coeficiente global do teste foi de 87,0% com coeficiente Kappa de 0,75. A análise das variáveis para cães com sorologia positiva pela IFI demonstrou diferença significativa em relação à ausência de matas e ausência de convívio com outras espécies animais. Em cães sororeagentes pelo ELISA as variáveis que apresentaram diferença significativa foram o tipo de mata ciliar existente no ambiente, a ausência de lixo, o esgoto a céu aberto e lançado diretamente em rios ou córregos e do lixo lançado em terreno baldio, queimado ou enterrado. O resultado obtido com a captura dos flebotomíneos foi a predominância do Lutzomyia whitmani com 79,9% das espécies coletadas. Os resultados demonstraram que a LTA está amplamente disseminada na população canina do município de Bela Vista do Paraíso, e que tanto a IFI como o ELISA podem ser utilizados para o diagnóstico. Deste modo o cão apresenta-se como um elo entre o ciclo silvestre e o peridomiciliar da LTA, podendo tornar-se um sinalizador do agente no ecossistema da doença nesse ecossistema.

The aim of this study was to determine the seroprevalence of Cutaneous Leishmaniasis (CL) in dogs of Bela Vista do Paraiso, Parana state, compare the IFA and ELISA techniques and identify the vectors possibly involved in the cycle of the parasite. Were collected blood samples from 489 dogs that were subjected to detection of anti-Leishmania sp. by IFA and by ELISA. Were considered positive samples ≥40 titers in IFA and for ELISA ≥ 0.174 optical density. Among the samples analyzed, 222 (45.4%) were positive by IFA and 189 (38.7%) by ELISA. Comparing the tests were found 176 positive samples (36.0%) and 254 negative (51.9%) for both techniques. The sensitivity of ELISA was 79.3% and specificity was 95.1%. The global coefficient of the test was 87.0% with kappa coefficient of 0.75. Analysis of variables for dogs with positive serology by IFA showed significant differences regarding the absence of forests and lack of contact with other animal species. Positive sera by ELISA in dogs variables that showed significant differences were the type of riparian vegetation existing in the environment, the lack of garbage, open sewers and released directly into rivers or streams and garbage thrown on wasteland, burned or buried. The result obtained with the capture of sandflies was the predominance of Lutzomyia whitmani with 79.9% of the species collected. The result obtained with the capture of sandflies was the predominance of Lutzomyia whitmani with 79.9% of the species collected. The results showed that the LTA is widespread in the canine population of Bela Vista do Paraiso, and both the IFI and ELISA can be used for diagnosis. So the dog appears as a link between wild and peridomestic cycle of CL may become an amplifier of disease in this ecosystem.

Comparação da coleta das amostras de sangue na triagem pré-natal, utilizando o papel de filtro e punção venosa na técnica de ELISA para detecção de HIV 1+2 / Comparison of the collection of blood samples in prenatal screening, using the filter paper and venipuncture technique ELISA for the detection of HIV 1+2

Apesar de o papel de filtro (PF) ter sido introduzido desde o século passado, (1963) por Guthrie e Susi, nas triagens neonatais, como alternativa para a coleta da amostra do sangue, seus benefícios na aplicação da prática médica laboratorial não foram aproveitados com eficiência nestes anos, comexceção dos recentes resultados obtidos nos trabalhos para a triagem pré-natal. O diagnóstico precoce do HIV em mulheres grávidas é de fundamental importância, sendo o aporte mais destacado para neutralizar a transmissão vertical (TV) do HIV-aids, pois ao ser detectada a presença de anticorpos anti--HIV, aplica-se o Protocolo ACTG 076 (Pediatric AIDS Clinical Trials Group Study Group), que é o tratamento das gestantes HIV-positivo no pré, intra e pós-parto. Objetivo: comparar a coleta das amostras de sangue no papel de filtro (PF) e no plasma (padrão-ouro) na triagem pré-natal, utilizando anticorposanti-HIV 1+2 no procedimento imunoquímico ELISA (Imunoscreen HIV 1+2 SS), da firma Mbiolog. Métodos: foram estudadas 1.142 grávidas de quatromunicípios do Estado do Rio de Janeiro: Itaboraí (N = 131), Itaguaí (N = 597), Niterói (N = 377) e São João de Meriti (N = 37), a partir do mês de novembro de 2008 até fevereiro de 2009. As grávidas foram submetidas a punção digital e venosa para a rotina da triagem pré-natal, sendo a primeira aplicada em PF. Foram calculados os limites de especificidade, sensibilidade, e valores preditivos positivos e negativos para o estudo. Resultados: os resultados da absorbância (homogeneização das variâncias) encontrados para as amostras não reativas e reativas, em ambas as técnicas, não mostraram diferenças significativas (P > 0,05) quando aplicado o teste T de Student no estudo de repetitividade. Os estudos de reprodutibilidade em ambas as técnicas não resultaram coeficientes de variação superiores a 10%. Conclusão: os resultados da sorologia para HIV no sangue seco coletado em PF foram semelhantes aos da coleta por punção venosa, validando esta técnica.

Although the filter paper (FP) have been introduced since the last century (1963) by Guthrie and Susi, in neonatal screening as an alternative to blood sample collection, its benefits in the application of medical laboratory practice not were used effectively in recent years, with the exception of the recent results obtained in the works for the prenatal screening. Early diagnosis of HIV in pregnant women is of paramount importance, being the most out standing support to counteract the vertical transmission (VT) of HIV-AIDS, because the determination of the presence of HIV antibodies, it applies to the ACTG 076 Protocol (Pediatric AIDS Clinical Trials Group Study Group), which is the treatment of pregnant HIV-positive in the pre-,intra and post-parto.Objetive: compare the collection of blood samples on filter paper (FP) and plasma (standard gold) in prenatal screening, using antibodies against HIV 1+2 ELISA immunochemical procedure (Imunoscreen HIV 1 +2 SS), the firm Mbiolog. Methods: we studied 1,142 pregnant women in four counties of the State of Rio de Janeiro: Itaboraí (N = 131), Itaguaí (N = 597), Niterói (N = 377) and St. John Meriti (N = 37), from November 2008 until February 2009.The pregnant women underwent fingerstick and venous for routine prenatal screening, the first being applied in PF. We calculated the limits of sensitivity,specificity and positive predictive value and negative for the study. Results: the results of absorbance (homogeneity of variances) for the samples foundnon-reactive and reactive in both techniques, showed no significant differences (P > 0.05) when using the Student's T test in the study of repeatability.Reproducibility studies for both techniques did not result in coefficients of variation above 10%. Conclusion: the results of serological tests for HIV in driedblood collected in PF were similar to the collection by venipuncture, validating this technique.

Comparação da coleta das amostras de sangue na triagem pré-natal, utilizando o papel de filtro e punção venosana técnica de ELISA para detecção de sífilis / Comparison of the collection of blood samples in prenatal screening, using the filter paperand venipuncture technique ELISA for the detection of syphilis

A sífilis é uma doença infecciosa sistêmica, de evolução crônica e causada pelo Treponema pallidum, um espiroqueta de transmissão sexuale vertical, que pode produzir, respectivamente, as formas adquirida e congênita da doença. No Brasil, segundo o Ministério da Saúde (MS), embora a subnotificação de casos de sífilis seja alta, alguns dados disponíveis indicam a elevada magnitude deste problema infeccioso. Objetivo: comparar a coletadas amostras de sangue no papel de filtro (PF) e no plasma (padrão-ouro) na triagem pré-natal, utilizando anticorpos antitreponêmicos totais (IgG + IgM) no procedimento imunoquímico ELISA, registrado pelo Imunoscreen, da firma MBiolog. Métodos: foram estudadas 1.142 grávidas de quatro municípiosdo Estado de Rio de Janeiro: Itaboraí (N = 131), Itaguaí (N = 597), Niterói (N = 377) e São João de Meriti (N = 37) a partir do mês de novembro de 2008 até fevereiro de 2009. As grávidas foram submetidas a punção venosa e digital para a rotina da triagem pré-natal, sendo a última aplicada em PF. Foram calculados os limites de especificidade, sensibilidade e valores preditivos positivo e negativo para o estudo. Resultados: os resultados da sorologia parasífilis nas amostras do município de Itaboraí apresentaram ELISA positivo em 4,58%, os municípios de Itaguaí, Niterói e São João de Meriti mostraram positividade em 3,18%, 2,65% e 0%, respectivamente. Os procedimentos realizados tiveram uma sensibilidade e especificidade de 100% e os critérios preditivos positivos e negativos para todas as grávidas, estudados nas 1.142 amostras, foram de 100%. Conclusão: os resultados da sorologia para sífilis no sangue seco coletado em PF foram semelhantes aos da coleta por punção venosa, validando esta técnica.

Syphilis is a systemic disease of chronic evolution and caused by Treponema pallidum, a spirochete of sexual and vertical transmission,which can produce, respectively, the form of acquired and congenital disease. In Brazil, according to the Ministry of Health (MoH), although the underreporting of cases of congenital syphilis is high, some available data indicate the high magnitude of this problem that especially affects the weakness of pregnant women. Congenital syphilis causes great social impact, which results in deterioration of quality of life on a important stratum of the population,and indirect costs to the economy of the country, which, added to the direct costs resulting from hospitalizations and procedures for the treatment of its complications, increasing the total costs of care of public health. Objective: to compare the collection of blood samples on filter paper (FP) and plasma(gold standard) in prenatal screening, using anti-treponema total (IgG + IgM) in ELISA immunochemical. Methods: we studied 1,142 pregnant of the following cities: Itaboraí (N = 131), Itaguaí (N = 597), Niterói (N = 377) and St. João de Meriti (N = 37). Blood samples were collected from the finger and venipuncture of pregnant women in stations of collection of these counties, calculating elapsed time from sample collection to delivery of the report to thecouncil. We calculated the limits of sensitivity, specificity, positive predictive value and negative for the study. Results: Itaboraí showed positive ELISA in4.58%, in Itaguai, Niterói and St. João de Meriti showed, respectively, 3.18%, 2.65% and 0%. The procedures performed had a sensitivity and specificity of 100%, and the positive and negative predictive criteria for all pregnant women studied in 1,142 samples were 100%. All positive cases were reported to the Municipality within 10 days of sample collection. Conclusion: we conclude that the implementation of collection of dried blood on filter paper in pregnantwomen screening, was similar to that collected by venipuncture, validating this technology.

Detection of antibodies against Babesia bovis and Babesia bigemina in calves from the region of Araguaína, State of Tocantins, Brazil / Detecção de anticorpos anti-Babesia bovis e anti-Babesia bigemina em bezerros na região de Araguaína, Estado do Tocantins, Brasil

The aim of this study was to determine the seroprevalence of antibodies against B. bovis and B. bigemina in calves from the region of Araguaína, State of Tocantins, Brazil. In this research we used sera obtained from 506 calves, from both genders and of 8 to 24 months old, to detect antibodies by indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA-test). Statistical analysis of the data was performed using the Chi-square (χ2) test with Yates correction. The seroprevalence obtained was 90.5 and 91.7 percent for B. bigemina and B. bovis, respectively, characterizing the region as an area of enzootic stability for the species analyzed. The seroprevalence to B. bovis showed higher positivity among calves 19-24 months old.

O objetivo desse estudo foi determinar a soroprevalência de anticorpos anti-B. bovis e anti-B. bigemina em bezerros da região de Araguaína, Estado do Tocantins, Brasil. Nesta pesquisa foram coletadas 506 amostras de soros de bezerros com faixa etária entre 8 e 24 meses, fêmeas e machos, as quais foram processadas pelo ensaio imunoenzimático indireto (ELISA-teste). Como análise estatística utilizou-se o Qui-Quadrado (χ2) com correção de Yates. As prevalências obtidas em bezerros foram de 90,5 e 91,7 por cento para B. bigemina e B. bovis, respectivamente, caracterizando esta região como de estabilidade enzoótica para as espécies analisadas. A soroprevalência para B. bovis apresentou maior positividade entre os bezerros com faixa etária de 19-24 meses.

Levantamento da incidência de Leifsonia xyli subsp. xyli em plantios de cana-de-açúcar do noroeste do Paraná / Survey of Leifsonia xyli subsp. xyli incidence in sugarcane plantations of the northwest region of Paraná State

O raquitismo-da-soqueira, causado por Leifsonia xyli subsp. xyli é considerado uma das mais importantes doenças bacterianas da cana-de-açúcar (Saccharum spp.). Para verificar a possível ocorrência de Leifsonia xyli subsp. xyli na região noroeste do Paraná, foi realizado um levantamento em 32 áreas de plantio de duas usinas, utilizando-se o método sorológico "Dot blot" e um protocolo baseado na reação em cadeia da polimerase. As amostras foram coletadas em áreas cultivadas com 8 variedades e 2 clones, a partir de plantas em diferentes épocas de corte, perfazendo um total de 1395 amostras. Constatou-se a presença da bactéria no fluído fibrovascular de plantas da variedade SP77-5181 coletado em uma das propriedades, com índice de incidência de 23 por cento. Esses resultados indicam a incidência de Leifsonia xyli subsp. xyli no noroeste do Paraná.

Ratoon stunting disease caused by Leifsonia xyli subsp. xyli is one of the most important bacterial diseases of sugarcane (Saccharum spp.). A ratoon stunting desease survey was carried in 32 sugarcane producing areas from two mills in the northwest region of Paraná State through a dot blot serological protocol and a polymerase chain reaction-based assay. A total of 1395 samples were collected in areas planted with 8 varieties and 2 sugarcane clones collected from plants at different harvest periods. The bacterium was detected in the fibrovascular fluid of the SP77-5181 variety from a producing area in a 23 percent rate of incidence. These data indicated that Leifsonia xyli subsp. xyli is present in the northwest region of Paraná.

Brucelose canina: relato de caso / Canine brucellosis: a case report

Relata-se a ocorrência de casos de brucelose em animais de um canil da cidade de Uruguaiana, Rio Grande do Sul. Devido a registros de aborto nesta criação, suspeitou-se desta enfermidade. O isolamento da Brucella canis foi realizado através da cultura de materiais obtidos dos fetos abortados, placenta e neonatos. O teste sorológico de imunodifusão em gel de ágar demonstrou que 72,7% (8/11) dos animais deste canil haviam se infectado com esta bactéria. Neste relato são descritos e discutidos os dados clínicos e sorológicos, assim como o isolamento da Brucella canis.

The ocurrence of canine brucellosis is described in a kennel from Uruguaiana city. Due to abortion registered at the kennel the suspected disease was brucellosis. The isolation of Bucella canis was realized by culturing the material collected from aborted fetuses, placenta and neonatos. The agar gel immunodiffusion test was used for sorological evaluation and showed that 72.7% (8/11) of the dogs were infected wifh the bactéria. The authors describe also the clinical signs, serological findings and also the isolation of the Brucella canis.