Molecular analysis and dimorphism of azole-susceptible and resistant Candida albicans isolates / Análise molecular e dimorfismo de isolados de Candida albicans suscetíveis e resistentes aos azólicos

INTRODUCTION: Candida albicans is responsible for superficial or systemic infections known as candidiasis, which may be found in infected tissue as unicellular budding yeasts, hyphae, or pseudohyphae. In this study, the effects of both fluconazole and itraconazole antifungal agents on the hyphal formation and genotypic characterization of C. albicans isolates classified as either susceptible or resistant were investigated. METHODS: The hyphal production of five C. albicans isolates under the action of antifungal agents was investigated by culturing yeast on growth medium and on hyphal induction medium. The genotypic characterization was carried out for 13 isolates of C. albicans using the random amplified polymorphic DNA-polymerase chain reaction (RAPD-PCR) method. RESULTS: The dimorphism analysis showed that the hyphal formation was higher in resistant than in the susceptible isolates to both azoles. The RAPD-PCR method identified the formation of two different groups. In group A, four resistant and two susceptible isolates were clustered, and in group B, one resistant and six susceptible isolates were clustered. CONCLUSIONS: Considering that hyphal formation was higher in resistant isolates in the presence of azole drugs, we confirmed that the hyphal production is closely related to susceptibility to azoles. These drugs may affect the morphogenesis of C. albicans depending on their susceptibility to these drugs. In relation to RAPD-PCR, most resistant isolates classified in group A and susceptible isolates in group B demonstrated that this method presented a similar standard between the two groups, suggesting that by this technique, a strong correlation between genotypes and fluconazole-resistant samples may be found.

INTRODUÇÃO: Candida albicans é responsável por infecções superficiais ou sistêmicas conhecidas como candidíase, encontrada em tecidos infectados na forma de leveduras brotantes unicelulares, hifas ou pseudohifas. Neste estudo, os efeitos de agentes antifúngicos como o fluconazol e o itraconazol sobre a formação de hifas e caracterização genotípica de isolados de C. albicans suscetíveis ou resistentes foram investigados. MÉTODOS: A produção de hifas de cinco isolados de C. albicans, sob a ação de antifúngicos foi investigada pelo cultivo da levedura em meios de crescimento e de indução de hifas. A caracterização genotípica foi realizada para 13 isolados de C. albicans pelo método de RAPD-PCR. RESULTADOS: A análise do dimorfismo mostrou que a formação de hifas foi maior nos isolados resistentes do que nos suscetíveis aos antifúngicos. O método de RAPD-PCR identificou a formação de dois diferentes grupos. No grupo A, foram agrupados quatro isolados resistentes e dois suscetíveis e no grupo B um resistente e seis suscetíveis. CONCLUSÕES: Considerando que a formação hifal foi maior em isolados resistentes na presença de azólicos, concluimos que a produção hifal está muito relacionada a suscetibilidade a estes fámacos. Estes antifúngicos podem alterar a morfologia de C. albicans em dependência da sua suscetibilidade. No método de RAPD-PCR, o encontro da maioria dos isolados resistentes classificados como pertencentes ao grupo A e suscetíveis ao grupo B demonstrou que este método apresentou um padrão semelhante entre os dois grupos, sugerindo que por este método pode ser detectado uma estreita correlação entre genótipos e amostras resistentes ao fluconazol.

Aspectos micológicos e suscetibilidade in vitro de leveduras do gênero Candida em pacientes HIV-positivos provenientes do Estado de Mato Grosso / Mycological aspects and susceptibility in vitro the yeast of the genus Candida from HIV-positive patients in the State of Mato Grosso

INTRODUÇÃO: A candidíase é uma das infecções fúngicas mais frequentes entre os pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana. O presente estudo objetivou a caracterização das leveduras do gênero Candida de distintas amostras clínicas, provenientes de pacientes HIV - positivos, assim como a determinação do perfil de suscetibilidade in vitro a cinco drogas antifúngicas. MÉTODOS: A caracterização dos isolados de Candida sp foi realizada através da metodologia clássica, testes bioquímicos (zimograma e auxanograma) e morfológicos (prova do tubo germinativo e microcultivo em lâmina). Também, foram realizadas a técnica genotípica (PCR) e identificação pelo método comercial API 20C AUX (BioMeriéux). Para a determinação do perfil de suscetibilidade in vitro, foram utilizadas cinco drogas antifúngicas (cetoconazol, fluconazol, itraconazol, voriconazol e anfotericina B), através do método comercialmente disponível - Etest. RESULTADOS: Foram identificados 105 isolados de leveduras do gênero Candida provenientes de 102 pacientes infectados pelo vírus HIV. Destes, foram caracterizadas 82 (78,1 por cento) Candida albicans, 8 (7,6 por cento) Candida parapsilosis, 8 (7,6 por cento) Candida tropicalis, 4 (3,8 por cento) Candida krusei, 2 (1,9 por cento) Candida glabrata e 1 (1 por cento) Candida guilliermondii. CONCLUSÕES: Considerando o perfil geral de sensibilidade, 60 por cento dos isolados foram suscetíveis a todos os antifúngicos testados, porém as espécies C. tropicalis e C. krusei demonstraram uma tendência a valores mais elevados de CIMs para os azóis do que os encontrados paraC. albicans, sugerindo resistência.

INTRODUCTION: Candidiasis is one of the most common fungal infections among patients infected by human immunodeficiency virus. The present study aimed to characterize yeasts of the genus Candida from distinct clinical samples from HIV-positive patients and determine the in vitro susceptibility profile to five antifungal drugs. METHODS: Characterization of Candida sp was achieved using the classic methodology: biochemical (zymogram and auxanogram) and micromorphology (germinative tube growth test and slide microculture) tests. Genotypic technique (PCR) and identification by the commercial method API 20C AUX (Biomeriéux) were also performed. To determine the in vitro susceptibility profile, five antifungal drugs were used (ketoconazole, fluconazole, itraconazole, voriconazole and amphotericin-B) following a commercially available method, the Etest. RESULTS: The procedure isolated 105 yeasts of the genus Candida from 102 HIV-infected patients. Of these, 82 (78.1 percent) were characterized as Candida albicans, 8 (7.6 percent) as C. parapsilosi s, 8 (7.6 percent) C. tropicalis, 4 (3.8 percent) C. krusei, 2 (1.9 percent) C. glabrata, and 1 (1 percent) as C. guiilliermondii. CONCLUSIONS: Considering the general profile of sensitivity, 60 percent of isolates were susceptible to all the antifungal drugs tested; however, the species C. tropicalis and C. krusei showed a tendency toward higher MICs to azoles than those obtained for C. albicans, suggesting resistance.

Comparison of in vitro activity of five antifungal agents against dermatophytes, using the agar dilution and broth microdilution methods / Comparação da atividade in vitro de cinco agentes antifúngicos para dermatófitos, usando os métodos de diluição em ágar e microdiluição em caldo

The purpose of this study was to compare the agar dilution and broth microdilution methods for determining the minimum inhibitory concentration (MIC) of fluconazole, itraconazole, ketoconazole, griseofulvin and terbinafine for 60 dermatophyte samples belonging to the species Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes and Microsporum canis. The percentage agreement between the two methods, for all the isolates with < 2 dilutions that were tested was 91.6 percent for ketoconazole and griseofulvin, 88.3 percent for itraconazole, 81.6 percent for terbinafine and 73.3 percent for fluconazole. One hundred percent agreement was obtained for Trichophyton mentagrophytes isolates evaluated with ketoconazole and griseofulvin. Thus, until a reference method for testing the in vitro susceptibility of dermatophytes is standardized, the similarity of the results between the two methods means that the agar dilution method may be useful for susceptibility testing on these filamentous fungi.

O propósito do presente trabalho foi comparar os métodos de diluição em ágar e diluição em caldo para a determinação de concentração inibitória mínima de fluconazol, itraconazol, cetoconazol, griseofulvina e terbinafina para 60 amostras de dermatófitos pertencentes às espécies, Trichophyton rubrum, Trichophyton. mentagrophytes e Microsporum canis. A porcentagem de acordo entre os dois métodos para todos os isolados testados considerando-se valores < 2 diluições, foram de 91,6 por cento para cetoconazol e para griseofulvina, de 88,3 por cento para itraconazol, de 81,6 por cento para terbinafina e de 73,3 por cento para fluconazol. Uma concordância de 100 por cento foi obtido para isolados de Trichophyton mentagrophytes avaliados com cetoconazol e griseofulvina. Desta forma, até que um método de referência seja padronizado para testar a suscetibilidade in vitro para os dermatófitos, os resultados semelhantes encontrados para os dois métodos fazem com que o método de diluição em ágar possa ser útil no teste de suscetibilidade para estes fungos filamentosos.

Suscetibilidade in vitro a antibióticos de cepas de Staphylococcus spp e Micrococcus spp isoladas a partir de mucosa oral de macacos-pregos (Cebus apella) mantidos em cativeiro / In vitro susceptibility to antibiotics in Staphylococcus spp e Micrococcus spp strains isolated from oral mucosae of captive capuchin monkeys (Cebus apella)

O estudo foi realizado com 29 macacos-pregos (Cebus apella). Foram colhidas 50 amostras de suabe da mucosa oral, junto à transição muco-gengival maxilar, com auxílio de zaragatoas esterilizadas, embebidas em caldo Brain Heart Infusion (BHI). Todos os animais foram submetidos a exame clínico para avaliação periodontal. As amostras obtidas foram cultivadas em meios apropriados: caldo simples, caldo BHI, e ágar sangue para o isolamento de cocos Gram-positivos aeróbios da família Micrococcaceae. Para sua classificação utilizou-se as provas de catalase, Staphy-test (teste rápido para caracterização de Staphylococcus aureus) e sensibilidade à bacitracina. Foram identificados 73,1 por cento de Staphylococcus spp; 15,4 por cento de Staphylococcus aureus; e 11,5 por cento Micrococcus spp. As cepas isoladas foram testadas em relação à sua suscetibilidade a antibióticos pela técnica de difusão em ágar. Verificou-se para as cepas de Staphylococcus spp, 94,7 por cento de sensibilidade a cefalotina e resistência de 89,5 por cento à penicilina, 97,4 por cento à oxacilina, 55,3 por cento à tetraciclina, 57,9 por cento à clindamicina e 63,2 por cento à amoxicilina. Os dados obtidos demonstraram que a cefalotina foi o antibiótico para o qual as amsotras de Staphylococcus spp estudadas apresentaram, in vitro, maior grau de sensibilidade.

Twenty-nine capuchin monkeys (Cebus apella) were used in this study. Fifty samples of oral mucous membrane were collected in area next to their muco-gingival-maxilar transition using sterilized swabs soaked in Brain Heart Infusion (BHI). All animals were clinically examined for periodontal evaluation. The samples were cultivated in appropriate media, namely: simple broth, BHI broth and, blood agar in order to get aerobic Gram positive cocos, from the Micrococcaceae family, isolated. Catalase test, Staphy-test (a quick-test for Staphylococcus aureus characterization) and bactracin-sensitivity test were the tools employed for their classification. Data were follows: 73.1 percent of them were Staphylococcus spp; 15.4 percent Staphylococcus aureus; and, 11.5 percent Micrococcus spp. The isolated were strains tested for their in vitro susceptible to antibiotics by the agar diffusion technique. Concerning the Staphylococcus spp strains, 94.7 percent were susceptibility to cephalotin; however, 89.5 percent of them were resistant to penicillin; 97.4 percent to oxacilin; 55.3 percent to tetracicline; 57.9 percent to clindamicine; and 63.2 percent to amoxiciline. Staphylococcus spp strains studied presented the highest in vitro sensitivity degree to cephalotin.