Ovarian Tissue Culture to Preserve Fertility in Transgender Male Patients after Hormonal Treatment / Cultura de tecido ovariano para preservação da fertilidade em pacientes transexuais masculinos após tratamento hormonal

Abstract Objective To evaluate the reproductive and histological characteristics of fresh cultured ovarian tissue from transgender male patients. Methods An in vitro pilot study in which samples were collected during sex reassignment surgery for transgender male patients. The ovarian cortex was cut into fragments of 2 mm, 3mm, and 4 mm, and placed in a 96-well plate suitable for cultivation at days 0, 2, 4, 6, and 8, when the histology was analyzed. Results Stromal hyperplasia was observed in all samples, and it was not associated with the obtainment of primordial or primary follicles. Peripheral reduction in cell count was also a recurrent finding. Primordial and primary follicles were identified with a heterogeneous pattern in fragments from the same patient and from different patients, and follicles in more advanced stages of development (secondary and antral) were not found. There was an association between the diameter of the ovarian fragments and the identification of primary follicles (p=0.036). The number of days in culture was associated with histological signs of tissue damaging in the fragments (p=0.002). The total number of follicles identified in the samples with 2mm in diameter was significantly lower than in those that measured 4mm in diameter (p=0.031). Conclusion A diameter of 4mm is suitable for ovarian tissue culture with the benefit of ease of handling. Even after prolonged exposure to testosterone, the ovarian fragments presented primordial and primary follicles, maintaining viability throughout the days they were exposed to the culture. Freezing the ovarian cortex of transgender patients who will undergo surgery for gender reassignment would be an interesting option, in the future, for the preservation of fertility.

Resumo Objetivo Avaliar as características reprodutivas e histológicas de tecido ovariano cultivado a fresco de pacientes transexuais masculinos. Métodos Estudo experimental in vitro e piloto, no qual amostras foram coletadas durante a cirurgia de redesignação de sexo para pacientes transexuais masculinos. O córtex ovariano foi cortado em fragmentos de 2mm, 3mm, e 4mm, e colocado em placa de 96 poços própria para cultivo nos dias 0, 2, 4, 6 e 8, quando a histologia foi analisada. Resultados Hiperplasia estromal foi observada em todas as amostras, e não esteve associada à obtenção de folículos primordiais ou primários. A redução periférica no número de células também foi um achado recorrente. Folículos primordiais e primários foramidentificados com padrão heterogêneo emfragmentos domesmo paciente e em fragmentos de pacientes diferentes, não sendo encontrados folículos em estágios mais avançados de desenvolvimento (secundários e antrais). Houve associação entre o diâmetro dos fragmentos ovarianos e a identificação dos folículos primários (p=0,036). O número de dias de cultura esteve associado a sinais histológicos de lesão tecidual nos fragmentos (p=0,002). O número total de folículos identificados nas amostras de 2mm de diâmetro foi significativamente menor do que nas de 4mm de diâmetro (p=0,031). Conclusão O diâmetro de 4mm parece ser mais adequado para a cultura de tecido ovariano com a vantagem de fácil manejo. Mesmo após exposição prolongada à testosterona, os fragmentos ovarianos apresentavam folículos primordiais e primários, e manteve a viabilidade ao longo dos dias de exposição à cultura. No futuro, o congelamento da cortical do ovário de pacientes transgêneros que se submeterão à cirurgia de redesignação sexual poderia ser uma opção interessante para a preservação da fertilidade.

Microbiological profile of leg ulcer infections: review study / Perfil microbiológico de las infecciones de ulceras de pierna: estudio de revisión / Perfil microbiológico das infecções de úlceras de perna: estudo de revisão

ABSTRACT Objectives: to analyze the microbiological profile of leg ulcers of patients treated at outpatient clinics and hospitals regarding the type of microorganism, microbiological selection of antibiotics, and techniques for the collection of culture material. Methods: literature review performed on LILACS, IBECS, MEDLINE, and CINAHL databases, resulting in a descriptive analysis of 27 studies. Results: 35.7% of the studies occurred in an outpatient care scenario; and 64.2% in hospitals. There was a predominance of swab (100%) in outpatient care and biopsy (55.5%) in the hospital. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, and Staphylococcus aureus were more common at both levels of assistance. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus was isolated in both. Conclusions: the microbiological profile of infections was similar, with the presence of resistant bacteria in both environments. This fact causes concern and raises the need for research to elucidate it. The studies did not compare the effectiveness between biopsy and swab.

RESUMEN Objetivos: analizar perfil microbiológico de úlceras de pierna de pacientes atendidos en ambulatorio y hospital cuanto al tipo de microorganismo, selección microbiológica a los antibióticos y técnicas de recogida de material para cultura. Métodos: revisión de literatura realizada en bases LILACS, IBECS, MEDLINE y CINAHL, resultando en 27 estudios analizados descriptivamente. Resultados: ocurrieron en ambulatorio, 35,7% de los estudios; y en hospitales, 64,2%. Predominaron swab (100%) en ambulatorio y biopsia (55,5%) en hospital. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus fueron más comunes en dos niveles de asistencia. Hubo el aislamiento de Staphylococcus aureus resistente a la meticilina en ambos. Conclusiones: perfil microbiológico de las infecciones fue semejante, con presencia de bacterias resistentes en los dos ambientes. Ese hecho causa preocupación y suscita necesidad de investigaciones para elucidarlo. Estudios no compararon la efectividad entre biopsia y swab.

RESUMO Objetivos: analisar o perfil microbiológico de úlceras de perna de pacientes atendidos em ambulatório e hospital quanto ao tipo de microrganismo, seleção microbiológica aos antibióticos e técnicas de coleta de material para cultura. Métodos: revisão da literatura realizada nas bases LILACS, IBECS, MEDLINE e CINAHL, resultando em 27 estudos analisados descritivamente. Resultados: ocorreram em ambulatório, 35,7% dos estudos; e em hospitais, 64,2%. Predominaram swab (100%) em ambulatório e biópsia (55,5%) no hospital. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e o Staphylococcus aureus foram mais comuns nos dois níveis de assistência. Houve o isolamento de Staphylococcus aureus resistente à meticilina em ambos. Conclusões: o perfil microbiológico das infecções foi semelhante, com presença de bactérias resistentes nos dois ambientes. Esse fato causa preocupação e suscita necessidade de pesquisas para elucidá-lo. Os estudos não compararam a efetividade entre biópsia e swab.

Microbiological profile of leg ulcer infections: review study / Perfil microbiológico de las infecciones de ulceras de pierna: estudio de revisión / Perfil microbiológico das infecções de úlceras de perna: estudo de revisão

ABSTRACT Objectives: to analyze the microbiological profile of leg ulcers of patients treated at outpatient clinics and hospitals regarding the type of microorganism, microbiological selection of antibiotics, and techniques for the collection of culture material. Methods: literature review performed on LILACS, IBECS, MEDLINE, and CINAHL databases, resulting in a descriptive analysis of 27 studies. Results: 35.7% of the studies occurred in an outpatient care scenario; and 64.2% in hospitals. There was a predominance of swab (100%) in outpatient care and biopsy (55.5%) in the hospital. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, and Staphylococcus aureus were more common at both levels of assistance. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus was isolated in both. Conclusions: the microbiological profile of infections was similar, with the presence of resistant bacteria in both environments. This fact causes concern and raises the need for research to elucidate it. The studies did not compare the effectiveness between biopsy and swab.

RESUMEN Objetivos: analizar perfil microbiológico de úlceras de pierna de pacientes atendidos en ambulatorio y hospital cuanto al tipo de microorganismo, selección microbiológica a los antibióticos y técnicas de recogida de material para cultura. Métodos: revisión de literatura realizada en bases LILACS, IBECS, MEDLINE y CINAHL, resultando en 27 estudios analizados descriptivamente. Resultados: ocurrieron en ambulatorio, 35,7% de los estudios; y en hospitales, 64,2%. Predominaron swab (100%) en ambulatorio y biopsia (55,5%) en hospital. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus fueron más comunes en dos niveles de asistencia. Hubo el aislamiento de Staphylococcus aureus resistente a la meticilina en ambos. Conclusiones: perfil microbiológico de las infecciones fue semejante, con presencia de bacterias resistentes en los dos ambientes. Ese hecho causa preocupación y suscita necesidad de investigaciones para elucidarlo. Estudios no compararon la efectividad entre biopsia y swab.

RESUMO Objetivos: analisar o perfil microbiológico de úlceras de perna de pacientes atendidos em ambulatório e hospital quanto ao tipo de microrganismo, seleção microbiológica aos antibióticos e técnicas de coleta de material para cultura. Métodos: revisão da literatura realizada nas bases LILACS, IBECS, MEDLINE e CINAHL, resultando em 27 estudos analisados descritivamente. Resultados: ocorreram em ambulatório, 35,7% dos estudos; e em hospitais, 64,2%. Predominaram swab (100%) em ambulatório e biópsia (55,5%) no hospital. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e o Staphylococcus aureus foram mais comuns nos dois níveis de assistência. Houve o isolamento de Staphylococcus aureus resistente à meticilina em ambos. Conclusões: o perfil microbiológico das infecções foi semelhante, com presença de bactérias resistentes nos dois ambientes. Esse fato causa preocupação e suscita necessidade de pesquisas para elucidá-lo. Os estudos não compararam a efetividade entre biópsia e swab.

Avaliação dos efeitos do Bisfenol A em queratinócitos e células de neoplasia de cavidade oral / Evaluation of bisphenol A effects in keratinocytes and oral cavity neoplasia cells

O Bisfenol A (BPA) é um monômero utilizado na produção de garrafas plásticas, embalagens alimentícias, resinas odontológicas e vários outros materiais. Este monômero age como um desregulador do sistema endócrino e seus efeitos estão associados a cânceres em diferentes órgão e tecidos, como mama, próstata e tireóide. O BPA já foi detectado em fluidos humanos, incluindo saliva, mas os seus efeitos na mucosa bucal e em células orais neoplásicas não foram investigados. Os objetivos do presente trabalho foram 1) verificar os efeitos da exposição crônica ao BPA em glândulas salivares e mucosa bucal in vivo e 2) avaliar os efeitos do BPA in vitro em células de neoplasias bucais e queratinócitos; Para atender ao objetivo 1, camundongos machos e fêmeas receberam BPA (200 mg/mL) na água de beber durante 6 semanas. As mucosas orais (palato, língua e mucosa jugal) e as glândulas submandibulares foram avaliadas. Para atender ao objetivo 2, a resposta ao BPA foi examinada nas linhagens NOK-SI (queratinócito), HN12, HN13 (CCE de cavidade oral), UM HMC1 e UM HMC3a (neoplasia de glândula salivar). Os seguintes parâmetros foram avaliados: viabilidade, proliferação, invasão, angiogênese, produção de citocinas e fatores de crescimento e possíveis mecanismos de ação do BPA. Resultados. A exposição de camundongos ao BPA resultou em alterações microscópicas caracterizadas pelo aumento da espessura do epitélio da mucosa oral (palato, língua e mucosa jugal) e uma redução no número de ácinos das glândulas submandibulares. Foi observado também um acúmulo de BPA nos tecidos orais. In vitro, nas linhagens de CCE, o BPA aumentou a proliferação, invasão celular e os níveis da proteína vimentina, e ainda induziu a secreção de citocinas e fatores de crescimento, e a acetilação de histonas H3. Em queratinócitos orais, o BPA aumentou a proliferação celular e induziu a secreção de fatores de crescimento e a expressão de receptores de estrógeno (ER) α e ß. Os efeitos do BPA foram revertidos na presença do antagonista puro do ER. Nas linhagens de neoplasias de glândula o BPA não alterou a proliferação e induziu a expressão de p63. Em conclusão, o BPA induz alterações morfológicas nos tecidos bucais e alterações moleculares nos queratinócitos e nas células de CCE de cavidade oral. Os mecanismos pelos quais o BPA induz estas alterações são dependentes da interação BPA-ER e da acetilação de histonas.

Bisphenol A (BPA) is a monomer used to product plastic bottles, food packaging, inner coating of food cans, thermal papers, medical devices, dental resins and various other materials. Due to its chemical structure, this monomer acts as a deregulator of the endocrine system and its effects are associated with cancers in different organs and tissues such as breast, endometrium, ovary, prostate, testis and thyroid. BPA has been detected in several human fluids, including saliva, however its effects on the normal oral mucosa and neoplastic oral cells have not been investigated yet. Thus, the objectives of the present study were 1) to verify the effects of chronic exposure to BPA in salivary glands and oral mucosa in vivo and 2) to evaluate the effects of BPA in vitro on oral tumor cells and keratinocytes. To meet objective 1, male and female mice received BPA (200 mg / mL) in drinking water for 6 weeks. The oral mucosa (palate, tongue and buccal mucosa) and submandibular salivary glands were evaluated microscopically. To meet objective 2, the response to BPA was examined in immortalized cell lines NOK SI (keratinocyte); HN12, HN13 (OSCC), UM HMC1 and UM HMC3a (salivary gland tumor). The following parameters were evaluated: viability, proliferation, invasion, angiogenesis, cytokine and growth factors production. Results. Exposure of mice to BPA resulted in microscopic changes characterized by increased thickness of the oral mucosa epithelium (palate, tongue and buccal mucosa) and a reduction in the number of submandibular salivary glands acini. There was also an accumulation of BPA in the oral tissues. In vitro, in OSCC cells, BPA increased cell proliferation and invasion, vimentin expression, induced secretion of cytokines and growth factors, and induced histone H3 acetylation. In oral keratinocytes, BPA increased cell proliferation and induced secretion of growth factors and estrogen receptor (ER) α and ß expression. The effects of BPA were reversed in the presence of the pure ER antagonist. In salivary gland tumor cell lines, BPA did not alter the proliferation and induced the expression of p63. BPA mechanism of action involves its interaction with ER, since the effects were reverted in the presence of pure receptor antagonist. In conclusion, BPA induces morphological changes in oral tissues and molecular changes in keratinocytes and OSCC cells. The mechanisms which BPA induces these changes are dependent to the BPA-ER interaction and histone acetylation.

Blefarite: epidemiologia, etiologia, apresentações clínicas, tratamento e evolução de nossos pacientes / Blepharitis: epidemiology, etiology, clinical presentations, treatment and evolution of our patients

Resumo Objetivo: A blefarite é uma das condições mais comumente encontradas na prática oftalmológica e se constitui em uma causa frequente de irritação e desconforto ocular. Por ser uma doença de difícil tratamento, os autores buscaram compreender melhor a epidemiologia, etiologia, apresentações clínicas, tratamento e evolução de seus pacientes, visando maior sucesso terapêutico. Métodos: Foram avaliados retrospectivamente e transversalmente o prontuário de 124 pacientes do Centro de Oftalmologia Tadeu Cvintal, os quais apresentavam blefarite e foram submetidos à classificação de gravidade e coleta de secreções palpebrais para cultura bacteriana e antibiograma. Resultados: A media da idade dos pacientes foi de 67,4 anos, o sexo feminino foi responsável por 70 (56,4%) casos e o masculino por 54 (43,5%). Quanto à gravidade da doença, constatou-se 71 casos de blefarite leve (56,8%), 52 (41,6%) com intensidade moderada e 2 (1,6%) casos graves. Avaliando o seguimento do tratamento da doença, foi observado que 103 (82,4%) pacientes não retornaram para avaliar o resultado do tratamento e apenas 22 (17,6%) retornaram. Em relação às culturas realizadas, 82 (66,1%) não apresentaram crescimento microbiano. Dentre as 42 (33,8%) amostras positivas, os Staphylococcus coagulase negativo foram os mais prevalentes, sobretudo os Staphylococcus epidermidis, responsável por 35 (83,3%) delas. Quanto à sensibilidade aos antibióticos, os agentes de nossa amostra demonstraram maior resistência à Penicilina, Eritromicina e Ciprofloxacino e 100% de sensibilidade à Linezolida, Vancomicina e Daptomicina. Conclusão: Conhecendo melhor as características epidemiológicas da blefarite e a sensibilidade antimicrobiana das bactérias envolvidas, é possível oferecer tratamentos mais eficazes.

Abstract Objective: Blepharitis is one of the most commonly encountered conditions in ophthalmic practice and is a frequent cause of eye irritation and discomfort. Being a difficult to treat disease, the authors sought to better understand the epidemiology, etiology, clinical presentations, treatment and evolution of their patients, aiming at greater therapeutic success. Methods: The medical records of 124 patients of Centro de Oftalmologia Tadeu Cvintal who had blepharitis were retrospectively and cross-sectionally evaluated and underwent severity classification and collection of eyelid secretions for bacterial culture and antibiogram. Results: The mean age of the patients was 67.4 years, females accounted for 70 (56.4%) cases and males for 54 (43.5%). Regarding the severity of the disease, there were 71 cases of mild blepharitis (56.8%), 52 (41.6%) with moderate intensity and 2 (1.6%) severe cases. Evaluating the follow-up of treatment of the disease, it was observed that 103 (82.4%) patients did not return to evaluate the treatment outcome and only 22 (17.6%) returned. In respect of the cultures performed, 82 (66.1%) did not show microbial growth. Among the 42 (33.8%) positive samples, coagulase-negative staphylococci were the most prevalent, especially Staphylococcus epidermidis, responsible for 35 (83.3%) of them. As for antibiotic sensitivity, the agents in our sample showed greater resistance to Penicillin, Erythromycin and Ciprofloxacin and 100% sensitivity to Linezolid, Vancomycin and Daptomycin. Conclusion: By better understanding the epidemiological characteristics of blepharitis and the antimicrobial sensitivity of the bacteria involved, it is possible to offer more effective treatments.

Efeito de flavonoides sobre microrganismos de interesse endodôntico e sua influência na expressão de marcadores de mineralização / Effect of flavonoids on endodontic microorganisms and their influence on the expression of mineralization markers

O tratamento endodôntico de dentes permanentes jovens representa um grande desafio clínico devido a presença de paredes dentinárias finas, divergentes ou paralelas e ápice aberto, o que dificulta a desinfecção e a execução dos procedimentos convencionais. Terapias de regeneração endodôntica envolvem o uso de materiais capazes de promover uma desinfecção eficaz sem causar citotoxicidade, além de induzir a diferenciação de células-tronco ou bioestimular células remanescentes do tecido pulpar mesmo após a injúria. Nesse contexto, os flavonoides, polifenóis presentes em frutas e vegetais, poderiam ser agentes interessantes para o tratamento endodôntico de dentes imaturos devido a sua amplitude terapêutica. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito antimicrobiano, citotóxico e indutor de mineralização de flavonoides com finalidade de aplicação endodôntica. Este trabalho de tese foi dividido em três capítulos. O capítulo 1 avaliou a toxicidade dos flavonoides taxifolina, crisina, pinocembrina e galangina sobre fibroblastos pelo ensaio de MTT, a atividade antimicrobiana pela determinação da concentração inibitória e bactericida mínima, e a ação antibiofilme do flavonoide com melhor efeito antimicrobiano, por meio de ensaios em placas de poliestireno e em dentina radicular bovina por meio da análise por microscopia confocal. Os resultados mostraram que o flavonoide taxifolina não foi tóxico para os fibroblastos em nenhuma das concentrações analisadas, enquanto que os flavonoides crisina, pinocembrina e galangina apresentaram efeitos citotóxicos. Crisina, pinocembrina e galangina não apresentaram efeito antimicrobiano frente E. faecalis and S. mutans nas concentrações testadas. A taxifolina foi capaz de inibir todas as bactérias testadas, eliminar biofilmes de E. faecalis e S. mutans em placas de poliestireno e reduzir significantemente o biofilme de E. faecalis em túbulos dentinários. O capítulo 2 avaliou a citotoxicidade do flavonoide taxifolina e o seu potencial sobre a indução de marcadores de mineralização dentinária (produção de fosfatase alcalina - ALP, nódulos de mineralização ­ NM e expressão dos genes DSPP ­ sialofosfoproteína dentinária e DMP-1 ­ proteína da matriz dentinária - 1) em células semelhantes a odontoblastos MDPC-23, após tratamentos de 24, 72h e contínuo. A taxifolina não apresentou citotoxicidade em nenhum dos três tipos de tratamento analisados. Todas as concentrações do tratamento de 24h e as concentrações de 10 e 5µM do tratamento de 72h aumentaram a atividade de ALP. A formação de NM aumentou com os tratamentos de taxifolina à 10µM em ambos os tratamentos de 24 e 72h, e à 5µM no tratamento de 24h. A expressão de DMP-1 aumentou com o tratamento de taxifolina em ambos os tratamentos de 24 e 72h, enquanto que a de DSPP aumentou apenas com o tratamento de 72h na concentração de 5µM. O capítulo 3 avaliou a citotoxicidade da taxifolina, e o seu potencial sobre a indução de marcadores de mineralização óssea (ALP, NM e expressão dos genes ALP e colágeno 1 - Col-1) em células semelhantes a osteoblastos Saos-2, após tratamentos de 24, 72h e contínuo. Os resultados mostraram que os tratamentos com taxifolina nas concentrações de 10, 5 e 1µM não foram citotóxicos em nenhum dos períodos analisados. O tratamento de 72h da taxifolina à 10µM foi capaz de aumentar a atividade de ALP e a formação de NM, além de aumentar a expressão de Col-1 após 13 dias. O tratamento de 24h da taxifolina na concentração de 10µM aumentou a expressão de ALP após 6 dias. Conclui-se que a taxifolina é um flavonoide com potencial uso para o tratamento endodôntico de dentes permanentes jovens, devido à sua ação antimicrobiana/antibiofilme, baixa citotoxicidade e capacidade de estimular a mineralização em odontoblastos e osteoblastos(AU)

The endodontic treatment of young permanent teeth represents a great clinical challenge due to the presence of thin, divergent or parallel dentin walls and the open apex that makes it difficult to disinfect and perform conventional endodontic procedures. Endodontic regeneration therapies involve the use of materials capable of promoting effective disinfection without causing cytotoxicity, in addition to inducing differentiation of stem cells or biostimulating remaining pulp tissue cells even after injury. In this context, the flavonoids, polyphenols present in fruits and vegetables, could be interesting agents for the endodontic treatment of immature teeth due to the wide therapeutic use. Thus, the objective of the present study was to evaluate the antimicrobial, cytotoxic effects and capacity of mineralization induction of flavonoids for endodontic application. This thesis was divided into three chapters. The chapter 1 evaluated the toxicity of taxifolin, chrysin, pinocembrin and galangin flavonoids on fibroblasts by the MTT method, antimicrobial activity by determining the minimum inhibitory and bactericidal concentrations and analyzed the antibiofilm action of the flavonoid with the best antimicrobial effect, by means of the biofilm assays in polystyrene plates and in bovine root dentin and confocal microscopy analysis. The results showed that the flavonoid taxifolin was not toxic on fibroblasts in any tested concentration, while chrysin, pinocembrin and galangin flavonoids showed cytotoxic effects. Chrysin, pinocembrin and galangin showed no antimicrobial effect against E. faecalis and S. mutans in any tested concentrations. Taxifolin was able to inhibit all tested bacteria, to eliminate E. faecalis and S. mutans biofilms on polystyrene plates and significantly reduce E. faecalis biofilms from the dentin tubules. The chapter 2 evaluated the cytotoxicity of taxifolin and its potential on the induction of dentin mineralization markers (alkaline phosphatase production - ALP, mineralization nodules - MN and expression of genes DSPP - dentin sialophosphoprotein and DMP-1 - dentin matrix protein - 1) on odontoblast-like cells MDPC-23, after treatments of 24, 72h and continuous. Taxifolin did not present cytotoxicity at any of the three types of treatments analyzed. All concentrations of 24h-treatment and 10 and 5µM of 72htreatment increased ALP activity. NM formation increased with taxifolin treatments at 10µM in both 24 e 72h treatments, and at 5µM in the 24h-treatment. Expression of DMP-1 increased with taxifolin in both 24 e 72h-treatments, whereas DSPP expression increased only with 72h-treatment at 5µM. The chapter 3 evaluated the cytotoxicity of taxifolin and its potential on the induction of bone mineralization markers (ALP, NM and expression of ALP and collagen 1 -Col-1 genes) on Saos-2 osteoblast-like cells, after treatments of 24, 72h and continuous. The results showed that taxifolin treatments at 10, 5 and 1µM were not cytotoxic in any of the periods analyzed. The 72h-treatment of taxifolin at 10µM was able to increase ALP activity and NM formation, in addition to increasing Col-1 expression after 13 days. The 24h-treatment of taxifolin at 10µM increased ALP expression after 6 days. It is concluded that taxifolin is a flavonoid with potential use for endodontic treatment of young permanent teeth due to its antimicrobial/antibiofilm action, low cytotoxicity and ability to stimulate mineralization in odontoblasts and osteoblasts(AU)

Vesículas extracelulares derivadas de macrófagos alteram o potencial de invasão, proliferação e migração de linhagens celulares do carcinoma de células escamosas de língua oral / Macrophage-derived extracellular vesicles alter the potential for invasion, proliferation, and migration of oral tongue squamous cell carcinoma cell lines

O câncer é composto pelas células malignas em proliferação associadas às diferentes células circunjacentes, formando o microambiente tumoral (TME), onde há uma constante troca de informações. Uma das formas de comunicação entre os diferentes tipos celulares do TME se dá por meio da liberação de vesículas extracelulares (EVs), um campo de estudo ainda pouco explorado. O presente estudo se propôs a avaliar os efeitos das EVs liberadas por macrófagos do TME, células altamente plásticas em seu fenótipo (M1 ­ perfil antitumoral; M2 ­ perfil pró-tumoral), em diferentes linhagens do carcinoma de células escamosas de língua oral (CCELO) no tocante à capacidade invasiva, proliferativa e migratória. Foi observado que as amostras de EVs extraídas dos macrófagos eram relativamente puras em EVs, porém subtipo inespecíficas. No ensaio de invasão em miomas, quando colocadas as células inflamatórias em cocultura com as células HSC-3, as células M1 inibiram a invasão e M2 aumentaram a capacidade invasiva das células malignas. Por outro lado, o tratamento com M1 EVs aumentou a capacidade invasiva das células HSC-3 e o tratamento com EVs de M2 inibiu a invasão dessas células, sendo observado um perfil semelhante nas células SCC-25 e SAS quando submetidas aos mesmos tratamentos. Na análise do marcador Ki-67 nos miomas, tanto as células HSC-3 quanto SCC-25 e SAS apresentaram o mesmo padrão de proliferação independentemente do tratamento utilizado, quando comparados com os respectivos controles negativos. Quando analisada a proliferação das células malignas no IncuCyte®, tratadas com EVs dos diferentes tipos de macrófagos em diferentes concentrações, foi identificado um aumento na capacidade proliferativa de células HSC-3 e SAS tratadas com M1 EVs em um padrão dose dependente. Um aumento da capacidade proliferativa seguindo um padrão dose dependente também ocorreu quando as células SAS foram tratadas com M2 EVs. Nos demais ensaios de proliferação no IncuCyte® também foram identificados efeitos na capacidade proliferativa, no entanto um padrão dose dependente não foi observado. No ensaio de migração no IncuCyte®, foram identificadas diferenças significativas na capacidade migratória de células SCC-25 e SAS tratadas com diferentes tipos de EVs nas diferentes concentrações, quando comparadas ao controle negativo. Os achados deste estudo sugerem que as EVs derivadas de macrófagos são fatores importantes na tumorigênese do CCELO, bem como abre discussões sobre os diferentes efeitos das células inflamatórias no TME a depender do tipo de comunicação celular executada (AU).

Cancer is an entity composed of proliferating malignant cells associated with the different types surrounding cells, forming the tumor microenvironment (TME), where there is a constant exchange of information. One of the ways of communicating between different types of TME cells is through the release of extracellular vesicles (EVs), a field of study that remains poorly understood. The aim of the present study was to evaluate the effects of EVs released from TME macrophages, which are cells highly plastic in their phenotype (M1 showing an anti-tumor profile and M2 exhibiting a pro-tumor profile) in different cell lines of tongue squamous cells carcinoma (TSCC) regarding to invasive, proliferative and migratory capacity. It was observed that EVs samples obtained from macrophages were relatively pure in EVs, although they were non-specific subtypes. In the myoma invasion assay, it was observed that when inflammatory cells were co-cultured with HSC-3 cells, M1 cells inhibited invasion and M2 increased the invasive ability of the malignant cells. On the other hand, treatment with M1 EVs increased the invasive capacity of HSC-3 cells, and treatment with M2 EVs inhibited the invasion of these malignant cells, and a similar profile was observed in SCC-25 and SAS cells when they were submitted to the same treatments. In the analysis of the Ki-67 marker in myomas, HSC-3, SCC-25 and SAS cells showed the same proliferation pattern regardless the type of the treatment used when compared to the respective negative controls. When it was analyzed the proliferation of malignant cells in IncuCyte® treated with EVs derived from different types of macrophages at different concentrations, an increase in the proliferative ability of HSC-3 and SAS cells treated with M1 EVs was observed in a dosedependent pattern. An increase in proliferative ability in dose-dependent profile was also observed when SAS cells were treated with M2 EVs. In the other proliferation assays performed in IncuCyte®, effects on proliferative capacity were also highlighted, however a dose-dependent pattern was not observed. In the IncuCyte® migration assay, significant differences were observed in the migration capacity of SCC-25 and SAS cells treated with different types of EVs at different concentrations when compared to the negative control. The findings of this study suggest that macrophages-derived EVs are pivotal factors in TSCC tumorigenesis, as well as permits discussions on the different effects of inflammatory cells on TME depending on the type of cell communication performed (AU).

Ex vivo model of rabbit intestinal epithelium applied to the study of colonization by enteroaggregative escherichia coli / Modelo ex vivo de epitélio intestinal de coelho aplicado ao estudo de colonização por Escherichia coli enteroagregativa

ABSTRACT BACKGROUND The diarrheal syndrome is considered a serious public health problem all over the world and is considered a major cause of morbidity and mortality in developing countries. The high incidence of enteroaggregative Escherichia coli in diarrheal syndromes classified as an emerging pathogen of gastrointestinal infections. After decades of study, your pathogenesis remains uncertain and has been investigated mainly using in vitro models of adhesion in cellular lines. OBJECTIVE The present study investigated the interaction of enteroaggregative Escherichia coli strains isolated from childhood diarrhea with rabbit ileal and colonic mucosa ex vivo, using the in vitro organ culture model. METHODS The in vitro adhesion assays using cultured tissue were performed with the strains co-incubated with intestinal fragments of ileum and colon over a period of 6 hours. Each strain was tested with three intestinal fragments for each region. The fragments were analysed by scanning electron microscopy. RESULTS Through scanning electron microscopy we observed that all strains adhered to rabbit ileal and colonic mucosa, with the typical aggregative adherence pattern of “stacked bricks” on the epithelium. However, the highest degree of adherence was observed on colonic mucosa. Threadlike structures were found in greater numbers in the ileum compared to the colon. CONCLUSION These data showed that enteroaggregative Escherichia coli may have a high tropism for the human colon, which was ratified by the higher degree of adherence on the rabbit colonic mucosa. Finally, data indicated that in vitro organ culture of intestinal mucosa from rabbit may be used to elucidate the enteroaggregative Escherichia coli pathogenesis.

RESUMO CONTEXTO A síndrome diarréica é considerada um grave problema de saúde pública em todo o mundo e é considerada uma das principais causas de morbidade e mortalidade nos países em desenvolvimento. A elevada incidência de Escherichia coli enteroagregativa nas síndromes diarreicas a classificou como um patógeno emergente de infecções gastrintestinais. Depois de décadas de estudo, sua patogênese ainda é incerta e tem sido investigada usando principalmente modelos in vitro de adesão em linhagens celulares. OBJETIVO O presente estudo investigou a interação de cepas de Escherichia coli enteroagregativa isoladas de diarreia infantil com mucosa ileal e colônica de coelho ex vivo, utilizando o modelo de cultura de órgão in vitro. MÉTODOS Os ensaios de adesão in vitro utilizando tecido cultivado foram realizados com as cepas co-incubadas com fragmentos intestinais de íleo e de cólon durante um período de 6 horas. Cada cepa foi testada em três fragmentos intestinais para cada região. Os fragmentos foram analisados por microscopia eletrônica de varredura. RESULTADOS Através da microscopia eletrônica de varredura observamos que todas as cepas aderiram a mucosa ileal e colônica de coelho, com o padrão de aderência agregativo típico de “tijolos empilhados” no epitélio. Entretanto, o maior grau de adesão foi observado na mucosa do cólon. Estruturas filiformes foram encontradas em maior número no íleo em comparação com o cólon. CONCLUSÃO Esses dados mostraram que Escherichia coli enteroagregativa pode ter um maior tropismo para o cólon humano, o que foi ratificado pelo maior grau de aderência na mucosa do cólon de coelho. Finalmente, os dados indicaram que a cultura de órgão in vitro da mucosa intestinal de coelho pode ser utilizado para elucidar a patogênese de Escherichia coli enteroagregativa.

Estudo in vitro do padrão de crescimento e proliferação celular de pré-osteoblastos humanos com bio-oss® e genox® / In vitro study of growth and proliferation of human pre-osteoblast on bio-oss® and genox®

Objetivo: O presente trabalho avaliou o padrão de crescimento, o índice de proliferação celular e morfologia de pré-osteoblastos humanos cultivados com Bio-Oss® e GenOx®. Material e Método: Pré-osteoblastos humanos MC3T3-E1 foram cultivados em contato com os biomateriais por 1, 24 e 72horas para avaliação da proliferação celular, medido com o teste colorimétrico MTS. Para a avaliação do padrão de crescimento e da morfologia celular, as células foram cultivadas por 24 e 72 horas, respectivamente e avaliadas sob microscopia de contraste de fase e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Para verificação de diferenças no crescimento celular entre os grupos foi utilizado o teste one-way de ANOVA, sendo considerados significantes valores de p<0,05. Resultados: A proliferação celular foi maior na primeira hora nas amostras em contato com os biomateriais em comparação ao grupo controle. Nos períodos de 24 e 72 horas de cultivo celular, a curva de crescimento não mostrou diferença estatisticamente significante entre os grupos (p>0.05). Na microscopia de contraste de fase observou-se que as células cresceram em proximidade aos biomateriais, iniciando a formação da monocamada de maneira semelhante. Quando analisadas no MEV, as células cultivadas sobre os biomateriais apresentaram-se com formato fusiforme e núcleo arredado. Conclusão: Com a comparação do comportamento biológico de Bio-Oss® e GenOx®, realizada in vitro neste estudo, pôde-se observar que apesar das diferenças físico-químicas, o padrão, índice de crescimento e morfologia celular de Bio-Oss® e GenOx® se mostraram semelhantes, e que ambos materiais são biocompatíveis e representam uma boa opção como substitutos ósseos.

Objective: The present study aimed to evaluate the growth pattern, cell proliferation index and morphology of human preosteoblasts cultured with Bio-Oss® and GenOx®. Material and Methods: MC3T3-E1 human pre-osteoblasts were cultured in contact with biomaterials for 1, 24 and 72 hours for the cell proliferation assay with the colorimetric test MTS. For the growth pattern and cell morphology analysis, the cells were cultured for 24 and 72 hours, respectively, and evaluated under phase contrast microscopy and scanning electron microscopy. To verify differences in cell growth among the groups, the one-way ANOVA test was used (p <0.05). Results: In the first hour of cell culture the cell proliferation was pronounced in samples in contact with the biomaterials. At 24 and 72 hours of cell culture, no significant differences between the groups was observed in respect of cell proliferation. In phase contrast microscopy it was noted that the cells grew in proximity to the biomaterials, initiating the formation of a monolayer. When analyzed in the scanning electron microscopy, the cells cultured on the biomaterials presented a fusiform morphology and a round nucleus. Conclusion: Despite the physico-chemical differences between Bio- Oss® and GenOx®, these two biomaterials presented a similar growth index and cell morphology analysis, showing that both biomaterials are biocompatible and represent a good choice as bone substitutes.

Storage protocol of dental pulp cells from human exfoliated deciduous teeth / Protocolo de armazenamento de células pulpares de dentes decíduos humanos

Objetivo: O objetivo deste estudo foi isolar células do tecido pulpar de dentes decíduos humanos, avaliar a capacidade de proliferação, caracterizá-las e normatizar as técnicas de cultivo e expansão celular destas para a criação de um banco de células. Material e métodos: Dentes decíduos sem cárie e com indicação ortodôntica de para extração foram utilizados como doadores de tecido para a pesquisa. As células foram extraídas de tecidos pulpares, isoladas e cultivadas em condições ideais até alcançarem confluência. Resultados: Após consecutivas passagens, as células cultivadas foram caracterizadas por meio de técnicas de imunofluorescência e congeladas entre a 2ª e a 6ª passagem, criando-se um biorrepositório de células da polpa de dentes decíduos humanos. Conclusão: A criação de bancos de células pulpares de dentes decíduos humanos permite uma aplicação mais ágil nas pesquisas laboratoriais, reduzindo o tempo e o custo da obtenção de novas amostras. Evita necessidade de triagem e obtenção de novos doadores de dentes e tecidos, e permite maior rapidez nas repetições de protocolos de pesquisas. (AU)

Objective: This study aimed to isolate the cells from the dental pulp tissue of human primary teeth, study the capacity of proliferation, characterize the cells and standardize the technique of culture and expansion to create a cell banking. Material and Methods: Primary teeth with no caries and orthodontic reasons were extracted for pulp tissue obtainment. The cells were extracted from the pulp cells, isolated and cultured under ideal conditions until full expansion. Results: After consecutive passages, the cultured cells were characterized using immunofluorescence technique and frozen between the 2nd and 6th passage, thus creating a biorepository of dental pulp cells from human primary teeth. Conclusion: The creation of a cell banking from dental pulp cells from human primary teeth enables the easy application of cells in laboratorial studies, reducing the cost and time for obtaining the samples, avoid the involvement of new subjects and allow a fast reproducibility of the researches. (AU)

Characterization of cryopreserved primary human corneal endothelial cells cultured in human serum-supplemented media / Caracterização de células endoteliais corneanas humanas primárias criopreservadas cultivadas em meio suplementado com soro humano

ABSTRACT Purpose: To compare cryopreserved human corneal endothelial cells (HCECs) grown in human serum-supplemented media (HS-SM) with cryopreserved HCECs grown in fetal bovine serum-supplemented media (FBS-SM). Methods: Three pairs of human corneas from donors aged 8, 28, and 31 years were obtained from the eye bank. From each pair, one cornea was used to start a HCEC culture using HS-SM; the other cornea was grown in FBS-SM. On reaching confluence, the six cell populations were frozen using 10% dimethyl sulfoxidecontaining medium. Thawed cells grown in HS-SM were compared with those grown in FBS-SM with respect to morphology, growth curves, immunohistochemistry, real time-reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) for endothelial cell markers, and detachment time. Results: No difference in morphology was observed for cells grown in the two media before or after cryopreservation. By growth curves, cell counts after thawing were similar in both media, with a slight trend toward higher cell counts in FBS-SM. Cells grown in both the media demonstrated a similar expression of endothelial cell markers when assessed by immunohistochemistry, although HCEC marker gene expression was higher in cells grown in HS-SM than in those grown in FBS-SM as assessed by RT-PCR. With FBS-SM, there was a tendency of longer detachment time and lower cell passages. Conclusions: HS-SM was similar to FBS-SM for cryopreservation of cultured HCECs as assessed by analysis of cell morphology, proliferation, and protein expression, although marker gene expression was higher in cells grown in HS-SM than in those grown in FBS-SM. Detachment time was longer with FBS-SM and in lower passages.

RESUMO Objetivo: Comparar células endoteliais de córnea humana (HCECs) criopreservadas e cultivadas em meio suplementado com soro humano (HS-SM) com HCEC criopreservadas e cultivadas em meio suplementado com soro bovino fetal (FBS-SM). Métodos: Três pares de córneas humanas de doadores com 8, 28 e 31 anos de idade foram obtidos do banco de olhos e, de cada par, uma córnea foi utilizado para iniciar uma cultura com HS-SM e outra com FBS-SM. Ao atingir a confluência, as populações de células foram congeladas utilizando-se dimetil-sulfóxido 10% no respectivo meio de cultura. Após descongeladas, as células cultivadas em HS-SM foram comparados com as cultivadas em FBS-SM por meio de morfologia, curva de crescimento, imuno-histoquímica, reação em cadeia de Reação em cadeia da polimerase da transcrição reversa em tempo real (RT-PCR) para marcadores de células endoteliais e tempo de descolamento. Resultado: Não foram observadas diferenças morfológicas antes ou após a criopreservação. Curva de crescimento mostrou contagens celulares semelhantes em ambos os meios, com discreta tendência para um maior número em FBS-SM. As células cultivadas em ambos os meios mostraram expressão semelhante de marcadores celulares endoteliais quando avaliadas por imuno-histoquímica, embora a expressão genética de marcadores para HCEC tenha sido maior em HS-SM quando avaliado por RT-PCR. Houve uma tendência de maior tempo de descolamento com FBS-SM e passagens iniciais. Conclusões: HS-SM foi semelhante ao FBS-SM na criopreservação de HCEC cultivadas in vitro quando avaliadas por morfologia celular, proliferação celular e expressão proteica, embora a expressão genética de marcadores endoteliais tenha sido maior em células cultivadas em HS-SM quando comparadas a células cultivadas em FBS-SM. O tempo de descolamento foi maior quando utilizado FBS-SM e em passagens iniciais.

Tuberculose pulmonar paucibacilar em Centros de Detenção Provisória / Paucibacillary pulmonary tuberculosis in ProvisionalDetention Centers

Cultura de micobactérias proporciona o crescimento de bacilos viáveis, mesmo presentes emescassa quantidade e não detectados pela baciloscopia. Neste estudo foram analisadas as amostrasde escarro que apresentaram baciloscopia negativa e cultura positiva. As amostras foram coletadasde 2008 a 2013, de indivíduos detidos em Centros de Detenção Provisória de Santo André,Mauá e Diadema, Estado de São Paulo. As metodologias utilizadas foram baciloscopia porcoloração Ziehl-Neelsen e cultura pelo Sistema BACTEC MGIT 960 e Ogawa-Kudoh. Dos11.529 exames realizados, 221 (1,9 %) apresentaram baciloscopias negativas e culturas positivas.Dos 221 isolados, 166 (75,1 %) pertenciam ao Complexo Mycobacterium tuberculosis, 21 (9,5 %)micobactérias não membros do Complexo Mycobacterium tuberculosis (MNT), 33 (14,9 %)Mycobaterium sp e uma cultura mista do Complexo M. tuberculosis e M. avium. MNT maisfrequentes foram M. avium (23,8 %) e M. fortuitum (19,0 %). A maioria dos isolados do ComplexoM. tuberculosis (155/166 - 93,4 %) foi sensível aos antimicrobianos. Sete amostras apresentaramresistência à isoniazida e uma apresentou multirresistência à isoniazida e rifampicina. Este estudomostra a importância da realização da cultura em escarros que apresentam baciloscopia negativano diagnóstico da TB e micobacteriose. O tratamento tardio causa a continuidade da transmissãoda doença e agravamento do quadro clínico.

Culture of mycobacteria induces the growth of viable bacillus occurring in small quantity,which are no detectable by bacilloscopy. This study aimed at identifying the mycobacteria isolatesfrom sputum presenting negative bacilloscopy and positive culture. The samples were collectedfrom 2008 to 2013 from criminals of Provisional Detention Centers in Santo André, Mauáand Diadema/SP. Smears were stained by Ziehl-Neelsen staining and the cultures were performedby the BACTEC MGIT 960 system and Ogawa-Kudoh culture medium. Of 11,529 isolates, 221(1.9 %) showed negative bacilloscopy and positive cultures. Of 221 isolates, 166 (75.1 %) belongedto Mycobacterium tuberculosis complex, 21 (9.5 %) were nontuberculous mycobacteria (NTM),33 (14.9 %) Mycobacterium sp, and one identified as a mixed culture of M. tuberculosis andM. avium complex. The most common NTM species were M. avium (23.8 %) and M. fortuitum(19.0 %). Most of the isolates (155/166-93.4 %) were susceptible to antimicrobial agents.Seven samples were resistant to isoniazid, and one presented multiresistance to isoniazid andrifampicin. This study shows the importance in performing sputum culture, when these samplesare negative on bacilloscopy in diagnosing TB and mycobacteriosis. The treatment delay resultsin the maintenance of disease transmission and worsening of clinical symptoms.

Tuberculose pulmonar paucibacilar em Centros de Detenção Provisória / Paucibacillary pulmonary tuberculosis in Provisional Detention Centers

Cultura de micobactérias proporciona o crescimento de bacilos viáveis, mesmo presentes em escassa quantidade e não detectados pela baciloscopia. Neste estudo foram analisadas as amostras de escarro que apresentaram baciloscopia negativa e cultura positiva. As amostras foram coletadas de 2008 a 2013, de indivíduos detidos em Centros de Detenção Provisória de Santo André, Mauá e Diadema, Estado de São Paulo. As metodologias utilizadas foram baciloscopia por coloração Ziehl-Neelsen e cultura pelo Sistema BACTEC MGIT 960 e Ogawa-Kudoh. Dos 11.529 exames realizados, 221 (1,9 %) apresentaram baciloscopias negativas e culturas positivas. Dos 221 isolados, 166 (75,1 %) pertenciam ao Complexo Mycobacterium tuberculosis, 21 (9,5 %) micobactérias não membros do Complexo Mycobacterium tuberculosis (MNT), 33 (14,9 %) Mycobaterium sp e uma cultura mista do Complexo M. tuberculosis e M. avium. MNT mais frequentes foram M. avium (23,8 %) e M. fortuitum (19,0 %). A maioria dos isolados do Complexo M. tuberculosis (155/166 - 93,4 %) foi sensível aos antimicrobianos. Sete amostras apresentaram resistência à isoniazida e uma apresentou multirresistência à isoniazida e rifampicina. Este estudo mostra a importância da realização da cultura em escarros que apresentam baciloscopia negativa no diagnóstico da TB e micobacteriose. O tratamento tardio causa a continuidade da transmissão da doença e agravamento do quadro clínico.

Culture of mycobacteria induces the growth of viable bacillus occurring in small quantity, which are no detectable by bacilloscopy. This study aimed at identifying the mycobacteria isolates from sputum presenting negative bacilloscopy and positive culture. The samples were collected from 2008 to 2013 from criminals of Provisional Detention Centers in Santo André, Mauá and Diadema/SP. Smears were stained by Ziehl-Neelsen staining and the cultures were performed by the BACTEC MGIT 960 system and Ogawa-Kudoh culture medium. Of 11,529 isolates, 221 (1.9 %) showed negative bacilloscopy and positive cultures. Of 221 isolates, 166 (75.1 %) belonged to Mycobacterium tuberculosis complex, 21 (9.5 %) were nontuberculous mycobacteria (NTM), 33 (14.9 %) Mycobacterium sp, and one identified as a mixed culture of M. tuberculosis and M. avium complex. The most common NTM species were M. avium (23.8 %) and M. fortuitum (19.0 %). Most of the isolates (155/166-93.4 %) were susceptible to antimicrobial agents. Seven samples were resistant to isoniazid, and one presented multiresistance to isoniazid and rifampicin. This study shows the importance in performing sputum culture, when these samples are negative on bacilloscopy in diagnosing TB and mycobacteriosis. The treatment delay results in the maintenance of disease transmission and worsening of clinical symptoms.

Influência de diferentes densidades de energia do laser de baixa intensidade em fibroblastos derivados da polpa de dentes decíduos / Influence of low-level laser with different energy densities on pulp fibroblasts from human primary teeth

O objetivo deste trabalho foi comparar os efeitos de diferentes densidades de energia e irradiâncias do Laser de Baixa Intensidade (LBI), variando em função do tempo de irradiação e potência, na viabilidade e proliferação de fibroblastos derivados da polpa de dentes decíduos humanos (HPF). HPF foram cultivados em DMEM e usados entre a 4ª e 8ª passagem. Os grupos foram divididos de acordo com diferentes densidades de energia, variando: Tempo de irradiação - Grupo I Ia (1,2 J/cm2 - 5 mW - 10 s), Ib (2,5 J/cm2 - 5 mW - 20 s), Ic (3,7 J/cm2 - 5 mW - 30 s), Id (5,0 J/cm2 - 5 mW - 40 s), e Ie (6,2 J/cm2 - 5 mW - 50 s); ou potência - Grupo II IIa (1,2 J/cm2 - 5 mW - 10 s), IIb (2,5 J/cm2 - 10 mW - 10 s), IIc (3,7 J/cm2 - 15 mW - 10 s), IId (5,0 J/cm2 - 20 mW - 10 s), e IIe (6,2 J/cm2 - 25 mW - 10 s). Células não irradiadas - cultivadas em condições nutricionais regulares - 10% Soro Fetal Bovino (SFB) (If e IIf) e células não irradiadas - cultivadas em déficit nutricional - 1% SFB (Ig e IIg), foram consideradas controles positivos e negativos, respectivamente. A viabilidade e proliferação celular foram avaliadas, repesctivamente, pelas técnicas MTT e Cristal violeta (CV), nos períodos de 24, 48 e 72 horas após a irradiação. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística por ANOVA 2 critérios, seguido pelo teste de Tukey (P<0,05). No ensaio MTT, os controles negativos, Ig e IIg, apresentaram significativamente menor viabilidade em relação aos correspondentes grupos experimentais: IIa e IIb, 24 horas após a irradiação; Ia, Ib, Ie, If e IIf no período de 48 horas; e Ib-If, assim como, IIa-IIf após 72 horas. Nos diferentes períodos de avaliação do ensaio CV, todos os grupos, exceto Ie, IIe e If, exibiram significativamente maior proliferação em comparação aos respectivos controles negativos. Dentro de um mesmo grupo nos diferentes períodos, os grupos If e IIe apresentaram menor viabilidade durante o período de 24 horas em comparação ao período de 72 horas pelo ensaio MTT. Na avaliação intragrupos, o ensaio CV revelou menor proliferação no período de 24 horas em comparação aos períodos de 48 e 72 horas, independente do grupo avaliado. Os diferentes protocolos de irradiação, grupos I e II, não apresentaram diferença estatisticamente significativa na viabilidade e proliferação celular entre densidades de energia iguais com irradiâncias diferentes durante os períodos avaliados. De acordo com os resultados obtidos, as diferentes densidades de energia e irradiâncias propostas não prejudicaram a viabilidade e proliferação de fibroblastos pulpares de dentes decíduos humanos. A variação do protocolo de irradiação LBI, em função do tempo ou da potência, não interferiram nas respostas celulares após a aplicação da mesma densidade de energia com irradiâncias diferentes.(AU)

The aim of this study was to compare the effects of Low-level laser (LLL) with different energy densities and irradiances, varying according to the irradiation time and power, on cell viability and proliferation of pulp fibloblasts from human primary teeth (HPF). HPF were culture in DMEM and used between 4th and 8th passages. Groups were divided according to different energy densities, varying: Time of irradiation Ia (1.2 J/cm2 - 5 mW - 10 s), Ib (2.5 J/cm2 - 5 mW - 20 s), Ic (3.7 J/cm2 - 5 mW - 30 s), Id (5.0 J/cm2 - 5 mW - 40 s), and Ie (6.2 J/cm2 - 5 mW - 50 s); or output power - Grupo II IIa (1.2 J/cm2 - 5 mW - 10 s), IIb (2.5 J/cm2 - 10 mW - 10 s), IIc (3.7 J/cm2 - 15 mW - 10 s), IId (5.0 J/cm2 - 20 mW - 10 s), e IIe (6.2 J/cm2 - 25 mW - 10 s). Non-irradiated cells - grown in regular nutritional conditions - 10% Fetal Bovine Serum (FSB) (If and IIf) and non-irradiated cells - grown in nutritional deficit - 1% FBS (Ig and IIg) were considered positive and negative controls, respectively. Cell viability and proliferation were respectively assessed through MTT and Crystal violet (CV) assays at 24, 48 and 72h after irradiation. Data were submitted to statistical analysis by ANOVA 2 criteria, followed by Tukey test (P<0.05). In the MTT assay, the negative controls, Ig and IIg, showed significantly lower viability in relation to the corresponding groups: IIa and IIb 24 hours after irradiation; Ia, Ib, Ie, If and IIf at 48 hours period; and Ib-If, as IIa-IIf, after 72 hours. At different periods of evaluation of CV assay, all groups, except Ie, IIe and If, exhibited significantly higher proliferation compared to the respective negative controls. Within the same group at different periods, groups If and IIe showed lower viability during 24 hours compared to 72 hours period by MTT assay. In the intragroup evaluation, CV assay revealed lower proliferation at 24 hours compared to 48 and 72 hours periods, regardless of the evaluated group. Different irradiation protocols, groups I and II, showed no statistically significant differences on cell viability and proliferation among equals energy densities with different irradiances at the evaluated periods. According to these findings, different LLL energy densities and irradiances proposed did not impair viability and proliferation of pulp fibloblasts from human primary teeth. The variation of the LLL irradiation protocol, by the time or power, did not interfere in cellular responses after the application of the same energy density with different irradiances.(AU)

Spermatogonial stem cells as a therapeutic alternative for fertility preservation of prepubertal boys / Espermatogônias-tronco como uma alternativa para a preservação da fertilidade de meninos pré-púberes

ABSTRACT Spermatogonial stem cells, which exist in the testicles since birth, are progenitors cells of male gametes. These cells are critical for the process of spermatogenesis, and not able to produce mature sperm cells before puberty due to their dependency of hormonal stimuli. This characteristic of the reproductive system limits the preservation of fertility only to males who are able to produce an ejaculate. This fact puts some light on the increase in survival rates of childhood cancer over the past decades because of improvements in the diagnosis and effective treatment in pediatric cancer patients. Therefore, we highlight one of the most important challenges concerning male fertility preservation that is the toxic effect of cancer therapy on reproductive function, especially the spermatogenesis. Currently, the experimental alternative for fertility preservation of prepubertal boys is the testicular tissue cryopreservationfor, for future isolation and spermatogonial stem cells transplantation, in order to restore the spermatogenesis. We present a brief review on isolation, characterization and culture conditions for the in vitro proliferation of spermatogonial stem cells, as well as the future perspectives as an alternative for fertility preservation in prepubertal boys. The possibility of restoring male fertility constitutes a research tool with an huge potential in basic and applied science. The development of these techniques may be a hope for the future of fertility preservation in cases that no other options exist, e.g, pediatric cancer patients.

RESUMO As espermatogônias-tronco, presentes nos testículos desde o nascimento, são as células progenitoras dos gametas masculinos, e, desse modo, críticas para o processo de espermatogênese. Antes da puberdade, essas células não são capazes de produzir espermatozoides maduros, o que só ocorrerá após o estímulo hormonal. Essa característica do sistema reprodutivo limita a possibilidade de preservação da fertilidade apenas para homens capazes de produzir um ejaculado. Tal fato coloca em evidência o aumento nas taxas de sobrevivência de crianças com câncer nas últimas décadas, devido principalmente à melhora no diagnóstico e ao tratamento dos pacientes pediátricos. Dessa forma, destaca-se um dos mais importantes desafios relativos à preservação da fertilidade masculina, que é o efeito tóxico das terapias anticâncer para o sistema reprodutivo, especialmente a espermatogênese. Tendo isso em vista, a alternativa experimental atualmente estudada para a preservação da fertilidade de pacientes pré-púberes é a criopreservação de tecido testicular para futuro isolamento e transplante de espermatogônias-tronco, a fim de restabelecer a espermatogênese. Apresentamos aqui uma breve revisão sobre isolamento, caracterização e condições de cultivo para a proliferação de espermatogônias-tronco, bem como as futuras perspectivas, como alternativa para preservação da fertilidade de meninos pré-púberes. A possibilidade de restabelecer a fertilidade masculina é uma ferramenta de pesquisa com potencial enorme de uso na pesquisa básica e aplicada. O desenvolvimento dessas técnicas pode fornecer uma esperança futura de preservação de fertilidade nos casos em que não há nenhuma outra opção, como para os pacientes pediátricos de câncer.

Desenvolvimento e testes in vitro de um novo corante para terapia fotodinâmica em Periodontia / Development and in vitro tests of a new dye for photodynamic therapy in Periodontics

A terapia fotodinâmica antimicrobiana (Antimicrobial Photodynamic Therapy - aPDT) tem sido utilizada em Periodontia para redução bacteriana de bolsas periodontais na forma de tratamento adjuvante da raspagem e alisamento radicular. Seu efeito em cirurgias periodontais é pouco estudado. Pesquisas recentes têm procurado descobrir novos fotossensibilizadores para aumento da efetividade dessa terapia. O objetivo do presente estudo foi testar in vitro um novo corante à base de corantes fenotiazínicos para uso em aPDT, quanto à sua biocompatibilidade e efetividade em eliminar bactérias. Foram realizados testes para avaliar a desmineralização e desgaste causados pelo corante em esmalte e dentina bovinos, bem como o tempo de aplicação ideal para se conseguir efeitos semelhantes ao ácido cítrico; comportamento óptico dos novos corantes em relação aos corantes convencionais; teste de biocompatibilidade de fragmentos de raiz humana, tratados pelo corante, em culturas de fibroblastos gengivais humanos; efetividade dos novos corantes sozinhos ou associados ao laser na eliminação de S. aureus e E. coli. Nos experimentos de desmineralização e biocompatibilidade foi utilizado um laser vermelho (660nm, 30mW, 45J/cm2, 30s) e nos experimentos com bactérias laser vermelho (660nm, 100mW, 45J/cm2, 12s). As análises estatísticas foram realizadas com testes paramétricos e não paramétricos (p<0,05). Os resultados mostraram que o novo corante promoveu desmineralização em esmalte (perda de dureza 55,5% e desgaste 10,33μm) e dentina (perda de dureza 65,9% e desgaste 8,37μm) bovinos de forma semelhante ao ácido cítrico, sendo 180s, o tempo mais adequado. Nos ensaios ópticos, observou-se que o novo corante à base de azul de toluidina (NCTBO) reduziu a banda de absorção para 575nm e teve uma fotodegradação mais rápida, enquanto que à base de azul de metileno (NCMB) o pico manteve-se em 660nm com fotodegradação lenta. O crescimento de fibroblastos gengivais humanos sobre superfícies de raiz...

The antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) is used in Periodontics for reduction of bacteria in periodontal pockets as an adjuvant treatment to scaling and root planning. Recent researches aim at finding new photosensitizers in order to improve its effectiveness. The aim of this study was to test in vitro the biocompatibility and efficiency of eliminating bacteria of a new phenothiazine-based dye for aPDT in Periodontics. The following tests were performed: magnitude of demineralization and wear in bovine dentin and enamel fragments; the ideal time of application to obtain results similar to citric acid conditioning; optic behavior of new dye compared to conventional dyes; biocompatibility of human root fragments treated by the new dye in human gingival fibroblasts culture; effectiveness of the new dye in elimination of S. aureus and E. coli. In the experiments of demineralization and biocompatibility a red laser (660nm, 30mW, 45J/cm2, 30s) was applied, while in the microbiology experiments the parameters were changed (660nm, 100mW, 45J/cm2, 12s). The statistical analysis were done with parametric and non-parametric tests (p<0.05). The results showed that the new dye promoted demineralization in bovine enamel (surface hardness loss 55.5% and wear 10.33μm) and dentin (surface hardness loss 65.9% and wear 8.37μm). The demineralization was similar to citric acid and the ideal time of application was 180s. The optic tests showed that the toluidine blue-based new dye (TBOND) diminished the absorption band to 575nm and had a faster photodegradation. The methylene blue-based new dye (MBND) maintained a peak of absorption in 660nm and had a slower photodegradation. Growth of human gingival fibroblasts onto human root surfaces was similar to those treated with regular dyes (3.07 x 2.6 cells after 72h). The TBOND when used alone, reduced E. coli and S. aureus in 59.6% e 54.6%, respectively. When associated to laser, the reduction of E. coli was 52.6%. The MBND...

Collection of tracheal aspirate: safety and microbiological concordance between two techniques / Recolección de aspirado traqueal: seguridad y concordancia microbiológica entre dos técnicas / Colheita de aspirado traqueal: segurança e concordância microbiológica entre duas técnicas

Objective: To evaluate the safety of the performance of the traditional and protected collection techniques of tracheal aspirate and to identify qualitative and quantitative agreement of the results of microbiological cultures between the techniques. Method: Clinical, prospective, comparative, single-blind research. The sample was composed of 54 patients of >18 years of age, undergoing invasive mechanical ventilation for a period of ≥48 hours and with suspected Ventilator Associated Pneumonia. The two techniques were implemented in the same patient, one immediately after the other, with an order of random execution, according to randomization by specialized software. Results: No significant events occurred oxygen desaturation, hemodynamic instability or tracheobronchial hemorrhage (p<0.05) and, although there were differences in some strains, there was qualitative and quantitative agreement between the techniques (p<0.001). Conclusion: Utilization of the protected technique provided no advantage over the traditional and execution of both techniques was safe for the patient.
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Objetivo: Evaluar la seguridad de la ejecución de las técnicas tradicional y protegida de la recolección de aspirado traqueal e identificar la concordancia cualitativa y cuantitativa de los resultados de los cultivos microbiológicos entre estas técnicas. Método: Investigación clínica, prospectiva, comparativa, ciega simple. La muestra fue constituida por 54 pacientes mayores de 18 años que fueron sometidos a ventilación mecánica invasiva durante 48 horas o más y con sospecha de Neumonía Asociada a la Ventilación Mecánica. Las dos técnicas fueron implementadas en el mismo paciente, una inmediatamente posterior a la otra. El orden de ejecución de las técnicas fue aleatorio, hecho por un software especializado. Resultados: No hubo eventos significativos en la disminución de la saturación de oxígeno, inestabilidad hemodinámica y hemorragias traqueo bronquiales (p<0,05) y aunque ocurrieron diferencias en algunas cepas, hubo concordancia cualitativa y cuantitativa entre las técnicas (p<0,001). Conclusión: El uso de la técnica protegida no ofrece ninguna ventaja sobre la técnica tradicional y la aplicación de ambas técnicas es segura para el paciente.
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Objetivo: Avaliar a segurança da execução das técnicas tradicional e protegida de colheita de aspirado traqueal e identificar a concordância qualitativa e quantitativa dos resultados de culturas microbiológicas entre as técnicas. Método: Pesquisa clínica, prospectiva, comparativa, simples-cega. A amostra foi constituída de 54 pacientes com idade ≥18 anos, submetidos à ventilação mecânica invasiva por período ≥48 horas e com suspeita de Pneumonia Associada à Ventilação Mecânica. As duas técnicas foram implementadas no mesmo paciente, uma imediatamente seguida da outra, sendo a ordem de execução aleatória, segundo randomização por software especializado. Resultados: Não ocorreram eventos significativos de queda da saturação de oxigênio, instabilidade hemodinâmica e hemorragias traqueobrônquicas (p<0,05) e, embora tenham ocorrido divergências em algumas cepas, houve concordância qualitativa e quantitativa entre as técnicas (p<0,001). Conclusão: A utilização da técnica protegida não proporciona vantagem em detrimento da tradicional e a execução de ambas as técnicas foi segura para o paciente.
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In vitro cytotoxicity of self-curing acrylic resins of different colors

OBJECTIVE: The aim of this study was to assess the in vitro cytotoxicity of acrylic resins of different colors over time. METHODS: Specimens were divided into 4 groups (n = 6) according to the color of the acrylic resin (Orto Class, Clássico, Campinas, São Paulo, Brazil): Group 1: clear acrylic resin; group 2: pink acrylic resin; group 3: blue acrylic resin and group 4: green acrylic resin. All specimens were fabricated according to the mass manipulation technique and submitted to mechanical polishing protocol. The control was performed with an amalgam specimen (C+), a glass specimen (C-) and cell control (CC). Specimens were immersed in Minimum Eagle's Medium (MEM) and incubated for 24 h at 37o C. The extracts from the experimental material were filtered and mixed with L929 fibroblast. Cytotoxicity was evaluated at 4 different times, 24, 48, 72 and 168 h. After contact, cells were incubated for 24 h and added to 100 µ of 0.01% neutral red dye. The cells were incubated for 3 h for pigment incorporation and fixed. Cells viability was determined by a spectroscopic (BioTek, Winooski, Vermont, USA) with a 492-nm wavelength λ=492 nm). RESULTS: There were no statistical differences between the experimental groups and the CC and C- groups. CONCLUSION: Clear, pink, blue and green self-curing acrylic resins fabricated by means of the mass manipulation technique and mechanically polished are not cytotoxic. Neither the pigment added to the self-curing acrylic resin nor the factor of time influenced the cytotoxicity of the material. .

OBJETIVO: avaliar, in vitro, a citotoxicidade de resinas acrílicas autopolimerizáveis, de diferentes cores, ao longo do tempo. MÉTODOS: os corpos de prova foram divididos em quatro grupos (n = 3), de acordo com a cor da resina acrílica utilizada (Orto Class, Clássico, São Paulo/SP), sendo: grupo 1, acrílica incolor; grupo 2, acrílica rosa; grupo 3, acrílica azul; e, grupo 4, acrílico verde. Todos os corpos de prova foram confeccionados pela técnica de massa e polidos mecanicamente. Um corpo de prova de amálgama, um de vidro e célula constituíram o controle positivo (C+), controle negativo (C-), e controle de célula (CC), respectivamente. Em seguida, esses foram imersos em meio mínimo essencial de Eagle (MEM) por 24h, quando se removeu o sobrenadante e colocou-os em contato com fibroblastos L929. Avaliou-se a citotoxicidade em quatro períodos: 24, 48, 72 e 168h. Após o contato com o meio, as células foram incubadas por 24h e adicionou-se 100µ do corante vermelho neutro a 0,01%. Posteriormente, as células foram incubadas por 3h, para incorporação do corante, e fixadas. A contagem das células viáveis foi realizada em espectrofotômetro (BioTek, Winooski, EUA), com um comprimento de onda de 492nm (λ = 492nm). RESULTADOS: não houve diferença estatística entre os grupos experimentais e os grupos CC e C-. CONCLUSÇÕES: as resinas acrílicas autopolimerizáveis incolor, rosa, azul e verde, manipuladas pela técnica de massa e polidas mecanicamente não são citotóxicas. O corante utilizado em resinas autopolimerizáveis e tempo não influenciam na citotoxocidade do material. .

Effect of standard and neutral-pH peritoneal dialysis solutions upon fibroblasts proliferation / Efeito da solução de diálise peritoneal com pH neutro e padrão sobre a proliferação de fibroblastos

Introduction: Continuous exposition of the peritoneal membrane to conventional dialysis solutions is an important risk factor for inducing structural and functional alterations. Objective: To compare in vitro mouse fibroblast NIH-3T3 cell viability after exposition to a neutral pH dialysis solution in comparison to cells exposed to a standard solution. Methods: Experimental study to compare the effects of a conventional standard or a neutral-pH, low-glucose degradation products peritoneal dialysis solution on the viability of exposed fibroblasts in cell culture. Both solutions were tested in all the commercially available glucose concentrations. Cell viability was evaluated with tetrazolium salt colorimetric assay. Results: Fibroblast viability was significantly superior in the neutral pH solution in comparison to control, in all three glucose concentrations (Optical density in nm-means ± SD: 1.5% 0.295 ± 0.047 vs. 0.372 ± 0.042, p < 0.001; 2.3% 0.270 ± 0.036 vs. 0.337 ± 0.051, p < 0.001; 4.25% 0.284 ± 0.037 vs. 0.332 ± 0.032, p < 0.001; control vs. neutral pH respectively, Student t Test). There was no significant difference in cell viability between the three concentrations of glucose when standard solution was used (ANOVA p = 0.218), although cell viability was higher after exposition to neutral pH peritoneal dialysis fluid at 1.5% in comparison to 2.3 and 4.25% glucose concentrations (ANOVA p = 0.008: Bonferroni 1.5% vs. 2.3% p = 0.033, 1.5% vs. 4.25% p = 0.014, 2.3% vs. 4.25% p = 1.00). Conclusion: Cell viability was better in neutral pH dialysis solution, especially in the lower glucose concentration. A more physiological pH and lower glucose degradation products may be responsible for such results. .

Introdução: A exposição contínua da membrana peritoneal a soluções convencionais de diálise é um importante fator de risco para induzir alterações estruturais e funcionais. Objetivo: Comparar a viabilidade in vitro dos fibroblastos NIH-3T3 de camundongo após exposição à solução de diálise com pH neutro com células expostas à solução padrão. Métodos: Estudo experimental; ambas as soluções foram testadas em todas as concentrações de glicose comercialmente disponíveis. A viabilidade celular foi avaliada por ensaio colorimétrico de sal tetrazólio. Resultados: A viabilidade de fibroblastos foi melhor na solução de pH neutro em relação ao controle nas três concentrações de glicose (densidade óptica em nm-médias ± DP: 1,5% 0,295 ± 0,047 vs. 0,372 ± 0,042, p < 0,001; 2,3% 0,270 ± 0,036 vs. 0,337 ± 0,051, p < 0,001; 4,25% 0,284 ± 0,037 vs. 0,332 ± 0,032, p < 0,001; controle vs. pH neutro respectivamente, teste t de Student). Não houve diferença significativa na viabilidade celular entre as três concentrações de glicose quando solução padrão foi utilizada (ANOVA p = 0,218), embora a viabilidade celular tenha sido superior após exposição aos fluidos de diálise peritoneal neutros, pH 1,5% em comparação com 2,3 e 4,25% de concentrações de glicose (ANOVA p = 0,008: Bonferroni 1,5% vs. 2,3% p = 0,033, 1,5% vs. 4,25% p = 0,014, 2,3% vs. 4,25% p = 1,0). Conclusão: A viabilidade celular foi melhor em solução neutra de pH de diálise, especialmente nas menores concentrações de glicose. O pH fisiológico e com menos produtos de degradação de glicose podem ser responsáveis por estes resultados. .

Caracterização de osteoblastos diferenciados de células-tronco mesenquimais da medula óssea de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) / Characterization of osteoblasts differentiated from mesenchymal stem cells from spontaneously hypertensive rats (SHR) bone marrow

A hipertensão arterial representa um fator de risco sistêmico para várias doenças incluindo redução da massa óssea por aumentar a reabsorção e diminuir a formação óssea. Considerando que a formação óssea é resultante da atividade de osteoblastos, o objetivo deste estudo foi avaliar as características fenotípicas e genotípicas de células osteoblásticas diferenciadas de CTMs (células-tronco mesenquimais) de SHR. A partir de medulas ósseas de fêmures de SHR, CTMs foram obtidas por adesão ao plástico de cultura de células e diferenciadas em osteoblastos por cultura em meio osteogênico até que atingissem a subconfluência. Em seguida, as células foram subcultivadas na densidade de 2x104 células/poço em placas de 24 poços. Células obtidas de Wistar foram utilizadas como controle. Para a avaliação das respostas celulares foram realizados ensaios de proliferação celular, atividade de fosfatase alcalina (ALP), formação de matriz mineralizada e expressão gênica dos marcadores osteoblástico: 1) runt-related transcription fator 2 (RUNX2), 2) Osterix (OSX), 3) Fosfatase alcalina (ALP), 4) Proteína óssea morfogenética 2 (BMP2); 5) Sialoproteína óssea (BSP), 6) Osteocalcina (OC), 7) Osteopontina (OPN), 8) e Colágeno (COL), além dos receptores β1 e β2 adrenérgicos. Os dados foram comparados pelo teste ANOVA seguido do teste de Tukey, e o nível de significância adotado foi de 5% (p≤0,05). Células osteoblásticas de SHR apresentaram alterações no fenótipo osteoblástico, exibindo, em todos os períodos avaliados, menor proliferação celular, atividade de ALP e formação de matriz mineralizada. A expressão gênica de todos os marcadores ósseos também foi menor em SHR quando comparado com Wistar na maioria dos períodos avaliados. A expressão gênica do receptor β2 adrenérgico foi maior em SHR em todos os períodos avaliados e não foi detectada a expressão do receptor β1 tanto em SHR como em Wistar. Com base nesses resultados, podemos concluir que os osteoblastos diferenciados das CTMs...

Hypertension is a systemic risk factor for several diseases including reduction of bone mass by increasing bone resorption and reducing bone formation. Considering that bone formation results from osteoblast activity, the aim of this study was to assess the phenotypic and genotypic characteristics of osteoblastic cells differentiated from MSCs of SHR. Bone marrow was harvested from SHR femurs and MSCs were selected by adherence to plastic cell culture and differentiated into osteoblasts by culturing in osteogenic medium until subconfluence. Then, the cells were subcultured at a density of 2x104 cells / well in 24 well plates. Cells from Wistar rats were used as control. Cells responses were evaluated by assaying proliferation, alkaline phosphatase activity (ALP), mineralized matrix formation and the gene expression of the osteoblastic markers: runt-related 1) runt-related transcription fator 2 (RUNX2), 2) Osterix (OSX) 3) Alkaline phosphatase (ALP), 4) Bone morphogenetic protein 2 (BMP2); 5) Bone sialoprotein (BSP), 6) Osteocalcin (OC), 7) Osteopontin (OPN), 8) and Collagen type 1 alpha (COL), in addition to the gene expression of β1 and β2 adrenergic receptors. Data were compared by ANOVA followed by Tukey test and the level of significance was 5% (p ≤ 0.05). SHR derived osteoblasts showed changes in osteoblastic phenotype, exhibiting in all periods reduced cell proliferation, ALP activity and mineralized matrix formation. The gene expression of all bone markers was also lower in SHR compared with Wistar in many periods. The gene expression of the β2 adrenergic receptor was greater in SHR in all periods and it was not detected the expression of β1receptor either in SHR or Wistar. Based on these results, we conclude that osteoblasts differentiated from SHR MSCs exhibit reduced or delayed in the differentiation process. We also suggest that overexpression of β2 adrenergic receptors may have acted in prejudice of osteoblastic differentiation...