Purificación de una fracción de antígenos de tripomastigotes de Trypanosoma cruzi para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas / Purification of a trypomastigote antigen fraction from Trypanosoma cruzi for Chagas’ disease diagnosis

Los antígenos excretados/secretados por las formas tripomastigotes de T. cruzi (antígenos TESA) pertenecen a la familia de las transialidasas, las cuales son responsables de la transferencia de ácido siálico exógeno a moléculas aceptadoras en la superficie de los tripomastigotes. En el presente trabajo se purifican varias proteínas de los antígenos TESA utilizando cromatografía de afinidad con resina de sefarosa B4-concanavalina A, con la intención de ser utilizados en el diagnóstico de la enfermedad de Chagas. El buffer de elución contenía una mezcla de α-D-manopiranósido y α-D-glucopiranósido. Se realizó electroforesis unidimensional en gel con poliacrilamida para identificar las bandas purificadas y la prueba de inmunoelectrotransferencia para visualizar las bandas reactivas con el pool de sueros de individuos con infección por T. cruzi. El gel teñido con azul de Coomassie coloidal permitió visualizar 3 bandas de aproximadamente 220, 170, y 20 kDa. La inmunoelectrotransferencia utilizando un pool de sueros positivos, confirmados para la infección por T. cruzi, reveló 5 bandas inmunogénicas de 220, 120, 85, 50 y 32 kDa mientras que el revelado con diaminobenzidina permitió observar las bandas de 220, 120, 85, 50 32 y 20 kDa. Asimismo las bandas purificadas no fueron reconocidas en la inmunoelectrotransferencia por el pool de sueros confirmados como negativos. Estos resultados sugieren el potencial de estas proteínas purificadas de TESA para ser usadas como nueva herramienta para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas.

Trypanosoma cruzi excreted/secreted antigens (TESA) belong to the transialidase family, which are responsible for the transfer of exogenous sialic acid to accepting molecules at the trypomastigote surface. In the present study we purified several proteins from TESA antigens using affinity chromatography with sepharose B4-concanavalin A resin, with the purpose of using them for Chagas’ disease diagnosis. The elution buffer contained a mixture of α-D-manopiranosid and α-D-glucopiranosid. A unidimensional electrophoresis in polyacrilamide gel to identify the purified bands, and an immunoelectrotransference test with a pool of sera from T. cruzi infected individuals to visualize the reactive bands were carried out. The colloidal Coomassie blue stained gel allowed visualizing 3 bands of approximately 220, 170 and 20 kDa. The immunoelectrotransference using a pool of positive sera with confirmed T. cruzi infection showed 5 immunogenic 220, 120, 50 and 32 kDa bands, while a developing with diaminobenzidine showed 220, 120, 85, 50, 32 and 20 kDa bands. The purified bands were not recognized in an immunoelectrotransference test when a pool of confirmed negative sera was used. These results suggest the potential of these TESA purified proteins for using them as a new tool for Chagas’ disease diagnosis.

Uso de antígenos recombinantes para la evaluación serológica de Leishmaniasis visceral y Tripanosomiasis canina / Use of recombinant antigens for serological evaluation of canine visceral Leishmaniasis

Un estudio transversal fue desarrollado para evaluar la seroprevalencia de la leishmaniasis visceral zoonótica y la tripanosomiasis americana en 211 caninos mestizos de una zona endémica para los dos protozoarios en el sur del departamento del Tolima. Los anticuerpos séricos anti-Leishmania infantum y anti-Trypanosoma cruzi fueron determinados por medio de las técnicas ELISA y Western Blot, usando los antígenos recombinantes rK39 y TESA, respectivamente. Se realizó xenodiagnóstico a los animales seropositivos a T. cruzi. De acuerdo con los resultados, el 40,28% (85/211) y el 1,42% (3/211) de los caninos presentaron anticuerpos contra L. infantum y T. cruzi, respectivamente. El xenodiagnóstico fue negativo. Los resultados sugieren que los caninos pueden jugar un papel importante como reservorios de L. infantum y fuentes de infección para la población infantil del área de estudio. Sin embargo, los perros podrían tener un papel limitado en la transmisión de T. cruzi. Se hace necesario contar con un algoritmo de pruebas diagnósticas para confirmar el estado real de la infección de los animales y para establecer la presencia de reacciones cruzadas o coinfecciones.

A cross-sectional study was conducted in order to evaluate the seroprevalence of zoonotic visceral Leishmaniasis and American Trypanosomiasis in 211 mongrel dogs from an endemic area for the two protozoans in southern Tolima. Serum anti-Leishmania infantum and anti-Trypanosoma cruzi antibodies were determined by ELISA and Western Blot techniques, using rK39 and TESA recombinant antigens respectively. The Xenodiagnosis was performed on the seropositive to T. cruzi. According to the results, 40.28% (85/211) and 1.42% (3/211) of the dogs tested positive for antibodies against L. infantum and T. cruzi respectively. The Xenodiagnosis was negative. The results suggest that dogs may play an important role as reservoirs of L. infantum and infection sources for children in the study area. However, dogs may play a limited role in the transmission of T. cruzi. It is necessary to have an algorithm for diagnostic tests to confirm the actual status of the animals’ infection and to establish the presence of cross-reactions or co-infections.