Demyelination in experimental intraventricular neurocysticercosis / Desmielinização na neurocisticercose intraventricular experimental

Abstract Neurocysticercosis (NCC) is classified as a neglected tropical disease, which affects mainly Latin America and Africa in spite of some reports in North America and Europe. NCC represents the cause of up to 30% of the reported cases of epilepsy in endemic countries. The NCC injuries present direct relation to the development stage, location, and number of parasites as well as to the host immune response. This study aimed the characterization of the inflammatory response and tissue injuries by means of the analyses of the periventricular and parenchymatous demyelination through the experimental intraventricular NCC infection. Therefore, BALB/c mice were submitted to experimental NCC inoculation with Taenia crassiceps cysticerci. Their brains were removed at 7, 30, 60, and 90 days after the inoculation (DAI), and analyzed after staining with hematoxylin and eosin (HE), Luxol Fast Blue, and Nissl. It was possible to observe ventriculomegaly, inflammatory infiltration composed by polymorphonuclear and mononuclear cells, and foamy macrophages. The presence of inflammatory cells was associated with neurodegeneration detected by the areas with demyelination observed initially in the periventricular area and lately in the parenchyma. In conclusion, the presence of cysticerci and the consequent inflammation were able to promote initial periventricular demyelination followed by parenchymatous demyelination as the infection progressed.

Resumo A neurocisticercose (NCC) é classificada como uma doença tropical negligenciada que afeta principalmente a América Latina e a África, apesar de alguns relatos na América do Norte e na Europa. A NCC é responsável por cerca de 30% dos casos de epilepsia em países endêmicos. Estas lesões parecem ter estreita relação com o estádio de desenvolvimento, com a localização e o número de parasitas, bem como a resposta imune do hospedeiro. O presente estudo objetivou caracterizar a resposta de células inflamatórias e as lesões teciduais pela análise da desmielinização periventricular e parenquimatosa ao longo da infecção experimental de NCC intraventricular. Para tanto, camundongos BALB/c foram submetidos a NCC experimental através da inoculação de cisticercos de Taenia crassiceps. O encéfalo foi retirado aos 7, 30, 60 e 90 dias após inoculação (DAI) e analisado após coloração por Hematoxilina e Eosina (HE), Luxol Fast Blue e Nissl. Observou-se ventriculomegalia, processo de infiltração inflamatório composto por células polimorfonucleares, mononucleares e macrófagos espumosos. A presença de células inflamatórias foi associada com neurodegeneração, observada pelas áreas de desmielinização que foram inicialmente periventricular e mais tardiamente no parênquima. Em conclusão, observa-se que a presença dos cisticercos e a inflamação foram capazes de promover desmielinização periventricular inicial e parenquimatosa conforme houve progressão tardia da infecção.

Experimental neurocysticercosis: absence of IL-4 induces lower encephalitis / Neurocisticercose experimental: ausência de IL-4 induz menos encefalite

ABSTRACT Neurocysticercosis (NCC) is the most severe clinical manifestation of cysticercosis. One of the factors responsible for its symptomatology is the host inflammatory response. Therefore the influence of interleukin 4 (IL-4) on the induction of encephalitis in experimental NCC was evaluated. Methods BALB/c (WT) and BALB/c (IL-4-KO) mice were inoculated intracranially with Taenia crassiceps cysticerci and euthanized at 7, 30, 60 and 90 days later, the encephala removed and histopathologically analyzed. Results The absence of IL-4 induced greater parasitism. In the initial phase of the infection, IL-4-KO showed a lower intensity in the inflammatory infiltration of polimorphonuclear cells in the host-parasite interface and intra-parenquimatous edema. The IL-4-KO animals, in the late phase of the infection, showed lower intensity of ventriculomegaly, encephalitis, and meningitis, and greater survival of the parasites in comparison with the WT animals. Conclusion The absence of IL-4 induced lower inflammatory infiltration, ventriculomegaly and perivasculitis in experimental NCC.

RESUMO A Neurocisticercose (NCC) é a manifestação clínica mais severa da cisticercose, e um dos fatores responsáveis pela sintomatologia é a resposta inflamatória do hospedeiro. Desta forma avaliou-se a influência da interleucina 4 (IL-4) na indução de encefalite na NCC experimental. Métodos Camundongos das linhagens BALB/c (WT) e BALB/c (IL-4-KO) foram inoculados intracranialmente com cisticercos de Taenia crassiceps e eutanasiados aos 7, 30, 60 e 90 dias após a infecção, os encéfalos foram removidos e analisados histopatologicamente. Resultados A ausência da IL-4 induziu um maior parasitismo nos animais. Na fase inicial da infecção os animais IL-4-KO apresentaram menor intensidade tanto de infiltrado inflamatório de polimorfonucleares na interface parasito-hospedeiro quanto de edema intraparenquimatoso. Os animais IL-4-KO, na fase tardia, apresentaram menor intensidade de ventriculomegalia, encefalite, meningite e maior sobrevivência dos cisticercos em relação aos animais WT. Conclusão A ausência da IL-4 induz menos infiltrado inflamatório, ventriculomegalia e perivasculite na NCC experimental.

A non-hepatotropic parasite infection increases mortality in the acetaminophen-induced acute liver failure murine model: possible roles for IL-5 and IL-6

We evaluated the effects of a non-hepatotropic parasite infection (Taenia crassiceps) on the outcome of acetaminophen-induced acute liver failure in mice. Uninfected and T. crassiceps infected mice orally received either 300 mg/kg acetaminophen or water as vehicle (n = 5 per group). Survival analysis, hepatocyte necrosis, alanine aminotransferase (ALT) levels, CYP2E1 protein, interleukin (IL-) 5, and IL-6 were assessed for all groups. All infected mice died within 16 h after exposure to acetaminophen (Tc+APAP group), whereas only one-third of uninfected animals exposed to acetaminophen (APAP group) died. Uninfected (Control group) and infected (Tc group) mice that received the vehicle showed no liver damage. Tc+APAP mice exhibited massive liver necrosis characterised by marked balloning degeneration of hepatocytes and higher serum ALT compared to Control, Tc, and APAP animals. Liver tissue from Tc+APAP mice also displayed increased expression of CYP2E1 protein and higher mRNA and protein levels of IL-5 and IL-6 compared to the other groups. These findings suggest that non-hepatotropic parasite infections may increase mortality following acute liver failure by promoting hepatocyte necrosis via IL-5 and IL-6-dependent CYP2E1 overproduction. This study identifies new potential risk factors associated with severe acute liver failure in patients.

Relevant peptides of Taenia crassiceps for the diagnosis of bovine cysticercosis by immunoblot / Peptídeos relevantes de Taenia crassiceps para o diagnóstico da cisticercose bovina pelo immunoblot

Given the limited knowledge about the diagnosis of bovine cysticercosis by immunoblot, the aim of this study was to assess the applicability of this test, identifying key peptides with diagnostic value. Immunoblot assays were performed using total larval antigen of Taenia crassiceps and 60 sera of positive bovines for cysticercosis (30 naturally and 30 experimentally infected with T. saginata eggs), 30 sera of negative bovines for cysticercosis and 30 sera of bovines with other diseases (fascioliasis, hydatidosis and tuberculosis). The peptides of greater diagnostic importance, in descending order of accuracy (%), were as follows: 6-8kDa (90.8%), 129-143kDa (74.2%), 99-105kDa (71.7%) and 14-19kDa (71.1%). Cross-reactions, due to fascioliasis and hydatidosis, were observed in the four intervals of peptides highlighted. The results demonstrate that the total antigen of T. crassiceps has peptides with a high diagnostic potential; therefore, the immunoblot is useful in the diagnosis of bovine cysticercosis.

Tendo em vista o conhecimento limitado sobre o diagnóstico da cisticercose bovina pelo immunoblot, o objetivo deste trabalho foi avaliar a aplicabilidade desse teste, identificando os principais peptídeos com valor diagnóstico. Foram realizados ensaios de immunoblot, utilizando antígeno total de larva de Taenia crassiceps e 60 soros de bovinos positivos para a cisticercose (30 naturalmente e 30 experimentalmente infectados com ovos de T. saginata), 30 soros de bovinos negativos para a cisticercose e 30 soros de bovinos com outras patologias (fasciolose, hidatidose e tuberculose). Os peptídeos de maior importância diagnóstica, em ordem decrescente de acurácia (%), foram os seguintes: 6-8 kDa (90,8%), 129-143 kDa (74,2%), 99-105 kDa (71,7%) e 14-19 kDa (71,1%). Reações cruzadas, em decorrência da fasciolose e hidatidose, foram observadas nos quatro intervalos de peptídeos ressaltados. Os resultados demonstram que o antígeno total de T. crassiceps possui peptídeos com alto potencial diagnóstico, sendo, portanto, o immunoblot útil no diagnóstico da cisticercose bovina.

IgG Antibody responses in mice coinfected with Toxocara canis and other helminths or protozoan parasites / Anticorpos IgG em camundongos coinfectados por Toxocara canis e outros helmintos e por protozoários parasitos

The immune response expressed by IgG antibodies in BALB/c mice experimentally infected with Toxocara canis, was studied with the aim of verifying the possible in vivo cross-reactivity between antigens of T. canis and other parasites (Ascaris suum, Taenia crassiceps, Schistosoma mansoni, Strongyloides venezuelensis and Toxoplasma gondii). Experiments included three groups of mice: one infected only by T. canis, another with one of the other species of parasites and a third concomitantly infected with T. canis and the other species in question. Animals were bled by orbital plexus at 23, 38 and 70 days post infection (p.i.). Sera were analyzed for anti-Toxocara antibodies by ELISA and Immunoblotting, using excretion-secretion antigens (ES), obtained from culture of third-stage larvae of T. canis. For all experiments a control group comprised by ten non-infected mice was used. Only in the case of A. suum infection, in these experimental conditions, the occurrence of cross-reactivity with T. canis was observed. However, in the case of co-infection of T. canis - S. mansoni, T. canis - S. venezuelensis and T. canis - T. crassiceps the production of anti-Toxocara antibodies was found at levels significantly lower than those found in mice infected with T. canis only. Co-infection with S. mansoni or S. venezuelensis showed lower mortality rates compared to what occurred in the animals with single infections. Results obtained in mice infected with T. canis and T. gondii showed significant differences between the mean levels of the optical densities of animals infected with T. canis and concomitantly infected with the protozoan only in the 23rd day p.i.

Estudou-se a resposta imune humoral expressa por anticorpos da classe IgG em camundongos BALB/c experimentalmente infectados com Toxocara canis em duas situações distintas. Na primeira, com o objetivo de verificar in vivo a possível reatividade cruzada entre Toxocara canis e outros parasitos (Ascaris suum, Taenia crassiceps, Schistosoma mansoni, Strongyloides venezuelensis e Toxoplasma gondii), foram realizados experimentos constituídos por três grupos de camundongos: um infectado apenas por Toxocara canis, outro com uma das demais espécies de parasitos estudados e um terceiro concomitantemente infectado por Toxocara canis e a espécie em questão. Todos os animais foram sangrados, através do plexo orbitário, 23, 38 e 70 dias após infecção. Os soros foram analisados para a presença de anticorpos anti-Toxocara por meio de teste imunoenzimático (ELISA) e por Immunoblotting, empregando-se antígeno de excreção-secreção (ES), obtido a partir da cultura de larvas de terceiro estádio de Toxocara canis. Para todos os experimentos utilizou-se grupo controle negativo constituído por 10 camundongos não infectados. Apenas no caso da infecção por Ascaris suum, nas condições experimentais observadas, logrou-se demonstrar ocorrência de reatividade cruzada com antígenos de Toxocara canis. Verificou-se, entretanto, no caso das coinfecções entre Toxocara canis-Schistosoma mansoni, Toxocara canis-Strongyloides venezuelensis e Toxocara canis-Taenia crassiceps produção de anticorpos anti-Toxocara em níveis significativamente inferiores do que os encontrados nos camundongos infectados somente por Toxocara canis. Nas coinfecções com Schistosoma mansoni ou Strongyloides venezuelensis observou-se, também, menor taxa de letalidade quando comparada à ocorrida nos animais com as respectivas infecções simples.

Experimental encephalitis caused by Taenia crassiceps cysticerci in mice / Encefalite experimental causada por cisticercos de Taenia crassiceps em camundongos

OBJECTIVES: To present the experimental model of neurocysticercosis (NCC) caused by Taenia crassiceps cysticerci, to describe the inflammatory process, susceptibility, or resistance of BALB/c and C57BL/6 mice to this infection, and to describe the host-parasite relationship. METHODS: The animals were intracranially inoculated with initial stage T. crassiceps cysticerci. They were euthanized at 7, 30, 60, and 90 days after the inoculation. Their encephala were removed for the histopathologic analysis, classification of the parasites, and inflammatory lesions. RESULTS: Experimental NCC was observed on both mice lineages. BALB/c mice presented inflammatory lesions with greater intensity, inducing necrosis on late stage parasites, and with an acute inflammation pattern, while C57BL/6 mice showed greater capability on provoking early necrosis in the cysticerci, which showed a chronic inflammation pattern. CONCLUSIONS: This experimental model induced NCC on mice with characteristic inflammation and lesions. C57BL/6 mice were able to induce precocious necrosis of the parasites presenting inflammatory lesions with lower intensity.

OBJETIVOS: Apresentar o modelo experimental de neurocisticercose (NCC) com cisticercos de Taenia crassiceps, descrever a inflamação, suscetibilidade e resistência em camundongos BALB/c e C57BL/6, caracterizando melhor a relação parasito-hospedeiro. MÉTODOS: Os animais foram inoculados intracranialmente com cisticercos de T. crassiceps em estádio inicial e eutanasiados aos 7, 30, 60 e 90 dias após a infecção. Retiraram-se os encéfalos para análise histopatológica, classificação dos parasitos e lesões inflamatórias. RESULTADOS: Foi possível induzir NCC nas duas linhagens de camundongos utilizados como modelo experimental. Os animais BALB/c apresentaram lesões inflamatórias mais intensas do que os camundongos C57BL/6 e induziram nos parasitos necrose na fase tardia com padrão inflamatório agudo. Os C57BL/6 mostraram-se mais hábeis em provocar necrose precocemente nos cisticercos, mas com padrão inflamatório crônico. CONCLUSÕES: Este modelo experimental induziu NCC nos animais com inflamações e lesões. Os camundongos C57BL/6 foram hábeis em induzir precocemente necrose nos parasitos, apresentando lesões inflamatórias com menor intensidade.

Avaliação da imunidade protetora induzida com antígeno bruto e purificado de Taenia crassiceps contra cisticercose murina / Evaluation of protective immunity induced by crude and purified antigens of Taenia crassiceps against murine cysticercosis

A neurocisticercose é a forma mais severa relacionada ao complexo teníase-cisticercose, causada pela Taenia solium. Diversas medidas de controle já foram propostas, ressaltando a profilaxia via hospedeiro intermediário com o desenvolvimento de vacinas contra a cisticercose suína, que podem ser previamente avaliadas em um modelo experimental intraperitoneal com cisticercos de Taenia crassiceps, em camundongos Balb/c, constituindo a cisticercose murina. No presente trabalho foram avaliados: a resposta imune humoral pela pesquisa de anticorpos IgG anti-T. crassiceps por teste ELISA e Imunoblot, relação IgG1/IgG2a e, análise dos índices de avidez; a resposta imune celular, de acordo com os resultados de proliferação celular, dosagem de citocinas e teste de hipersensibilidade tardia (HTT) e; o índice de proteção (IP) induzido por antígeno bruto (LV-total) e purificado (18/14) de T. crassiceps, com ou sem o auxílio de adjuvantes, sob protocolos de imunização ativa por via subcutânea e oral. Paralelamente à análise de imunização ativa, houve avaliação do protocolo de imunização passiva com anticorpos monoclonais (AcMo) anti-T. crassiceps. Foram analisados 19 grupos experimentais divididos em três protocolos de imunização ativa por via subcutânea. No protocolo I foram avaliados três grupos experimentais imunizados com 10µg de 18/14, uma dose, e auxílio dos adjuvantes PSS/DDA, Al(OH)3 ou sem o auxílio destes. Os grupos apresentaram IP entre 24,9% e 51,8%. No protocolo II foram analisados nove grupos imunizados com 5, 10 ou 20µg de 18/14 e diferentes esquemas de adjuvantes: DODAB (IP entre 90,3% e 100,0%), PSS/DDA (IP entre 63,6% e 70,1%) ou Al(OH)3 (IP entre 60,7% e 100,0%). Comparando as concentrações antigênicas, os grupos apresentaram maiores IP quando imunizados com 5 ou 10µg de 18/14. No protocolo III foram analisados sete grupos imunizados com 20, 40 e/ou 60µg de 18/14, com duas ou três doses, em diferentes esquemas de adjuvantes: PSS/DDA e Al(OH)3 ou sem adjuvantes, com IP entre 63,5% e 100,0%. A avaliação da resposta imune humoral dos grupos imunizados por via subcutânea demonstraram a presença de anticorpos IgG por teste ELISA em todos os grupos imunizados, sem correlação dos índices de reatividade (IR) com os IP. Por imunoblot, foram reconhecidas, pelo menos, as proteínas de 14 e 18 kDa após 15 (T15), 30 (T30) e/ou 60 (T60) dias contados a partir da 1ª dose de imunização. Os grupos imunizados por via subcutânea que apresentaram IP> 90,0% tiveram relação IgG1/IgG2a >1,0 no T30 e <1,0 no T60. Quanto à avaliação da resposta imune celular, 10 dos 12 grupos avaliados por ensaios de proliferação de células obtidas de linfonodos induzidas por 18/14 apresentaram índices de estimulação (IE) positivos, enquanto que o antígeno L-Vtotal demonstrou-se imunossupressor nestes experimentos. A análise de dois grupos imunizados de forma ativa, por via subcutânea, com IP=100%, mostrou o predomínio de citocinas com polarização Th1 (IFN-γ) no T60 e Th2 (IL-4) no T120. Não houve correlação dos IP com os resultados obtidos com HTT, porém, os resultados foram variáveis de acordo com o perfil antigênico e o adjuvante utilizado pela via subcutânea. Sequencialmente foram analisados seis grupos imunizados de forma ativa, por via oral, com 10, 20 ou 30µg de LV-total, uma ou duas doses, com o auxílio de Al(OH)3 que apresentaram IP entre 48,3% e 100,0%, sem diferença significativa entre os grupos, exceto com o grupo imunizado com duas doses de 30µg, o qual apresentou 100,0% de IP. No T15 e T30 os IR obtidos em teste ELISA para pesquisa de anticorpos IgG anti-T. crassiceps foram entre 0,9 e 2,4, enquanto que no T60 entre 2,6 e 5,1. Por Imunoblot, foram reconhecidas as proteínas de 14, 18, 30 e >40kDa no T60. A relação IgG1/IgG2a foi <1,0 no T30 e no T60, enquanto que HTT foi apresentado <40,0% no T30 e T60. Adicionalmente aos ensaios de imunização ativa, seis grupos de camundongos Balb/c imunizados de forma passiva com anticorpos monoclonais anti-T. crassiceps apresentaram IP até 93,0%. De acordo com os resultados obtidos, antígenos bruto e purificado de T. crassiceps foram considerados promissores para imunização murina, principalmente o 18/14 quando utilizado com DODAB ou hidróxido de alumínio pela via subcutânea. Os mecanismos protetores não foram totalmente elucidados, porém, demonstram polarização para resposta Th1 e proteção parcial dependente de IgG, demonstrada pelos ensaios de imunização passiva

Neurocysticercosis is the most severe form of infection related to the complex taeniasis-cysticercosis, caused by Taenia solium. Several control measures have been proposed, emphasizing the prophylaxis via intermediate host through the development of vaccines against porcine cysticercosis, which may be previously evaluated in an intraperitoneal experimental model using cysticercus of Taenia crassiceps, in Balb/c mice, constituting the murine cysticercosis. In this study were evaluated: the humoral immune response by search of anti-T. crassiceps IgG antibody by ELISA and Immunoblot assays, IgG1/IgG2a ratio and, analysis of avidity indices; the cellular immune response by proliferation assay, cytokine maeasurements and delayed hypersensitivity assay (DHA) and; protection index (PI) induced by crude antigen (total-VF) and purified (18/14) of T. crassiceps, with or without adjuvants, through active immunization protocols by subcutaneous and oral administration. In parallel to the active immunization was performed the evaluation of passive immunization protocol with anti-T. crassiceps monoclonal antibodies (AcMo). Were analyzed 19 experimental groups, divided into three active immunization protocols by subcutaneous via. In I Protocol were evaluated three experimental groups which were immunized with 10µg of 18/14 antigen, one dose, with or without PSS/DDA, Al(OH)3 adjuvants. These groups showed PI between 24,9% and 51,8%. In II Protocol were evaluated nine experimental groups which were immunized with 5, 10 or 20µg of 18/14 antigen, using different schemes of adjuvants: DODAB (PI between 90,3% and 100,0%), PSS/DDA (PI between 63,6% and 70,1%) or Al(OH)3 (PI between 60,7% and 100,0%). Comparing the concentrations antigenic, groups had higher IP when immunized with 5 or 10µg of 18/14 antigen. In III Protocol were evaluated seven groups immunized with 20, 40 and/or 60µg of 18/14 antigen, with two or three doses, using also different schemes of adjuvants: PSS/DDA and Al(OH)3 adjuvants or without them, showing PI between 63,5% and 100,0%. The evaluation of humoral immune response of all subcutaneous immunizated groups demonstrated the presence of IgG antibodies by ELISA in all immunized groups, without correlation between reactivity indices (RI) and PI. By immunoblot, were recognized at least the 14 and 18 kDa proteins after 15 (T15), 30 (T30) and/or 60 (T60) days from the first dose immunization. The groups immunized subcutaneously that showed PI > 90,0% had IgG1/IgG2a ratio >1,0 in T30 and <1,0 at T60. About the cellular immune response evaluation, 10 among 12 groups evaluated by proliferation assays using lymphonodes stimulated with 18/14 antigen showed indices of stimulation (IS) positive, while the VF-total antigen was shown immunosuppressive in these experiments. The analysis of two groups actively immunized subcutaneously with PI equal to 100%, showed predominance of cytokines tending to Th1 (IFN-γ) in T60 time and Th2 (IL-4) in T120 time. There was no correlation between PI indices and the results obtained from the DHA, however, the results varied according to the antigenic profile and the adjuvant subcutaneously used. Sequentially were analyzed six groups actively immunized by oral via, with 10, 20 or 30µg of LV-total, one or two doses, supported by Al(OH)3 adjuvant which showed PI between 48,3% and 100,0%, with no significant difference between the groups, except the group immunized with two doses of 30µg, which had PI of 100,0%. In T15 and T30 times the reactivity indices obtained by ELISA test for the detection of IgG anti-T. crassiceps antibodies were between 0,9 and 2,4, while in T60 time they were between 2,6 and 5,1. By Immunoblot, were recognized the 14, 18, 30 and > 40kDa proteins in T60 time. The IgG1/IgG2a ratio was <1,0 in T30 and T60 time, while DHA was presented <40,0% in T30 and T60. In addition to the active immunization assays, groups of six Balb/c mice were passively immunized with anti-T. crassiceps monoclonal antibodies and they showed PI up to 93,0%. According to the obtained results, crude and purified antigens of T. crassiceps were considered promising for murine immunization, especially when 18/14 antigen was used together with DODAB or aluminum hydroxide subcutaneously. The protective mechanisms have not been fully elucidated, however, showed trend towards Th1 response and dependent partial protection of IgG, as demonstrated by passive immunization assays

Seroepidemiological study of human cysticercosis with blood samples collected on filter paper, in Lages, State of Santa Catarina, Brazil, 2004-2005 / Estudo soroepidemiológico da cisticercose humana com amostras de sangue total coletado em papel filtro, em Lages, Estado de Santa Catarina, 2004-2005

INTRODUCTION: Human serofrequency of antibodies against Taenia solium antigens was determined and risk factors for cysticercosis transmission were identified. METHODS: Individuals (n=878) from periurban and rural locations of Lages, SC, were interviewed to gather demographic, sanitary and health information. Interviews and blood sample collections by finger prick on Whatman filter paper were performed from August 2004 to May 2005. Observation determined that 850 samples were suitable for analysis and were tested by ELISA using vesicular fluid of Taenia crassiceps heterologous antigen. To ensure the reliability of the results, 77 samples of the dried blood were matched with sera. The reactive samples were submitted to a serum confirmatory immunoblot (IB) test using purified Taenia crassiceps glycoproteins. RESULTS: The ELISA results for the dried blood and serum samples were statistically consistent. ELISA was positive in 186 (21.9 percent) out of 850 individuals. A group of 213 individuals were asked to collect vein blood for IB (186 with positive result in ELISA and 27 with inappropriate whole blood samples) and 130 attended the request. The IB was positive in 29 (3.4 percent) out of 850 individuals. A significant correlation (p = 0.0364) was determined among individuals who tested positive in the IB assay who practiced both pig rearing and kitchen gardening. CONCLUSIONS: ELISA with dried blood eluted from filter paper was suitable for cysticercosis population surveys. In Lages, human infection was associated with pig rearing and kitchen gardening. The prevalence index was compatible with other Latin American endemic areas.

INTRODUÇÃO: O primeiro levantamento sobre cisticercose humana e identificação dos fatores de risco associados à transmissão, foram realizados em Lages, SC. MÉTODOS: Oitocentos e setenta e sete voluntários de regiões periurbana e rural foram entrevistados e forneceram informações demográficas e condições sanitárias e de saúde. Amostras de sangue foram coletadas por meio de punção digital em papel filtro entre agosto 2004 e maio 2005. Verificou-se que 850 amostras estavam adequadas para análise. No ELISA, utilizou-se o antígeno heterólogo liquido vesicular de Taenia crassiceps. Para assegurar a confiabilidade dos resultados de ELISA, foram pareadas 77 amostras de soro e sangue eluido do papel filtro. A confirmação do diagnóstico sorológico foi feita por immunoblot (IB) com glicoproteínas purificadas de Taenia crassiceps. RESULTADOS: A reatividade de IgG eluída de sangue em papel filtro mostrou-se compatível com a dos soros correspondentes. A triagem por ELISA de 850 indivíduos revelou 186 (21,9 por cento) positivos. De 213 pessoas convidadas a colher soro para IB (186 ELISA positivo e 27 com amostras de sangue total inadequadas), compareceram 130. O IB foi positivo em 29 (3,4 por cento) de 850 amostras. Houve correlação significativa entre IB positivo e a prática de criação de suínos e de horta caseira (p = 0,0364). CONCLUSÕES: ELISA com sangue total em papel filtro mostrou-se adequado para inquéritos populacionais para cisticercose. A transmissão da cisticercose humana na área estudada mostrou correlação com criação suína domestica e horta caseira. A prevalência obtida foi semelhante à relatada em áreas endêmicas da América Latina.

Detecção de peptídeos importantes para o diagnóstico da cisticercose bovina no immunoblot / Detection of important peptides for bovine cysticercosis diagnosis in immunoblot

A dificuldade de se localizar cisticercos em bovinos com infecção discreta torna o diagnóstico tradicional da cisticercose bovina em matadouros um recurso de baixa sensibilidade, o que gera uma demanda de diagnóstico por métodos alternativos como o immunoblot. Para tanto, neste trabalho, foram realizados ensaios de immunoblot a fim de analisar os peptídeos responsáveis pela reação do antígeno vesicular de Taenia crassiceps. Foram utilizadas 28 amostras de soro de bovinos comprovadamente negativos e 28 amostras coletadas de bovinos infectados experimentalmente com ovos de Taenia saginata. Os resultados dos ensaios de immunoblot com as amostras de soros-controle mencionadas indicaram que os peptídeos de 4-6, 14 e 18kDa destacaram-se entre os demais, mostrando altas taxas de desempenho no diagnóstico da cisticercose bovina e uma aparência diferenciada, com área e largura maiores, ao contrário dos peptídeos de média e alta massa molecular, que se apresentaram sob a forma de linha e com reações inespecíficas. O immunoblot mostrou ter um potencial como uma alternativa de diagnóstico da cisticercose bovina, incluindo sua aplicação em animais vivos, como método auxiliar de diagnóstico em estudos epidemiológicos da doença.

The diagnosis of cysticercosis in bovines that presents discreet infection is committed by the conventional methodology of detection employed in slaughterhouses. This deficiency leads to the development of alternative methods, such as immunoblot, in order to improve the detection of this disease. An immunoblot assay was developed to detect peptides from Taenia crassiceps antigenand it was used to test 56 samples of bovine serum (28 confirmed as negative and 28 from experimentally infected animals with Taenia saginata eggs). The peptides 4-6, 14 and 18 kDa showed better performance in bovine cysticercosis diagnosis due to an enhanced appearance, once they showed higher area and wide, contrasting with medium and high molecular weight peptides, that showed unspecific reactions and discreet appearance. The obtained results indicated that immunoblot can represent a potential alternative in bovine cysticercosis diagnosis, including its use in live animals, improving the detection of this disease even in epidemiological studies.

Ensaios de padronização do teste ELISA para diagnósticoda cisticercose bovina utilizando antígenos de larvade Taenia crassiceps / ELISA test standardization for the diagnosis of bovine cysticercosis employing Taenia crassiceps metacestode antigens

Os antígenos total e vesicular de Taenia crassiceps e soros-controle de bovinos positivos e negativos para a cisticercose foramcomparados por meio de alguns parâmetros de padronização do teste ELISA, visando avaliar o seu desempenho no diagnósticoda referida doença. Os parâmetros avaliados foram: diferentes concentrações dos antígenos, diluições de soros e conjugados,marcas de placa e substâncias bloqueadoras das placas. As diluições 1:25 de soro e 1:2.500 de conjugado para o antígenode líquido vesicular e 1:5.000 para o antígeno total, o leite desnatado e as maiores concentrações dos antígenos testadas (1,2 e 4 µg/orifício) foram os critérios de padronização que proporcionaram maior diferenciação entre soros positivos e negativos,conseqüentemente, melhor desempenho do teste ELISA.

Using the cyst fluid and the total antigens of Taenia crassiceps and positive and negative bovine control sera, some standardizationparameters of one ELISA were compared, in order to evaluate its performance in the diagnosis of the bovine cysticercosis. Thereferred parameters were different antigen concentrations, dilutions of sera and conjugated, plate marks and blocking substances.The 1:25 dilution sera and 1:2.500 dilution conjugated for the cyst fluid antigen and 1:5.000 for the total antigen, the skimmedmilk and the largest antigens concentrations (1, 2 and 4 µg/well) improved the differentiation among positive and negative sera,consequently, they were the best criteria for the bovine cysticercosis determination employing the ELISA.

Hacia el desarrollo de una vacuna en contra de la cisticercosis porcina basada en la paramiosina de Taenia solium

La paramiosina de Taenia solium (TPmy) es un antígeno inmunodominante de la cisticercosis humana y porcina. Se trata de una proteína de 100 kDa con una estructura alfa-hélice superenrollada asociada al músculo y a estructuras tegumentarias del cisticerco. La TPmy tiene la propiedad de unirse al C1q e inhibir la cascada del complemento. La TPmy probablemente se une al C1q a través sus dominios tipo colágena y podría estar relacionada con una estrategia parasitaria para modular la respuesta inmune del huésped. En el hombre y en el ratón, la respuesta inmune humoral en contra de la TPmy está preferentemente dirigida hacia el extremo carboxilo terminal mientras que el extremo amino terminal de la TPmy induce una respuesta protectora celular de tipo Th1. Ensayos de protección en el modelo murino de cisticercosis en ratones inmunizados con fragmentos recombinantes de TPmy revelaron que el extremo amino terminal induce alrededor de 60% de protección en contra de un reto intraperitoneal con cisticercos de Taenia crassiceps. Ensayos preliminares de protección por inmunización génica revelaron que el extremo amino terminal de la TPmy clonado en un vector plasmídico con un promotor de citomegalovirus induce alrededor de 79% de protección, junto con plásmidos para la expresión de IL-12, sugiriendo que este tipo de inmunización con TPmy puede resultar en el desarrollo de una vacuna eficaz y económica en contra de la cisticercosis.

Taenia solium paramyosin (TPmy) is a prominent 100 kDa antigen in human and porcine cysticercosis. TPmy is an α-helical coiled coil protein present in muscle and tegumentary structures of T. solium cysticerci. TPmy has the property of binding C1q resulting in inhibition of the complement cascade. TPmy probably binds C1q through its collagen-like domains and could be involved in a parasite strategy to modulate host immune response. Humoral immune response against TPmy is preferentially directed against carboxyl terminal end in humans and mice, whereas amino terminal end of TPmy preferentially induces a Th1-related cellular immune response. Protection studies in murine model of cysticercosis showed that the amino terminal end fragment of TPmy induces approximately 60% protection against an i.p. challenge with Taenia crassiceps cysts when mice are immunized with recombinant fragments of TPmy. Initial protection studies using genetic immunization showed that amino terminal end fragment of TPmy cloned into a plasmid expression vector with a cytomegalovirus promoter, together with IL-12-expressing plasmids induced 79% protection, suggesting that this kind of TPmy-immunization might result in development of a cost-effective vaccine against cysticercosis.