Isolation and characterization of the aerobic bacterial microbiota of the esophagus and its probable association with obstructive caseous lesions in green turtles (Chelonia mydas) / Isolamento e caracterização da microbiota bacteriana aeróbia do esôfago e sua provável associação com lesões caseosas obstrutivas em tartarugas-verdes (Chelonia mydas)

Caseous lesions in the esophagus of green turtles (Chelonia mydas) from the coast of Brazil have been described as obstructive lesions and can lead to the death of these animals. However, their etiology remains unclear. The aim of this study was to isolate and characterize the aerobic bacterial microbiota of the esophagus of green turtles (C. mydas) from the Brazilian coast and to verify its possible participation in the etiology of caseous lesions. For this, 42 animals were used, 33 alive and healthy and 9 naturally dead that had esophageal lesions confirmed by necropsy, from Anchieta and Piúma beaches, Espírito Santo. Microbiological tests and morphological evaluation of the esophagus were performed. We isolated 14 different bacterial agents from healthy animal samples, with the prevalence of Pseudomonas aeruginosa being (36.36%), Staphylococcus aureus (33.33%), Aeromonas hydrophila (27.27%), and Vibrio alginolyticus (24.24%). In dead animals, only three distinct agents were isolated: S. aureus (50.00%), A. hydrophila (25.00%), and V. alginolyticus (25.00%). Morphological evaluation revealed a predominance of the lesions at the gastroesophageal junction, with multifocal-to-coalescent distribution, discrete intensity, and absence of obstruction. Ulcerations and caseous exudates, inflammatory infiltrates, parasitic eggs, and giant foreign body cells were also observed as well as bacterial lumps and glandular alterations, such as necrosis, adenitis, and fragments of adult parasites. There was a positive correlation between bacterial lumps and microbiological culture and a negative correlation between bacterial lumps and microbiological culture with parasites. Thus, it was noted that the esophageal aerobic microbiota of C. mydas was predominantly composed of Gram-negative bacteria such as P. aeruginosa, A. hydrophila, and V. alginolyticus, in addition to several enterobacteria and Gram-positive bacteria, such as S. aureus. These agents are opportunists and may be involved in the etiology of caseous esophagitis in association with other pathogens as co-factors working in association or, even in a secondary way.(AU)

A ocorrência de lesão caseosa no esôfago de tartarugas-verdes (Chelonia mydas) da costa do Brasil tem sido descrita como de caráter obstrutivo e pode causar a morte dos animais. No entanto, sua etiologia permanece pouco esclarecida. Objetivou-se isolar e caracterizar a microbiota aeróbica esofágica das tartarugas-verdes (C. mydas) da costa brasileira e verificar sua possível participação na etiologia das lesões caseosas. Foram utilizados 42 animais, 33 vivos e hígidos e nove mortos naturalmente que apresentavam lesão esofágica confirmada pela necropsia, provenientes de Anchieta e Piúma, Espírito Santo, nos quais foram feitos testes microbiológicos e avaliação morfológica do esôfago. Foram isolados 14 agentes bacterianos diferentes nas amostras de animais saudáveis, com prevalência de Pseudomonas aeruginosa (36,36%), Staphylococcus aureus (33,33%), Aeromonas hydrophila (27,27%) e Vibrio alginolyticus (24,24%). Nos animais mortos, foram isolados apenas três agentes distintos: S. aureus (50,00%), A. hydrophila (25,00%) e V. alginolyticus (25,00%). A avaliação morfológica revelou predominância da lesão em junção gastroesofágica, com distribuição multifocal a coalescente, intensidade discreta e ausência de obstrução. Observou-se ainda ulceração e exsudato caseoso, infiltrado inflamatório, ovos de parasitos e células gigantes do tipo corpo estranho, além de grumos bacterianos e de alterações glandulares, como necrose, adenite e fragmentos de parasitos adultos. Houve correlação positiva dos grumos bacterianos com cultivo microbiológico e negativa dos grumos bacterianos e cultivo microbiológico com parasitos. Assim, nota-se que a microbiota esofágica aeróbica de C. mydas é constituída predominantemente por bactérias Gram-negativas como P. aeruginosa, A. hydrophila e V. alginolyticus, além de diversas enterobatérias e por Gram-positivas, como S. aureus. Esses agentes são oportunistas e podem estar envolvidos na etiologia da esofagite caseosa em associação a outros patógenos como co-fatores agindo em associação, ou mesmo, por via de infecção secundária.(AU)

Perfil epidemiológico da fibropapilomatose em tartarugas-marinhas encalhadas entre o litoral sul de Alagoas e norte da Bahia, nordeste do Brasil / Fibropapillomatosis epidemiology in sea turtles stranded between the south of Alagoas and north of Bahia, northeast of Brazil / Perfil epidemiológico de fibropapilomatosis en tortugas marinas encalladas entre el litoral sur de Alagoas y el norte de Bahia, noreste de Brasil

Em um intervalo de quatro anos, a prevalência da fibropapilomatose em tartarugas encalhadas em uma região do nordeste do Brasil compreendida entre o sul de Alagoas e o norte da Bahia foi de 16% em Chelonia mydas, 2% em Caretta caretta e 0,6% em Lepidochelys olivacea. C. mydas acometidas apresentaram biometria média de 0,49m de Comprimento Curvilíneo da Carapaça - CCC. Machos e fêmeas foram igualmente acometidos, numa média de 22%. Pela análise de 1231 registros fotográficos, a média foi de 13 tumores por C. mydas. Nessa espécie 76,77% dos tumores foram registrados na parte anterior do corpo, 17,97% na região posterior, 4,12% na carapaça e plastrão e 1,0% nos globos oculares. Não foram registrados tumores na cavidade oral. C. mydas foram em sua maioria moderadamente afetadas pela doença. L. olivacea acometida apresentou biometria média de 0,69m de CCC. Machos e fêmeas foram atingidas numa média de 1,0%. Os tumores em L. olivacea foram observados na porção anterior e posterior do corpo. Somente um indivíduo do sexo masculino de C. caretta, com biometria de 1,03m de CCC apresentou sinal da doença. A C. caretta apresentava um tumor externo pedunculado na região cervical, de tamanho entre 1,1cm e 4,0cm de diâmetro. As prevalências da fibropapilomatose em Eretmochelys imbricata e Dermochelys coriacea foram de 0,0%. A prevalência da fibropapilomatose em C. mydas segue padrões encontrados para a costa brasileira. No entanto, a doença se manifesta com severidade levemente superior a encontrada no litoral da região sudeste do país.(AU)

In a four-year review, the prevalence of fibropapillomatosis in turtles stranded in the region located in northeast of Brazil encompassing Southern Alagoas and Northern Bahia was 16% in Chelonia mydas, 2% in Caretta caretta and 0.6% in Lepidochelys olivacea. The affected C. mydas presented an average 0.49m Curvilinear Carapace Length - CCL. The disease affected 20% male and female C. mydas. By analyzing 1231 photos, C. mydas presented an average of 13 tumors. Regarding the tumor locations in C. mydas, 76.77% were recorded in the anterior body part, 17.97% in the posterior body region, 4.12% in the carapace and plastron, and 1.0% in the eyeballs. Oral cavity tumors were not found in C. mydas. C. mydas were mostly moderately affected by the disease. Affected L. olivacea presented an average 0.69m CCL. The disease equally affected 1.0% male and female individuals in that specie. Tumors were observed in L. olivacea in the anterior and posterior portion of the body. Only one male C. caretta presenting 1.03m CCL had signs of the disease, presenting one external tumor in the cervical region measuring between 1.1 cm and 4.0 cm in diameter. No prevalence was found for fibropapillomatosis in Eretmochelys imbricata and Dermochelys coriacea (0.0%). The prevalence and distribution of fibropapillomatosis in C. mydas in the study area are similar to the patterns found in the Brazilian Southeastern coast. However, the disease presents a slightly higher severity in relation to those found in the Southeastern coast of the country.(AU)

En un intervalo de cuatro años, la prevalencia de fibropapilomatosis en tortugas encalladas en una región del noreste de Brasil comprendida entre el sur de Alagoas y el norte de Bahia fue de 16% en Chelonia mydas, 2% en Caretta caretta y 0.6% en Lepidochelys olivacea. C. mydas afectadas presentaron biometría media de 0.49m de longitud curvilínea del caparazón - CCC. Machos y hembras fueron igualmente afectados, un promedio de 22%. Mediante el análisis de 1231 registros fotográficos, el promedio fue de 13 tumores en C. mydas. En esa especie 76.77% de los tumores se registraron en la parte delantera del cuerpo, 17.97% en la región posterior, 4.12% en el caparazón y plastrón, 1.0% en los globos oculares. No se registró tumores en la cavidad oral. C. mydas fueron en su mayoría moderadamente afectadas por la enfermedad. L. olivacea afectada presentó biometría media de 0.69m de CCC. Machos y hembras fueron afectados por un promedio de 1.0%. Los tumores en L. olivacea fueron observados en la porción anterior y posterior del cuerpo. Sólo una tortuga del sexo masculino C. caretta, con biometría de 1.03m de CCC mostró signos de la enfermedad. La C. caretta presentaba un tumor externo pedunculado en la región cervical, de tamaño entre 1.1 cm y 4.0 cm de diámetro. Las prevalencias de fibropapilomatosis en Eretmochelys imbricata y Dermochelys coriácea fueron de 0,0%. La prevalencia de fibropapilomatosis en C. mydas sigue patrones encontrados para la costa brasileña. Todavía, la enfermedad se manifiesta con gravedad un poco mayor a las encontradas en el litoral de la región sureste del país.(AU)

Atividade da colinesterase plasmática como biomarcador de impacto ambiental em tartarugas verdes (Chelonia mydas) no litoral do Arquipélago de Fernando de Noronha, Pernambuco / Plasma cholinesterase activity as environmental impact biomarker for green turtles (Chelonia mydas) on the coast of Fernando de Noronha, Pernambuco, Brazil

Biomarcadores podem ser usados de forma preditiva, permitindo que sejam tomadas ações de controle antes que ocorram danos ambientais irreversíveis com consequências ecológicas severas, no entanto, espécies sentinelas são necessárias para avaliação desses marcadores. As tartarugas marinhas são consideradas espécies sentinelas quando acometidas por fibropapilomas, sendo sinalizadora do desequilíbrio ambiental marinho nas suas áreas de ocorrência. Com o objetivo de propor a determinação da atividade da colinesterase plasmática em tartarugas verdes (Chelonia mydas) como biomarcador, procedeu-se a determinação da atividade enzimática em animais saudáveis e em localidade de baixo impacto antrópico (Arquipélago de Fernando de Noronha, Pernambuco, Brasil) para servir como referência para comparação com animais capturados em locais de maior impacto antrópico. Ao todo foram analisadas amostras de plasma heparinizado de 35 animais capturados. Todas as amostras analisadas apresentaram alguma atividade enzimática de colinesterase plasmática. Os valores obtidos de colinesterase variaram de 162 a 379 UI/L, com média e desvio padrão de 216,4 ± 51,4 UI/L. Nos estudos de repetibilidade e reprodutibilidade obtiveram-se coeficientes de variação menor que 5% em todas as análises, portanto a metodologia analítica utilizada se mostrou confiável. A longevidade das tartarugas marinhas da espécie C. mydas, o comportamento alimentar, juntamente com o fato de possuirem atividade enzimática detectável podem indicar essa espécie como bioindicadora de exposição a poluentes que influenciam na atividade da colinesterase plasmática.(AU)

Biomarkers can be used in a predictive manner, permitting actions control to be taken before they occur irreversible damage with severe environmental ecological consequences, however, sentinel species are needed to evaluate these markers. Sea turtles affected by fibropapillomas are considered sentinel species, signaling the marine environmental imbalance in their areas of occurrence. With the objective to use the plasma cholinesterase activity in green turtles (Chelonia mydas) as a biomarker, the measurement of enzyme activity was evaluated in healthy animals and in location of low pollution impact (Fernando de Noronha, Pernambuco, Brazil) to serve as a reference for comparison with animals trapped in places with higher pollution impact. Were analyzed heparinized plasma samples from 35 captured animals. All samples analyzed showed enzymatic activity of plasma cholinesterase. The values obtained ranged between 162-379 IU/L, with mean and standard deviation of 216.4 ± 51.4 IU/L. In studies of repeatability and reproducibility were obtained variance coefficients of less than 5% in all analyzes, so the analytical methodology proved successful. The longevity of marine turtles of the species C. mydas, feeding behavior, along with the fact possess detectable enzyme activity may indicate this species as a bioindicator of exposure to pollutants that influence plasma cholinesterase activity.(AU)

Hematological and histopathological evaluation of wildlife green turtles (Chelonia mydas) with and without fibropapilloma from the north coast of São Paulo state, Brazil / Avaliação hematológica e histopatológica de tartarugas verdes de vida livre (Chelonia mydas) com e sem fibropapilomas do litoral norte do estado de São Paulo

Blood profiles were determined in 47 juvenile green turtles, Chelonia mydas, from São Paulo northern coast, Brazil. Twenty-nine were affected by fibropapillomas and 18 were tumor free. Complete gross and histopathologic examinations of the fibropapillo were performed in 21 green turtles. Biometrical data, size, location and amount of tumors were recorded. The papillomas varied in morphology, location, size, color and texture. We found hyperplastic stroma, rich in blood vessels and connective tissue with increase in thickness of the dermis. The tumors w0ere classified as papillomas or fibropapillomas according to their epithelial and/or stromal proliferation. The lowest Mean Corpuscular Hemoglobin (HCM) values were observed in affected turtles.

Realizou-se hemograma de 47 tartarugas verdes, Chelonia mydas, provenientes de uma população de vida livre do litoral do estado de São Paulo, Brasil. Dessas, 29 apresentavam fibropapilomas e 18 não apresentavam formação tumoral. Fez-se avaliação macroscópica e histopatológica dos tumores de 21 tartarugas verdes com fibropapilomatose. Foram coletados dados biométricos dos animais, avaliação de tamanho, localização e quantidade dos tumores. As formações papilomatosas apresentaram morfologia, localização, tamanho, coloração e textura variados. Observou-se um estroma hiperplásico, rico em vasos sanguíneos e grande quantidade de tecido conjuntivo, resultando em um espessamento da derme. As formações foram classificadas como papilomas e/ou fibropapilomas, dependendo da proliferação epitelial e/ou de estroma, respectivamente. Os parâmetros hematológicos apresentaram variação, em função do acometimento tumoral, somente para Hemoglobina Corpuscular Média (HCM), sendo observados valores menores em animais com fibropapilomas.

Patterns and inferred processes associated with sea turtle strandings in Paraíba State, Northeast Brazil / Padrões e inferências associadas com encalhes de tartarugas marinhas no Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil

This study analysed sea turtle strandings on the coast of Paraíba State, Northeastern Brazil, from August 2009 to July 2010. A total of 124 strandings were recorded in this period: green turtle Chelonia mydas (n = 106), hawksbill Eretmochelys imbricata (n = 15), olive ridley Lepidochelys olivacea (n = 2) and loggerhead Caretta caretta (n = 1). Of all turtles for which the Curved Carapace Length (CCL) was measured (n = 122), only 12 individuals (9.7%) were adults. Twenty individuals had synthetic anthropogenic debris in the gastrointestinal tract. Other traces of human interactions were observed in 43 individuals, such as injuries caused by entanglement in fishing lines or nets, collisions with vessels, direct contact with oil spills and lesions caused by sharp or spiked objects. Moreover, in 28.5% of the stranded turtles, the presence of external tumors was noticed, suggestive of fibropapillomatosis and in 9.7%, shark bite marks were observed. Of the 107 individuals that were sexed, 76 were females and 31 were males. Most turtles (72.6%) became stranded during the spring/summer (between October and March). We found evidence of human interactions (injuries) in half of the strandings, but in most cases it was not possible to determine if such interactions were the cause of death. A logistic regression found a significant relationship between CCL, ingestion of debris and lesions caused by sharks or spiked objects. Systematic data collection from stranded sea turtles can provide useful biological information, such as seasonal and spatial patterns in their occurrence and mortality, age structure, sex ratio and diet, as well as possible mortality causes.

Este estudo analisou encalhes de tartarugas marinhas na costa do Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil, de agosto de 2009 a julho de 2010. Neste período, 124 encalhes foram registrados: tartaruga-verde Chelonia mydas (n = 106), tartaruga-de-pente Eretmochelys imbricata (n = 15), tartaruga-oliva Lepidochelys olivacea (n = 2) e cabeçuda Caretta caretta (n = 1). Dentre todas as tartarugas que tiveram o Comprimento Curvilíneo da Carapaça (CCC) medido (n = 122), apenas 12 indivíduos (9,7%) foram considerados adultos. Vinte indivíduos tinham detritos antropogênicos sintéticos no trato gastrointestinal. Em 43 indivíduos, outros vestígios de interações humanas foram observados, tais como lesões causadas por emaranhamento em linhas ou redes de pesca, colisões com embarcações, contato direto com derramamentos de óleo e lesões causadas por objetos perfurocortantes. Além disso, em 28,5% das tartarugas encalhadas, foi observada a presença de tumores externos sugestivos de fibropapilomatose e em 9,7%, foram observadas marcas de mordidas de tubarão. Dos 107 indivíduos sexados, 76 eram fêmeas e 31 eram machos. A maioria das tartarugas (72,6%) encalhou durante a primavera/verão (entre outubro e março). Foram encontrados sinais de interações humanas (lesões) em metade dos encalhes, mas na maioria dos casos, não foi possível determinar se tais interações foram a causa da morte. A regressão logística encontrou uma relação significativa entre CCC e ingestão de detritos, lesões causadas por objetos perfuro-cortantes e ataques de tubarões. A coleta sistemática de dados de tartarugas marinhas encalhadas pode fornecer informações biológicas úteis, tais como padrões sazonais e espaciais na sua ocorrência e mortalidade, estrutura etária, razão sexual, dieta, bem como possíveis causas de mortalidade.

Morfometria do coração e dos vasos da base e sua implicação no mergulho em Chelonia mydas / Heart and base vessels morphometric and your implications in dive of Chelonia mydas

Objetivou-se caracterizar a morfologia das câmaras cardíacas e das artérias aortas e pulmonares da espécie Chelonia mydas. Foram avaliados 11 espécimes de C. mydas mortas coletadas no litoral do estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Os animais foram necropsiados para a obtenção do coração, fragmentos das artérias aorta e pulmonares direita e esquerda. Os vasos adquiridos foram fixados em formol e submetidos ao processamento histológico de rotina e coloração com Técnica de Verhoff modificada. Enquanto, do coração, os parâmetros largura, altura base-ápice e a circunferência ventricular foram mensurados por meio do paquímetro. Nessa espécie a microscopia das artérias pulmonares e artérias aortas variaram de acordo com o antímero. A maior espessura relativa do Cavum Venosum (CV) auxilia no bombeamento cardíaco durante o mergulho e sua menor espessura direita é uma vantagem para a dilatação ventricular durante a imersão profunda enquanto que a quantificação das lâminas elásticas e fibras musculares da túnica média das artérias aortas e pulmonares direita e esquerda comprovaram que a túnica média das aortas predomina o componente elástico vs. muscular, entretanto, nas artérias pulmonares o componente elástico não-predomina. Essa angioarquitetura pode estar relacionada com a capacidade de mergulho, favorecendo um maior aproveitamento do sangue oxigenado armazenado previamente durante o período de apneia.

This study aimed to characterize the morphology of the heart chambers, pulmonary arteries and aortas of Chelonia mydas. Eleven specimens were evaluated from dead C. mydas collected on the coast of the state of Rio Grande do Norte, Brazil. The animals were necropsied to obtain heart, aorta and fragments of the right and left pulmonary vessels. The vessels were fixed in formalin and subjected to histological processing and staining by a modified Verhoff technique. The parameters width, height and base-apex ventricular circumference of the heart were measured with a caliper. In the species the microscopy of pulmonary arteries and aorta varied according to the antimere. The largest relative thickness of Cavum venosum (CV) assists the cardiac output during diving, and its smaller thickness is advantageous for the right ventricular dilation during deep immersion, while the quantification of elastic and muscle fibers of the tunica media of aortas and right and left pulmonary arteries showed that the medial layer of aorta dominates the elastic vs. muscle fibers; however the elastic fibers are not dominating in the pulmonary arteries. The angioarchitecture may be related to the ability to swim, favoring better use of oxygenated blood previously stored during the period of apnea.

Green turtle head trauma with intracerebral hemorrhage: image diagnosis and treatment / Traumatismo craniano com hemorragia intracerebral em tartaruga verde: diagnóstico por imagem e tratamento

Sea turtles are threatened to the point of extinction. The major goal of rehabilitating injured individuals is to eventually reintroduce them back into their habitat. Sea turtles are vulnerable to anthropogenic effects, and impact traumas are a common cause of death among these animals. Carapace and skull fractures are usually related to vessel collisions or propeller impacts. However, intentional traumas inflicted by humans are also considered as a potential threat. The purpose of this article is to describe the diagnosis and rehabilitation procedures of a juvenile green turtle (Chelonia mydas) after severe head trauma with brain hemorrhage. The data presented here can be used as a reference for future cases of head trauma in chelonians.

Tartarugas marinhas são animais ameaçados de extinção. Por isso, o principal objetivo em reabilitar indivíduos feridos é posteriormente reintroduzi-los em seu habitat. Quelônios marinhos apresentam grande vulnerabilidade a efeitos antropogênicos, e a ocorrência de traumatismos impactantes constituem uma importante causa de óbitos entre esses animais. Fraturas de carapaça e crânio estão normalmente associadas a colisões por embarcações. No entanto, lesões intencionais provocadas por humanos também podem ser consideradas ameaças em potencial. O objetivo deste estudo é descrever o diagnóstico e a reabilitação de um indivíduo jovem de tartaruga verde (C. mydas) após traumatismo craniano severo com hemorragia cerebral. Os dados apresentados poderão ser utilizados como referências para casos futuros de traumatismos afetando a região da cabeça de quelônios.

Hematological profile of Chelonia mydas (Testudines, Cheloniidae) according to the severity of fibropapillomatosis or its absence / Perfil hematológico de Chelonia mydas (Testudines, Cheloniidae) de acordo com o grau de acometimento pela fibropapilomatose e sua ausência

The green turtle Chelonia mydas feeds and nests in the Brazilian coastal area and is considered an endangered species by the World Conservation Union (IUCN 2009) and threatened by the Red List of Brazilian Fauna (Ministério do Meio Ambiente 2009). Fibropapillomatosis is a disease characterized by benign skin tumors (fibropapillomas), and it is one of the main threats to the survival of this species. Studies suggest the involvement of viruses as infectious agents associated with environmental and genetic factors. Blood samples were collected from 45 turtles captured in the coastal area of the state of Sao Paulo, Brazil. From these, 27 were affected by fibropapillomas and 18 were tumor free. Biometrical data on the turtles, size, location and quantity of tumors were recorded. The area occupied by fibropapillomas per animal was calculated and four groups were determined according to severity of the disease or its absence. The objective of the study was to compare hemogram results of the sea turtles classified in these four groups. The lowest hematocrit value was observed in severely affected animals. In the hemoglobin assay, the highest value was observed in the group of tumor free turtles and the lowest, in animals severely affected. Lymphocyte counts and curved carapace length were on the verge of statistical significance.

Chelonia mydas, denominada tartaruga verde, é uma tartaruga marinha que frequenta o litoral brasileiro para alimentação e nidificação e é considerada em perigo de extinção pela IUCN (World Conservation Union, 2009) e ameaçada pela Lista Vermelha da Fauna Brasileira (Ministério do Meio Ambiente, 2009). A fibropapilomatose, doença caracterizada por tumores cutâneos benignos (fibropapilomas), é uma das mais importantes ameaças à sobrevivência dessa espécie. Pesquisas sugerem o envolvimento de agentes infecciosos virais em associação com fatores ambientais e genéticos. Foram colhidas amostras sanguíneas de 45 tartarugas provenientes do litoral do estado de São Paulo, Brasil, sendo 18 sem fibropapilomas e 27 acometidas. Dados de biometria das tartarugas, quantidade, localização e tamanho dos tumores foram anotados. Foi realizado o cálculo da área de fibropapilomas por animal e foram estipulados 4 grupos de acordo com o grau de acometimento e sua ausência. O objetivo foi realizar uma comparação entre os hemogramas das tartarugas marinhas classificadas nos 4 grupos. Animais de grau grave apresentaram o menor valor para hematócrito. Para dosagem de hemoglobina, observou-se que o maior valor foi para o grupo de tartarugas sem fibropapilomas e o menor para o de grau grave. Os valores de linfócitos e comprimento curvilíneo da carapaça beiraram a significância estatística.

Flow cytometry as a tool in the evaluation of blood leukocyte function in Chelonia mydas (Linnaeus, 1758) (Testudines, Cheloniidae)

Chelonia mydas is a sea turtle that feeds and nests on the Brazilian coast and a disease called fibropapillomatosis is a threat to this species. Because of this, it is extremely necessary to determine a methodology that would enable the analysis of blood leukocyte function in these sea turtles. In order to achieve this aim, blood samples were collected from C. mydas with or without fibropapillomas captured on the São Paulo north coast. Blood samples were placed in tubes containing sodium heparin and were transported under refrigeration to the laboratory in sterile RPMI 1640 cell culture medium. Leukocytes were separated by density gradient using Ficoll-PaqueTM Plus, Amershan Biociences®. The following stimuli were applied in the assessment of leukocyte function: Phorbol Miristate-Acetate (PMA) for oxidative burst activity evaluation and Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) Bio Particles®, Alexa Fluor® 594 conjugate for phagocytosis evaluation. Three cell populations were identified: heterophils, monocytes and lymphocytes. Monocytes were the cells responsible for phagocytosis and oxidative burst.

Chelonia mydas é uma tartaruga marinha que freqüenta o litoral brasileiro para alimentação e nidificação e uma doença denominada fibropapilomatose é uma das mais importantes ameaças à sobrevivência dessa espécie. Desta forma, a definição de uma metodologia que permita analisar a função dos leucócitos sangüíneos torna-se extremamente necessária. Foram utilizadas amostras sangüíneas de C. mydas com e sem fibropapilomas capturadas no litoral norte do estado de São Paulo. As amostras sangüíneas foram colocadas em tubos contendo heparina sódica e transportadas em meio de cultura celular RPMI 1640 estéril e sob refrigeração. Os leucócitos foram obtidos por gradiente de densidade usando Ficoll-PaqueTM Plus, Amershan Biociences®. Os estímulos aplicados foram Miristato Acetato de Phorbol (PMA) para avaliação de burst oxidativo e Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) Bio Particles®, Alexa Fluor® 594 conjugate para avaliação de fagocitose. Foram identificadas três populações celulares: heterófilos, monócitos e linfócitos. Os monócitos foram as células responsáveis pela fagocitose e pelo burst oxidativo.

Flow cytometry as a tool in the evaluation of blood leukocyte function in Chelonia mydas (Linnaeus, 1758) (Testudines, Cheloniidae) / A citometria de fluxo como ferramenta para avaliar a função celular de leucócitos sangüíneos de Chelonia mydas (Testudines, Cheloniidae)

Chelonia mydas is a sea turtle that feeds and nests on the Brazilian coast and a disease called fibropapillomatosis is a threat to this species. Because of this, it is extremely necessary to determine a methodology that would enable the analysis of blood leukocyte function in these sea turtles. In order to achieve this aim, blood samples were collected from C. mydas with or without fibropapillomas captured on the São Paulo north coast. Blood samples were placed in tubes containing sodium heparin and were transported under refrigeration to the laboratory in sterile RPMI 1640 cell culture medium. Leukocytes were separated by density gradient using Ficoll-PaqueTM Plus, Amershan Biociences®. The following stimuli were applied in the assessment of leukocyte function: Phorbol Miristate-Acetate (PMA) for oxidative burst activity evaluation and Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) Bio Particles®, Alexa Fluor® 594 conjugate for phagocytosis evaluation. Three cell populations were identified: heterophils, monocytes and lymphocytes. Monocytes were the cells responsible for phagocytosis and oxidative burst.

Chelonia mydas é uma tartaruga marinha que freqüenta o litoral brasileiro para alimentação e nidificação e uma doença denominada fibropapilomatose é uma das mais importantes ameaças à sobrevivência dessa espécie. Desta forma, a definição de uma metodologia que permita analisar a função dos leucócitos sangüíneos torna-se extremamente necessária. Foram utilizadas amostras sangüíneas de C. mydas com e sem fibropapilomas capturadas no litoral norte do estado de São Paulo. As amostras sangüíneas foram colocadas em tubos contendo heparina sódica e transportadas em meio de cultura celular RPMI 1640 estéril e sob refrigeração. Os leucócitos foram obtidos por gradiente de densidade usando Ficoll-PaqueTM Plus, Amershan Biociences®. Os estímulos aplicados foram Miristato Acetato de Phorbol (PMA) para avaliação de burst oxidativo e Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) Bio Particles®, Alexa Fluor® 594 conjugate para avaliação de fagocitose. Foram identificadas três populações celulares: heterófilos, monócitos e linfócitos. Os monócitos foram as células responsáveis pela fagocitose e pelo burst oxidativo.

Valores hematológicos de tartarugas marinhas Chelonia mydas (Linaeus, 1758) juvenis selvagens do Arquipélago de Fernando de Noronha, Pernambuco, Brasil / Hematological values of juvenile wild sea turtles Chelonia mydas (Linaeus, 1758) from the Fernando de Noronha archipelago, Pernambuco State, Brazil

Foram determinados os valores hematológicos de referência para 60 tartarugas marinhas Chelonia mydas juvenis selvagens aparentemente saudáveis do Arquipélago de Fernando de Noronha, Pernambuco,Brasil nos meses de julho a setembro de 2003. Os resultados obtidos foram: Hematócrito 21,4 a 36,6 %; Hemácias 0,244 a 0,554 x106/μl; Hemoglobina 5,9 a 14,0 g/dl; Volume Corpuscular Médio 500,4 a986,1 fl; Hemoglobina Corpuscular Média 144,0 a 367,1 pg; Concentração de Hemoglobina Corpuscular Média 23,7 a 45,1 g/dl;Leucócitos 1178,8 a 8259,6 /μl; Monócitos 15,4 a 1494,3 /μl; Linfócitos221,1 a 1924,8 /μl; Heterófilos 621,5 a 4317,8 /μl; Eosinófilos 96,1 a1831,0 /μl; Basófilos 0,0 a 45,3 /μl e Trombócitos 9513,2 a36316,5 /μl. A comparação dos resultados obtidos com os dados da literatura reforça a necessidade do estabelecimento de valores hematológicos específicos para aglomerações em diferentes condições geográficas, climáticas, faixas de tamanho e diferentes metodologias. Devido a estas influências estes valores não devem ser extrapolados para outras aglomerações e devem ser usados com critério para avaliação clínica de indivíduos sob outras condições.

The hematological reference ranges of sixty wild, apparently health, juvenile green sea turtles (Chelonia mydas) from the Fernando de Noronha Archipelago, Pernambuco State, Brazil, were determined between the months of July and September of 2003. The obtained results were: Packed cell volume 21,4-36,6 %; erythrocytes count 0,244-0,554 x106/μl; Hemoglobin 5,9-14,0 g/dl; Mean Corpuscular Volume500,4-986,1 fl; Mean Corpuscular Hemoglobin 144,0-367,1 pg; Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration 23,7-45,1 g/dl; Totalleucocytes count 1178,8-8259,6 /μl; Monocytes 15,4-1494,3 /μl;Lymphocytes 221,1-1924,8 /μl; Heterophils 621,5-4317,8 /μl;Eosinophils 96,1-1831,0 /μl; Basophils 0,0-45,3 /μl; Trombocytes 9513,2-36316,5 /μl. The comparison between the obtained results and literature data reinforce the need to establish hematological counts for specific agglomerations on different geographic and climate conditions, size classes, age, and methodologies. Because of these influences, the values should not be extrapolated to other C. mydas agglomerations and should be used carefully for the clinical evaluation of individuals under other conditions.