The Addition of Dydrogesterone after Frozen Embryo Transfer in Hormonal Substituted Cycles with Low Progesterone Levels / Uso adicional de didrogesterona após transferência de blastocisto em ciclos substituídos com valores baixos de progesterona

Abstract Objective To determine whether a rescue strategy using dydrogesterone (DYD) could improve the outcomes of frozen embryo transfer cycles (FET) with low progesterone (P4) levels on the day of a blastocyst transfer. Methods Retrospective cohort study including FET cycles performed between July 2019 and October 2020 following an artificial endometrial preparation cycle using estradiol valerate and micronized vaginal P4 (400 mg twice daily). Whenever the serum P4 value was below 10 ng/mL on the morning of the planned transfer, DYD 10 mg three times a day was added as supplementation. The primary endpoint was ongoing pregnancy beyond 10 weeks. The sample was subdivided into two groups according to serum P4 on the day of FET: low (< 10 ng/mL, with DYD supplementation) or normal (above 10 ng/mL). We performed linear or logistic generalized estimating equations (GEE), as appropriate. Results We analyzed 304 FET cycles from 241 couples, 11.8% (n = 36) of which had serum P4 below 10 ng/mL on the FET day. Baseline clinical data of patients was comparable between the study groups. Overall, 191 cycles (62.8%) had a biochemical pregnancy, of which 131 (44,1%) were ongoing pregnancies, with a 29,8% miscarriage rate. We found no statistically significant differences in the hCG positive (63 vs 64%) or ongoing pregnancy rates (50 vs 43,3%) between those FETs with low or normal serum P4 values, even after multivariable logistic regression modelling. Conclusion Our results indicate that DYD 10 mg three times a day administered in women who perform FET with P4 serum levels < 10 ng/mL, allows this group to have pregnancy rates beyond 12 weeks at least as good as those with serum levels above 10 ng/mL.

Resumo Objetivo Determinar se uma estratégia de resgate usando didrogesterona (DYD) pode melhorar os resultados dos ciclos de transferência de embriões congelados (TEC) com baixos níveis de progesterona (P4) no dia de uma transferência de blastocisto. Métodos Estudo de coorte retrospectivo que incluiu ciclos TEC realizados entre julho de 2019 e outubro de 2020 após um ciclo de preparação endometrial artificial usando valerato de estradiol e P4 vaginal micronizado (400 mg duas vezes ao dia). Sempre que o valor de P4 sérico estava abaixo de 10 ng/mL na manhã da transferência planejada, adicionou-se 10 mg de DYD tri-diário como suplementação. O desfecho primário foi gravidez evolutiva após 10 semanas. A amostra foi subdividida em dois grupos de acordo com o P4 sérico no dia da TEC: baixo (< 10 ng/mL, com suplementação de DYD) ou normal (acima de 10 ng/mL). Realizamos equações de estimativa generalizada linear ou logística (GEE), conforme apropriado. Resultados Analisaram-se 304 ciclos de FET de 241 casais, dos quais 11,8% (n = 36) tinham valores de P4 sérico abaixo de 10 ng/mL no dia da TEC. Os dados clínicos e demográficos dos pacientes eram comparáveis entre os grupos. Globalmente, 191 ciclos (62,8%) tiveram uma gravidez bioquímica, dos quais 131 (44,1%) foram gestações em curso, com uma taxa de aborto espontâneo de 29,8%. Não encontramos diferenças estatisticamente significativas na taxa de gravidez bioquímica (63 vs. 64%) ou nas taxas de gravidez evolutiva (50 vs. 43,3%) entre TEC com valores séricos de P4 baixos ou normais, mesmo após modelação com regressão logística multivariável. Conclusão Nossos resultados indicam que a suplementação com DYD 10 mg três vezes ao dia em mulheres com níveis séricos de P4 abaixo de 10 ng/mL em ciclos de TEC substituídos parecem conseguir resultados pelo menos tão bons como nos ciclos com valores superiores para taxas de gravidez em curso além de 12 semanas.

Efficacy and limitations of different approaches to anticipate the diagnosis of pregnancy in cattle / Eficácia e limitações de diferentes abordagens para antecipar o diagnóstico de gestação em bovinos

The study evaluated sonographic and serologic exams performed for early (20 to 30d) diagnosis of pregnancy. One hundred-twenty (n= 120) bovine recipients were synchronized (estrous=D0) and timed embryo transferred (TET, D7) with fresh in vitro produced embryos. In the first trial (n= 46), diagnosis of pregnancy was performed on day 20 (D20) by detecting CL blood flow (BF) and by Pregnancy-Associated Glycoproteins (PAGs) serology. In the second trial (n= 30), pregnancy diagnosis was performed on D25 by ultrasound visualization of uterine contents and by PAGs serology. In the last trial, PAG's serology was performed on D30. Ultrasonographic detection of the uterine contents and embryo viability performed on D30 (DG30) was considered the gold standard. The PROC FREQ procedure was used to test the agreement between diagnostic methods. On D20, the Doppler ultrasonography of the CL had showed high sensitivity (100%), but only moderate specificity (53.3%). On the same day, serologic diagnostic had no agreement (k= -0.08, P< 0.46) with the gold standard, with very low sensitivity (6.3%). However, the sensitivity of the serologic exam increased dramatically (from 6.3 to 100%) from D20 to D25, and it contributed to detect false negatives from the ultrasound diagnosis, improving the overall accuracy from 90% to 96.7%.(AU)

O estudo foi planejado para correlacionar exames ultrassonográficos e sorológicos realizados para o diagnóstico precoce (20 a 30d) de gestação. Cento e vinte (n= 120) receptoras bovinas foram sincronizadas (estro=D0), e embriões frescos produzidos in vitro foram transferidos em tempo fixo (TETF, D7). No experimento 1 (n= 46), o diagnóstico de gestação foi realizado no D20, pela detecção do fluxo sanguíneo do CL e pela sorologia de glicoproteínas associadas à gestação (PAGs). No experimento 2 (n= 30), a detecção da gestação foi realizada por meio da visualização do conteúdo do útero e também pela sorologia para PAGs. No experimento 3, a sorologia para PAGs foi realizada no D30. Em todos os experimentos, a visualização ultrassonográfica da vesícula e da viabilidade embrionária, realizada no D30, foi considerada padrão-ouro. O procedimento PROC FREQ testou o nível de concordância dos métodos diagnósticos. No D20, o diagnóstico baseado na vascularização do CL mostrou alta sensibilidade (100%) e apenas moderada especificidade (53,3%). Nesse mesmo dia, o diagnóstico sorológico não apresentou concordância (k=-0,08, P<0,46) com o padrão-ouro, além de baixa sensibilidade (6,3%). No entanto, a sensibilidade do exame sorológico aumentou drasticamente (6,3 para 100%) do D20 para o D25, contribuindo para detectar falsos negativos diagnosticados pela ultrassonografia, melhorando a acurácia (90 para 96,7%).(AU)

Evaluation of embryo collection and transfer days on pregnancy rate of Mangalarga Marchador mares during the breeding season / Evaluación de los días de recolección y transferencia de embriones sobre las tasas de preñez en yeguas Mangalarga Marchador durante la estación de monta / Avaliação do dia da colheita e da transferência de embriões equino da raça Mangalarga Marchador durante a estação de monta

Abstract Background: Proper timing for embryo collection and transfer in horses -which is critical for the success of this biotechnology- is still debated. Additionally, there is little information on this technology under tropical conditions. Objective: To determine the best day for collection and transfer of embryos in Mangalarga Marchador mares under Brazilian northeast's conditions. Methods: Donors (n= 30) and recipients (n= 76) in diestrus phase were selected based on both clinical and gynecology examinations. Estrus was induced on both donor and recipient mares by intramuscular injection of 5 mg Dinoprost, aiming to obtain an ovulation interval of -1 to +3 between recipient and donor. Ovulation was induced with buserelin acetate when the largest follicle reached at least 35 mm in diameter. At this time, mares were subjected to artificial insemination at 48-hour intervals until ovulation. The embryos were collected on days 7, 8, and 9 after ovulation. Results: The embryo collection on day 8 was more efficient (p<0.05) than on day 7, but it was not more effective (p>0.05) than day 9, which presented the same efficiency (p>0.05) as day 7. From a total of 76 embryos transferred to the recipients, that were between days 4 and 9 after ovulation, there was no influence (p>0.05) of the day of transfer on pregnancy rate. Conclusions: The embryo collection must be performed on day 8 after ovulation, and transfer can be performed on any day of that interval (4-9) without affecting the pregnancy rate.

Resumen Antecedentes: El momento mas apropiado para la recolección y transferencia de embriones en equinos -que es fundamental para el éxito de esta biotecnología- continua siendo sujeto de estudio. Además, es escasa la información sobre esta tecnología en condiciones tropicales. Objetivo: Determinar el momento mas adecuado para la recolecta y transferencia de embriones en yeguas Mangalarga Marchador, en las condiciones del nordeste Brasileño. Métodos: Donadoras (n= 30) y receptoras (n= 76) en la fase de diestro se seleccionaron con base en los exámenes clínicos y ginecológicos. El estro de las yeguas donadoras y receptoras fue inducido con 5 mg de Dinoprost, vía intramuscular, intentando obtener un intervalo de ovulación de -1 a +3 entre la receptora y la donadora. La ovulación fue inducida con acetato de buserelina cuando el folículo mayor alcanzó 35 mm de diámetro. En ese momento, las yeguas fueron sometidas a inseminación artificial en intervalos de 48 horas hasta la ovulación. Los embriones fueron recolectados en los días 7, 8 y 9 después de la ovulación. Resultados: La recolecta de embriones en el día 8 fue más eficiente (p<0,05) que en el día 7, pero no fue más efectivo (p>0,05) que en el día 9, el cuál presentó la misma eficiencia (p>0,05) que en el día 7. De un total de 76 embriones transferidos a las receptoras, que se encontraban entre el día 4 y 9 después de la ovulación, no se registró influencia (p>0,05) del día de la transferencia en la tasa de preñez. Conclusiones: La recolecta embrionaria debe ser realizada el día 8 después de la ovulación, y la transferencia puede ser realizada en cualquier día de este intervalo (4 a 9) sin que se afecte la tasa de preñez.

Resumo Antecedentes: A importância do momentoda colheita e da transferência do embrião equino para o sucesso dessa biotécnica em equino continua sem ser completamente entendida. Adicionalmente, existe pouca informação sobre essa tecnologia em condições tropicais. Objetivo: Determinar o melhor dia para colheita e para transferência de embriões em eguas manga larga marchador nas condições do nordeste brasileiro. Métodos: Doadoras (n = 30) e receptoras (n = 76) na fase de diestro foram selecionadas com base nos exames clínico e ginecológicos. O estro das éguas doadoras e receptoras foi induzido com 5 mg de Dinoprost administrado por via intramuscular, buscando obter um intervalo de ovulação de -1 a +3 entre a receptora e a doadora. A ovulação foi induzida com acetato de buserelina quando o foliculo maior alcançou o tamanho de 35 mm de diâmetro. Nesse momento, as éguas foram submetidas a inseminação artificial em intervalos de 48 horas até a ovulação. Os embriões foram colhidos nos dias 7, 8 e 9 depois da ovulação. Resultados: A colheita de embriões no dia 8 foi mais eficiente (p<0,05) do que no dia 7, porem não foi mais efetivo (p>0,05) do que o dia 9, o qual apresentou a mesma eficiência (p>0,05) que o dia 7. De um total de 76 embriões transferidos para as receptoras que se encontravam entre os dias 4 e 9 depois da ovulação, não se registrou influência (p>0,05) do dia da transferência sobre a taxa de prenhez. Conclusões: A colheita embrionária deve ser realizada no dia 8 depois da ovulação, e a transferência pode ser realizada em qualquer dia desse intervalo (4-9) sem que a taxa de prenhez seja afetada.

Pregnancy and delivery rates after vitrification of in vitro -produced Nelore ( Bos indicus ) embryos under field conditions / Tasas de preñez y nacimientos después de la vitrificación de embriones Nelore (Bos indicus) producidos in vitro bajo condiciones de campo / Taxas de prenhez e nascimentos após vitrificação de embriões Nelore (Bos indicus) produzidos in vitro sob condições de campo

Abstract Background: Cryopreservation preserves cellular viability under low temperatures, resulting in diminished intracellular enzymatic activity and reduced cellular metabolism that ultimately allows preserving genetic material for indefinite periods of time. Embryos submitted to cryopreservation suffer from considerable morphological and functional damage, resulting in reduced survival and development rates. Objective: To evaluate pregnancy and delivery rates of in vitro-produced (IVP) Nellore (Bos indicus) embryos after vitrification under field conditions. Methods: The IVP embryos at blastocyst (Bl) and expanded blastocyst (Bx) were transferred fresh (n= 137) or after vitrification (n= 127). Results: Pregnancy rates at 35 d for fresh embryos were lower in Bl (41.6) than in Bx (60.9) (p<0.05). After vitrification, pregnancy rates were similar at 35 d between Bl (38.0) and Bx (47.6) (p>0.05). Pregnancy loss at 60 d were similar (p>0.05) for both fresh (Bl: 3.1 and Bx: 4.8) and vitrified embryos (Bl: 1.9 and Bx: 4.7). Delivery rates were similar between groups (p>0.05). Conclusion: Both pregnancy and delivery rates of Bos indicus IVP embryos vitrified under field conditions are indistinguishable from fresh embryos.

Resumen Antecedentes: La criopreservación se caracteriza por el mantenimiento de la viabilidad celular a bajas temperaturas, resultando en reducido metabolismo y actividad enzimática intracelular, lo que permite la preservación del material genético por períodos de tiempo indefinidos. Los embriones sometidos a ésta técnica sufren daños morfológicos y funcionales considerables, dando como resultado una sobrevivencia y tasas de desarrollo reducidas. Objetivo: Evaluar la tasa de preñez a partir de embriones Nelore (Bos indicus) producidos in vitro (IVP) después de la vitrificación bajo condiciones de campo. Métodos: Embriones IVP en los estadios de blastocisto (Bl) y blastocisto expandido (Bx) se transfirieron en fresco (n= 137) o después de la vitrificación (n= 127). Resultados: La tasa de preñez a los 35 d fue menor para los embriones transferidos en fresco en fase Bl (41,6) en relación con los Bx (60,9) (p<0,05). Después de la vitrificación, las tasas de preñez a los 35 d fueron similares entre Bl (38,0) y Bx (47,6) (p>0,05). Las pérdidas de preñez a los 60 d fueron similares (p>0,05) tanto para embriones en fresco en Bl (3,1) y Bx (4,8) como para los vitrificados (Bl: 1,9 y Bx: 4,7). Las tasas de nacimiento fueron similares entre los grupos (p>0,05). Conclusión: Las tasas de preñez y nacimiento de embriones IVP vitrificados de Nelore (Bos indicus) bajo condiciones de campo son semejantes a las de embriones en fresco.

Resumo Antecedentes: A criopreservação é caracterizada pela manutenção da viabilidade celular em baixas temperaturas, resultando em atividade enzimática intracelular e metabolismo celular reduzido, que permite a preservação do material genético por períodos indefinidos de tempo. Embriões submetidos à criopreservação sofrem danos morfológicos e funcionais consideráveis, resultando em sobrevivência reduzida e menores taxas de desenvolvimento. Objetivo: Avaliar a taxa de prenhez a partir de embriões Nelore (Bos indicus) produzidos in vitro (IVP) após a vitrificação sob condições de campo. Métodos: Embriões IVP nos estádios de blastocisto (Bl) e blastocisto expandido (Bx) foram transferidos a fresco (n= 137) ou depois da vitrificação (n= 127). Resultados: A taxa de prenhez aos 35 d foi menor para os embriões transferidos a fresco na fase de Bl (41,6), em relação aos Bx (60,9) (p<0,05). Apos a vitrificação, as taxas de prenhez foram semelhantes aos 35 d entre Bl (38,0) e Bx (47,6) (p>0,05). As perdas de prenhez aos 60 d foram semelhantes (p>0,05) tanto para embriões a fresco nos estádios de Bl (3,1) e Bx (4,8), e vitrificados em Bl (1,9) e Bx (4,7). As taxas de nascimentos foram semelhantes entre os grupos (p>0,05). Conclusão: As taxas de prenhez e nascimentos dos embriões IVP vitrificados de Nelore (Bos indicus) sob condições de campo é semelhante àquela dos embriões a fresco.

Freezing goat embryos at different developmental stages and quality using ethylene glycol and a slow cooling rate / Congelação de embriões caprinos em diferentes estádios de desenvolvimento e qualidade utilizando etileno glicol e taxa de resfriamento lenta

The efficiency of an alternative freezing protocol for goat embryos of different morphology and quality was tested. Fifty-eight embryos on Day 6-7 stage were transferred as fresh or after freeze-thawing (n=29/group). For freezing, embryos were placed into 1.5M ethylene-glycol solution for 10min. During this time, they were loaded in the central part of 0.25mL straw, separated by air bubble from columns containing PBS/BSA 0.4% plus 20% BFS. Straws were then frozen using a freezing machine from 20ºC to -6ºC at a cooling rate of 3ºC/min, stabilization for 15min (seeding after 5min), from -6 C to -32ºC at 0.6 C/min,and plunged into liquid nitrogen. Frozen embryos were thawed for 30s at 37ºC in a water bath. Embryos subjected to fresh transfer were maintained in holding medium (37ºC). Fresh and frozen-thawed embryos were transferred at day 7 post-estrus to 30 recipients. Kidding and kid born rates were similar (P> 0.05), respectively, for recipients receiving fresh (66.7% or 10/15; 55.2% or 16/29) or frozen-thawed (60% or 9/15; 51.7% or 15/29) embryos. The cryopreservation of goat embryos using slow-freezing protocol and 1.5MEG resulted in similar efficiency rates of fresh embryos.(AU)

Este estudo testou a eficiência de protocolo alternativo de criopreservação de embriões caprinos de diferentes qualidades morfológicas. Foram utilizados 58 embriões, coletados entre o sexto e o sétimo dia do ciclo estral (n=29/grupo). Embriões congelados passaram por solução 1,5M etilenoglicol por 10min e foram aspirados durante esse tempo para parte central de palheta 0,25mL, separada por bolhas de ar de colunas contendo PBS 0,4% BSA e 20% SFB. As palhetas foram congeladas em máquina de congelação de 20ºC a -6ºC, com taxa de resfriamento de 3ºC/min, estabilização por 15min (seeding após 5min), -6ºC a -32ºC a 0,6ºC/min, e imersas em nitrogênio líquido. Os embriões foram descongelados por 30s a 37ºC, em água. Embriões frescos foram mantidos em solução de manutenção (37ºC). Embriões frescos e congelados/descongelados foram transferidos para 30 receptoras no sétimo dia do ciclo estral. A taxa de partos e a de crias nascidas (respectivamente) foram similares (P>0,05) para receptoras recebendo embriões frescos (66,7% ou 10/15; 55,2% ou 16/29) ou congelados/descongelados (60,0% ou 9/15; 51,7% ou 15/29). O protocolo de criopreservação de embriões utilizado no presente estudo resultou em índices de eficiência semelhantes aos de embriões frescos.(AU)

Viable offspring after successful non-surgical embryo transfer in goats / Nascimento de fetos viáveis após transferência de embriões não-cirúrgica em caprinos

O objetivo do presente estudo foi avaliar a viabilidade da técnica de transferência não cirúrgica em cabras. Quatro cabras não-lactantes pluríparas da raça Toggenburg foram utilizadas como receptoras de embriões, sendo que duas receberam um embriões e duas receberam dois embriões coletados não cirurgicamente cabras doadoras. Os corpos lúteos das receptoras foram detectados um dia antes da transferência de embriões por ultrassonografia transretal. Uma seringa de 5mL contendo 2mL de meio holding foi acoplada em um cateter tomcat, no qual os embriões foram aspirados em uma coluna central a duas outras colunas. Um espéculo Colin número 2 foi inserido na vulva e na vagina, e com o uso de uma fonte de luz, a cerviz foi localizada e imobilizada com uma pinça de Allis. Um cateter uretral número seis acoplado a um mandril e lubrificado com meio PBS foi inserido na cérvix, e assim os aneis cervicais foram gradualmente transpostos. Após perder a resistência, o cateter uretral foi movido lateralmente para o corno uterino desejado. O mandril e a pinça de Allis foram retirados e o conjunto seringa e tomcat foi acoplado ao cateter uretral e o conteúdo injetado no corno uterino ipsilateral ao corpo lúteo com posterior retirada do cateter. Cabras que ovularam em apenas um ovário foram usadas para testar a eficiência da deposição do embrião. O tempo gasto entre a inserção do espéculo e a sua remoção foi inferior a três minutos. O tempo para transpor a cérvix foi inferior a um minuto. A ultrassonografia revelou a deposição de líquido no corno desejado. Receptoras que receberam dois embriões tornaram-se gestantes e pariram três crias. Estes primeiros resultados encorajam a técnica e demonstram que a transferência de embriões em caprinos pode ser feita totalmente por procedimentos não cirúrgicos...

Taxa de prenhez e de perda de gestação em receptoras de embriões bovinos produzidos in vitro / Pregnancy and pregnancy loss rates in recipients of bovine embryos produced in vitro

Avaliaram-se resultados de 1100 transferências de embriões, realizadas de novembro de 2008 a fevereiro de 2009, em um programa comercial de produção de embriões. Foram utilizados embriões ½ Holandês/Gir (n=139) e ¾ Holandês/Gir (n=961) de qualidade um e oitavo dia (D8) para transferência a fresco. As receptoras foram novilhas ½ Nelore/Simental, sincronizadas, usando-se o protocolo: dia zero (D0) - introdução do dispositivo intravaginal com 1g de progesterona + 2mg de benzoato de estradiol (BE); dia 5 (D5) - aplicação de 150μg de D-cloprostenol (PGF2α) + 400UI de gonadotrofina coriônica equina (eCG); dia 8 (D8) ‒ remoção do dispositivo intravaginal; e dia 9 (D9) ‒ aplicação de 1mg de BE. Foram analisados os efeitos do grupo genético, o estágio de desenvolvimento e o tempo de cultivo do embrião, o lado do corpo lúteo (CL), o touro, o número de inovulações prévias realizadas em cada receptora e a sequência de horas de serviço gastas para realizar as inovulações sobre as taxas de prenhez e de perda da gestação. Apenas o tempo de cultivo do embrião influenciou a taxa de prenhez. Conclui-se que, ao utilizar embriões de excelente qualidade, um grande número de transferências de embriões pode ser executado por dia, sem comprometer a viabilidade da técnica de transferência.

We evaluated the results from 1100 embryo transfers performed from November 2008 to February 2009 by a commercial embryo transfer company. ½ Holstein/Gir (n = 139) or ¾ Holstein/Gir (n= 961) embryos in a grade of 1 and the eighth day (D8) for fresh transfer were used. The heifer recipients were ½ Nelore/Simmental, synchronized using the following protocol: Day zero (D0) - intravaginal device with 1g of progesterone + 2mg of estradiol benzoate (EB); Day five (D5) - application of 150μg of D-Cloprostenol (PGF2α) + 400UI of equine chorionic gonadotropin (eCG); Day eight (D8) - progesterone device removal and Day nine (D9) - application of 1mg of EB. The effects of genetic group, embryo's stage of development and cultivation time, side of the corpus luteum (CL), bull, number of previous transfers in each recipient and sequence of hours spent with transfer on the pregnancy rate and loss of gestation were analyzed. Only the embryo's cultivation time influenced the pregnancy rate. It is concluded that if using high quality embryos, a larger number of embryo transfers can be executed per day without compromising the viability of technology transfer.

Gordura corporal e eficiência reprodutiva em éguas doadoras de embrião Mangalarga Marchador / Body fat and reproductive efficiency of Mangalarga Marchador embryo donor mares

Foi comparado o julgamento do escore de condição corporal (ECC) com a espessura de gordura subcutânea (EGS) e sua relação com a eficiência reprodutiva de éguas Mangalarga Marchador doadoras de embrião. O experimento foi conduzido com 56 éguas doadoras entre os meses de agosto/08 e abril/09. O ECC foi maior em éguas mais velhas e aumentou com os dias de permanência no experimento. Houve correlação positiva entre peso e tempo de experimento. O peso não foi associado à idade, porém aumentou ao longo do experimento. A EGS na região da cauda e entre a 12ª e 13ª costelas aumentou com a idade e diminuiu com os dias de permanência no experimento. Houve correlação positiva entre EGS e ECC para a cauda e costela. O diâmetro do folículo dominante aumentou ao longo do ciclo estral, e foi menor em éguas com ECC abaixo de 6,5. O diâmetro folicular não foi influenciado pela idade. O diâmetro médio do folículo ovulatório foi 38,43 ± 3,09 mm. A recuperação embrionária não foi afetada pela idade ou ECC, mas foi menor (41 por cento) eméguas que ovularam folículos menores que 40 mm quando comparados às que ovularam folículos maiores que 40 mm (59 por cento). A idade da doadora não foi associada à taxa de gestação dos embriões nas receptoras. A gordura corporal afetou a eficiência reprodutiva das éguas, além disso, a ultrassonografia parece ser essencial para a avaliação precisa e correta do escore de condição corporal.

Body condition scoring (BCS) was compared to an ultrasound subcutaneous fat thickness (SFT) determination in relation to the reproductive efficiency of Mangalarga Marchador embryo donor mares. Fifty six barren mares were studied throughout the 2008/2009 breeding season (August through April) and the experiment was designed in a completely randomized scheme. BCS was higher in older mares and increased with time in the experiment, and there was a positive interaction between weight and time. Weight was not associated with age, but increased throughout the experiment. Tail and rib BCS increased with age, and decreased with time. There was a positive correlation between BCS and tail and rib SFT. The diameter of the dominant follicle increased during the estrous cycle and was smaller for mares with BCS below 6.5. Age did not influence the dominant follicle diameter. The mean ovulatory follicle diameter was 38.43 ± 3.09. Embryo recovery was not affected by age or BCS but was lower (41 percent, P=0.003) in mares that ovulated follicles smaller than 40mm compared to mares ovulating follicles greater than 40mm (59 percent). Donor age was not associated with recipient pregnancy rates. Body fat affected the reproductive efficiency in mares, and seems that ultra-sonography may be essential for correct and reliable body condition scoring.

Progesterone production in superovulated holstein heifers and in crossbred recipient of embryo supplemented with betacarotene and tocopherol / Produção de progesterona em novilhas Holandesas superovuladas e receptoras de embrião mestiças suplementadas com betacaroteno e tocoferol

Two experiments were conducted to evaluate the effect of the intramuscular injection of betacarotene associated to tocopherol on the plasma concentration progesterone of superovulated Holstein heifers (experiment 1) and in crossbred (Bos taurus x Bos indicus) heifers submitted to fixed-time embryo transfer (FTET, experiment 2). In experiment 1, after estrus synchronization and superovulation animals were inseminated 12 and 24 hours after estrus onset and embryos flushed 7 days later. Heifers were allocated randomly to one of three treatments: Control; T800 (800 mg of betacarotene plus 500 mg of tocopherol) and T1200 (1,200 mg of betacarotene plus 750 mg of tocopherol). The treatments were given on the day of ear implant placement and repeated on the first day of superovulation. Blood samples were collected on D0, D5, D9, D12 and D16. In experiment 2, treatments were imposed at intravaginal device insertion (D0). The same experimental design, as in experiment 1, was used. Blood samples were collected on D17 (embryos implanted) for progesterone determination by radioimmunoassay. In experiment 1, average plasma progesterone concentrations after corpora lutea formation (D12 plus D16 means) were 13.7±1.8 ng/ml, 14.5±2.3 ng/ml and 10.8±2.3 ng/ml for control, T800 and T1200, respectively, and did not differ (P=0.44). In experiment 2, progesterone concentrations on D17 in Control (8.88±0.57 ng/ml), T800 (7.48±0.64 ng/ml) and T1200 (5.90±1.33 ng/ml) groups were similar (P=0.11). Results indicate that the supplemental betacarotene and tocopherol injections did not influence peripheral progesterone concentrations in superovulated Holstein donors and crossbreed recipients heifers.

Dois experimentos foram conduzidos para avaliar o efeito da injeção intramuscular de betacaroteno associada ao tocoferol, na concentração plasmática de progesterona de novilhas Holandesas superovuladas (Experimento 1) e em novilhas cruzadas (Bos taurus x Bos indicus) submetidas à transferência embrionária em tempo fixo (TETF, experimento 2). No experimento 1, após a sincronização do estro e superovulação, os animais foram inseminados entre 12 a 24 h após o início do estro e os embriões recuperados após 7 dias. As novilhas foram divididas, aleatoriamente, em 1 de 3 tratamentos: Controle (duas injeções de soro); T800 (800 mg de betacaroteno mais 500 mg de tocoferol) e T1200 (1.200 mg de betacaroteno mais 750 mg de tocoferol). Os tratamentos foram administrados no dia da colocação do implante de progesterona e repetido no primeiro dia da superovulação. As colheitas de sangue foram realizadas no D0, D5, D9, D12 e D16. No experimento 2, os tratamentos foram realizados no momento da inserção do dispositivo de progesterona (D0). Utilizou-se o mesmo delineamento do experimento 1. A colheita de sangue para a determinação da progesterona por radioimunoensaio foi realizada no D17 (inovulação embrionária). No experimento 1, a concentração plasmática média, após formação do corpo lúteo (média da soma de D12 com D16) foi de 13,7±1,8 ng/ml, 14,5±2,3 ng/ml e 10,8±2,3 ng/ml para os grupos Controle, T800 e T1200, respectivamente, e não diferiram (P=0,44) entre os tratamentos. No experimento 2, a concentração de progesterona nas receptoras, no dia 17, foi semelhante (P=0,11) entre os grupos controle (8,88±0,57 ng/ml), T800 (7,48±0,64 ng/ml) e T1200 (5,90±1,33 ng/ml). Os resultados indicaram que as injeções de suplemento com betacaroteno e tocoferol não influenciaram na concentração plasmática de progesterona em novilhas Holandesas doadoras de embriões e em novilhas cruzadas, receptoras de embrião.

Efeito do ibuprofeno administrado uma hora antes da inovulação de embriões bovinos / Effect of ibuprofen administered one hour before the bovine embryo transfer

Avaliou-se o efeito do ibuprofeno administrado uma hora antes da inovulação de embriões bovinos, com o objetivo de melhorar a taxa de prenhez. Após a avaliação da resposta ao protocolo de sincronização do estro, 76 fêmeas selecionadas como receptoras de embriões foram distribuídas em três grupos (G) experimentais: G1 (n=25) receptoras usadas como controle, G2 (n=30) receptoras que receberam ibuprofeno 5mg/kg, I.M, uma hora antes da inovulação dos embriões, e G3 (n=21) receptoras que receberam uma matriz polimérica de liberação controlada de ibuprofeno administrado por via subcutânea. As taxas de prenhez foram de 16 por cento (4/25), 43,3 por cento (13/30) e 14,2 por cento (3/21), para G1, G2 e G3, respectivamente. Observou-se diferença (P<0,024) na taxa de prenhez do G2 quando comparado ao G1 e ao G3. A administração do ibuprofeno por via intramuscular uma hora antes da inovulação dos embriões resultou em melhor taxa de prenhez em receptoras da raça Nelore.

The effect of the administered ibuprofen was evaluated one hour before the embryo transfer of bovine embryos in order to improve pregnancy rates. After evaluating the response to protocol synchronization of estrus, 76 Females selected as the recipients of embryos were distributed into three experimental groups: G1 (n = 25) surrogate cows used as control, G2 (n = 30) surrogate cows that received 5mg/kg ibuprofen, IM, one hour before the embryo transfer, and G3 (n = 20) surrogate cows that received an array polymeric release of controlled ibuprofen subcutaneously administered. The pregnancy rates were 16 percent (4/25), 43.3 percent (13/30), and 14.2 percent (3/21) for G1, G2, and G3, respectively. There was statistical difference (P<0.024) on pregnancy rate of G2, in comparison with those of G1 and G3. The administration of ibuprofen intramuscularly one hour before the embryo transfer resulted in better pregnancy rate in Nellore surrogate cows.

Desempenho de novilhas Holandês na produção de embriões F1 Holandês-Zebu, em condições tropicais / Performance of Holstein heifers for F1 Holstein-Zebu embryo production, in tropical conditions

A produção in vivo de embriões bovinos é uma alternativa para a formação e manutenção de rebanhos mestiços F1 destinados à produção de leite. Objetivou-se estudar o potencial de utilização de novilhas da raça Holandês, mantidas em pasto e suplementadas, como doadoras de embrião, nas épocas de verão e inverno. Procederam-se superovulação e coleta de embriões em sete novilhas em cada época. Foram obtidos os dados climáticos, a temperatura retal e a frequência respiratória das doadoras. No verão, observou-se maior índice de temperatura e umidade (ITU) às 6h, 12h e 18h, bem como maior (P0,05) na média de estruturas recuperadas (20,14±17,47 vs. 8,57±9,40), embriões viáveis (14,57±11,91 vs. 7,14±7,24) e congeláveis (13,28±11,39 vs. 6,57±6,24) obtidos no inverno e no verão, respectivamente. Sob as condições estudadas, novilhas da raça Holandês podem ser utilizadas para a produção de embriões F1, tanto no verão, quanto no inverno.

In vivo embryo production (embryo transfer) is an alternative for F1 dairy herds formation and maintenance. The aim of this study was to evaluate the potential of utilization of grazing and supplemented Holstein heifers as embryo donors in summer or winter. Superovulation was performed in seven heifers on each season. Climatic parameters, as well as rectal temperature and respiratory rate of donors were measured. Temperature and humidity index (THI) was higher (p0.05). Holstein heifers can be used as embryo donors in both summer and winter, under the given conditions.

Associação entre sorologia para Neospora caninum e taxa de prenhez em vacas receptoras de embriões / Association between seropositivity for Neospora caninum and pregnancy rate in bovine receipts submitted to embryo transfer technology

The association between seropositivity for Neospora caninum and pregnancy rate in cows belonging to a surrogate herd submitted to embryo transfer technology was determined. The serological status was evaluated in 275 heifers, aging from 14 to 20-month-old. For N. caninum serology analysis of a monoclonal competitive ELISA test Kit was used, and 81 animals (29.5 percent) showed seropositive. Thus, two groups were randomly formed selecting 33 seropositive heifers and other 33 seronegative animals out of the remaining 194 animals. Seronegative animals were followed up by serological analysis until the end of the trial in order to identify persistently infected individuals. The pregnancy rate was 72.7 percent in the group of N. caninum-positive sera, and, 81.8 percent in the seronegative group.No significant difference was observed between groups according to Chi-square test. No association between N. caninum seropositivity and pregnancy rates in surrogate heifers was found

Comparação das taxas de prenhez entre receptoras com corpos lúteos cavitários ou compactos após protocolo de sincronização com cloprostenol ou transferência de embriões em tempo fixo / Comparison tge pregnancy rates between bovine recipients with cavitary or compact corpus luteum after cloprostenol or fixed time embryo transfer

O objetivo deste experimento foi avaliar as taxas de prenhez em receptoras com corpo lúteo (CL) compacto ou cavitário, submetidas a protocolos com cloprostenol ou transferência em tempo fixo. Foram utilizadas 203 novilhas mestiças. No primeiro grupo (G-PGF, n=103), os animais com CL previamente detectados por ultra-sonografia transretal receberam 500mg de Cloprostenol (Sincrocio, Ouro fino, Brasil), por via IM e permaneceram sob observação de cio por 72 horas. No segundo grupo (G-P4, n=100), as novilhas receberam um dispositivo intravaginal de progesterona (CIDR, Pfizer, Brasil) simultaneamente à aplicação IM de 2 mg de benzoato de estradiol (BE); (Estrogin, Farmavet, Brasil). No oitavo dia, os dispositivos foram retirados e os animais receberam 500 mg de Cloprostenol (Sincrocio, Ouro fino, Brasil) por via IM. Após 24 horas, os animais receberam uma aplicação IM de 1 mg de BE. A avaliação ultra-sonográfica do CL foi realizada 10 dias e 17 dias após o início dos tratamentos, respectivamente para os grupos G-PGF e G-P4. Todas as receptoras com CL receberam embriões produzidos in vitro. O diagnóstico de gestação foi realizado 23 dias depois, por ultra-sonografia. Os resultados foram analisados pelo testo do Qui-quadrado. Não houve diferença significativa nas taxas de aproveitamento de receptoras entre os grupos G-PGF e G-P4 (72,8; 75/103; 79; 79/100). Detectou-se CL cavitário em 21,3 (16/75) das receptoras do G-PGF e 22,7 (18/79) para o grupo G-P4 (P>0,05). Entre as receptoras com CL cavitário ou compacto, não houve diferença na taxa de prenhez 41,1 (14/34) e 38,3 (46/120), respectivamente. Os resultados demonstraram que não houve diferença nas taxas de prenhez de receptoras com corpos lúteos cavitários, em comparação às receptoras com CL compactos, independentemente dos tratamentos realizados.

The aim of this work was to evaluate pregnancy rates in bovine embryo recipients with compact andcavitary corpus luteum. Two hundred and three crossbred heifers were divided in two groups. In the firstgroup (G-PGF, n=103), the animals received 500 mg de Cloprostenol IM (Sincrocio, Ouro fino, Brasil) afterCL identification by ultrasonography. After that, heifers were detected for heat the next 72 hours. Theanimals from second group (G-P4, n=100) received an intravaginal progesterone device (CIDR, Pfizer,Brasil) and 2 mg estradiol benzoate (Estrogin, Farmavet, Brasil) IM, in random stages from estrus cycle.On the 8th day the devices were removed and the animals received 500 mg of Cloprostenol IM. After 24hall animals received 1 mg BE, IM. The CL was identified and evaluated at 10 and 17 days after thebeginning of the treatmentin G-PGF and G-P4, respectively. All the heifers with CL received IVP embryos.The pregnancy diagnosis was made by transrectal ultrasonography after 23 days. The results wereanalyzed by Chi-square. There were no significant difference in number of heifers ready to embryotransfer in G-PGF and G-P4, respectively 72.8% (75/103) e 79% (79/100); (P>0.05)Twenty one percent (16/75) had cavitary CL in G-PGF and 22.7% (18/79) in G-P4 (P>0.05). Among all embryo recipients with acavitary or compact CL there was no difference on pregnancy rates(41.1% 14/34 and 38.3% 46/120,respectively, P>0.05), regardless of protocol treatment

Biotecnologia de embriões: III - Otimização do momento da inseminação artificial em fêmeas bovinas superovuladas, para programas de transferência de embriões / Embryos' Biotecnology: III - Optimizing of the Moment of Artificial lnsemination in Superovulated Cows in Embryos Transfer Programs

O objetivo do presente trabalho foi comparar diversos esquemas de inseminação artificial (IA) utilizados em fêmeas bovinas de diferentes raças, doadoras de embriões, de forma a identificar o momento correto da inseminação em programas de transferência de embriões. Computou-se um total de 101 tratamento de indução à superovulação, com FSH-P e sincronização do estro pela aplicação da PGF 2. Os animais foram divididos em quatro grupos para estabelecer-se os esquemas da IA. A partir da detecção do estro, dois grupos de fêmeas sofreram três inseminações com 12h de intervalo (grupo 1) ou duas inseminações com 12h de intervalo (grupo 2), respectivamente esquema 1 e 2. Nos outros dois grupos, onde não se considerou a detecção do estro, as fêmeas sofreram três inseminações, 48, 60 e 72h após a aplicação do agente luteolítico (grupo 3), ou duas inseminações, 48 e 60h após a aplicação do mesmo agente (grupo 4), o que caracterizou os esquemas 3 e 4, respectivamente. A análise das estruturas embrionárias coletadas no 7º dia após a IA, demonstrou não haver diferença significativa (P > 0.05) entre os quatro esquemas de inseminação utilizados, em relação ao número total de embriões recuperados, ao número de embriões transferíveis, ao percentual de embriões degenerados, de não fecundados e de transferíveis. Esses achados indicam que, não foram necessárias mais do que duas inseminações nas fêmeas doadoras superovuladas, para obter-se até 54,98 ± 35,26% de embriões transferíveis, e que o momento da aplicação da PGF 2 pode ser utilizado como um parâmetro confiável, para determinar-se o momento correto da Inseminação Artificial.

The aim of this study was to compare differents artificial insemination (AI) scheduoles used in donors cows, in arder to get the optimun moment of insemination in embryo transfer programs. lt was done 101 treatments of induction to superovulation with FSH-p and estrus sincronization with PGF2. The females were divided in four groups in order to establish artificial insemination schedules. From estrus detection, two groups of donor females were inseminated three times (group 1) or twice (group 2) at 12th intervals, respectively schedule 1 and 2. In the others two groups wich the estrus detection was not considered, the donors were inseminated at 48, 60 and 72h (group 3) or twice, at 48 and 60h (group 4), after luteolitic agent administration, respectively schedules 3 and 4. The statistical analysis of recovered strutuctures on day 7 after AI showed no significant differences (P>0.05) in the four schedules in relation to total number of recovered embryos, transferable embryo number, degenerated embryos, no fertilized and transferable embryo rate. These results indicated that only two A. I. were enough to obtain 54.98 ± 35.26% of transferable embryos and the moment of PGF2 administration may be used as a trustworthy parameter in arder to establish the good time for artificial insemination on cattle.