Complexos imínicos de cobre com atividade antiparasitária frente à doença de chagas / Imine copper complexes with antiparasitic activity against Chagas disease

Neste trabalho foram sintetizados e caracterizados três complexos de cobre com ligantes imínicos, com o objetivo de avaliar sua atividade tripanocida. Esses complexos foram caracterizados por diversas técnicas espectroscópicas, como UV-Vis, Infravermelho e EPR, além de análise elementar e espectrometria de massa. Juntamente com outros complexos similares previamente sintetizados pelo nosso grupo, tiveram suas atividades avaliadas frente à forma tripomastigota do parasita T. cruzi, responsável pela fase aguda da doença de Chagas, por ensaios de viabilidade celular, com determinação do valor de seus IC50, concentração em que observamos a morte de 50% da cultura celular, pela metodologia denominada MTT. Todos os complexos mostraram-se eficientes frente a tripomastigotas, apresentando valores de IC50 abaixo de 10 µM, com quatro deles obtendo índice de seletividade maior que 10, fator importante para definir agentes promissores antichagásicos. Complexos selecionados também tiveram sua atividade verificada frente à forma amastigota do parasita, responsável pela fase crônica da doença, utilizando método de imageamento por microscópio de fluorescência e contagem celular. Estudos de inibição da cruzaína, uma cisteíno-protease importante para o metabolismo do parasita foram conduzidos em colaboração com o laboratório do Prof. Wagner Alves de Souza Júdice, da Universidade de Mogi das Cruzes. Quatro dos compostos testados apresentaram atividade inibitória frente a cruzaína, sendo dois de cobre, um de zinco e um ligante livre. Os estudos também permitiram diferenciar os mecanismos de inibição dos compostos, com os complexos de cobre apresentando um mecanismo de inibição clássico e o composto de zinco e o ligante livre apresentando o mecanismo de inibição competitiva parabólica com cooperatividade

In this work, three copper complexes with iminic ligands were synthesized and characterized, with the objective of evaluating their trypanocidal activity. These complexes were characterized by several spectroscopic techniques, such as UV-Vis, Infrared and EPR, in addition to elementary analysis and mass spectrometry. Together with other similar complexes previously synthesized by our group, their activities were evaluated against the trypomastigote form of the parasite T. cruzi, responsible for the acute phase of Chagas disease, by cell viability tests, with determination of the value of their IC50, concentration in that we observed the death of 50% of the cell culture, by the methodology called MTT, all presenting IC50 values below 10 µM, with four of them obtaining a selectivity index greater than 10, important factor for defining promising antichagasic agents. Selected complexes also had their activity verified against the amastigote form of the parasite, responsible for the chronic phase of the disease, using a fluorescence microscope and cell counting imaging method. Inhibition studies of cruzain, a cysteine protease important for the metabolism of the parasite, were conducted in collaboration with the laboratory of Professor Wagner Alves de Souza Júdice at the University of Mogi das Cruzes. Four of the tested compounds showed inhibitory activity against cruzain, two of copper, one of zinc and a free ligand. The studies also allowed to differentiate the mechanisms of inhibition of the compounds, with the copper complexes presenting a classic inhibition mechanism and the zinc compound and the free ligand presenting the competitive parabolic inhibition mechanism with cooperativity

Behavior of alfa-tomatine and tomatidine against several genera of trypanosomatids from insects and plants and Trypanosoma cruzi / Comportamento de alfa-tomatina e tomatidina contra vários gêneros de tripanossomatídeos de insetos e plantas e Trypanosoma cruzi

Glycoalkaloids are important secondary metabolites accumulated by plants as protection against pathogens. One of them, α-tomatine, is found in high concentrations in green tomato fruits, while in the ripe fruits, its aglycone form, tomatidine, does not present a protective effect, and it is usual to find parasites of tomatoes like Phytomonas serpens in these ripe fruits. To investigate the sensitivity of trypanosomatids to the action of α-tomatine, we used logarithmic growth phase culture of 20 trypanosomatids from insects and plants and Trypanosoma cruzi. The lethal dose 50% (LD50) was determined by mixing 107 cells of the different isolates with α-tomatine at concentrations ranging from 10-3 to 10-8 M for 30 min at room temperature. The same tests performed with the tomatidine as a control showed no detectable toxicity against the same trypanosomatid cultures. The tests involved determination of the percentage (%) survival of the protozoan cultures in a Neubauer chamber using optical microscopy. The LD50 values varied from 10-4 to 10-6 M α-tomatine. Slight differences were detected among the LD50 values of the analyzed samples, and none of them showed evidence of resistance to the action of tomatinase, as shown by some pathogenic fungi.

Os glicoalcaloides são metabólitos secundários importantes produzidos pelas plantas e estão envolvidos em sua proteção contra agentes patogênicos. Um deles, α-tomatina, é encontrado em altas concentrações em frutos de tomate verde, enquanto que, nos frutos maduros, sua forma aglicona, tomatidina, não apresenta um efeito protetor, sendo comum encontrar parasitas de tomates como Phytomonas serpens nesses frutos maduros. Para investigar a sensibilidade dos tripanossomatídeos à ação da α-tomatina, utilizamos formas de cultura em fase logarítmica de 20 tripanossomatídeos de plantas e insetos e Trypanosoma cruzi. A dose letal 50% (DL50) foi determinada, misturando 107 células das formas de cultura com concentrações de 10-3 a 10-8 M de α-tomatina durante trinta minutos a temperatura ambiente. Testes realizados com a tomatidina como controle não mostraram toxicidade detectável contra os mesmos tripanossomatídeos. Os testes foram avaliados pela porcentagem (%) de sobrevivência das formas de cultura dos protozoários observados por microscopia óptica em câmara de Neubauer. Os resultados da determinação de DL50 mostraram que esta variou entre 10-4 a 10-6 M de α-tomatina. Pequenas diferenças foram observadas entre os valores de DL50 das amostras analisadas, e nenhuma delas mostrou evidência de resistência pela ação da tomatinidase, como demonstrado em alguns fungos patogênicos.

Oleanonic acid from Lippia lupulina (Verbenaceae) shows strong in vitro antileishmanial and antitrypanosomal activity / Ácido oleanônico isolado de Lippia lupulina (Verbenaceae) apresenta potentes atividades leishmanicida e tripanocida

Leishmaniasis and Chagas disease affect millions of people in tropical and subtropical regions. Drugs used currently to treat such diseases often present undesirable side effects and low efficiency. The aim of this work was to identify extracts and isolated compounds from the genus Lippia with leishmanicidal and trypanocidal activity. Fifteen extracts from different plant parts of Lippia species with partially known chemical compositions, four partition fractions, six compounds and a mixture of four interconverting flavanones previously isolated from Lippia salviaefolia and Lippia lupulina were assayed in vitro towards epimastigote forms of Trypanosoma cruzi and promastigote forms of Leishmania amazonensis. The root extract of L. lupulina had potent activity against T. cruzi and L. amazonensis (IC50 of 20.0 and 54.5 µg mL-1, respectively). The triterpenoid oleanonic acid showed the strongest activity against these protozoans (IC50 of 18.5 and 29.9 µM, respectively). Our results indicate that Lippia plants and their derivatives deserve further investigation in the search for new antiprotozoal drugs, particularly for the treatment of leishmaniasis and Chagas disease.

Leishmaniose e doença de Chagas afetam milhões de pessoas em regiões tropicais e subtropicais. As drogas atualmente usadas para tratar estas doenças frequentemente apresentam efeitos colaterais indesejáveis e baixa eficiência. Este trabalho teve como objetivo encontrar extratos, frações e compostos isolados de espécies do gênero Lippia com atividades leishmanicida e tripanocida. Quinze extratos de diferentes partes de plantas do gênero Lippia, com composições químicas parcialmente conhecidas, quatro frações de partição, seis substâncias e uma mistura de quatro flavanonas interconversíveis isolados de Lippia salviaefolia e Lippia lupulina foram testados, in vitro, frente a formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi e promastigotas de Leishmania amazonensis. O extrato etanólico das raízes de L. lupulina apresentou atividade potente contra T. cruzi e L. amazonensis (IC50 de 20,0 e 54,5 µg mL-1, respectivamente), enquanto que o ácido oleanônico mostrou as atividades mais fortes contra estes protozoários, com IC50 de 18,5 e 29,9 µM, respectivamente. Estes resultados indicam que espécies do gênero Lippia e seus derivados merecem investigações adicionais na busca por novas terapias antiprotozoárias, especialmente para o tratamento de leishmaniose e doença de Chagas.

Actividad tripanocida de Piper solmsianum C. DC. sobre formas epimastigota y tripomastigota de Trypanosoma cruzi / Trypanocidal activity of Piper solmsianum C. DC. against epimastigote and trypomastigote forms of Trypanosoma cruzi

Introducción: la infección por Trypanosoma cruzi, conocida como enfermedad de Chagas, es un problema importante de salud pública en países de América Central y Sudamérica.Objetivo: evaluar la actividad de extractos crudos de acetato de etilo de plantas in vitro de 6-8 meses y 10-12 meses de edad, de tallos leñosos y hojas de plantas silvestres maduras y el lignano tetrahidrofurano grandisina, aislados de Piper solmsianum, sobre las formas epimastigota y tripomastigota de T. cruzi in vitro.Métodos: en la evaluación del efecto de diversos extractos crudos de acetato de etilo y grandisina de P. solmsianum, sobre la viabilidad de las formas epimastigota y tripomastigota de T. cruzi, se utilizó el método MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromuro).Resultados: en la forma epimastigota, el mejor resultado en la inhibición del crecimiento fue obtenido con 50 µg/mL de extracto de tallo y en la forma tripomastigota con 25 y 50 µg/mL de grandisina y plantas in vitro de 6-8 meses de edad, respectivamente. En todos los casos los valores de inhibición oscilaron entre 86 a 96 por ciento. Plantas in vitro de 6-8 meses de edad y grandisina fueron más activas sobre las formas epimastigota y tripomastigota de T. cruzi con valores de CI50 de 0,018 y 0,360 µg/mL, respectivamente.Conclusiones: se demuestra la actividad tripanocida de extractos de plantas silvestres y plantas in vitro de P. solmsianum(AU)

Introduction: the infection by Trypanosoma cruzi, known as Chagas' disease, poses a major public health problem in Central and South America countries.Objective: to evaluate the activity of crude ethyl acetate extracts from in vitro plants of 6-8 and 10-12 months of age, stem barks and mature wild plant leaves and tetrahydrofuran lignin grandisin isolated from Piper solmsianum against the epimastigote and trypomastigote forms of T. cruzi in vitro.Methods: in the evaluation of the effect of various crude ethyl acetate extracts and grandisin from P. solmsianum on the viability of epimastigote and trypomastigote forms of T. cruzi, the MTT method (3-(4,5-dimethylthiazol-2-il)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) was used.Results: in the epimastigote form, the best results in growth inhibition was obtained with 50 µg/mL of stem extract, and in the trypomastigote form, with 25 and 50 µg/mL of grandisin and 6-8 months-old in vitro plants, respectively. The inhibition values in all cases ranged from 86 to 96 percent. 6-8 months old in vitro plants and grandisin were found to be active against the epimastigote and trypomastigote forms of T. cruzi with IC50 of 0.018 µg/mL and 0.360 µg/mL, respectively.Conclusions: the trypanocidal activity of extracts from wild plants and in vitro plants of P. solmsianum was proved(AU)

Avaliação das atividades antibacteriana, tripanocida e citotóxica do extrato hidroalcóolico das raízes de Tradescantia sillamontana Matuda (Veludo Branco) (Commelinaceae) / Evaluation of antibacterial, trypanocidal and cytotoxical activities of the hydroalcoholic extract from the roots of Tradescantia sillamontana Matuda (Veludo Branco) (Commelinaceae)

RESUMO O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antibacteriano e tripanocida in vitro do extrato hidroalcóolico das raízes de Tradescantia sillamontana Matuda (Commelinaceae), conhecida popularmente como veludo branco. Foi avaliada a atividade antibacteriana in vitro frente às bactérias Streptococcus mitis (CIM = 100 µg/mL; CMB = 150 µg/mL), Streptococcus mutans (CIM = 200 µg/mL; CMB = 220 µg/mL), Streptococcus sanguinis (CIM = 400 µg/mL; CMB = 425 µg/mL), Streptococcus sobrinus (CIM = 400 µg/mL; CMB = 420 µg/mL) e Bacteroides fragilis (CIM = 400 µg/mL; CMB = 430 µg/mL) pelo método de diluição em caldo. Os protozoários da família tripanossomatídeo causam doenças tropicais que costumam ser negligenciadas que costumam ser como a tripanossomíase, para a qual estão disponíveis poucos medicamentos. Neste contexto, o extrato hidroalcóolico das raízes de T. sillamontana também foi avaliado frente às formas tripomastigotas da cepa Y de Trypanosoma cruzi, com promissora atividade frente a este protozoário (IC50 = 2,4 µg/mL). Quando avaliada a atividade citotóxica frente a fibroblastos da linhagem LLCMK2, o extrato apresentou moderada citotoxicidade (CC50 = 480,37 µg/mL). Os resultados ora apresentados para o extrato hidroalcóolico das raízes de Tradescantia sillamontana Matuda demonstraram promissoras atividades antibacteriana e tripanocida, sendo uma fonte alternativa de produtos naturais com atividades contra T. cruzi e algumas bactérias do gênero Streptococcus e Bacteroides.

ABSTRACT The aim of this study was to investigate the in vitro, antibacterial and trypanocidal effect of the hydroalcoholic extract from the roots of Tradescantia sillamontana Matuda (Commelinaceae), commonly known as Veludo branco. The in vitro antibacterial activity against the standard bacteria Streptococcus mitis (MIC = 100µg/mL; MBC = 150 µg/mL), Streptococcus mutans (MIC = 200µg/mL; MBC = 220 µg/mL), Streptococcus sanguinis (MIC = 400µg/mL; MBC = 425 µg/mL), Streptococcus sobrinus (MIC = 400µg/mL; MBC = 420 µg/mL) andBacteroides fragilis (MIC = 400µg/mL; MBC = 430 µg/mL), using microdilution broth methods. Protozoans from the trypanosomatid family cause neglected tropical diseases such as trypanosomiasis, for which few drugs are available. In this context, the hydroalcoholic extract of the Tradescantia sillamontana roots was also investigated with regards to the in vitro effects against the trypomastigote forms of theY strain of Trypanosoma cruzi, showing strong activity against this parasite (IC50 = 2.4 µg/mL). When performing cytotoxic activity against fibroblasts LLCMK2 line, the extract showed moderate cytotoxicity (CC50 = 480.37 mg/mL). The results presented for the hydroalcoholic extract of the roots of Tradescantia sillamontana Matuda demonstrated effective antibacterial and trypanocidal activities and were shown to be an alternative source of natural products with activity against T. cruzi and some bacteria of the genus Streptococcus and Bacteroides.

Avaliação da atividade citotóxica e potencial antiparasitário in vitro do a-pineno e carvacrol / Cytotoxic and antiparasitic in vitro activities of a-pinene and carvacrol

A leishmaniose e a doença de Chagas tem sido um grande desafio, no que diz respeito à sua terapêutica. Devido à grande dificuldade de encontrar fármacos que garantam uma ação terapêutica eficiente e menos agressora à espécie humana, diferentes produtos naturais vêm sendo testados. Muitas espécies vegetais foram investigadas quanto à sua ação leishmanicida e tripanocida na expectativa de que seus compostos metabólicos possuam atividade antiparasitária e ausência ou baixa citotoxicidade. Neste estudo sobre bioatividade do a-pineno e carvacrol, avaliaram-se os potenciais leishmanicida e tripanocida. O carvacrol apresentou um percentual de inibição de 38,34% e 74,12% para as formas promastigotas e epimastigotas respectivamente, na concentração de 100µg/mL, apresentando uma citotoxicidade de 21,62%. O a-pineno apresentou 100% e 5,30% de inibição para as formas epimastigota e promastigota na concentração de 100 µg/mL, com citotoxicidade de 87,88%.

Leishmaniasis and Chagas Disease represent a great challenge against the modern therapeutics. Due the high difficult to find new drugs with therapeutic efficacy and low toxicity, several natural products had been screened. Many species of plants were investigated about their leishmanicidal and trypanocidal activities. Some phytocompounds are the a-pinene and carvacrol. In this work, we evaluated the bioactivities of a-pinene and carvacrol against Trypanosoma cruzi and Leishmania braziliensis cell lines. The carvacrol inhibited 38,34% and 74,12% of the promatigote and epimastigote forms, respectively at 100 µg/mL, showing a low cytotoxic activity (21,62%). The O a-pinene inhibited 100% and 5,30% against the epimastigote and promastigote forms respectively, at 100 µg/mL, showing a higher cytotoxic activity (87,88%).

Citotocixidade e atividade antiparasitária de Lygodium venustum SW / Cytotoxic and antiparasitic activity of Lygodium venustum SW

. Doenças parasitárias infecciosas como leishmaniose e doença de Chagas tem se difundido nas últimas décadas a locais onde antes não se observava sua ocorrência. São consideradas negligenciadas por assolarem países pobres e serem marginalizadas farmacologicamente. O tratamento não apresenta muitas opções de fármacos e estes demonstram relevante toxicidade contribuindo para o aparecimento de diversos efeitos colaterais. A pesquisa com produtos naturais tem se mostrado uma interessante alternativa para a procura por novos fármacos. Lygodium venustum é uma samambaia cosmopolita de hábito lianescente encontrada na encosta na Chapada do Araripe, considerada por algumas populações americanas como planta medicinal para o tratamento de dermatoses, infecções, micoses e tricomoníases. Neste estudo foi avaliada sua atividade anti-parasitária contra Leishmania brasiliensis e Trypanosoma cruzi, bem como sua citotoxicidade através de ensaios n vitro. Foram testadas a fração hexânica e o extrato etanólico obtido das folhas de Lygodium venustum em diferentes concentrações. Para os testes in vitro de T. cruzi, foi utilizado o clone CL-B5 e para Leishmania brasiliensis foram utilizadas formas promastigotas. O ensaio de citotoxicidade foi realizado com linhagens de fbroblastos. L. venustum não apresentou atividade antiparasitária clinicamente relevante na forma de extrato etanólico bruto nem como fração hexânica contra Leishmania. A fração hexânica apresentou uma atividade intermediária contra T. cruzi, porém a concentração de efeito moderado possui citotoxicidade máxima tornando-se inviável para aplicação clínica. Entretanto, a citoxicicidade apresentada poderá ser útil em pesquisas sobre atividade antineoplásica em células tumorais.

Infectious and parasitic diseases like leishmaniasis and Chagas disease have spreading recent decades to places not observed before. They are considered neglected by desolating poor countries and marginalized pharmacologically. There are not many options for the treatment and these drugs have shown signifcant toxicity contributing to the appearance of several side effects. Research on natural products has been shown to be an interesting alternative to the search for new drugs. Lygodium venustum is a cosmopolitan fern with latescence habit found on the Chapada do Araripe, considered by some American popula-tions as a medicinal plant for the treatment of skin diseases, infections, fungal infections and trichomoniasis. This study evaluated its antiparasitic activity against Trypanosoma cruzi and Leishmania brasiliensis, as well as its cytotoxicity through trials in vitro. We tested the ethanolic extract and hexane fraction obtained from the leaves of L. venustum at different concentrations. For in vitro tests of T. cruzi, we used the clone CL-B5 and for L. brasiliensis we used promastigotes. The cytotoxicity assay was performed with strains of fbroblasts. L.venustum showed no antiparasitic activity clinically relevant in the form of crude ethanolic extractor as the hexane fraction against Leishmania. The hexane fraction showed an intermediate activity against T.cruzi, but the concentration of moderate effect has maximum cytotoxicity becoming unfeasible for clinical application. However, the cytotoxicity presented may be useful in research on antineoplastic activity in tumor cells.

Tripanocide and antibacterial activity ofAlvaradoa subovata Cronquist extracts / Actividad tripanocida y antibacteriana de extractos de Alvaradoa subovata Cronquist

We studied antioxidant, antibacterial and tripanocide activities of Alvaradoa subovata extracts. The ethanolic extracts showed the greatest DPPH radical scavenging capacity, especially that of bark with an IC50 = 4.7 +/- 0.18 ug/mL. Wood dichloromethane extract displayed growth inhibition of the phytopathogenic bacteria Xanthomona axonopodis in the disk diffusion assay and showed a MIC value of 100 ug/ml. It also showed growth inhibition of Trypanosoma cruzi (IC50 = 0.063 +/- 0.003 mg/mL). A fraction of this extract, which has emodin as the main component, showed tripanocide activity (60 percent of growth inhibition at 100 ug/mL). The main compounds in wood dichloromethane extract were anthraquinones, identified as chrysophanol and emodin, and coumarins, of which scopoletin was identified. These three compound s could serve as analytical markers of the extract. The results of this study show that wood extract of A. subovata constitute a source of bioactive compounds such as antiparasitic and pesticides agents.

En el presente trabajo se estudió la actividad antioxidante, antibacteriana y tripanocida de extractos de Alvaradoa subovata. La mayor actividad depuradora de radicales libres se observó en el extracto etanólico de corteza (CI50 = 4.7 +/- 0.18 ug/mL). El extracto en diclorometano de madera inhibió el crecimiento de la bacteria fitopatógena Xanthomona axonopodis con una CIM = 100 ug/mL. El mismo extracto mostró inhibición del crecimiento de Trypanosoma cruzi (CI50 = 0.063 +/- 0.003 mg/mL). Una fracción de este extracto (100 ug/mL), cuyo componente mayoritario es emodina, inhibió en un 60 por ciento el crecimiento del parásito. Los compuestos mayoritarios detectados en el extracto de madera fueron antraquinonas, entre las cuales se identificaron emodina y crisofanol, y la cumarina escopoletina. Estos tres compuestos podrían servir como marcadores analíticos del extracto. Los resultados de este trabajo muestran que los extractos de A. subovata constituyen una fuente de compuestos bioactivos con potencial como antiparasitarios y plaguicidas.

Fitoquímica y evaluación biológica de croton caracasana Pittier. Hemisintesis y evaluación biológica de derivados del ácido de caracasina / Phytochemistry and biological evaluation of croton caracasana Pittier. Hemisynthesis and biological evaluation of caracasin acid derivatives

En este trabajo de investigación se presenta los resultados del estudio fitoquímico de la planta Croton caracasana Pittier (Euphorbiaceae) colectada en Venezuela. De los tallos y hojas de la planta, se aislaron y caracterizaron siete compuestos identificados como 5-hidroxi-3, 7, 8, 3', 4'-pentametoxiflavona (I), lupeol (II), crotofolin E (III), crotocarasin A (IV), crotocarasin B (V), crotocarasin C (VI) y crotocarasin D (VII). Los compuestos IV, V, VI y VII se reportan por primera vez en la literatura de productos naturales. Se evaluó la actividad citotóxica de estos compuestos a través del método del MTT sobre las líneas celulares MCF-7 y SKBR3 (carcinoma mamario). Se encontró que los compuestos IV, V, VI y VII presentaron actividad citotóxica sobre las líneas MCF-7 y SKBR3, mientras que el compuesto III solo mostró actividad sobre la línea SKBR3. Adicionalmente, se realizó la hemisíntesis de diversos derivados del ácido de caracasina aislado de Croton micans. Estos derivados se obtuvieron a través de reacciones de formación de ésteres y amidas, reducción con H2 Pd/C y con NaBH4, reacciones con mm-CPBA y adiciones nucleofílicas 1,4. Se evaluó la actividad citotóxica, antibacteriana, leishmanicida y tripanocida de estos compuestos y se realizó un análisis preliminar de la relación estructura química-actividad biológica con los resultados obtenidos.

Avaliação da atividade anti-Trypanosoma e anti-Leishmania de Mentha arvensis e Turnera ulmifolia / Evaluation of the anti-Trypanosoma and anti-Leishmania activity of Mentha arvensis and Turnera ulmifolia

Tripanosomiasis or “Chagas disease”, caused by Trypanosoma cruzi, affect 10 million people in Latin America. Today, the chemotherapy is the only specific treatment against this disease, being the most used drugs the nifurtimox and benznidazole. Leishmaniasis is a disease caused by parasites of the genus Leishmania, mainly founded in regions with forests, as the Amazonia. Recent reports about the Leishmaniasis indicate a deficit of therapeutical drugs available against this disease and reinforce the necessity of the discovering of new drugs. An interesting approach against these diseases is the use of natural products, as the extracts of plants as Mentha arvensis and Turnera ulmifolia. For the in vitro assays against T. cruzi and Leishmania, was used the clone CL-B5 and promastigote forms, respectively. The cytotoxic assay was performed using fibroblasts. Our results indicated that M. arvensis was active against all strains assayed, inhibiting 65 e 47 percent of the assayed strains (IC50 = 192.3 and 531.9 ug/mL respectively), representing an interesting and alternative source of natural products with anti-kinetoplastida activity.

Doença de Chagas, causada por Trypanosoma cruzi, afeta cerca de 10 milhões de pessoas nas Américas. Atualmente, a quimioterapia é o único tratamento específico disponível para esta doença, onde os medicamentos utilizados são nifurtimox e benzonidazol. Leishmaniose tegumentar Americana no Brasil é causada por uma variedade de espécies de Leishmania e uma grande diversidade destes parasitos pode ser encontrada na Região Amazônica. Revisões recentes na quimioterapia de leishmaniose enfatizam as deficiências dos agentes terapêuticos atualmente disponíveis e mostram a necessidade urgente de novos candidatos. Uma alternativa para substituir esses medicamentos são extratos naturais de Mentha arvensis e Turnera ulmifolia. Foram preparados extratos etanólicos das folhas de M. arvensis e T. ulmifolia. Para os testes in vitro de T. cruzi, foi utilizado o clone CL-B5 e para Leishmania brasiliensis foram utilizadas formas promastigotas. O ensaio de citotoxicidade foi realizado com linhagens de fibroblastos. Nossos resultados indicam que M. arvensis foi eficaz contra as cepas de parasitos testadas apresentando 65 e 47 por cento de inibição em uma concentração de 500 ug/mL (respectivamente, CE50 = 192.3 e 531.9 ug/mL), sendo considerada uma fonte alternativa de produtos naturais com atividade contra T. cruzi e L. brasiliensis.

Actividad tripanocida y antioxidante in vitro de los extractos etanólicos de Caesalpinia pluviosa DC. y Astronium urundeuva (Allemâo) Engl. / Trypanocidal and antioxidant in vitro activities of ethanolic extracts from Caesalpinia pluviosa DC. and Astronium urundeuva (Allemâo) Engl

Caesalpinia pluviosa DC yAstronium urundeuva (Allemâo) Engl. , son plantas medicinales de uso tradicional en Bolivia. Para determinar la actividad tripanocida y antioxidante in vitro de los extractos etanólicos de estas especies vegetales, se realizó la medición de la inhibición del desarrollo in vitro de tripomastigotes de Trypanosoma cruzi, clon CL Brener. Los métodos antioxidantes fueron 1,1-difenil-2-picril-hidrazil (DPPH) y 2,2-azino-bis (3- etilbenzo-tiazolina-6-sulfónico ácido) diamonio sal (ABTS). El extracto etanólico de la corteza de Caesalpinia pluviosa DC tuvo la mayor actividad tripanocida (CI50 = 55 µg/ml +7,07) y antioxidante (CI50 = 0,166mg/ml por el método ABTS y CI50 = 1,30 por el método DPPH). En conclusión, este estudio revela que los extractos de Caesalpinia pluviosa DC y Astronium urundeuva (Allemâo) Engl., tienen un efecto tripanocida y antioxidante in vitro, justificando el uso tradicional de la planta y constituyéndose en excelentes candidatos para completar estudios biológicos in vivo y químicos. Esta asociación de actividad antioxidante-tripanocida, es una nueva perspectiva para el tratamiento de la enfermedad de Chagas. (AU)

Trypanocidal activity of flavonoids and limonoids isolated from Myrsinaceae and Meliaceae active plant extracts / Atividade tripanocida de flavonoides e limonoides isolados de extratos ativos de plantas de Myrsinaceae e Meliaceae

The activity of crude extracts of three Rapanea species (Myrsinaceae) and Cipadessa fruticosa (Meliaceae) was evaluated in vitro against the trypomastigote forms of Trypanosoma cruzi. Thirty-three extracts from different organs of these species were assayed and eleven of them showed significant activity (lysis percent >50). The fractionation of an active extract from branches of R. lancifolia (99.5 percent) led to the isolation of two flavonoids: quercetin and taxifolin, which have weak trypanocidal activity. Additionally, one active extract from fruits of C. fruticosa (97.7 percent) afforded mexicanolide limonoids: cipadesin, mexicanolide, febrifugin and cipadesin A, that were slightly active on T. cruzi. Moreover, other two flavonoids (flavone and 7-methoxyflavone), previously assayed against T. cruzi, were isolated from the hexane extract from branches of C. fruticosa (100 percent). The results presented here suggest that the plants evaluated could be a source of new active compounds against T. cruzi.

A atividade de extratos brutos de três espécies de Rapanea (Myrsinaceae) e de Cipadessa fruticosa (Meliaceae) foi avaliada in vitro contra formas tripomastigotas de Trypanosoma cruzi. Foram obtidos 33 extratos de diferentes órgãos das espécies estudadas, sendo que onze deles apresentaram atividades significantes ( por cento de lise > 50) nos ensaios realizados. O fracionamento de um extrato ativo dos galhos de R. lancifolia (99,5 por cento) resultou no isolamento de dois flavonoides (quercetina e taxifolina), que apresentaram baixa atividade tripanocida. De um extrato ativo dos frutos de C. fruticosa (97,7 por cento) foram isolados os limonoides mexicanolídeos cipadesina, mexicanolídeo, febrifugina e cipadesina A, que foram moderadamente ativos sobre T. cruzi. Além disso, outros dois flavonoides (flavona e 7-metoxiflavona), previamente ensaiados contra T. cruzi, foram isolados do extrato hexânico dos galhos de C. fruticosa (100 por cento). Os resultados obtidos aqui sugerem que as plantas avaliadas podem constituir fontes de novas substâncias ativas sobre o T. cruzi.

Actividad tripanocida in vitro e in vivo de extractos etanólicos de algunas plantas medicinales bolivianas / In vitro and in vivo trypanocidal activity, of ethanolic extracts from some bolivian medicinal plants

A 100 años del descubrimiento de la enfermedad de Chagas, aun no existen drogas que satisfagan completamente. Los extractos de plantas medicinales son una posibilidad de obtener nuevos compuestos que sean activos contra Trypanosoma cruzi. Se evaluó la actividad tripanocida in vitro sobre las formas tripomastigotes de ocho extractos etanólicos provenientes de 4 plantas medicinales bolivianas. El extracto etanólico de la corteza de Anacardium occidentale fue el más activo in vitro (CI50= 200 µg/ml), seguido de las hojas de Bowdichia virgilioides (350 µg/ml). A. occidentale, B. virgilioides y Senna reticulata, no son eficaces en la fase aguda de la enfermedad de Chagas en el modelo murino. (AU)

Trypanocidal activity of Piper arboreum and Piper tuberculatum (Piperaceae) / Atividade tripanocida de Piper arboreum e Piper tuberculatum (Piperaceae)

No escopo de nossas pesquisas sobre agentes bioativos da flora brasileira, vinte e quatro extratos e frações de Piper arboreum Aub. e Piper tuberculatum Jacq. (Piperaceae) tiveram sua atividade tripanocida avaliada através do ensaio colorimétrico com MTT. As atividades mais potentes foram manifestadas pelas frações hexânicas das folhas de P. arboreum (CI50 = 13,3 µg/mL) e P. tuberculatum (CI50 = 17,2 µg/mL). As frações hexânicas dos frutos de P. tuberculatum e P. arboreum também apresentaram efeito tóxico potente contra as formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi, com valores de CI50 (µg/mL) de 32,2 e 31,3, respectivamente. Adicionalmente, o estudo fitoquímico da fração hexânica das folhas de P. arboreum forneceu duas amidas pirrolidínicas, piperilina (1) e 4,5-diidropiperilina (2), que podem ser responsáveis pela atividade antiprotozoária desta fração.

In the scope of our ongoing research on bioactive agents from Brazilian flora, twenty-four extracts and fractions obtained from Piper arboreum Aub. and Piper tuberculatum Jacq. (Piperaceae) were screened for trypanocidal activity by using MTT colorimetric assay. The strongest activity was found in hexane fractions from the leaves of P. arboreum (IC50= 13.3 µg/ mL) and P. tuberculatum (IC50 = 17.2 µg/mL). Hexane fractions of the fruits of P. tuberculatum and P. arboreum showed potent toxic effects on epimastigote forms of Trypanosoma cruzi, with values of IC50 (µg/mL) of 32.2 and 31.3, respectively. Additionally, the phytochemical study of the hexane fraction of P. arboreum leaves furnished two pyrrolidine amides, piperyline (1) and 4,5-dihydropiperyline (2), which could be responsible, at least in part for the observed antiprotozoal activity.

Arrabidaea chica (HBK) Verlot: phytochemical approach, antifungal and trypanocidal activities / Arrabidaea chica (HBK) Verlot: abordagem fitoquímica, atividades tripanocida e antifúngica

Arrabidaea chica (HBK.) Verlot (Bignoniaceae) vernacular name "Pariri", is a climbing shrub, widespread from South Mexico to Guyana and central Brazil and is traditionally indicated to treat symptoms of inflammations and skin affections. Its ethanol extract was chemically investigated and tested against yeasts and dermatophytic fungi. The trypanocidal activity of the same extract was also evaluated. This work reports the isolation of three flavonoids, the total growth inhibition of Trichophyton mentagrophytes and a significant trypanocidal effect of the ethanol extract and its fractions. No relevant acute toxicity was detected even at a dose of 1000 mg/kg.

Arrabidaea chica (HBK.) Verlot (Bignoniaceae) popularmente, "Pariri", é um arbusto escandente, distribuído do sul do México até a Guiana e Brasil central e é tradicionalmente indicado para tratar sintomas de inflamações e afecções da pele. Seu extrato etanólico foi quimicamente investigado e testado contra leveduras e fungos dermatófitos. A atividade tripanocida do mesmo extrato foi também avaliada. Este trabalho reporta o isolamento de três flavonóides, a inibição total do crescimento de Trichophyton mentagrophytes e um significante efeito tripanocida do extrato etanólico e de suas frações. Não foi detectada qualquer toxicidade aguda relevante, mesmo a uma dose de 1000 mg/kg.

Susceptibilidad de trypanosoma cruzi a diferentes venenos de serpientes de Costa Rica / Susceptibility of Trypanosoma cruzi to different Costa Rican snake venoms

Se evaluaron los efectos tóxicos de los venenos de cinco serpientes costarricenses en cuanto a su capacidad tripanocida contra dos cepas de trypanosoma cruzi y sus efectos en cuanto a los mecanismos de muerte celular. Los venenos de bothrops asper, bothriechis schlegelii, crotalus durissus durissus, atropoides nummifer y A. picadoi, mostraron actividad tripanocida contra las formas de epimastigoto, amastigoto y tripomastigoto. Los venenos de b. asper y de A. nummifer presentaron la más alta citotoxicidad para las células Vero. Los de b. asper y b. schlegelii presentaron la más alta actividad en los epimastigotos de la cepa CL, mientras que los venenos de b. asper y el de A. nummifer fueron más eficientes contra los epimastigotos de la cepa Jennifer. El veneno de b. schlegelii produce un efecto proliferativo en las células Vero; mientras que el de C. d. durissus produce el mismo efecto en los epimastigotos de la cepa CL, ambos a la concentración de 2,5 Ig/mL. Los valores de CI50 mostraron que se requieren menores cantidades contra los amastigotos en relación con los epimastigotos. Los venenos de b. asper y B. schlegelii presentan la más alta actividad contra los amastigotos de ambas cepas. Con los tripomastigotos sanguíneos de la cepa GA, los cinco venenos ocasionaron una disminución de la motilidad en los diferentes tiempos de exposición, pero el veneno de A. nummifer, en las concentraciones más bajas, mostró una actividad más marcada en comparación con los otros veneno. En cuanto a los efectos de los venenos, mediados por los grados de apoptosis, necrosis o proliferación celular, se observó que estos fenémenos se presentan y tienen relación con el tipo de veneno, su concentración y el tiempo de exposición.

The trypanocide effect of venoms from five Costa Rican species of snakes was evaluated against two strains of trypanosoma cruzi and their cellular toxic effects were likewise observed. The venoms of Bothrops asper, bothriechis schlegelii, crotalus durissus durissus, atropoide nummifer and A. picadoi showed evident trypanocide action against epimastigotes, amastigotes and trypomastigotes. The venoms of b. asper and b. schlegelii were shown to be the most active against the epimastigotes of the CL strain, whereas those of b. asper and A. nummifer were more effective against the epimastigotes of the Jennifer strain. The venoms of b. schlegelii and C.d. durissus, at the lowest concentrations of 2.5 Ig/mL, were able to trigger a proliferative effect on Vero cells and epimastigotes of the CL strain, respectively. The IC50 values showed that lower amounts of venoms are necessary in order to inhibit amastigotes as compared to epimastigotes. The venoms of b. asper and b. schlegelii exhibited the highest activity against amastigotes of both T. cruzi strains. All venoms were able to arrest motility of blood trypomastigotes of the GA strain at different times and the most active in this case was A. nummifer venom. The toxic effects of the venoms measured by the degree of apoptosis, necrosis and cell proliferation that they produced showed that all these events occur and are related to the type of venom, its concentration and exposure time.

Trypanocidal activity of coumarins and styryl-2-pyrones from Polygala sabulosa A.W. Bennett (Polygalaceae) / Atividade tripanocida de cumarinas e estiril-2-pironas de Polygala sabulosa A.W. Bennett (Polygalaceae)

A bioatividade das frações e compostos obtidos de Polygala sabulosa contra as formas epimastigota, tripomastigota sanguínea e amastigota de Trypanosoma cruzi foram avaliadas in vitro. Frações diclorometano e acetato de etila mostraram potente atividade tripanocida sob as formas epimastigotas (IC50 < 10,4 µg/mL). Análises por cromatografia em camada delgada destas frações confirmaram a presença de compostos previamente descritos (dihidroestiril-2-pironas, estiril-2-pironas e 6-metoxi-7-preniloxicumarina). Após o fracionamento da fração diclorometano por cromatografia em coluna, obteve-se o composto α-espinasterol e da fração acetato de etila obtiveram-se os compostos apigenina, quercetina e uma quercetina-3- O-glicosídeo, todos descritos pela primeira vez para o gênero Polygala. 4-metoxi-6-(11,12-metilenodioxi-14-metoxidihidroestiril)-2-pirona, 4-metoxi-6-(11,12-dimetoxi-14-metoxiestiril)-2-pirona, 6-metoxi-7-preniloxicumarina e quercetina-3- O-glicosídeo mostraram fraca atividade contra a forma tripomastigota sanguínea (IC50 < 1008,6 µg/mL). A cumarina prenilada foi o composto mais ativo contra ambas as formas epimastigota e tripomastigota, com IC50 10,5 e 88,2 µg/mL, respectivamente. A atividade hemolítica e a toxicidade celular de cada composto foram também avaliadas. Além disso, 4-metoxi-6-(11,12-metilenodioxi-14-metoxidihidroestiril)-2-pirona e 6-metoxi-7-preniloxicumarina reduziram em quatro vezes a infecção em ratos por Vero Cells nas concentrações de 100 e 50 µg/mL respectivamente. Esses resultados mostram, pela primeira vez, a atividade de compostos de P. sabulosa contra T. cruzi.

Bioactivity of fractions and compounds obtained from Polygala sabulosa against Trypanosoma cruzi epimastigote, blood trypomastigote and amastigote forms were evaluated in vitro. Dichloromethane and ethyl acetate fractions showed a strong trypanocidal activity on epimastigotes (IC50 < 10.4 µg/mL). Chromatographic analysis by TLC of these fractions confirmed the presence of previously described compounds (dihydrostyryl-2-pyrones, styryl-2-pyrones and 6-methoxy-7-prenyloxycoumarin). The dichloromethane fraction was fractioned by silica gel column chromatography to afford the compound α-spinasterol and the ethyl acetate fraction yielded apigenin, quercetin and a quercetin-3-O-glucoside, being the first description for the Polygala genus. 4-Methoxy-6-(11,12-methylenedioxy-14-methoxydihydrostyryl)-2-pyrone, 4-methoxy-6-(11,12-dimethoxystyryl)-2-pyrone, 6-methoxy-7-prenyloxycoumarin and quercetin-3-O-glucoside showed a weak activity against blood trypomastigotes (IC50 < 1008.6 µg/mL). The prenylated coumarin was the most active compound against both epimastigote and trypomastigote forms, IC50 10.5 and 88.2 µg/mL, respectively. The hemolytic activity and cell toxicity of each active compound was also assessed. Furthermore, 4-methoxy-6-(11,12-methylenedioxy-14-methoxydihydrostyryl)-2-pyrone and 6-methoxy-7-prenyloxycoumarin reduced 4 times the T. cruzi infection rate for Vero cells at 100 and 50 µg/mL, respectively. These results show for the first time active compounds against T. cruzi in P. sabulosa.