Serum prevalence of anti-Trypanosoma vivax antibodies in cattle in Tapira-MG, Brazil / Soroprevalência de anticorpos anti-Trypanosoma vivaxem bovinos em Tapira-MG, Brasil

Trypanosoma vivax is considered the most important pathogenic Trypanosoma for cattle and causes great damage to the dairy and beef cattle industries. This study aimed to evaluate the prevalence of anti-T. vivax antibodies in dairy cattle from the municipality of Tapira, located in the Alto Paranaíba region, Minas Gerais, Brazil. The 74 blood serum samples from dairy cattle were analyzed using an indirect immunofluorescence reaction. The seroprevalence was 82.4 % (61/74), and the highest incidence observed can be correlated with the transit of untested animals, the presence of vectors, and needle sharing by owners. The data allowed defining Tapira as an area of expansion of T. vivax epizootic infections in the state of Minas Gerais.

O Trypanosoma vivax é considerado o mais importante trypanosoma patogênico para bovinos e causa grandes prejuízos na pecuária de corte e leite. Este estudo teve como objetivo avaliar a prevalência anticorpos de anti-Trypanosoma vivax em bovinos leiteiros do município de Tapira, localizado na região do Alto Paranaíba, Minas Gerais, Brasil. As 74 amostras de soro sanguíneo de bovinos leiteiros foram analisadas por meio de reação de imunofluorescência indireta. A soroprevalência foi de 82,4% (61/74), que pode estar relacionada ao trânsito de animais não testados, presença de vetores e compartilhamento de agulhas pelos proprietários. Os dados permitiram definir Tapira como uma área de expansão das infecções epizoóticas por Trypanosoma vivax no estado de Minas Gerais.

Detection of Trypanosoma vivax in tissues of experimentally infected goats: what is the role of adipose tissue in the life cycle of this protozoon? / Detecção de Trypanosoma vivax em tecidos de caprinos experimentalmente infectados: qual é o papel do tecido adiposo no ciclo de vida desse protozoário?

Abstract Trypanosomiasis, caused by Trypanosoma vivax, is responsible for great economic losses among livestock in Africa and South America. During the life cycle of these parasites, they may present different morphological, metabolic and physiological characteristics depending on the interactions that are encountered at each point of their life cycle. Although T. vivax is frequently reported in the circulation of its mammalian hosts, it has the ability to migrate to the tissues of these individuals. However, this characteristic is poorly understood. In this context, we aimed to investigate the presence of T. vivax and the changes caused in different tissues of experimentally infected goats. Despite the animals were not perfused before tissues collection, using different approaches, we demonstrated its presence in different samples, including in the adipose tissue and skin of infected animals. In addition, a mononuclear inflammatory reaction, mostly characterized by an infiltrate of lymphocytes, plasma cells and macrophages were observed. The results highlight the possibility that, like other trypanosomatids, T. vivax may use these tissues during its life cycle. Future studies aiming to elucidate the length of time for which T. vivax remains active in these sites, and whether it uses these sites as a refuge from trypanocidal drugs, and whether it is capable of recolonizing the blood circulation, are much needed.

Resumo A tripanossomíase, causada por Trypanosoma vivax, é responsável por grandes perdas econômicas na bovinocultura da África e da América do Sul. Durante seu ciclo de vida, o parasita pode apresentar diferentes características morfológicas, metabólicas e fisiológicas em função das interações que ele encontra em cada ponto do seu ciclo. Embora o T. vivax seja reportado, frequentemente, na circulação dos seus hospedeiros mamíferos, o protozoário tem a capacidade de migrar para os tecidos desses indivíduos. Entretanto, essa característica é pobremente conhecida. Neste contexto, o objetivo foi verificar a presença, assim como as alterações causadas pelo T. vivax nos diferentes tecidos de caprinos experimentalmente infectados. Apesar dos animais não terem sido perfundidos antes da coleta dos tecidos, utilizando-se diferentes abordagens, foi evidenciada a presença do T. vivax em diferentes amostras teciduais, incluindo no tecido adiposo e pele dos animais infectados. Além disso, foi observada reação inflamatória mononuclear, caracterizada majoritariamente por infiltrado de linfócitos, plasmócitos e macrófagos. Os resultados evidenciam a possibilidade de que, assim como outros tripanossomatídeos, T. vivax pode usar esses tecidos durante o seu ciclo de vida. São necessários futuros estudos, objetivando elucidar o período em que o T. vivax permanece ativo nesses sítios, se ele utiliza esses locais como refúgio das drogas tripanocidas, e se ele é capaz de recolonizar a circulação sanguínea.

Aspectos clínicos, epidemiológicos e diagnóstico da infecção por Trypanosoma vivax em rebanho bovino no estado do Maranhão / Clinical and epidemiological aspects and diagnosis of Trypanosoma vivax infection in a cattle herd, state of Maranhão, Brazil

O objetivo desse estudo foi investigar a ocorrência de tripanossomose em uma propriedade leiteira no município de Timon no estado do Maranhão, Brasil. O proprietário relatava histórico de abortos, nascimentos de crias fracas e mortalidade de animais adultos com perda progressiva de peso. Foram realizadas visitas à propriedade para obtenção do histórico, exame dos animais e coleta de sangue para realização do teste de Woo, hemogramas, testes sorológicos para pesquisa de anticorpos contra tripanossomose, leptospirose, e neosporose e PCR para diagnóstico molecular de Trypanosoma vivax. A identificação de animais com baixos valores no hematócrito foi a principal alteração hematológica identificada no rebanho. Dois animais foram positivos no teste de Woo, sendo visualizados tripanossomas em esfregaços sanguíneos, confirmados por meio de diagnóstico molecular como sendo T. vivax. Identificou-se que 95,23% (40/42) dos animais com hematócrito baixo foram sorologicamente positivos para T. vivax. As condições identificadas na propriedade, como ambiente propício aos vetores mecânicos, a presença de animais silvestres e a introdução de animais de estados onde já haviam sido registrados surtos de tripanossomose provavelmente estiveram associadas à introdução e disseminação do agente no rebanho. O elevado número de animais sorologicamente positivos para tripanossomose 82,51% (151/183) demonstra que praticamente todo o rebanho teve contato com o agente. O rápido estabelecimento das medidas de controle, entre elas a utilização das drogas tripanocidas, contribuiu para o controle do surto. O estudo permitiu comprovar a ocorrência de mais um surto de tripanossomíase tripanossomose no Brasil. O diagnóstico clínico da enfermidade foi dificultado pela semelhança dos sinais clínicos com outras enfermidades e pela possibilidade da associação de duas ou mais doenças no mesmo paciente, o que ressalta a importância do estabelecimento de medidas diagnósticas adequadas como forma de evitar a disseminação da enfermidade e minimizar as perdas econômicas dos produtores.(AU)

The objective of this study was to investigate the occurrence of trypanosomiasis in a dairy farm in municipality of Timon, State of Maranhão, Brazil. The owner reported abortus, births of weak calves, and mortality of adult animals with progressive weight loss. Visits to the property were carried out to obtain the history, realize animal examination and blood collection for the Woo test, hemograms, serological tests for trypanosomiasis, leptospirosis, and neosporosis and PCR for molecular diagnosis of Trypanosoma vivax. The identification of animals with low values in the hematocrit was the main hematological alteration identified in the herd. Two animals were positive in the Woo test and trypanosomes were visualized in blood smears, confirmed by molecular diagnosis as T. vivax. It was identified that 95.23% (40/42) of the animals with low hematocrit were serologically positive for T. vivax. The conditions identified in the property as an environment propitious to mechanical vectors, the presence of wild animals and the introduction of animals from states where trypanosomiasis outbreaks had already been reported were probably associated with the introduction and dissemination of the agent in the herd. The high number of serologically positive animals for trypanosomiasis 82.51% (151/183) shows that almost all the herd had contact with the agent. The rapid establishment of control measures, including the use of trypanocidal drugs, contributed to the control of the outbreak. The study allowed confirming the occurrence of another outbreak of trypanosomiasis in Brazil. The clinical diagnosis of the disease was difficult by the similarity of the clinical signs of trypanosomiasis with other diseases and the possibility of association of two or more diseases in the same patient, which emphasizes the importance of establishing adequate diagnostic measures as a way to avoid the dissemination of the disease and to minimize the economic losses of the producers.(AU)

Tripanosomiasis bovina en ganadería lechera de trópico alto: primer informe de Haematobia irritans como principal vector de T. vivax y T. evansi en Colombia

La tripanosomiasis bovina es una enfermedad hemoparasitaria transmitida en Latinoamérica principalmente por moscas picadoras de la familia Tabanidae. El objetivo del estudio fue evaluar la infección por Trypanosoma vivax y Trypanosoma evansi en ganadería bovina especializada en producción de leche en una hacienda y sus potenciales vectores. Se realizó un estudio parasitológico y entomológico directo por técnicas de microscopia y reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con dos marcadores moleculares para diferenciar especies de Trypanosoma en muestras de sangre de bovinos y moscas. La frecuencia de infección por Trypanosoma vivax y Trypanosoma evansi en bovinos fue de 3,6 y 0 %, respectivamente. La caracterización de vectores muestra a Haematobia irritans como la mosca más frecuente en la zona de estudio (97,1 %), seguida de Stomoxys calcitrans (2,8 %). No se identificaron tabánidos. Se encontró T. vivax y T. evansi en probóscide y toráx-abdomen de las moscas picadoras Haematobia irritans y Stomoxys calcitrans, lo que representa un comportamiento epizoótico atípico al que sucede en países de Suramérica. Por su alta densidad poblacional, se sugiere la mosca Haematobia irritans como el principal potencial vector.

Bovine trypanosomiasis is a hemoparasitic disease transmitted in Latin America mainly by biting flies of the family Tabanidae. The study aimed to evaluate infection by Trypanosoma vivax and Trypanosoma evansi in cattle specialized in milk production on a farm and their potential vectors. A direct parasitological and entomological study was performed using microscopy techniques and polymerase chain reaction (PCR) with two molecular markers to differentiate Trypanosoma species in blood samples of cattle and flies. Infection frequency with Trypanosoma vivax and Trypanosoma evansi in cattle was 3.6 and 0%, respectively. Characterization of vectors shows Haematobia irritans as the most frequent fly in the study area (97.1%), followed by Stomoxys calcitrans (2.8%). No horseflies were identified. T. vivax and T. evansi were found in proboscis and thorax-abdomen of biting flies Haematobia irritans and Stomoxys calcitrans, representing an epizootic behavior, atypical in South American countries. Due to its high population density, it is suggested that the Haematobia irritans fly is the main potential vector.

A tripanossomíase bovina é uma doença causada por hemoparasitas e transmitida na América Latina principalmente por moscas picadoras da família Tabanidae. O objetivo do estudo foi avaliar a infecção por Trypanosoma vivax e Trypanosoma evansi em gado bovino especializada em produção de leite em uma fazenda e seus potenciais vectores. Se realizou um estudo parasitológico e entomológico direto por técnicas de microscopia e reação em cadeia da polimerase (PCR) com dois marcadores moleculares para diferenciar espécies de Typanosoma em amostras de sangue de bovinos e moscas. A frequência de infecção por Trypanosoma vivax e Trypanosoma evansi em bovinos foi de 3,6 e 0 %, respectivamente. A caracterização de vetores mostra a Haematobia irritans como a mosca mais frequente na zona de estudo (97,1 %), seguida de Stomoxys calcitrans (2,8 %). Não se identificaram tabanídeos. Se encontrou T. vivax e T. evansi em proboscídea e tórax-abdômen das moscas picadoras Haematobia irritans e Stomoxys calcitrans, o que representa um comportamento epizoótico atípico ao que sucede em países da América do Sul. Por sua alta densidade populacional, se sugere a mosca Haematobia irritans como o principal potencial vetor.

Tripanosomiasis bovina en ganadería lechera de trópico alto: primer informe de Haematobia irritans como principal vector de T. vivax y T. evansi en Colombia / Bovine trypanosomiasis in dairy farming in the high tropics: First report of Haematobia irritans as the main vector for T. vivax and T. evansi in Colombia / Tripanossomíase bovina em gado leiteiro de trópico alto: primeiro relatório de Haematobia irritans como principal vetor de T. vivax e T. evansi na Colômbia

Resumen: La tripanosomiasis bovina es una enfermedad hemoparasitaria transmitida en Latinoamérica principalmente por moscas picadoras de la familia Tabanidae. El objetivo del estudio fue evaluar la infección por Trypanosoma vivax y Trypanosoma evansi en ganadería bovina especializada en producción de leche en una hacienda y sus potenciales vectores. Se realizó un estudio parasitológico y entomológico directo por técnicas de microscopia y reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con dos marcadores moleculares para diferenciar especies de Trypanosoma en muestras de sangre de bovinos y moscas. La frecuencia de infección por Trypanosoma vivax y Trypanosoma evansi en bovinos fue de 3,6 y 0 %, respectivamente. La caracterización de vectores muestra a Haematobia irritans como la mosca más frecuente en la zona de estudio (97,1 %), seguida de Stomoxys calcitrans (2,8 %). No se identificaron tabánidos. Se encontró T. vivax y T. evansi en probóscide y toráx-abdomen de las moscas picadoras Haematobia irritans y Stomoxys calcitrans, lo que representa un comportamiento epizoótico atípico al que sucede en países de Suramérica. Por su alta densidad poblacional, se sugiere la mosca Haematobia irritans como el principal potencial vector.

Abstract: Bovine trypanosomiasis is a hemoparasitic disease transmitted in Latin America mainly by biting flies of the family Tabanidae. The study aimed to evaluate infection by Trypanosoma vivax and Trypanosoma evansi in cattle specialized in milk production on a farm and their potential vectors. A direct parasitological and entomological study was performed using microscopy techniques and polymerase chain reaction (PCR) with two molecular markers to differentiate Trypanosoma species in blood samples of cattle and flies. Infection frequency with Trypanosoma vivax and Trypanosoma evansi in cattle was 3.6 and 0%, respectively. Characterization of vectors shows Haematobia irritans as the most frequent fly in the study area (97.1%), followed by Stomoxys calcitrans (2.8%). No horseflies were identified. T. vivax and T. evansi were found in proboscis and thorax-abdomen of biting flies Haematobia irritans and Stomoxys calcitrans, representing an epizootic behavior, atypical in South American countries. Due to its high population density, it is suggested that the Haematobia irritans fly is the main potential vector.

Resumo: A tripanossomíase bovina é uma doença causada por hemoparasitas e transmitida na América Latina principalmente por moscas picadoras da família Tabanidae. O objetivo do estudo foi avaliar a infecção por Trypanosoma vivax e Trypanosoma evansi em gado bovino especializada em produção de leite em uma fazenda e seus potenciais vectores. Se realizou um estudo parasitológico e entomológico direto por técnicas de microscopia e reação em cadeia da polimerase (PCR) com dois marcadores moleculares para diferenciar espécies de Typanosoma em amostras de sangue de bovinos e moscas. A frequência de infecção por Trypanosoma vivax e Trypanosoma evansi em bovinos foi de 3,6 e 0 %, respectivamente. A caracterização de vetores mostra a Haematobia irritans como a mosca mais frequente na zona de estudo (97,1 %), seguida de Stomoxys calcitrans (2,8 %). Não se identificaram tabanídeos. Se encontrou T. vivax e T. evansi em proboscídea e tórax-abdômen das moscas picadoras Haematobia irritans e Stomoxys calcitrans, o que representa um comportamento epizoótico atípico ao que sucede em países da América do Sul. Por sua alta densidade populacional, se sugere a mosca Haematobia irritans como o principal potencial vetor.

Morfometría Comparativa de Cinco Aislados Venezolanos Trypanosoma vivax / Comparative Morfometric of five Venezuelan Trypanosoma vivax isolates

La tripanosomosis causada por Trypanosoma vivax, se encuentra distribuida en las regiones tropicales y subtropicales de África, América Latina y Asia, causando grandes pérdidas económicas. Los análisis biométricos previos reportan que T. vivax mide entre 18 y 31 µm; sin embargo, pocos estudios de este tipo se han realizado en Venezuela. El objetivo del presente estudio fue describir y comparar la morfometría de cinco aislados de T. vivax, con el propósito de demostrar la variabilidad en el tamaño de los protozoarios obtenidos a partir de bovinos con infecciones activas en diferentes zonas geográficas del país. Para ello, se realizaron infecciones experimentales en ovinos y se tomaron muestras de sangre en el primer pico de parasitemia. Se registraron microfotografías de los estadios hematozoicos (20 micrografías de microscopia electrónica de barrido) de cada aislado para estudios morfológicos. Los resultados revelaron diferencias significativas (p<0,05); (p<0,01) en la longitud entre los aislados. Los valores totales promedios fueron: 20,99 ± 2,10 µm, con variaciones medias entre 18,12 ± 4,42 µm en los de menor tamaño y 24,35 ± 5,55 µm en la mayor longitud, respectivamente. Por lo tanto, se demostró la existencia de variabilidad en el tamaño de estos hemoparásitos de Venezuela.

Trypanosomosis caused by Trypanosoma vivax (T. vivax), is distributed in tropical and subtropical regions of Africa, Latin America and Asia, causing great economic losses. Previous biometric analysis report that T. vivax measures between 18 and 31 µm; but few such studies have been conducted in Venezuela. The aim of this study was to describe and compare the morphometry of five isolates of T. vivax, to demonstrate the variability in size of the protozoa obtained from naturally-infected cattle in different geographical areas of Venezuela. To accomplish this, experimental infections were induced in sheep and blood samples were taken at the first peak of parasitemia. Micrographs of stages of hematozoa (20 micrographs of each specimen using scanning electron microscopy) were recorded for morphological studies. The results of this research revealed significant (p<0.05); (p<0.01) statistical differences in length among them. The total average length was 20.99 ± 2.10 µm, with variations which ranged from 18.12 ± 4.42 µm, for smaller lengths, and 24.35 ± 5.55 µm, for greater lengths, respectively. Therefore, the existence of variability in the size of these hemoparasites in Venezuela was demonstrated.

Detecção de anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax em bovinos através do teste de Imunofluorescência indireta / Detection of IgG antibodies against Trypanosoma vivax in cattle by indirect immunofluorescence test

Trypanosoma vivax infecta uma grande variedade de animais ungulados selvagens e domésticos, podendo causar grande impacto na produção de ruminantes. Este trabalho teve como objetivo avaliar a detecção de anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax em bovinos provenientes do estado de Pernambuco, Brasil. Para tanto, foram analisadas 2,053 amostras de soro sanguíneo de bovinos provenientes de rebanhos de municípios do estado de Pernambuco, os quais foram analisados através da Reação de Imunofluorescência Indireta. Das amostras testadas 13,93% (286/2.053) foram reagentes para anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax. As freqüências, por mesorregião, variaram de 11,90% a 15,99%. Assim, os dados obtidos permitiram a caracterização do estado de Pernambuco como uma área de instabilidade enzoótica e sugere que o estado Pernambuco é área endêmica para Trypanosoma vivax e este parasito está distribuído por todo o estado.

Trypanosoma vivax infects a wide range of wild and domestic ungulates, causing important losses for the livestock industry. The aim of the present study was to assess the detection of IgG antibodies against T. vivax in cattle from the state of Pernambuco, Brazil. Therefore, we analyzed 2.053 blood serum samples from cattle herds of municipalities in Pernambuco, what was made by Immunofluorescence Assay. The overall seroprevalence of IgG antibodies against T. vivax in cattle was 13.93% (286/2053). The frequencies, by region, varied from 11.90% to 15.99%. Thus, the data obtained allowed to characterize the state of Pernambuco as an area of enzootic instability for T. vivax. The frequency herein reported (i.e., 13.93%) indicates that Pernambuco is an endemic area for T. vivax, this parasite being spread throughout the state.

Caracterización molecular de Trypanosoma vivax en ovinos naturalmente infectados en dos hatos de los municipios San Fernando y Biruaca estado Apure Venezuela / Molecular characterization of Trypanosoma vivax in naturally-infected sheep from two farms at San Fernando and Biruaca municipalities Apure state Venezuela

Este estudio tuvo como objetivo efectuar una caracterización molecular de Trypanosoma vivax en ovinos de dos hatos en los cuales estos rumiantes, conjuntamente con vacunos y búfalos de agua, comparten la misma área agroecológica, estableciendo el potencial papel de los ovinos como fuente de infección de tripanosomosis por T. vivax para los grandes rumiantes. La técnica de microcentrifugación capilar (TMC) fue usada para establecer el porcentaje de infecciones activas por tripanosomas existente en los animales evaluados. Se empleó un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para confirmar la identificación de especie, mientras que un ensayo de PCR-RFLP (polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción) permitió evaluar la variabilidad intraespecífica entre los aislados de T. vivax detectados en ovinos vs. aquellos provenientes de bóvidos (vacunos y búfalos de agua), colectados en la misma área de producción. De las 320 muestras de sangre de ovinos colectadas, la TMC detectó positividad en 11 (4,35 por ciento), lo que es de gran relevancia epidemiológica debido a la baja sensibilidad de esta metodología. Los resultados de PCR permitieron caracterizar a T. vivax como la especie presente en todas las infecciones activas detectadas. Todos los animales infectados mostraron un valor de hematocrito inferior (P<0,05) al registrado en animales no infectados (22,435 vs. 31,450). El ensayo de PCR-RFLP permitió observar la existencia de perfiles de restricción similares entre los aislados de T. vivax evaluados, sugiriéndose la ausencia de variación intraespecífica para el marcador molecular en estudio, independientemente del origen de hospedador del que provino la muestra (ovinos, vacunos, búfalos de agua). Estos resultados permiten sugerir que los aislados de T. vivax que infectan ovinos, vacunos y búfalos de agua en el área de estudio pudiesen estar estrechamente relacionados desde un punto de vista genético y, consecuentemente...

This study was made to achieve a molecular characterization of Trypanosoma vivax in two Venezuelan farms where both small ruminants (mainly ovines) and bovines (cattle and water buffaloes) share the same agroecological area. In addition, it was made to assess the role of sheep as source of T. vivax infection for cattle and buffalo herds. The microhematocrit centrifugation technique (MHC) was used to establish the percentage of current trypanosome infection. A PCR-based assay was used to confirm the species identification while a PCR-RFLP assay was used for studying intra-specific variation among T. vivax from sheep vs. those from other livestock from the same area. From 320 sheep blood samples, MHC detected 11 (4,35 percent) which is of remarkable epidemiological significance due to the low sensitivity of this method. Based on PCR results, T. vivax was characterized as the only species responsible for all sheep infections. All infected animals showed a lower packed cell volume value (P<0,05) when compared with the non-infected (22,435 vs. 31,450). The PCR-RFLP technique revealed similar profiles among T. vivax isolates suggesting a non intra-specific variation within the molecular marker amplified regardless the host (sheep water buffaloes or cattle). Thus, it was suggested that T. vivax infecting sheep, cattle, and buffaloes in the study area could be genetically closely related. These findings show that sheep may play an important role in the epidemiology of livestock trypanosomiasis in this area and they might be incorporated into therapeutic and preventive programs against livestock trypanosomiasis.

Tiempo de supervivencia in vivo y criopreservación de Trypanosoma vivax / In vivo survival time and cryopreservation of Trypanosoma vivax

Uno de los problemas más comunes del trabajo con Trypanosoma vivax, es la supervivencia y criopreservación de este protozoario, lo cual origina pérdida de aislados de campo y errores en exámenes parasitológicos. Se propone evaluar la supervivencia in vivo en condiciones de campo y criopreservación de T. vivax. Para determinar la supervivencia, la sangre se sometió a temperatura ambiente y refrigeración a 4°C, luego se determinó la sobrevivencia en el tiempo. Para el estudio de criopreservación, se emplearon dos crioprotectores de diferente naturaleza química: glicerol 10 por ciento y DMSO 5 por ciento de concentración final. Además, la criopreservación se realizó bajo tres condiciones de almacenamiento en nitrógeno líquido: 1) fase gaseosa 2) líquida y 3) combinación de ambas. Durante la evaluación de la supervivencia, se observó que la sobrevivencia de T. vivax en sangre refrigerada disminuyó significativamente (P<0,01), en comparación con aquellas sometidas a temperatura ambiente. Sin embargo, la sobrevivencia de éstos últimos comienza a disminuir luego de 6 horas, aunque algunos hemoparásitos permanecieron viables hasta 24 horas post-recolección. Para evaluar la criopreservación, al cabo de dos semanas, se descongelaron los crioviales, se determinó la sobrevivencia, resultando negativas las muestras sometidas a congelamiento directo en fase líquida. Los otros dos métodos empleados, resultaron similares (estadísticamente no significativos), el glicerol 10 por ciento resultó con mayor número de parásitos viables. En conclusión, se determinó que, las muestras infectadas con T. vivax deben evaluarse antes de 8 horas post-recolección y mantenerlas a temperatura ambiente. Por otra parte, el congelamiento debe realizarse en primera instancia en fase gaseosa o combinación gaseosa/líquida, empleando glicerol 10 por ciento. Estos resultados, permiten sugerir la mejor metodología a ser empleada para la supervivencia de los parásitos antes de exámenes parasitológicos...

One of the common problems working with Trypanosoma vivax is its survival and cryopreservation, which originates loss of field isolates and parasitological examinations mistakes. The aim of this paper was to study the best methodologies for in vivo survival under field conditions and cryopreservation of the T. vivax. In order to study complete blood survival of T. vivax, two surviving conditions were tested at: room temperature and refrigeration at 4°C. The result shows that surviving in cooled sampled diminished significantly (P<0.01) compare with room temperature. Nevertheless, surviving of room temperature parasite begins to diminish after 6 hours, although some parasites remained viable up to 24 hours post-harvesting. Cryopreservation studies were made under three liquid nitrogen storage conditions: 1) gaseous phase 2) liquid and 3) gaseous/ liquid phase combination (glycerol 10 percent and DMSO 5 percent, were used as cryoprotectants). After two weeks and defrost the survive of T. vivax from cryovials determined. The result show that: a) direct freezing in liquid phase samples were negative and b) the other two methodology were positive and statistically similar, glycerol 10 percent resulted with the greatest number of viable parasites. In conclusion, these results suggest that the best methodologies for conservation under field conditions, were that the samples infected with T. vivax must be evaluated before 8 hours post-harvesting at room temperature and cryopreservation condition of the T. vivax, must be made in gaseous phase or gaseous/liquid phase combination.

Inmunoensayo de capa fina (ICF) en el serodiagnóstico de la tripanosomiasis bovina causada por el trypanosoma vivax / Thin layer immunoassay (TIA) for the serodiagnosis of cattle Trypanosomiasis caused by trypanosoma vivax

El Trypanosoma vivax es el agente causal de la tripanosomiasis bovina. Las bajas parasitemias y sus oscilaciones típicas en la enfermedad, limitan el uso de métodos de diagnóstico directo. La prueba de ELISA es una técnica serológica con buena sensibilidad, especificidad y valor predictivo, pero con ciertos inconvenientes debido a su alto costo y difícil transferencia al campo. Dada la optimización previa de la técnica de ELISA para la detección de anticuerpos de bovino anti-T. vivax utilizando antígenos del Trypanosoma evansi, el objetivo de este trabajo fue el de optimizar la prueba de Inmunoensayo de Capa Fina (ICF) y aplicarla junto con la prueba de ELISA en un estudio seroepidemiológico comparativo. A manera general, los antígenos del T. evansi se sensibilizaron en las placas a distintas concentraciones en tampón carbonato 0,05 M pH 9,6, para posteriormente incubarlas en presencia de los sueros problema y de referencia, positivos y negativos, al T. vivax. El excedente de antígenos y sueros se eliminó por lavados con agua destilada y las reacciones antígeno-anticuerpo, se revelaron con los vapores de un baño de María en el caso del ICF y por incubación con anticuerpos secundarios conjugados a peroxidasa y un sustrato cromogénico para el ELISA. La seroprevalencia obtenida por ICF y ELISA fue del 38,66% y 36% respectivamente, a la vez que la distribución de la seroprevalencia por localidad, es similar en ambas pruebas. La fiabilidad del ICF en relación al ELISA quedó demostrada con una sensibilidad del 89,36% y especificidad del 75%. Los resultados demuestran que la prueba de ICF tiene una alta correlación con la prueba de ELISA, por ello la postulamos como una técnica alternativa en los estudios seroepidemiológicos de la tripanosomiasis bovina.

Trypanosoma vivax is the aethiological agent of bovine trypanosomiasis. The low parasitic burden and typical fluctuations, limit the direct diagnosis of the disease. The ELISA is a serological technique that has been used for the detection of trypanosomiasis. However, despite its good sensibility, specificity and predictive value, the high cost of this test has restricted its applicability under field conditions. Given the previous standardization of the ELISA assay for the detection of bovine antibodies against T. vivax using T. evansi antigens, the aim of this work was to standardize the Thin Layer Immunoassay (TIA) and apply it in conjunction with the ELISA test in a serological and epidemiological comparative study. Briefly, T. evansi antigens were sensitized in Petri dishes at different protein concentrations in 0.05 M carbonate buffer (pH 9.6). Subsequently, the Petri dishes were incubated in the presence of problem and reference sera, which were either positive or negative to T. vivax. The excess antigen and sera was eliminated by washes in distilled water and the antigen-antibody reactions were developed with a water steam in the TIA, followed by incubation with secondary antibodies (anti-bovine IgG) conjugated to Horseradish Peroxidase (HRP) and a chromogenic substrate in the ELISA. Results show that the values of seroprevalence obtained by both techniques were similar (38.66% and 36% for ICF and ELISA, respectively). Also, seroprevalence distribution in each locality was similar for both tests. The relative trustability of TIA was demonstrated with a sensibility of 89.36% and a specificity of 75%, respectively. These results suggest that TIA has a high correlation with ELISA and is suitable to be used in serological and epidemiological studies of bovine trypanosomiasis.

Frequency of antibodies to Babesia bigemina, B. bovis, Anaplasma marginale, Trypanosoma vivax and Borrelia burdgorferi in cattle from the northeastern region of the state of Pará, Brazil / Freqüência de anticorpos para Babesia bigemina, B. bovis, Anaplasma marginale, Trypanosoma vivax e Borrelia burgdorferi em bovinos do nordeste do Estado do Pará, Brasil

Babesiosis, anaplasmosis, and trypanosomosis are relevant diseases, potentially causing morbidity in cattle, leading to economic losses. Borreliosis is import as a potential zoonosis. The objective of this study was to determine, by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), the frequency of seropositive cattle to Babesia bigemina, B. bovis, Anaplasma marginale, Trypanosoma vivax and Borrelia burgdorferi in cattle from the Northeastern region of Pará, Brazil. Sera samples from 246 female adult cattle from municipalities of Castanhal and São Miguel do Guamá were used. Crude antigens ELISAs were used to detect antibodies to all agents, except to A. marginale, to which an indirect ELISA with recombinant major surface 1a protein (MSP1a) antigen was used. Overall frequencies of seropositive animals were: B. bigemina - 99.2 percent; B. bovis - 98.8 percent; A. marginale - 68.3 percent; T. vivax - 93.1 percent and B. burgdorferi - 54.9 percent. The frequencies of seropositive cattle to B. bovis and B. bigemina suggest a high rate of transmission of these organisms by tick in the studied region, which can be classified as enzootically stable to these hemoprotozoans. The low frequency of seropositive cattle to A. marginale may be attributed to a lower sensitivity of the recombinant antigen ELISA utilized or a distinct rate of inoculation of this rickettsia by ticks, as compared with Babesia sp. transmission. The high frequency of seropositive cattle to T. vivax indicates that this hemoprotozoan is prevalent in herds from the Northeastern region of Pará. The rate of animal that showed homologues antibodies to B. burgdorferi indicates the presence of the tickborne spirochaetal agent in the cattle population in the studied region.

A babesiose, a anaplasmose e a tripanossomose são enfermidades relevantes, potencialmente causadoras de morbidade em bovinos, levando a perdas econômicas. A borreliose assume importância como zoonose potencial. O objetivo desse estudo foi determinar, por meio do ensaio de imunoadsorção enzimática (ELISA), a freqüência de anticorpos para Babesia bigemina, B. bovis, Anaplasma marginale, Trypanosoma vivax e Borrelia burgdorferi em bovinos da região nordeste do Estado do Pará, Brasil. Amostras de soro de 246 vacas dos municípios de Castanhal e São Miguel do Guamá foram usadas. ELISAs com antígeno bruto foram utilizados para detector anticorpos contra todos os agentes, exceto para A. marginale, para o qual um ELISA indireto com proteína principal de superfície 1a (MSP1a) foi usado. As freqüências de bovinos soropositivos foram: B. bigemina - 99,2 por cento; B. bovis - 98,8 por cento; A. marginale - 68,3 por cento; T. vivax - 93,1 por cento and B. burgdorferi -54,9 por cento As freqüências de bovinos soropositivos para B. bovis e B. bigemina sugerem uma alta taxa de transmissão desses organismos por carrapatos, na região estudada, a qual pode ser classificada com sendo de estabilidade enzoótica para os hemoparasitos. A baixa freqüência de bovinos soropositivos para A. marginale pode ser atribuída a uma menor sensibilidade do ELISA com antígeno recombinante, ou uma menor taxa de inoculação da riquétsia pelos carrapatos, quando comparada àquelas observadas para Babesia sp. A alta freqüência de bovinos soropositivos para T. vivax indica que esse hemoprotozoário é prevalente em rebanhos do nordeste do Estado do Pará. O percentual de animais com anticorpos homólogos para B. burgdorferi indica a presenças deste espiroquetídeo transmitido por carrapatos na população de bovinos da região estudada.

Ocorrência de Trypanosoma vivax no estado de Minas Gerais / Occurrence of Trypanosoma vivax in Minas Gerais state, Brazil

A cow from Igarapé city, Minas Gerais state, Brazil, showing vision damage was referred at the Veterinary Hospital of the Universidade Federal de Minas Gerais. Clinical examination revealed anemia and a flagellated protozoan was observed in the blood smears obtained from the animal. The morphometric analysis demonstrated that the protozoan was Trypanosoma vivax. This is the first report of T. vivax occurrence in Minas Gerais state. An epidemiological investigation is currently being conducted on the farm and neighbor areas in order to estimate the parasite prevalence and the distribution of this trypanosomiasis in the region.

Biometry of Trypanosoma vivax found in a calf in the state of Maranhão, Brazil

Blood samples from cattle presenting signs of anemia, lethargy, weakness and general weight loss were collected. Trypanosoma vivax was detected in the blood smears of a calf. This paper reports the first recorded occurrence of T. vivax in the state of Maranhão, northeastern region of Brazil, and provides the biometrical data of the parasite.

Amostras de sangue foram coletadas de bovinos que apresentaram sinais de anemia, letargia, fraqueza e perda de peso. Trypanosoma vivax foi detectado em esfregaços sanguíneos de um bezerro. Este trabalho registra, pela primeira vez, a ocorrência de T. vivax no Estado do Maranhão, Região nordeste do Brasil, e fornece os dados biométricos do parasito.

Aspectos clínicos, epidemiológicos e patológicos da infecção natural em bovinos por Trypanosoma vivax na Paraíba / Clinical, epidemiological and pathological signs of natural infection in cattle by Trypanosoma vivax in Paraíba, Brazil

Descrevem-se dois surtos de tripanossomíase por Trypanosoma vivax em bovinos, ocorridos em dois estabelecimentos do alto sertão da Paraíba. Os sinais clínicos, a patologia e a epidemiologia da doença foram estudados no período de maio de 2005 a novembro de 2006.T. vivax foi identificado em esfregaços da capa leucocitária e mediante a reação em cadeia da polimerase (PCR). Os animais afetados apresentaram anorexia, depressão, febre, anemia, perda de peso, redução da produção leiteira, cegueira transitória, aborto e sinais nervosos caracterizados por incoordenação motora, salivação, opistótono, nistagno, tetania e bruxismo. Todos os animais que apresentaram sintomatologia nervosa morreram. As alterações macroscópicas observadas em um bovino submetido à necropsia foram aumento de volume dos linfonodos, atrofia serosa dos depósitos de gordura, aumento de volume do baço com evidência da polpa branca, hidropericárdio, além de petéquias e equimoses no epicárdio. Histologicamente havia meningoencefalite. O controle da doença na propriedade com tratamento específico dos casos clínicos com aceturato de diminazene foi eficiente, pois após o tratamento não se verificou mais a presença do parasita em esfregaços sanguíneos nem evidência clínica da enfermidade em até 2 meses após o início do surto. Os fatores epidemiológicos favoráveis à ocorrência dos surtos foram a abundância de vetores mecânicos, como tabanídeos e Stomozys spp., e a entrada, no rebanho, de animais oriundos de propriedades onde ocorreu a doença em questão. Sugere-se que o semi-árido do Nordeste, devido a períodos prolongados de secas e altas temperaturas, é região de instabilidade enzoótica para a tripanossomíase, em conseqüência, provavelmente, ao ambiente desfavorável para o desenvolvimento de vetores durante a maior parte do ano.

Two outbreaks of trypanosomiasis by Trypanosoma vivax, reported in cattle, occurred on two farms located in the state of Paraíba, northeastern Brazil. The epidemiology, clinical signs and pathology of the disease were studied from May 2005 to November 2006. T. vivax was identified morphologically and by polymerase chain reaction test (PCR). The affected cattle presented anorexia, depression, fever, anemia, weight loss, reduction in milk production, transitory blindness, abortion and some nervous signs as nystagmus, tetany and bruxism. All cattle that presented nervous signs died. Necropsy findings were enlarged lymph and spleen, serous atrophy of the fat depots, proeminence of the splenic white pulp, hydropericardium and pericardial petechiae and ecchymoses on the epicardium. Histologically there was meningoencephalitis. The treatment of the clinical cases with diminazena aceturate was efficient with clearance of the parasite from the blood or disappearance of clinical signs in up to 2 months after the beginning of the outbreak on the two farms studied. The epidemiologic factors favoring the occurrence of the outbreak were the abundance of mechanical vectors, as tabanids and Stomoxys sp., and the introduction into the herd of cattle from farms where the disease occurred. It is suggested that the semiarid of the Brazilian Northeast is an enzootic instability region for trypanosomiasis due to its prolonged periods of drought and high temperatures, constituting during most part of the year an unfavorable environment for the development of vectors.

Trypanosoma vivax: Bometría y eritrometría en infecciones experimentales

La anemia y la poiquilocitosis son manifestaciones clínicas características de la tripanosomosis por Trypanosoma vivax. No obstante, poco se sabe acerca de la multicausalidad de las alteraciones de forma y tamaño que experimentan los eritrocitos durante la infección. La parasitemia, las dimensiones tripomastigóticas y el área eritrocítica fueron registradas a lo largo de las infecciones. El análisis estadístico reveló cambios significativos en las variables consideradas. El estudio demostró relación entre las dimensiones tripomastigóticas y el área eritrocítica. Además, probó que el patrón de cambio morfométrico experimentado por tripomastigotes de aislados diferentes en distintos hospedadores, pudiera ser un evento hospedador-dependiente.

Anemia and poikilocytosis are clinical manifestations characteristic to tripanosomosis by Trypanosoma vivax. Nevertheless, little is known about the multicausality of the form and size alterations that experience the erythrocytes during the infection. The parasitemia, the trypomastigotic dimensions and the erythrocytic area were registered throughout the infections. The statistical analysis reveals significant changes in the considered variables. The study demonstrated relationship between the trypomastigotic dimensions and the erythrocytic area. In addition, it proved that the pattern of trypomastigote morphometric change of different isolates experienced in different hosts could be a host-dependent event.

Trypanosomosis por trypanosoma vivax en búfalos (bubalis bubalis), en dos fincas del estado guárico, venezuela / Trypanosomosis due to trypanosoma vivax in two buffalo (bubalus bubalis) farms of guárico state, venezuela

El presente trabajo contempló la determinación de la seroprevalencia y agroecoepidemiología de la trypanosomosis por Trypanosoma vivax en dos fincas de búfalos (Bubalis bubalis) del oriente del estado Guárico, Venezuela. Durante la época lluviosa (julio a octubre 1991), se procesaron un total de 240 muestras sanguíneas de búfalos, de raza Murrah belgas, hembras y machos, de diferentes edades, mediante la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Fueron tomados datos sobre área de estudio y caracterización de las fincas a fin de correlacionarlos con la seroprevalencia. Como resultados se obtuvo una seroprevalencia promedio de 29,5% donde el 75% eran animales adultos, con una distribución por sexo de 75% en hembras y 25% en machos. Ambas fincas se encontraron en la zona de vida E (bosque seco tropical) y en las unidades agroecológicas E101 y E110, presentando como características relevantes que, una de ellas explota la ganadería bovina en conjunto con la bufalina asociada con cultivos de cereales (sorgo y maíz); la extensión de las fincas era mayor a las 500 ha y reportan alta presencia de tábanos (100%) (P < 0,05). Se concluye que la trypanosomosis en búfalos debido a T. vivax alcanzó una alta seroprevalencia en las fincas estudiadas, bajo sistemas de producción de doble propósito bajo pastoreo.

The present study was carried out for establish seroprevalence and agriecoepidemiology of the trypanosomosis due Trypanosoma vivax in two buffalo (Bubalis bubalis) farms of the eastern of Guárico state, Venezuela. During the raining season (July to October, 1991) a total of 240 blood samples of Murrah Belgian buffalo races were analyzed by the immunofluorescent antibody test (IFAT). Data gathered included: characterization of farms and the studied area with the objective to correlate with seroprevalence. Results showed an 29.5% average of seroprevalence, with an etarian distribution of 75% in adults animals. Sex distribution was 75% in females and 25% in males. Both farms were in the life zone E (tropical dry forest) and the ecological unities E101 and E110. One farm produced simultaneously bovine cattle associated with crops (sorghum and maize), and the extention of farms was more 500 ha with high presence of tabanus. It is concluded that trypanosomosis due T. vivax in buffaloes reached a high seroprevalence in dual purpose systems with buffaloes under pasture.