Clinical and epidemiological characteristics of probable cases of congenital Zika syndrome and dengue antibody levels, Tuxtla Gutierrez, Chiapas, Mexico

Introduction: We previously found that the occurrence of congenital Zika syndrome was under-reported in Mexico. It was postulated that high dengue virus antibody levels found at the population-level in endemic countries might have contributed to the occurrence of the regional pandemic of Zika disease. A case series of suspected cases of congenital Zika syndrome in a maternity hospital in Tuxtla Gutierrez, Chiapas, Mexico was assembled to assess why they were not reported and to explore the hypothesis of dengue virus antibody-dependent enhancement of Zika disease. Methods: We used a quantitative approach to describe clinical and imaging records and used data from interviews of a total of 13 suspected cases of congenital Zika syndrome. We also quantitated dengue 1 and 2 antibodies using an 80% plaque reduction neutralization test of sera specimens obtained from the mothers of these 13 cases and compared them to those of a group of mothers who delivered normal newborns in the same hospital. Results: Only one of the suspected cases was laboratory-confirmed because appropriate specimens were not collected from the newborns as required by the case definition. We found 1) microcephaly, 2) hypoplasia/hypogeneses, thinning or absence of brain structures, 3) multiple birth defects, 4) calcifications, and cysts, 5) meningocele/encephalocele, and 6) hydrocephalus in 100 %, 76.9 %, 38.5 %, 38.5 %, 30.8 %, and 23.1 %, respectively of the case series. The cases clustered geographically, and 77 % occurred between May 2016 to March 2017 and recalled or were told by a doctor they had Zika fever. There was a four-fold increased risk of congenital Zika syndrome among those with dengue 1 antibody as compared to those with dengue 2 antibodies (odds ratio = 3.6; 95 % confidence interval: 0.7, 20.5), reaching only borderline statistical significance. Conclusions: We found in the largest maternal facility of the capital of the State of Chiapas, in Mexico, that only 7.7 % of suspected cases were confirmed, and that the rather complex requirement of cerebrospinal fluid specimens or serological specimens of newborns for suspected cases of congenital Zika syndrome used during the pandemic resulted in low sensitivity of the surveillance system. The finding of higher levels of dengue 1 than dengue 2 antibodies in cases than the referent population, requires further evaluation and may suggest a role for dengue antibody-dependent response in Zika disease.

Introducción: Previamente los autores habían encontrado evidencia de sub-notificación de la ocurrencia del síndrome congénito por Zika en México. Se ha postulado que niveles elevados de anticuerpos contra los virus del dengue a nivel poblacional en los países endémicos hubiese contribuido a la ocurrencia de la pandemia regional de enfermedad por Zika. Ensamblamos una serie de casos sospechosos de síndrome congénito por Zika en un hospital de maternidad en Tuxtla Gutiérrez, Chiapas, México, para evaluar por qué no fueron notificados y explorar la hipótesis de enfermedad por Zika incrementada por anticuerpos anti-dengue. Métodos: Utilizamos un enfoque cuantitativo para describir 13 casos sospechosos de síndrome congénito por revisamos registros clínicos e imágenes, entrevistas. También cuantificamos los niveles de anticuerpos para los virus dengue 1 y 2 en suero de las madres de los casos comparados con los de mujeres que tuvieron recién nacidos normales en el mismo hospital. Resultados: Solamente uno de los 12 casos sospechosos fue confirmado por laboratorio, porque en los demás no se recolectaron especímenes adecuados de los neonatos como lo requería la definición de casos. Encontramos 1) microcefalia, 2) hipoplasia y adelgazamiento de las estructuras cerebrales, 3) malformaciones múltiples, 4) calcificaciones o quistes, 5) meningocele/encefalocele, y 6) hidrocefalia en: 100 %, 76.9 %, 38.5 %, 38.5 %, 30.8 %, y 23.1 %, en ese orden entre los casos sospechosos. Los casos se aglutinaron geográficamente y 77 % ocurrieron entre Mayo del 2016 y Marzo del 2017, y sus madres recordaban que tuvieron o que un profesional de la salud les dijo que tuvieron fiebre por Zika. Encontramos un incremento de casi 4 veces en el riesgo de síndrome congénito por Zika para aquellos con altos niveles de anticuerpos anti-dengue 1 comparado con anticuerpos anti-dengue 2 (cociente de suertes = 3.6; intervalo de confianza del 95 %: 0.7, 20.5), alcanzando solamente una significancia estadística limítrofe. Conclusiones: Encontramos en el establecimiento de atención a la maternidad más grande en la capital de Chiapas, México, que solamente 7.7 % de los casos sospechosos de síndrome congénito por Zika fueron confirmados y que los relativamente complejos requerimientos de la definición de casos de muestras serológicas o de líquido cefalorraquídeo resultó en una baja sensibilidad del sistema de vigilancia. El hallazgo de niveles más altos de anticuerpos a dengue 1 que dengue 2 requiere más evaluación y pudiera sugerir un papel de la respuesta dependiente de anticuerpos al dengue en Zika.

Encefalitis como complicación neurológica por dengue / Encephalitis as neurological complication due dengue

Resumen Se presenta el caso de un varón de 32 años, previamente sano, que consultó por fiebre de cinco días, cefalea, dolor retro-ocular, rash, petequias, mialgias, artralgias y dolor abdominal. Presentaba leucopenia, trombocitopenia intensa, transaminitis y tiempo de coagulación prolongado. Se diagnosticó un dengue grave con coagulopatía que requirió manejo en Unidad de Cuidados Intensivos. Evolucionó con alteración del estado de conciencia, agitación psicomotora y agresividad. Se descartaron alteraciones estructurales, isquémicohemorrágicas, infecciones bacterianas y micóticas. Se confirmó finalmente una encefalitis por dengue por una RPC para virus dengue positiva en LCR. Se brindaron medidas de soporte con una evolución favorable. La encefalitis es la complicación neurológica más grave tras la infección por virus del dengue.

Abstract We present the case of a 32-year-old male, previously healthy, with a 5-day history of fever, frontal-occipital headache, retro-ocular pain, rash, petechiae, myalgia, arthralgia, and abdominal pain. Blood tests with leukopenia, severe thrombocytopenia, transaminitis, long clotting times. Severe dengue with associated coagulopathy was diagnosed, indicating transfer to ICU. Presents torpid evolution, altered state of consciousness, psychomotor agitation, and aggressiveness. Structural, ischemic-hemorrhagic alterations, bacterial and fungal infections were ruled out. Finally diagnosing dengue encephalitis, confirmed by DENV PCR in CSF. Support measures are provided with favorable evolution. Encephalitis is the most serious neurological complication after dengue virus infection.

Evaluación preliminar de la actividad antiviral de Ageratina havanensis frente al virus dengue-2 utilizando ensayos inmunoenzimáticos

RESUMEN Introducción: Se presenta la evaluación preliminar de la actividad antiviral de extractos de Ageratina havanensis (etanólico de tallo, AH-T-EtOH; butanólico de hoja, AH-H-ButOH y acetato de etilo de hoja, AH-H-AcEtO) utilizando dos sistemas inmunoenzimáticos, un ELISA celular (ELISAc) y la técnica de inmunoperoxidasa. Objetivo: Evaluar la actividad antiviral de los extractos de Ageratina havanensis utilizando dos sistemas inmunoenzimáticos. Métodos: Se normalizó y empleó un ELISAc y la técnica de inmunoperoxidasa en evaluar de forma preliminar la actividad antiviral de tres extractos de Ageratina havanensis a diferentes concentraciones y tiempos de adición mediante la detección de la expresión de la proteína E del virus dengue. Resultados: El ELISAc logró como parámetros óptimos: línea celular Vero, antígeno viral en cultivo de células, tiempo de expresión de la proteína E de 96 h, compuesto fijador metanol-acetona y bloqueador leche descremada al 1 %. La menor expresión de la proteína E (mayor inhibición sobre la replicación viral), fue al adicionar el extracto AH-T-EtOH a su mayor concentración y 1 h antes de inocular el virus dengue-2 cepa A15 (VDEN-2 A15). El extracto AH-H-ButOH a concentraciones de 125 µg/mL y 250 µg/mL presentó una ligera limitación de expresión de E 1 h después de la inoculación viral. El extracto AH-H-AcEtO a las concentraciones empleadas, no mostró difererencia añadido antes y después de la inoculación. El ensayo de inmunoperoxidasa exhibió resultados análogos para los extractos. Conclusiones: La mayor inhibición de la replicación viral fue obtenida con el extracto AH-H-ButOH, a su mayor concentración y ambos tiempos de adición. Los ensayos inmunoenzimáticos aplicados son herramientas útiles para evaluar extractos de Ageratina havanensis con posible actividad antiviral.

ABSTRACT Introduction: A preliminary evaluation is presented of the antiviral activity of Ageratina havanensis extracts (stem ethanolic, AH-T-EtOH; leaf butanolic, AH-H-ButOH; and leaf ethyl acetate, AH-H-AcEtO) using two enzyme immunoassays, cellular ELISA (C-ELISA) and immunoperoxidase technique. Objective: Evaluate the antiviral activity of Ageratine havanensis extracts using two enzyme immunoassays. Methods: C-ELISA and immunoperoxidase technique were standardized for use in the preliminary evaluation of the antiviral activity of three Ageratina havanensis extracts at different concentrations and addition times through detection of the expression of the E protein of dengue virus. Results: C-ELISA achieved the following optimal parameters: Vero cell line, viral antigen in cell culture, protein E expression time 96 h, methanol-acetone fixation compound and 1% skimmed milk blocker. The smallest expression of protein E (greatest inhibition over viral replication) was achieved at addition of extract AH-T-EtOH at its highest concentration and 1 h before inoculating dengue-2 virus strain A15 (VDEN-2 A15). Extract AH-H-ButOH at concentrations of 125 µg/ml and 250 µg/ml presented a slight limitation in the expression of E 1 h after viral inoculation. Extract AH-H-AcEtO at the concentrations used did not show any difference when added before and after inoculation. The immunoperoxidase assay exhibited similar results for the extracts. Conclusions: The greatest inhibition of viral replication was obtained with extract AH-H-ButOH at its highest concentration and at both addition times. The enzyme immunoassays applied are useful tools to evaluate Ageratine havanensis extracts with potential antiviral activity.

LA PÉRDIDA DE FUNCIÓN DE LA QUINASA DEPENDIENTE DE CICLINA 5 (CDK5) ALTERA EL CITOESQUELETO Y REDUCE LA INFECCIÓN in vitro POR EL VIRUS DEL DENGUE 2 / The loss of function of Cyclin-Dependent Kinase 5 (CDK5) alters the Cytoskeleton and decrease the in vitro Dengue Virus-2 infection

RESUMEN La quinasa dependiente de ciclina 5 (CDK5) regula diversas funciones en neuronas, células endoteliales y epiteliales, entre ellas la dinámica del citoesqueleto. Así mismo, se ha reportado que componentes del citoesqueleto, tales como, filamentos de actina y microtúbulos juegan un rol importante durante la infección por el virus dengue (DENV). El objetivo del presente trabajo fue evaluar por dos métodos, inhibición química y silenciamiento génico, la participación de CDK5 durante la infección por DENV-2. La actividad antiviral de roscovitina fue evaluada usando ensayos de Unidades Formadoras de Placa (PFU). La eficiencia de transfección y el silenciamiento de CDK5, empleando miARNs artificiales, se determinó por citometría de flujo. El efecto sobre la proteína de envoltura viral y elementos del citoesqueleto se evidenció mediante microscopia avanzada de fluorescencia y análisis de imágenes. Roscovitina mostró actividad antiviral en etapas pre y post-infectivas en una forma dependiente de la dosis. El tratamiento con roscovitina y miRCDK5 mostró ser efectivo reduciendo la cantidad de CDK5 en células no infectadas. En células infectadas y transfectadas con miRCDK5, así como tratadas con el inhibidor, se observó una reducción significativa de la proteína de envoltura viral; sin embargo, no se encontró reducción significativa de CDK5. Además, el tratamiento con roscovitina indujo cambios celulares morfológicos evidentes en células infectadas. Los resultados indican la potencial participación de CDK5 durante la infección por DENV-2, posiblemente mediando la traducción proteica o la replicación del genoma viral a través de la regulación de la dinámica del citoesqueleto. Se requieren datos adicionales para esclarecer la mecanística del fenómeno usando métodos alternativos.

ABSTRACT Cyclin-Dependent Kinase 5 (CDK5) regulates several functions in neurons, endothelial, and epithelial cells, including the cytoskeleton dynamics. Likewise, it has been reported that some cytoskeleton elements, such as actin filaments and microtubules, play an essential role during Dengue virus (DENV) infection. This work aimed to evaluate the role of CDK5 during DENV-2 infection by two methods, chemical inhibition, and gene silencing. The antiviral activity of roscovitine was evaluated using Plaque Forming Units (PFU) assay. The transfection efficiency and knockdown of CDK5, using artificial miRNAs, was carried out by flow cytometry. The effect on the viral envelope protein and cytoskeleton elements was evidenced by advanced fluorescence microscopy and image analysis. Roscovitine showed antiviral activity in pre and post-infection stages in a dose-dependent manner. Treatment with roscovitine and miRCDK5 decrease the amount of CDK5 in uninfected cells. In cells infected and transfected with miRCDK5, as well as treated with the inhibitor, a significant reduction of the viral envelope protein was observed; however, no significant reduction of CDK5 was found. Also, evident morphological cellular changes were observed during the treatment with roscovitine in infected cells. The results indicate the potential participation of CDK5 during DENV-2 infection, possibly mediating protein translation or replication of the viral genome through the cytoskeletal dynamics regulation. Additional data are required to clarify the mechanistic of these phenomena using alternative methods.

Dengue virus infection induces chromatin remodeling at locus AAEL006536 in the midgut of Aedes aegypti / La infección por virus dengue induce remodelación de la cromatina en el locus AAEL006536 en el intestino medio de Aedes aegypti

Abstract: Objective: To identify and characterize Aedes aegypti's AAEL006536 gene proximal upstream cis-regulatory sequences activated by dengue virus infection. Materials and methods: A. aegypti Rockefeller strain mosquitoes were blood fed or infected with dengue virus 2. Open chromatin profiling was then carried out in pools of midguts from each group of mosquitoes. Results: The proximal upstream region does not contain open chromatin sites in the midguts of blood-fed mosquitoes as detected by FAIRE-qPCR. In contrast, two cis-regulatory sites were identified in the same upstream region of dengue virus-infected mosquito midguts. The distal sequence contains STAT-, REL- and C/EBP-type transcription factor binding sites. Conclusion: The activation of two proximal cis-regulatory sequences, induced by dengue virus infection, is mediated by chromatin remodeling mechanisms. Binding sites suggest a dengue virus infection-induced participation of immunity transcription factors in the up-regulation of this gene. This suggests the participation of the AAEL006536 gene in the mosquito's antiviral innate immune response.

Resumen: Objetivo: Identificar y caracterizar las secuencias reguladoras activadas por la infección por virus dengue en la región proximal del gen AAEL006536 de Aedes aegypti. Material y métodos: Mosquitos de la cepa Rockefeller de A. aegypti se infectaron con virus dengue o se alimentaron con sangre. Se obtuvieron los perfiles de cromatina abierta del locus en los intestinos de cada uno de los grupos. Resultados: Se identificaron dos sitios reguladores solo en los intestinos de mosquitos infectados por virus dengue. El sitio distal contiene sitios de unión a factores de transcripción tipo REL, STAT y C/EBP. Conclusiones: La activación de dos sitios reguladores proximales está mediada por la remodelación de la cromatina. Los sitios de unión a factores de transcripción en el sitio regulador distal sugieren la participación de las vías de inmunidad en la regulación del gen. Esto sugiere la participación de este gen en la respuesta inmune del mosquito frente a la infección viral.

Dengue perinatal: Reporte de caso / Perinatal Dengue: A case Report

Resumen Introducción: El dengue perinatal es una patología de la que poco se sabe, los reportes disponibles describen riesgo de resultados perinatales adversos. Objetivo: Reportar un caso de dengue perinatal, como diagnóstico diferencial de sepsis neonatal, que debe tenerse en cuenta en zonas endémicas. Caso clínico: Recién nacido de una mujer de 23 años quien a las 36 semanas de gestación presentó cuadro de dengue con antígeno Non-Structural Protein 1 (NS1) positivo y anticuerpos anti-dengue negativos. Al sexto día de enfermedad dio a luz a un recién nacido sano, quien, al segundo día de vida, presentó fiebre sin otros hallazgos patológicos al examen físico, asociado a trombocitopenia severa (17.900 plaquetas/uL) y aumento de la proteína C reactiva, antígeno viral NS1 positivo e in-munoglobulina G (IgG) anti dengue positiva. Fue manejado con antibióticoterpia con ampicilina y gentamicina por protocolo de la institución para sepsis neonatal probable. El neonato mostró me joría clínica, con estabilidad hemodinámica y aumento significativo de plaquetas, siendo dado de alta. Conclusiones: El dengue en el embarazo trae consigo el riesgo de resultados perinatales adver sos, particularmente bajo peso al nacer y parto pre-término. Los hijos de madres diagnosticadas con dengue al final del embarazo deberían ser observados estrechamente con realización de hemograma seriado en los primeros días de vida, debido al riesgo de transmisión vertical.

Abstract Introduction: Few reports are available about perinatal dengue, with controversial results in regards the risk of perinatal outcome. Objective: To report a case of perinatal dengue as a differential diagno sis with neonatal sepsis, which must be considered in endemic areas. Clinical case: Male newborn of a 23 year-old female, who presented a Non-Structural Protein 1 (NS1) antigen positive to dengue at 36 weeks of gestation and negative anti-dengue antibodies. At day six of the illness a healthy newborn was born. On the second day of life the neonate presented fever with no other pathological findings on the physical exam, associated with severe thrombocytopenia (17,900 platelets/uL), increased C-reactive protein, a positive NS1 antigen, and positive anti-dengue immunoglobulin G (IgG). He was treated with ampicillin and gentamicin according the Institution protocol of neonatal sepsis. The newborn showed clinical improvement, with hemodynamic stability and significant increase of platelets, receiving the medical discharge. Conclusions: Dengue in pregnancy produces the risk of adverse perinatal outcomes, particularly low birth weight and preterm delivery. Children of mothers diagnosed with dengue at the end of pregnancy should be observed closely with serial hemograms during child's first days of life, due to the high risk of vertical transmission.

Dengue y factores teratogénicos. Reporte de un paciente / Dengue and Teratogenic Factors. Report of a Patient

Se reportó un caso de aborto espontáneo producido entre la décima y oncena semanas de gestación en una gestante durante la epidemia de dengue que afectó la ciudad de Holguín, en el año 2015. El objetivo fue realizar el análisis de los factores teratogénicos que incidieron en el fracaso gestacional. La transmisión transplacentaria de la infección por el virus dengue al embriofeto, que provocó alteraciones en el proceso metabólico del desarrollo embriofetal fue el factor teratogénico primario, potencializados en forma sinérgica por la prolongada exposición febril que afectó la gestante, con la formación de un hematoma retroplacentario y la producción secundaria de un grado variable de insuficiencia placentaria, que ulteriormente condujo al desprendimiento placentario abortivo. La terapéutica farmacológica empleada (dipirona, gravinol, omeprazol, difenhidramina y benadrilina) por la insuficiente actividad enzimática microsómica y citosólica, característica en este estadio del desarrollo de la concepción, suele haber interrumpido o dificultado la actividad farmacocinética embriofetal, que actuó en calidad de coteratógeno en este estadio del desarrollo e incidió en el desarrollo de la concepción para producir el aborto espontáneo.

A case of spontaneous abortion occurred between the tenth and eleventh weeks of gestation in a pregnant woman during the dengue epidemic that affected the city of Holguín in 2015. The objective of this was to analyze of the teratogenic factors that affected the gestational failure. The transplacental transmission of dengue virus infection to embryofeto, which caused alterations in the metabolic process of the embryofoetal development, was the primary teratogenic factor, together with the prolonged febrile exposure that affected the pregnant woman, with the formation of a retroplacental hematoma, and secondary variable degree of placental insufficiency, causing the abortion. Dipyrone, gravinol, omeprazole, diphenhydramine and benadryline were the pharmacological therapy used, due to the insufficient microsomal and cytosolic enzymatic activity, characteristic at this stage of conception development, has usually interrupted or hindered the embryofoetal pharmacokinetic activity, acting as coteratogen, influenced in the development of conception to produce embryolethal effects, producing the spontaneous abortion.

Complicaciones neurológicas del virus chikunguya y dengue / Neurological complications of chikungunya and dengue virus

Resumen Los virus chikungunya (CHIKV) y dengue (DENV) son arbovirus transmitidos por el mosquito Aedes. La infección por ambos virus es casi privativa de regiones tropicales y subtropicales , pero en los últimos años han aparecido casos en la mayoría de los países, lo que ha aumentado el interés en estos virus. En esta revisión se describe las manifestaciones neurológicas de CHIKV y DENV. Los cuadros neurológicos observados en pacientes infectados por estos virus son en la mayoría de los casos encefalitis y encefalopatía. También hay cuadros de mielitis y encefalomielitis aguda diseminada(ADEM) post infecciosas. Más infrecuentemente se observa compromiso periférico: síndrome de Guillain Barré(SGB) y mononeuritis. La miositis y la parálisis periódica se observan aunque raramente en la infección por DENV. El diagnóstico se realiza por serología Ig M específica o por detección de ARN viral en suero y LCR. El tratamiento es de sostén pues no hay tratamiento específico. Los pacientes con cuadros post infecciosos/inmunomediados se tratan con inmunoglobulina(IG) EV o plasmaféresis(SGB)y con metilprednisolona/IG en pacientes con ADEM. Es fundamental realizar el diagnóstico precoz de la infección por DENV y CHIKV para tratar a tiempo las complicaciones sistémicas y neurológicas, en especial las encefalitis y cuadros postinfecciosos.

Abstract Chikungunya (CHIKV) and dengue (DENV) viruses are arboviruses transmitted by the Aedes mosquito. Infection by both viruses is almost deprived of tropical and subtropical regions, but in recent years cases have appeared in most countries, which has increased the interest in these viruses. This review describes the neurological manifestations of CHIKV and DENV. The neurological pictures observed in patients infected by these viruses are in most cases encephalitis and encephalopathy. There are also post-infectious myelitis and disseminated acute encephalomyelitis (ADEM). Peripheral involvement is more rarely observed: Guillain Barré syndrome (GBS) and mononeuritis. Myositis and periodic paralysis are seen but rarely in DENV infection. The diagnosis is made by specific IgM serology or by detection of viral RNA in serum and CSF. The treatment is supportive as there is no specific treatment. Patients with post-infectious / immunomediated squares are treated with immunoglobulin (IG) EV or plasmapheresis (GBS) and with methylprednisolone / GI in patients with ADEM. Early diagnosis of infection by DENV and CHIKV is essential to treat systemic and neurological complications, especially encephalitis and postinfectious disease.

Papel de las células dendríticas en la infección por el virus dengue: blancos de replicación y respuesta inmune / Role of dendritic cells in infection by dengue virus: targets for replication and immune response

Dengue fever, caused by dengue virus (DENV) infection, is one of the most important diseases in the world, not only due to the high morbidity/mortality rates it causes, but also because of its great economic and social impact in tropical/subtropical countries. DENV infection has a wide range of clinical manifestations ranging from asymptomatic infection or infection with mild symptoms to severe dengue that can lead to death. At present, no etiological treatment or effective globally distributed vaccine against the four DENV serotypes exists. Despite great efforts made to understand the mechanism associated with DENV disease pathogenesis the causes leading to severe dengue presentation have not been clarified. Some hypotheses seek to give a biological and physiological explanation to the clinical manifestations that appear during the infection. Based on the evidence that after contact with dendritic cells DENV alters the functionality of these cells, this review aims to describe the most relevant findings regarding the importance of dendritic cells in the context of DENV infection and progression of the illness.

El dengue, causada por el virus dengue (DENV), es una de las enfermedades más importantes no sólo por los altos índices de morbilidad/mortalidad, sino también por su gran impacto económico y social en los países de las regiones tropicales/subtropicales. La infección por el DENV cursa por un variado rango de manifestaciones clínicas que van desde una infección asintomática o con síntomas leves, hasta el dengue grave que puede ser fatal. En la actualidad, no se dispone de un tratamiento etiológico y tampoco de una vacuna eficaz mundialmente distribuida, contra los 4 serotipos del DENV. A pesar de los grandes esfuerzos orientados a entender el mecanismo asociado con la patogénesis de la enfermedad, aún no se ha logrado esclarecer de forma definitiva las causas que conllevan a las formas graves de enfermedad. Algunas hipótesis buscan dar una explicación biológica y fisiológica a las manifestaciones clínicas que se presentan durante la infección. Dado que una de ellas sugiere que luego del contacto con las células dendríticas el DENV altera su funcionalidad, la presente revisión tiene como objetivo describir los hallazgos más relevantes referentes a la importancia de dichas células en el marco de la infección por el DENV y progresión de la enfermedad.

Persistencia en la competencia vectorial de Aedes albopictus de Venezuela a una cepa asiática dengue 2 / Vector competence persistance of Venezuelan Aedes albopictus for an Asian dengue-2 strain

En Venezuela, existen poblaciones de Aedes aegypti (Ae. aegypti) de diferente origen geográfico y estructura genética que difieren en la competencia vectorial para el virus dengue. Debido a que, recientemente, se reportó la presencia de Aedes albopictus (Ae. albopictus), es importante también conocer la competencia vectorial de esta especie para prever el riesgo epidemiológico el cual conlleva a su propagación. Se determinó la persistencia en la competencia vectorial de Ae. albopictus de Maracay, Venezuela a una cepa asiática dengue 2. Las especies de mosquitos Ae. albopictus y Ae. aegypti fueron alimentadas con una suspensión sangre-virus dengue 2 y luego de 20 días post-exposición viral se determinó la presencia del virus por el ensayo de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en las diferentes partes de los insectos: abdomen (infección), patas/alas (diseminación) y cabeza (transmisión). Los resultados muestran que la cepa Ae. aegypti es más susceptible a la infección del abdomen (60 %) que la cepa de Ae. albopictus (37,5%); sin embargo, sólo en Ae. albopictus se encontró el virus presente en las patas/alas (100%) y cabezas (33%). La cepa de Ae. albopictus estudiada podría ser más competente para la transmisión del virus dengue asiático que la de Ae. aegypti. Este hallazgo es de gran importancia epidemiológica, ya que se demuestra que este vector aún no estando en su continente de origen, puede seguir siendo un vector eficiente y con el tiempo adecuarse a las cepas virales propias.

In Venezuela, there are populations of Aedes aegypti (Ae. aegypti) with different geographic origins and genetic structure that differ in vector competence for dengue virus. Since recently, the presence of Aedes albopictus (Ae. albopictus) was reported, it is also important to know the vector competence of this species to predict the epidemiological risk which would bring its spread. The objective was to determine the vector competence persistance of Ae. albopictus from Maracay, Venezuela for an Asian dengue-2 strain. The two species of mosquitoes were fed with a blood-dengue 2 virus suspension and after 20 days post-exposure to virus, the presence of the virus was determined by the polymerase chain reaction assay in different parts of the insect: abdomen (infection), legs/wings (spread) and head (transmission).The results show that the strain Ae. aegypti is more susceptible to infection in the abdomen (60 %) that the strain of Ae. albopictus (37.5%); however, only in Ae. albopictus this virus was found in the legs /wings (100%) and heads (33%). The studied strain of Ae. albopictus may be more competent vector in the transmission of the dengue 2 virus than Ae. aegypti. This finding is of great epidemiological importance as this shows that even this mosquito not being in its continent of origin, it can still be an efficient vector and eventually become adapted to the native viral strains.

A systematic review of observational studies on oxidative/nitrosative stress involvement in dengue pathogenesis / Revisión sistemática de los estudios observacionales sobre el papel del estrés oxidativo-nitrosativo en la patogénesis del dengue

Objective: Our objective was to systematically review the published observational research related to the role of oxidative-nitrosative stress in pathogenesis of dengue. Methods: We searched electronic databases (PubMed, EMBASE, The COCHRANE library, ScienceDirect, Scopus, SciELO, LILACS via Virtual Health Library, Google Scholar) using the term: dengue, dengue virus, severe dengue, oxidative stress, nitrosative stress, antioxidants, oxidants, free radicals, oxidized lipid products, lipid peroxides, nitric oxide, and nitric oxide synthase. Articles were selected for review by title and abstract excluding letter, review, in vivo and in vitro studies, and duplicates studies. Selected articles were reviewed for study design, original purposes, sample size, main outcomes, methods, and oxidative-nitrosative stress markers values. Results: In total, 4,331 non-duplicates articles were identified from electronic databases searches, of which 16 were eligible for full text searching. Data from the observational studies originate from Asian countries (50%; 8/16), South American countries (31.2%; 5/16), and Central America and the Caribbean countries (18.8%; 3/16). Case-control study was the type of design most common in researches reviewed. The 1997 World Health Organization (WHO) dengue case classification criteria were used in all studies included in this review. Conclusions: Based on published data found in peer-reviewed literature, oxidative and nitrosative stress are demonstrated by changes in plasma levels of nitric oxide, antioxidants, lipid peroxidation and protein oxidation markers in patients with dengue infection. Additionally, elevated serum protein carbonyls and malondialdehyde levels appear to be associated with dengue disease severity.

Objetivo: Sistematizar las evidencias observacionales sobre la relación entre el estrés oxidativo-nitrosativo y la patogénesis del dengue. Métodos: Revisión sistemática de estudios observacionales en las bases de datos (PubMed, EMBASE, The COCHRANE library, ScienceDirect, Scopus, SciELO, LILACS via Virtual Health Library, Google Scholar) utilizando las siguientes palabras clave: dengue, dengue virus, severe dengue, oxidative stress, nitrosative stress, antioxidants, oxidants, free radicals, oxidized lipid products, lipid peroxides, nitric oxide y nitric oxide synthase. La selección inicial fue realizada a partir del título y resumen excluyéndose: cartas para editor, revisiones, estudios in vivo/in vitro y duplicados. A cada artículo seleccionado, se le revisó el diseño del estudio, objetivo, tamaño de la muestra, resultados principales y niveles plasmáticos de los marcadores de estrés oxidativo-nitrosativo. Resultados: De 4,331 publicaciones encontradas, 16 estudios cumplieron con los criterios de inclusión. El 50% (8/16) de los estudios revisados fueron realizados en países de Sur América, Centro América y del Caribe. El diseño de casos y controles fue el más frecuente. El anterior sistema de clasificación de casos (OMS-1997) fue utilizado en todos los estudios incluidos en esta revisión. Conclusiones: El estrés oxidativo-nitrosativo se encuentra presente en el curso de la infección por virus dengue, demostrado por los cambios en las concentraciones plasmáticas de óxido nítrico, antioxidantes y marcadores de lipoperoxidación y de oxidación de proteínas. Por último, parece existir una asociación entre la elevación de los niveles plasmáticos de los carbonilos proteicos y malondialdehído con la severidad del dengue.

Estrés oxidative-nitrosativo y dengue: revisión sistemática de estudios in vivo e in vitro / Oxidative-nitrosative stress and dengue disease: a systematic review of in vivo/in vitro studies

Objective: In this systematic review the aim was to summarise the in vivo/in vitro evidence on the role of oxidative-nitrosative stress in pathogenesis of dengue. Methods: We searched electronic databases (PubMed, EMBASE, The COCHRANE library, ScienceDirect, Scopus, SciELO, LILACS via Virtual Health Library, Google Scholar) using the term: dengue, dengue virus, severe dengue, oxidative stress, nitrosative stress, antioxidants, oxidants, free radicals, oxidized lipid products, lipid peroxides, nitric oxide, and nitric oxide synthase. Articles were selected for review by title and abstract excluding letter, review, epidemiological studies, and duplicates studies. Selected articles were reviewed for used animal model or cell cultures, original purposes, strain of virus or type of antibody, main outcomes, methods, and oxidative-nitrosative stress markers values. Results: In total, 4330 non-duplicates articles were identified from computerized searches of reference databases, of which 32 were eligible for full text searching. The results of in vivo studies were obtained from monkey and knockout and/or wild-type mice. Human peripheral blood mononuclear cells were cell cultures most commonly used in identified in vitro studies, following by human endothelial cells cultures. DENV-2 strains were most used. Conclusions: In conclusion, a large body of in vivo and in vitro evidences showed that oxidative/nitrosative stress can be related to production of pathogenesis-related protein, increased susceptibility of mice to DENV infection, hemorrhage development in mice, proinflammatory cytokines and transcriptional factor expression, and DENV replication in various cell cultures(AU)

Objetivo: sistematizar las evidencias in vivo/in vitro de la participación del estrés oxidativo-nitrosativo en el curso de la infección por virus del dengue. Métodos: revisión sistemática de estudios observacionales en las bases de datos (PubMed, EMBASE, The COCHRANE library, ScienceDirect, Scopus, SciELO, LILACS via Virtual Health Library, Google Scholar) utilizando las siguientes palabras clave: dengue, dengue virus, severe dengue, oxidative stress, nitrosative stress, antioxidants, oxidants, free radicals, oxidized lipid products, lipid peroxides, nitric oxide y nitric oxide synthase. La selección inicial fue realizada a partir del título y resumen excluyéndose: cartas para editor, revisiones, estudios con diseños epidemiológicos y estudios duplicados. A cada artículo seleccionado, se le revisó el objetivo o propósito, cultivos celulares o modelos animales utilizados, cepas víricas o tipo de anticuerpos utilizados, métodos y valores de los marcadores de estrés oxidativo-nitrosativo. Resultados: de 4330 publicaciones encontradas, 32 estudios cumplieron con los criterios de inclusión. Se utilizaron primates no humanos y ratones knockout o tipo salvaje para la obtención de las evidencias in vivo. Los cultivos celulares más utilizados fueron de células mononucleares de sangre periférica y de células endoteliales humanas. Las cepas más utilizadas en los ensayos correspondieron al serotipo 2 del virus dengue. Conclusiones: existen evidencias in vivo/in vitro que muestran la posible asociación entre el estrés oxidativo-nitrosativo con: producción de proteínas relacionadas con la patogénesis del dengue, incremento en la susceptibilidad de ratones por la infección por dengue, desarrollo de hemorragias en modelo de ratón, expresión de citoquinas proinflamatorias y replicación viral en varios cultivos de células tanto humanas como de origen animal(AU)

Identificación rápida de patógenos en hemocultivos pediátricos por FilmArray / Rapid identification of pathogens from pediatric blood cultures by use of the FilmArray blood culture identification panel

Introduction: Dengue is a worldwide public health problem for which there is still no vaccine, so the knowledge of its temporal behavior could be useful for the implementation of appropriate control strategies. Objective: To analyze the incidence of dengue during the last ten years in Colombia (2004-2013), highlighting the periods and regions in which the largest number of cases was reported. Methods: We conducted a searching of dengue cases reported in Colombia between 2004 and 2013 in the database records of SIVIGILA and INS. The meteorological variables were obtained from IDEAM and its correlation with the incidence of dengue was found by the Pearson correlation method. Results: This analysis shows that every year there is an increase in the number of cases and that the most affected regions are the departments of Santander, Norte de Santander, Huila, Tolima and Valle del Cauca; with 2010 being the year with the highest record of events, with more than 150.000 cases. Discussion: The results indicate that DENV infection presents a cyclic behavior that most likely will be repeated every three or four years and the occurrence of cases can be attributed to social as well as climate changes.

Introducción: El dengue es un importante problema de salud pública mundial para el cual aún no existe una vacuna, por lo que el aporte al conocimiento de su comportamiento es útil para la ejecución de estrategias adecuadas para su control. Objetivo: Analizar la incidencia de dengue en los últimos diez años en Colombia (2004-2013), resaltando los períodos y regiones en las que se reporta el mayor número de casos. Métodos: Se realizó una búsqueda de casos de dengue reportados en Colombia entre 2004 y 2013 en registros del SIVIGILA y el INS. Las variables meteorológicas se obtuvieron del IDEAM y su correlación con la incidencia de dengue se halló por el método de correlación de Pearson. Resultados: Nuestro análisis muestra que cada año se presenta un incremento en el número de casos y las regiones más afectadas son Santander, Norte de Santander, Huila, Tolima y Valle del Cauca. El 2010 fue el año con mayor registro de eventos, con más de 150.000 casos. Discusión: Los resultados indican que la infección por DENV presenta un comportamiento cíclico, que muy posiblemente se repite cada tres o cuatro años y dicha ocurrencia de casos puede ser atribuida a cambios sociales y climáticos.

Obtención de la sublínea celular CLA-HT. Estudio de su sensibilidad para el aislamiento y multiplicación de los virus del dengue / Obtainment of CLA-HT cell subline and study of its susceptibility for the isolation and multiplication of the dengue virus

Introducción: en el diagnóstico de dengue es importante la determinación del serotipo viral. A pesar de existir otros métodos, el aislamiento viral en cultivos de células y la identificación por la técnica de inmunofluorescencia siguen siendo muy utilizados. Por lo tanto, la búsqueda de sistemas celulares más sensibles ha sido un tema reiterado durante muchos años para el virus dengue y otros agentes. Objetivo: obtener una sublínea celular a partir del clon CLA-1 (Aedes pseudoscutellaris) que crece a 28 ºC, capaz de multiplicarse a 33ºC (CLA-HT) y evaluar su utilidad para el aislamiento y la identificación de los virus del dengue. Métodos: a partir del clono CLA-1 de la línea celular AP-61(Aedes pseudoscutellaris) se obtuvo por selección una cepa o sublínea celular CLA-HT capaz de crecer a 33 °C. Se estudió su sensibilidad para la multiplicación de los 4 serotipos del virus del dengue y su eficiencia para el aislamiento directo de sueros de pacientes en fase aguda de la enfermedad, ambos comparativamente con la línea C6/36HT (A. albopictus). Resultados: la sublínea CLA-HT permitió el crecimiento de los 4 serotipos del virus dengue aunque para algunos requirió más tiempo que la C6/36 HT. Para el aislamiento a partir de muestras de sueros colectadas de individuos en fase aguda, la sublínea CLA-HT detectó el virus en el 40 por ciento de las muestras, mientras que C6/36 detectó el virus en el 50 por ciento. Discusión: CLA-HT es capaz de detectar todos los serotipos del virus dengue a partir de las 96 horas pos inoculación, por lo que es útil para la investigación como sistema alternativo y su eficiencia de aislamiento directo es buena para aplicar en grandes brotes. Además, la principal ventaja es que es posible utilizarla para proporcionar una respuesta rápida a situaciones emergentes en laboratorios de escasos recursos, ya que no precisa de condiciones de incubación con CO2. Conclusiones: se obtuvo una sublínea CLA-HT a partir de la línea CLA-1 capaz de crecer a 33ºC, la cual detecta los 4 serotipos del virus dengue. Su eficiencia de aislamiento es ligeramente menor que la sublínea C6/36 HT, pero se puede utilizar como sistema alternativo para el aislamiento de los virus dengue sobre todo en laboratorios con bajos recursos que no cuenten con condiciones óptimas de incubación(AU)

Introduction: the identification of viral serotypes is an important issue for dengue diagnosis. Despite the existence of other identification methods, the viral isolation in cell cultures and determination by immunofluorescent technique remain as the most used. Therefore the search for more sensitive cellular systems has been a repeated topic during many years for dengue virus and other agents. Objective: to obtain a cell subline from CLA-1 clone (Aedes pseudoscutellaris), that grows at 28 °C, capable of multiplying at 33 °C (CLA-HT)and to evaluate its usefulness for Dengue virus isolation and identification. Methods: by using a CLA-1 clone of the AP-61(Aedes pseudoscutellaris) cell line, it was possible to obtain a strain or cell subline CLA-HT capable of growing at 33 oC (CLA-HT) through a temperature selection method. Its sensitivity for the multiplication of the 4 dengue virus serotypes and its efficiency for direct virus isolation from acutely ill patients' sera were studied in comparison to C6/36 HT cell line (A. albopictus). Results: four dengue virus serotypes grew in CLA-HT cell subline but some serotypes were detected later in CLA-HT than in C6/36 HT. For dengue isolation from serum samples taken in acutely ill patients, the CLA-HT subline detected 40 percent positive samples whereas C6/36 HT did 50 percent. Discussion: CLA-HT is able to detect all dengue virus serotypes from 96 hours on post inoculation. It makes the new cell line useful for research as an alternative system and the direct isolation efficiency is good to be applied in large outbreaks. The most important advantage of CLA-HT is the possibility of giving rapid answer in emergency situations in low resource laboratories since it does not require special incubation conditions with CO2. Conclusions: a CLA-HT subline was obtained from CLA-1 line and it grows at 33 oC and capable of detecting 4 dengue virus serotypes. Its isolation efficiency is slightly lower than that of C6/36 HT subline, but it may be used as an alternative system for dengue virus isolation, mainly in resource-poor laboratories that do not have the optimal conditions for incubation(AU)

Descripción de un modelo de infección in vitro con virus dengue empleando células mononucleares humanas de sangre periférica / Human peripheral blood mononuclear cells as an in vitro model for dengue virus infection

No existen modelos animales apropiados para el estudio de la fisiopatología y las manifestaciones clínicas de la enfermedad causada por la infección con virus dengue, por lo que para ello se requiere desarrollar modelos experimentales. El propósito del presente trabajo fue establecer un modelo de infección in vitro con virus dengue serotipo-2 (DENV-2). Para esto se obtuvieron células mononucleares de sangre periférica (CMSP) usando un gradiente de Ficoll, y se las cultivó e infectó con DENV-2 a una baja multiplicidad de infección. La subpoblación celular que se infectó y produjo citocinas se identificó empleando un análisis multiparamétrico por citometría de flujo. Como resultado, las CMSP fueron permisivas a la infección, que se detectó a las 24 horas de inoculado el virus. Además, en este mismo tiempo, los monocitos CD14+, pero no los linfocitos CD3+ o CD19+, fueron la subpoblación celular preferencialmente infectada y responsable de la producción de TNF-α e IL-6. En conclusión, se estableció un modelo de infección in vitro usando CMSP no fraccionadas, en el que se identificó a los monocitos CD14+ como la principal célula blanco de la infección con DENV-2 y productora de citocinas proinflamatorias.

To date, there are no appropriate animal models for the study of the pathophysiology and clinical manifestations of the disease caused by dengue virus infection; therefore, experimental models are required for that purpose. The objective of the present work was to establish a model of in vitro infection with DENV-2. To this end, human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were obtained using a Ficoll gradient, and infected with DENV-2 using a low multiplicity of infection. The cell populations infected and responsible for the production of cytokines were identified using a multiparametric analysis by flow cytometry. As a result, PBMC were permissive to infection that was detected 24 hours after virus inoculation. Additionally, at this same time, CD14+ cells, but not CD3+ or CD19+ cells, were preferentially infected and responsible for the production of TNF-α and IL-6. In conclusion, we established a model of in vitro infection using unfractionated PBMC, in which CD14+ cells were identified as the primary target cells for infection with DENV-2, and the production of proinflammatory cytokines.

Selección de variantes de virus dengue sensibles a la heparina en células BHK-21 / Selection of heparin-sensitive dengue virus variants in BHK-21 cells

Estudios previos han demostrado que la adaptación de diversos virus a crecer en líneas celulares de vertebrados, conduce a la selección de variantes virales que unen al heparán sulfato (HS) con alta afinidad. En el presente trabajo se determinó la susceptibilidad de cepas del virus dengue (DENV) a la heparina hipersulfatada un análogo al HS, después de pases seriados en células BHK-21. A aislados de campo de los cuatro serotipos de DENV, se les realizaron ocho pases seriados en células BHK-21. La adaptación de los DENV al cultivo celular seleccionó variantes virales con una aumentada capacidad replicativa en células BHK-21 y una incrementada susceptibilidad a la heparina, en relación a las respectivas cepas no adaptadas, obteniéndose una inhibición de la infectividad más significativa en DENV-2 y DENV-4. Las cepas de DENV adaptadas presentaron cambios en la secuencia de aminoácidos de la proteína de envoltura (E), en particular una substitución K204R para DENV-1, N67K para DENV-2, K308R y V452A para DENV-3 y E327G para DENV-4. Estas sustituciones implicaron ganancia de residuos básicos que incrementaron la carga neta positiva de la proteína. Los resultados sugieren, que la adaptación de cepas de DENV a células BHK-21 selecciona variantes virales sensibles a la heparina y que la efectividad de este compuesto varía dependiendo de la cepa viral. Además sugieren que el HS puede jugar un papel importante en la infectividad de las cepas de DENV adaptadas al cultivo celular, a diferencia de los aislados de DENV no adaptados.

Several studies have shown that adaptation of various viruses to grow in certain cell lines of vertebrates, leads to the selection of virus variants that bind heparan sulfate (HS) with high affinity. In this study we investigated the susceptibility of strains of dengue virus (DENV) to oversulfated heparin an analogue of HS after passages in BHK-21 cells. Field isolates of the four serotypes of DENV with a limited number of passes in mosquito cells C6/36HT were serially passaged eight times in BHK-21 cells. The adaptation of the DENV to the cell culture selected viral variants with an increased replicative capacity in BHK-21 cells and an increased susceptibility to heparin compared with the original not adapted strains, with a more significant inhibition of the infectivity in DENV-2 and DENV-4.The E protein of the adapted strains showed changes in the amino acid sequence, particularly at the position K204R to DENV-1, N67K to DENV-2, K308R and V452A for DENV-3 and E327G to DENV-4. These substitutions implicated a gain of basic residues that increased the net positive charge of the protein. These results suggest that adaptation of DENV strains to BHK-21 cells implies changes in the envelope protein, changes associated to the protein reactivity with heparin, the inhibitory effectiveness of this compound varying depending on the viral strain. In addition, these results suggest that the HS can play an important role in the infectivity of the DENV strains adapted to vertebrate cell culture, but not in the infectivity of non-adapted DENV isolates.

Efecto de la competición larval sobre poblaciones del vector del dengue colectadas en Medellín, Colombia / Effect of larval competition on populations of the dengue vector collected in Medellín, Colombia

Introducción: Aedes aegypti es el vector responsable de transmitir el virus dengue, la densidad de la población en los estadios larvales puede afectar las características de vida del adulto, con implicaciones en la capacidad de transmisión viral. Objetivo: determinar el efecto de la competición larval causada por la alta densidad en colonias de Aedes aegypti procedentes de zonas de alta y baja incidencia de dengue en la ciudad de Medellín, Colombia, así como en una colonia de referencia en el laboratorio. Métodos: en las 3 colonias se evaluó el tiempo de desarrollo y supervivencia larval, así como el tamaño y el tiempo de supervivencia de los adultos. Resultados: se encontró que la competición larval en condiciones de alta densidad redujo de manera significativa el tiempo de desarrollo y la supervivencia de los últimos estadios larvales. Por otro lado, la alta densidad experimentada durante la etapa larval, también generó cambios en los adultos de las 3 colonias, representados en una disminución significativa del tamaño y una disminución en el tiempo de supervivencia (esta última solo en las colonias de campo). Conclusión: a pesar de que no se obtuvieron diferencias frente al efecto competitivo entre las colonias de campo provenientes de zonas con desigualdades en la incidencia de dengue en Medellín, la diferencia en respuesta obtenida en la colonia de laboratorio en comparación con las colonias de campo, hace pensar que es importante la evaluación de parámetros ecológicos sobre poblaciones de Aedes aegypti silvestres, porque estas evaluaciones acercarían más al comportamiento del vector. Estudios en curso en el laboratorio permitirán conocer si las diferencias encontradas entre las colonias afectan la competencia de Aedes aegypti frente a la infección por virus dengue(AU)

Introduction: Aedes aegypti is the vector transmitting the dengue virus. Larval density may affect adult life, with an impact on viral transmission capacity. Objective: determine the effect of larval competition caused by high density in Aedes aegypti colonies from areas of high and low dengue incidence in the city of Medellín, Colombia, and in a reference colony in the laboratory. Methods: the three colonies were evaluated for larval development and survival time, as well as size and survival time in adults. Results: it was found that in high density conditions larval competition significantly shortened development and survival time in the last larval stages. High density during the larval stage also brought about changes in adults from the three colonies, represented by a significantly reduced size and a decrease in survival time (the latter only in the field colonies). Conclusion: no differences in competitive effect were found between the field colonies from areas with unequal dengue incidence in Medellín. However, the difference in the response obtained from the laboratory colony in contrast to the field colony, points to the need to evaluate the ecological parameters of wild Aedes aegypti populations to obtain a more accurate view of the behavior of the vector. Laboratory studies in progress will make it possible to know whether the differences found between the colonies affect the competence of Aedes aegypti for dengue virus infection(AU)

Analysis of real time PCR amplification efficiencies from three genomic region of dengue virus / Análisis de las eficiencias de amplificación por PCR en tiempo real de tres regiones genómicas del virus dengue

Early diagnosis of dengue virus (DENV) infection represents a key factor in preventing clinical complications attributed to the disease. The aim of this study was to evaluate the amplification efficiencies of an in-house quantitative real time-PCR (qPCR) assay of DENV, using the non-structural conserved genomic region protein-5 (NS5) versus two genomic regions usually employed for virus detection, the capsid/pre-membrane region (C-prM) and the 3’-noncoding region (3’NC). One-hundred sixty seven acute phase serum samples from febrile patients were used for validation purposes. Results showed that the three genomic regions had similar amplification profiles and correlation coefficients (0.987-0.999). When isolated viruses were used, the NS5 region had the highest qPCR efficiencies for the four serotypes (98-100%). Amplification from acute serum samples showed that 41.1% (67/167) were positive for the universal assay by at least two of the selected genomic regions. The agreement rates between NS5/C-prM and NS5/3’NC regions were 56.7% and 97%, respectively. Amplification concordance values between C-prM/NS5 and NS5/3’NC regions showed a weak (k= 0.109; CI 95%) and a moderate (k= 0.489; CI 95%) efficiencies in amplification, respectively. Serotyping assay using a singleplex NS5-TaqMan® format was much more sensitive than the C-prM/SYBR Green® I protocol (76%). External evaluation showed a high sensitivity (100%), specificity (78%) and high agreement between the assays. According to the results, the NS5 genomic region provides the best genomic region for optimal detection and typification of DENV in clinical samples.

El diagnóstico precoz de la infección por el virus dengue (DENV) constituye un elemento clave para la prevención de las complicaciones clínicas propias de la enfermedad. El objetivo del estudio fue evaluar la detección de DENV mediante un ensayo cuantitativo de PCR-tiempo real (qPCR), desarrollado localmente, utilizando la región no-estructural-5 (NS5), versus dos regiones tradicionalmente empleadas para la detección del virus, la región cápside/pre-membrana (C-prM), y la región noncodificante-3’ (3’NC). Se recolectaron 167 muestras de suero de pacientes en fase aguda de la enfermedad. Las tres regiones génicas tuvieron perfiles de amplificación/coeficientes de correlación similares (0,987-0,999). Sin embargo, la región NS5 tuvo la eficiencia de amplificación más elevada para los cuatro serotipos (98-100%). Durante el proceso de validación, 41,1% (67/167) de las muestras de suero resultaron positivas para DENV al menos por dos de las regiones genómicas empleadas. Los valores de concordancia entre las regiones NS5/C-prM y NS5/3’NC fueron de 56,7% y 97%, respectivamente. La concordancia fue débil entre las regiones NS5/C-prM (k= 0,109; CI 95%), sin embargo, fue moderada entre las regiones NS5/3’NC (k= 0,489; CI 95%). El ensayo de tipificación uniplex en formato NS5/TaqMan® mostró alta sensibilidad (100%) que el protocolo C-prM/SYBRGreen®-I (76%). La validación externa del ensayo mostró una alta sensibilidad (100%), especificidad (78%) y acuerdo alto entre los ensayos utilizados. De acuerdo a los resultados obtenidos, la región NS5 ofrece la mayor opción para la detección y serotipificación del DENV en muestras clínicas.

Compromiso hepático por Dengue en niños del Huila, Colombia / Dengue-related hepatic compromise in children from the Huila department of Colombia

Objetivo Determinar la frecuencia y severidad del compromiso hepático en niños con Dengue. Métodos Estudio descriptivo que incluyó a 108 niños menores de 13 años con diagnóstico de infección por virus de Dengue, confirmada por detección plasmática de NS1 e IgM dengue-específica, que consultaron al Hospital Universitario de Neiva, en el período de junio de 2009 a mayo de 2010.El grado de daño hepático fue evaluado por criterios clínicos y bioquímicos que incluyeron transaminasas y albúmina. El diagnóstico de infección con Leptospira o Hepatitis A fue realizado por detección de IgM plasmática específica medida en fase aguda y convaleciente. Resultados De los casos incluidos, 98 y 10 casos fueron clasificados como dengue con signos de alarma y Dengue grave, respectivamente. Dos de cada tres pacientes con Dengue presentaron signos de alarma y todos los pacientes con Dengue grave presentaron algún grado de compromiso hapático evidenciado clínica y bioquímicamente. Independientemente de la clasificación clínica, la hepatomegalia fue el signo clínico cardinal del compromiso hepático y se presentó en el 85 % del total de niños incluidos. De resaltar, 5 de los pacientes presentaron probable coinfección de dengue y leptospira, siendo la primera descripción en Colombia. En ninguno de los casos analizados se presentó enfermedad aguda por Hepatitis A. Conclusión El compromiso hepático es muy frecuente en la infección por virus Dengue. Enfermedades como la leptospirosis deben ser tenidas en cuenta no sólo en el diagnóstico diferencial del paciente pediátrico febril con compromiso hepático, sino como causa de coinfección en el niño con Dengue en el sur de Colombia.

Objective Dengue is the most important arthropod-borne viral disease in the world; it can be life-threatening because of liver involvement. Aim Determining liver involvement frequency and severity in dengue-infected children. Methods This was a descriptive case series study which involved studying 108 dengue-infected children aged less than 13 years old whose infection had been confirmed by the detection of dengue-specific IgM and NS1 in plasma. Clinical and biochemical parameters were used for evaluating liver involvement, including transaminases and albumin. Hepatitis A and leptospira infection were also evaluated by using ELISA to detect pathogen-specific IgM in plasma during acute and convalescence phases. The study was carried out at a teaching hospital in Neiva from June 2009 to May 2010. Results Ninety-eight of the aforementioned cases were clinically classified as dengue with warning signs (DWS) and 10 as severe dengue (SD). Two out of three DWS patients and all SD patients had some degree of liver involvement, shown clinically and biochemically. Regardless of the clinical classification, hepatomegaly was the main clinical sign of liver involvement and was present in 85% of all the children in the study. It is worth noting that 5 patients had probable dengue and leptospirosis co-infection, this being the first instance of this in Colombia. None of the cases analyzed here had acute hepatitis A. Conclusions Liver compromise should be considered in confirmed cases of dengue as shown in this series of children. Leptospirosis must be considered as differential diagnosis and also as causing co-infection in a febrile child.