Anticancer drug screening: standardization of in vitro wound healing assay / Triagem de drogas anticâncer: padronização do ensaio de ranhura in vitro

ABSTRACT Introduction: Gliomas are characterized by rapid proliferation and aggressive invasion into normal surrounding brain tissue. In medical laboratories, the in vitro wound healing assay stands out as a simple, easy, inexpensive and affordable method to evaluate cell migration and proliferation. Objective: To standardize the in vitro wound healing assay using antimicrotubule drugs as positive controls. Methods: U87MG glioma cells were seeded at different densities and, after 24 h, the monolayer was scratched using different micropipette tip size to create a gap with no cells. The cells were then treated with colchicine and paclitaxel in culture medium with the presence or absence of fetal bovine serum. The wound was photographed with the aid of an inverted microscope and the wound area was measured using the Image J software. Results: Better defined edges scratches and monolayer with approximately 90% confluence were obtained at 1.5 and 2 x 105 cells/well density. The width and area of the scratch were, respectively, 948 pm/2.193221 mm2; 964 pm/2.266 mm2 and 1448 pm/3.221 mm2 to 10. 200 and 1000 pl micropipette tips. Colchicine inhibited wound closure by 12.6% or 3.4%, both in the presence or absence of serum; paclitaxel 2.4 and 6.7% respectively. Conclusion: Under standardized conditions, colchicine and paclitaxel proved to be efficient positive controls into the in vitro wound healing assay.

RESUMEN Introducción: Gliomas se caracterizan por rápida proliferación e invasion agresiva del tejido cerebral normal circundante. En laboratorios médicos, el ensayo de cierre de herida - una prueba in vitro - se destaca por ser un método simple, fácil, de bajo costo y accesiblepara evaluar la migración y la proliferación celular. Objetivo: Estandarizar el ensayo de cierre de herida usando agentes anti-microtúbulos como control positivo. Métodos: Las células de glioma U87MG fueron sembradas en diferentes concentracionesy, después de 24 horas, la monocamadafue rayada con punteras de diferentes tamanos para crear una hendidura sin células. Las células fueron entonces tratadas con colchicina y paclitaxel, en medio con o sin suero fetal bovino. La ranura fue fotografiada con la ayuda de un microscopio invertido, y el área de la ranura fue medida mediante el programa Image J. Resultados: Ranuras con bordes más bien-definidos y monocamada con alrededor de 90% de confluencia se obtuvieron con 1,5 y 2 x 105 células/pozo. La anchura y el área de las ranuras obtenidas fueron, respectivamente, 948 p.m/2,193 mm2; 964p.m/2,266mm2; y 1448p.m/3,221 mm2 para las punteras de 10,200y 1000pl. La colchicina inhibió el cierre de las ranuras en 12,6% o 2,4%, tanto en presencia como en ausencia de suero; el paclitaxel, 3,4% y 6,7%, respectivamente. Conclusión: En condiciones estandarizadas, colchicina y paclitaxel pueden ser usados como control positivo en el ensayo de cierre de herida in vitro.

RESUMO Introdução: Gliomas são caracterizados por terem rápida proliferação e invasão agressiva no tecido cerebral circundante normal. Em laboratórios médicos, o ensaio de ranhura - um teste in vitro - destaca-se por ser um método simples, fácil, barato e acessível para avaliar a migração e a proliferação celular. Objetivo: Padronizar o ensaio de ranhura, utilizando drogas antimicrotúbulos como controles positivos. Métodos: As células de glioma U87MG foram semeadas em diferentes concentrações e, após 24 horas, a monocamada foi arranhada usando ponteiras de diferentes tamanhos para criar uma fenda sem células. As células foram então tratadas com colchicina e paclitaxel, com meio em ausência ou presença de soro fetal bovino. A ranhura foi fotografada com auxílio de microscópio invertido, e a área da ranhura foi medida por meio do programa Image J. Resultados: Ranhuras com bordas mais bem definidas e monocamada com aproximadamente 90% de confluência foram obtidas com 1,5 e 2 x 105 células/poço. A largura e a área das ranhuras obtidasforam, respectivamente, 948pm/2,193 mm2;964pm/2,266mm2; e 1448 pm/3,221 mm2 para as ponteiras de 10, 200 e 1000 pl. A colchicina inibiu o fechamento das ranhuras em 12,6% ou 2,4%, tanto na presença quanto na ausência de soro; o paclitaxel, em 3,4% e 6,7%, respectivamente. Conclusão: Em condições padronizadas, colchicina e paclitaxel podem ser usados como controles positivos eficientes no teste in vitro de ranhura.

Potencialidad terapéutica de los flavonoides prenilados: flavonoides prenilados como potenciales componentes de medicamentos / Therapeutic potential of prenilated flavonoids: prenilated flavonoids as potential components of drugs

Los flavonoides representan un destacado grupo dentro de los compuestos naturales y tienen amplia distribución en el reino vegetal. A ningún otro grupo de compuestos de origen natural se le han atribuido tan numerosas, variadas e importantesactividades en el crecimiento y desarrollo de las plantas. En general, no son tóxicos y presentan múltiples actividades biológicas; algunos de ellos han sido aprobados como principios activos de medicamentos en la Argentina y otros países. En este trabajo se resumen los efectos farmacológicos más relevantes de los flavonoides prenilados, un subgrupo con estructurasde escasa distribución en la naturaleza. Han sido poco estudiados desde el punto de vista químico y farmacológico. Sinembargo, los avances realizados en los últimos años permiten estimar interesantes aplicaciones terapéuticas. Así, por ejemplo, se han reportado sus actividades antimicrobiana, antitumoral, antiinflamatoria y antioxidante. Se dan ejemplos de información científica relacionada primordialmente con flavonoides prenilados extraídos de especies vegetales autóctonas de laArgentina.

Flavonoids are natural compounds synthesized by plants, in which are vital metabolites involved in diverse and important functions such as growth and development. In general, they are innocuous and present many biological activities. In the paper we review the most relevant pharmacological effects of prenylated flavonoids, a subgroup of low distribution in nature that has not been much studied from the chemical and pharmacological points of view. Nevertheless, the advances achieved in the last years allow to estimate interesting therapeutical applications for them. Thus, the antimicrobial, antitumoral, anti-inflammatory and antioxidant activities have been described. Examples of information related to compounds extracted from indigenous plants from Argentina were selected.

Prácticas agrícolas para el cultivo de Cajanus indicus Spreng (gandul) con fines terapéuticos / Agricultural practice for cultivation of Cajanus indicus Spreng (gandul) for therapeutic purposes

Introducción: Cajanus indicus Spreng (gandul), presenta gran interés terapéutico, sobre todo en la búsqueda de compuestos de origen vegetal que mediante mecanismo antimitótico inhiban el desarrollo de procesos cancerosos. Objetivos: determinar los aspectos agrícolas que proporcionen mayor producción de la parte aérea para su explotación con estos fines. Métodos: durante 2007-2009 se hicieron diferentes investigaciones en la Estación Experimental de Plantas Medicinales Dr. Juan Tomás Roig; en julio de 2007 se realizó un estudio para analizar el comportamiento de la planta y determinar la altura de corte que proporcionara su mejor rebrotación, posteriormente se estudió por 2 años consecutivos, febrero de 2008 hasta febrero de 2009, 2 distancias de siembra: 90 x 30 cm y 90 x 60 cm; y 2 momentos de inicio de cosecha: 3 y 4 meses de edad...

Introduction: Cajanus indicus Spreng. (gandul) is of great therapeutic interest mainly in the search of vegetal compounds capable of inhibiting cancerous processes through the antimycotic mechanism. Objectives: to determine the agricultural aspects that favour higher production of the aerial part of this plant to this end. Methods: in the 2007-2009 period, several research studies were performed in Dr Juan Tomás Roig experimental center of medicinal plants. In July, 2007 a study was conducted to analyze the behaviour of the plant and to determine the cutting height that will encourage the best sprout. From February 2008 to February 2009, 2 sowing distances (90 x 30 cm and 90 x 60 cm) and 2 times of harvest starting (3 and 4 months of age) were studied...

Prácticas agrícolas para el cultivo de Xanthium strumarium L (guizazo de caballo) con fines terapéuticos / Agricultural practices for the culture of Xanthium strumanium L (guizazo de caballo) with therapeutic aims

Xanthium strumarium (guizazo de caballo) se encuentra entre las plantas con antividad antimitótica. OBJETIVOS: determinar en esta especie los aspectos agrícolas que garanticen el adecuado material vegetal. MÉTODOS: se realizaron estudios durante 2007-2009, donde se evaluaron dos fechas de siembra: junio y julio; dos distancias de siembra 90 x 30 cm y 90 x 50 cm y dos momentos de cosecha: 3 meses de edad (parte aérea y raíces) en plantas que presentaban estado de floración-fructificación y 4 meses de edad (solo raíces) en plantas en fructificación. Las semillas, obtenidas de areales silvestres, se sembraron en parcelas, 3 repeticiones en cada caso. Se evaluó la altura de las plantas en el momento de la cosecha, se seleccionaron 10 plantas/parcelas y se cosecharon 39 plantas/parcelas en la distancia de 90 x 30 cm y 24 plantas en la distancia de 90 x 50 cm, en el caso del follaje se evaluaron los rendimientos de 10 plantas/parcelas en cada caso. RESULTADOS: se observó que bajo cultivo la altura de las plantas fueron mayores en las que se sembraron en junio, con distancia de 90 x 30 cm, en tanto que en las de julio se comportaron de forma similar, independientemente a las distancias de siembra empleadas y en correspondencia con ello los rendimientos resultaron iguales; sin embargo, cuando se quieren cosechar también las raíces, es preferible hacer la cosecha a los 3 meses de edad y, en este caso, los mayores valores se presentaron en las siembras de julio, con distancia de 90 x 30 cm. CONCLUSIÓN: para el aprovechamiento de la planta con doble propósito: parte aérea y raíces, pues en ambas se ha encontrado la actividad antimitótica, la siembra se debe realizar entre junio y julio a la distancia de 90 x 30 cm y recolectarse el material a la edad de 3 meses

Xanthium strumarium (guizazo de caballo) is among the plants with antimitotic activity. OBJECTIVES: to determine in this species the agricultural features to guarantee the appropriate plant material. METHODS: during 2007-2009 studies were conducted to assess to sow dates: June and July; two sow distances 90 x 30 cm and 90 x 50 cm at two sow periods: three months of age (aerial parts and roots) in plants with a flowering-fructification states and four months of age (only roots) in plants in fructification process. Seeds obtained from wild aerial plants were sowed in plots, three repetitions in each case. The plants height was assessed at the harvest moment, choosing 10 plants/lots and 39 plants/lots were growed at a 90 x 30 cm distance and 24 plants at the 90 x 50 cm distance, in the case of foliage the yields of 10 plants/lots were assessed in each case. RESULTS: there was that at culture the plants heights were higher in those sowed in June at a 90 x 30 cm distance while those sowed in July behaved in a similar way independently of the sow distances used and in correspondence with it, the yields were similar; however, when we desire to grow also the roots, it is preferable to grow at three months of age, and in this case, the higher values were in sows of July at a 90 x 30 cm distance. CONCLUSION: for the plant exploitation with a double aim: aerial parts and roots, since in both there is antimitotic activity, sow must to be performed between June and July at a 90 x 30 cm distance and to harvest the material at three months age

Influencia del tratamiento de Petiveria alliacea en la expresión diferencial de genes en células tumorales / Differential gene expression in tumor cells induced by Petiveria alliacea treatment

El estudio del perfil de expresión génica en las células eucariotas se constituye como una herramienta importante en el entendimiento de las huellas moleculares generadas en respuesta a un estímulo farmacológico. A partir de Petiveria alliacea, una de las plantas colombianas con actividad antitumoral, se ha obtenido la fracción FAST 8 7:3, en la cual se han encontrado diferentes compuestos, como el trisulfuro de dibencilo, uno de los componentes antitumorales más potentes reportados para la planta. Esta fracción también posee actividad citotóxica sobre la línea de células tumorales K562 e induce cambios en el perfil de expresión de genes, que podrían estar relacionados de alguna forma con la actividad antitumoral tradicional reportada para esta planta. Esta actividad puede ser ejercida, en parte, por la presencia del trisulfuro de dibencilo y por la actividad de los otros componentes de la fracción. En este contexto, proponemos el uso del ADNc-AFLP como herramienta útil en la tamización del perfil de genes transcritos en las células tumorales y, también, como herramienta útil para el descubrimiento de nuevos fármacos antitumorales...

Abstract Gene expression profile in eukaryotic cells is a very useful tool to understand the molecular footprint responsible for the pharmacological response to a stimulus. In the present study a fraction named FAST 8 (7:3), obtained from Petiveria alliacea, was used as stimulus to track out the gene expression profile on K562 cell line. P. alliacea is a plant that grows in Colombia, and in traditional medicine is used for its anti-tumoral activity. Of the different compounds present in the fraction, dibenzyl trisulfide (DTS), is a compound described by previous reports to have anti-tumoral properties. The fraction exhibits cytotoxic activity over tumor cell line K562 inducing changes in gene expression profile. DTS might be in part responsible for the fraction activity, but the other compounds may also contribute to the biological response. Herein, we propose the use of cDNAAFLP as a useful tool for gene expression profile screening of tumoral cells and in the discovery of new anti-tumoral drugs...

Lectinas vegetales y sus efectos en el cáncer / Plant lectins and their effects on cancer

Recently, there has been increased interest in the potential health benefits of plant lectins, particularly due to their anti-cancer effect. This updated review discusses literature data published on the anticancer activities of plant lectins and their possible molecular mechanism(s) of action.

La importancia de estudiar compuestos naturales para utilizarlos como opciones médicas terapéuticas, específicamente contra el cáncer, nos da la pauta para realizar una revisión exhaustiva de la literatura concerniente a la actividad biológica de las lectinas vegetales, las cuales han sido reportadas por poseer propiedades tóxicas, citotóxicas, antitumorales y anticancerígenas. En este trabajo revisamos diferentes estudios publicados sobre el mecanismo de acción de las lectinas con respecto a su efecto antitumoral.