Application of a polymerase chain reaction test for the detection of Brucella canis from clinical samples of canines and humans / Aplicación de una prueba de reacción en cadena de la polimerasa para detección de Brucella canis a partir de muestras clínicas de caninos y humanos / Aplicação de um teste de reacção em cadeia da polimerase para detecção de Brucella canis a partir de amostras clínicas de canino e humano

Background: laboratory diagnosis of canine brucellosis includes serological and bacteriological tests; the blood culture is considered the gold standard, but it presents issues of sensitivity and delay in results. Therefore, the polymerase chain reaction (PCR) could be useful to detect low amounts of bacterial DNA from clinical samples and provide results within hours. Objective: to evaluate the sensitivity and specificity of PCR for the detection of Brucella canis in whole blood samples. Methods: blood samples from 499 dogs from kennels in two Colombian regions and 91 co-inhabiting humans were used. The 2-mercaptoethanol rapid slide agglutination test (2ME-RSAT) from serum and blood culture and PCR tests from whole blood were performed on all samples. Bayes theorem was used to establish the sensitivity and specificity of the PCR test compared with the other tests performed. Results: 9.9% of the evaluated co-inhabiting humans yielded positive serological results and 0% were positive by PCR or blood culture tests. 10.8% of dog samples were positive by blood culture, 19% were positive by PCR and 13% were positive by 2ME-RSAT. 7% of the samples were positive by all tests. Compared with blood culture, PCR had a sensitivity of 92.6% and a specificity of 90% for canine samples. Compared with 2ME-RSAT, it had a sensitivity of 77.4% and a specificity of 89.2%. When PCR and 2ME-RSAT results were compared with blood culture, a higher number of positive samples were retrieved than when results of only individual tests were applied. Conclusions: PCR is useful to detect B. canis in clinical samples; however, it is preferable to include the 2ME-RSAT test, as this improves the accuracy of the diagnosis. The PCR results are obtained within 24 to 48 hours and do not require the presence of whole bacterial cells to detect DNA.

Antecedentes: el diagnóstico de laboratorio de brucelosis canina incluye pruebas serológicas y bacteriológicas. El hemocultivo se considera el estándar de oro, pero tiene problemas de sensibilidad y tiempo de entrega de los resultados. Por eso, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) podría ser útil para detectar pequeñas cantidades de ADN bacteriano de muestras clínicas y proporcionar resultados en horas. Objetivo: evaluar la sensibilidad y especificidad de una PCR para la detección de Brucella canis, en muestras de sangre total de 499 perros de perreras y 91 humanos cohabitantes de dos regiones de Colombia. Métodos: se realizaron pruebas de aglutinación rápida en placa con 2-mercaptoetanol (2ME-PARP) a partir de suero, PCR y hemocultivo a partir de sangre total. El teorema de Bayes se utilizó para establecer la sensibilidad y especificidad de la prueba de PCR respecto a las demás. Resultados: 9,9% de los humanos cohabitantes evaluados resultaron positivos para la prueba serológica, y el 0% fue positivo para PCR o hemocultivo. 10,8% de las muestras de perros fueron positivas para hemocultivo, 19% fueron positivas para PCR y 13% eran 2ME-PARP positivo. 7% de las muestras fueron positivas para todos los ensayos. En las muestras caninas, la PCR tuvo una sensibilidad del 92,6% y una especificidad del 90% en comparación con el hemocultivo. En comparación con 2ME-PARP, tuvo una sensibilidad del 77,4% y una especificidad del 89,2%. Cuando se compararon los resultados de la PCR y 2ME-PARP con el hemocultivo, un mayor número de muestras positivas fueron obtenidas que usando los resultados de cada una. Conclusiones: la PCR es útil para detectar B.canis en muestras clínicas, sin embargo, es recomendable incluir la prueba de 2ME-PARP, lo que mejora la exactitud del diagnóstico, se obtienen los resultados en 24 ó 48 horas y no requieren la presencia de células bacterianas completas para detectar ADN.

Antecedentes: o diagnóstico laboratorial da brucelose canina inclui testes sorológicos e bacteriológicos. O padrão ouro é a cultura de sangue, mas tem problemas com a sensibilidade e o tempo de entrega dos resultados. Por conseguinte, a reação em cadeia da polimerase (PCR), pode ser útil para detectar pequenas quantidades de ADN bacteriano diretamente a partir de amostras clínicas e fornecem resultados em 24 horas. Objetivo: para avaliar a sensibilidade e a especificidade da PCR para a detecção de Brucella canis em amostras de sangue total de 499 caninos provenientes de canis e 91 seres humanos em contato com estes cães em duas regiões da Colômbia. Métodos: foram realizados testes de aglutinação rápida em placa com 2-mercaptoetanol (2ME-PARP) a partir de soro, PCR y hemocultura a partir de sangue total. O teorema de Bayes utilizou-se para estabelecer a sensibilidade e especificidade da PCR em relação aos outros. Resultados: 9,9% (9) dos humanos avaliados resultaram positivos na prova sorológica, 100% foram negativos por PCR e hemocultura. 10.8% (54) das amostras de cães foram positivas na hemocultura, 19% (95) foram positivas na PCR e 13% (65) foram positivas no teste 2ME-PARP. 7% (35) das amostras foram positivas para todos os testes. Nas amostras caninas, a PCR teve sensibilidade do 92.6% e uma especificidade de 90% em comparação com a hemocultura. Em comparação com 2ME-PARP, teve uma sensibilidade de 77.4% e uma especificidade de 82.2%. Quando foram comparados os resultados da PCR e 2-ME-PARP com a hemocultura, um maior número de amostras positivas foram obtidas que quando foram usados os resultados de cada uma. Conclusões: a PCR é útil para detectar B. canis em amostras clínicas, porém, é recomendável incluir o teste de 2ME-PARP, para melhorar a acurácia do diagnóstico. Os resultados obtém-se em 24-48 horas e não requerem a presença de células bacterianas completas para detectar ADN.

Inquérito sorológico e molecular da brucelose canina no município de Natal, Estado do Rio Grande do Norte / Serological and molecular survey of canine brucellosis in the county of Natal, Rio Grande do Norte state

O objetivo do presente trabalho foi determinar a ocorrência de anticorpos anti-Brucella rugosa e anti-Brucella lisa em cães do município de Natal, Estado do Rio Grande do Norte, Brasil, bem como identificar fatores de risco associados à positividade e realizar a detecção molecular em animais soropositivos. Foram utilizados soros sanguíneos de 416 cães atendidos em clínicas veterinárias durante o período de março a novembro de 2011. Para o diagnóstico sorológico da infecção por Brucella rugosa, foi empregada a prova de imunodifusão em gel de ágar (IDGA), utilizando antígeno de lipopolissacarídeos e proteínas de Brucella ovis, amostra Reo 198 e, para o diagnóstico da infecção por Brucella lisa, foi utilizado o teste do antígeno acidificado tamponado (AAT). De animais soropositivos, foram coletadas amostras de sangue com citrato de sódio para o diagnóstico pela reação em cadeia pela polimerase (PCR). A frequência de anticorpos anti-Brucella rugosa foi de 28,9% (120/416). Todos os animais foram negativos para anticorpos anti-Brucella lisa. Dentre 80 animais soropositivos, o DNA de Brucella spp. foi amplificado em três animais (3,8%). Não foram identificados fatores de risco associados à soropositividade. Conclui-se que a infecção por Brucella rugosa está presente no município de Natal, bem como se sugere o monitoramento sorológico de animais atendidos em clínicas visando à identificação de fontes de infecção.

The aim of this study was to determine the occurrence of anti-rough Brucella and anti-smooth Brucella antibodies in dogs from the county of Natal, Rio Grande do Norte state, Brazil, as well as to identify risk factors associated with positivity and to perform molecular detection of the agent in seropositive animals. Sera from 416 dogs attended in veterinary clinics during the period from March to November 2011 were used. For the serological diagnosis of rough Brucella the agar gel immunodiffusion (AGID) test, using antigen of lipopolysaccharides and proteins from Brucella ovis, strain Reo 198, was carried, and for smooth Brucella the buffered plate agglutination test (BPAT) was used. From seropositive animals, blood samples with sodium citrate were collected for the diagnosis by polymerase chain reaction (PCR). Frequency of anti-rough Brucella antibodies was 28.9% (120/416). All animals were negative for anti-smooth Brucella antibodies. Of the 80 seropositive animals Brucella spp. DNA was amplified in three (3.8%). Risk factors associated with the seropositivity were not identified. It was concluded that rough Brucella infection is present in the county of Natal, as well as it is suggested the serological monitoring of animals attended at clinics aiming the identification of sources of infection.

Anticorpos anti-Brucella canis e anti-Brucella abortus emcães de Araguaína, Tocantins / Antibodies anti-Brucella canis and anti-Brucella abortus in dogs from Araguaína, Tocantins,Brazil

Os objetivos deste estudo foram determinar a soroprevalência da infecção por Brucella canis e Brucella abortus e avaliaros possíveis fatores de risco associados à infecção em cães no município de Araguaína, Tocantins. Soros de 374 cães,pertencentes à zona urbana do município de Araguaína-Tocantins, foram analisados pelas técnicas de imunodifusãoem ágar gel (IDGA), para pesquisa de anticorpos contra Brucella canis, e antígeno acidificado tamponado (AAT)e polarização fluorescente (FPA) para detecção de anticorpos contra Brucella abortus. Dos 374 soros testados parapresença de anticorpos contra B. abortus, 21 foram reagentes no AAT, entretanto todos foram negativos pela FPA. Àprova do IDGA 167 animais foram reagentes resultando em uma prevalência para B. canis de 44,53% (IC 95%; 39,43 a49,72). A avaliação de possíveis fatores de risco associados à soropositividade para B. canis não revelou a existência derelação entre a infecção e as variáveis individuais estudadas. Assim, o presente estudo permite concluir que não houveanimais infectados por B. abortus e que a infecção por B. canis está disseminada nos cães do município de Araguaína,Tocantins.

The aims of the present study were to determine the seroprevalence of infection by Brucella canis and Brucella abortusand to evaluate possible risk factors for infection in dogs from Araguaína, Tocantins, Brazil. Sera from 374 dogs, of theurban zones of the municipality, from both sexes, were submitted to the agar-gel immunodiffusion for Brucella canisantibodiesand to rose Bengal test (AAT) and fluorescence polarization assay (FPA) for Brucella abortus-antibodies.From the 374 tested dogs, 21 reacted in the AAT, but no one was positive in the FPA. The seroprevalence of B. canisinfection found in Araguaína, Tocantins, Brazil, was 44.53% (95% IC; 39.43 to 49.72). No association was found amongseropositivity for B. canis and the risk factors studied. Thus, data from the present study showed that there was noinfection by B. abortus among dogs in the sample and that infection by B. canis is widespread and at high prevalence inAraguaína, Tocantins, Brazil.

Inquérito sorológico da brucelose canina através da utilização de antígeno externo e interno de Brucella canis e Brucella ovis

O objetivo desse estudo foi investigar a ocorrência da brucelose canina na cidade do Rio de Janeiro utilizando-se a técnica deimunodifusão em gel de agarose.Antígenos externo e interno de Brucella canis e Brucella ovis foram previamente preparadose um antígeno comercial usado para diagnóstico da brucelose canina foi também utilizado.Amostras de soro de 316 cãescoletadas aleatoriamente foram examinadas.Oito amostras (2,53%) foram positivas no teste utilizando-se antígeno externo deB. canis e B. ovis e sete amostras (2,2%) foram confirmadas com o antígeno comercial.Três amostras (0,95%) foram positivaspara todos os antígenos testados. Antígenos externo e interno devem ser usados nos testes sorológicos para diagnóstico dabrucelose canina para detecção precoce e obtenção de resultados mais precisos, respectivamente.

Inquérito sorológico da brucelose canina através da utilização de antígeno externo e interno de Brucella canis e Brucella ovis / Serodiagnosis of canine brucellosis using external and internal antigens of Brucella canis and Brucella ovis

O objetivo desse estudo foi investigar a ocorrência da brucelose canina na cidade do Rio de Janeiro utilizando-se a técnica deimunodifusão em gel de agarose.Antígenos externo e interno de Brucella canis e Brucella ovis foram previamente preparadose um antígeno comercial usado para diagnóstico da brucelose canina foi também utilizado.Amostras de soro de 316 cãescoletadas aleatoriamente foram examinadas.Oito amostras (2,53 por cento) foram positivas no teste utilizando-se antígeno externo deB. canis e B. ovis e sete amostras (2,2 por cento) foram confirmadas com o antígeno comercial.Três amostras (0,95 por cento) foram positivaspara todos os antígenos testados. Antígenos externo e interno devem ser usados nos testes sorológicos para diagnóstico dabrucelose canina para detecção precoce e obtenção de resultados mais precisos, respectivamente.

The present study was designed to carry out a serologic investigation of canine brucellosis by using agar gel immunodiffusiontest in the Rio de Janeiro city. External and internal antigens of B. canis and B. ovis were previously prepared and a commercialkit used for canine brucellosis diagnosis, was also employed. Random samples of 316 dogs were examined. Eight samples (2,53 percent) were positive by using external antigen of B. canis and B. ovis. Seven samples (2,2 percent) were positive using the commercialantigen also, and three samples (0,95 percent) were positive for all the antigens employed. External and internal antigens must beused for early detection and accurate results, respectively.