Transmissibilidade de Lentivírus de Pequenos Ruminantes para cabritos e cabras adultas por meio de sêmen infectado experimentalmente / Transmissibility of Small Ruminants Lentivirus in kids by experimentally infected semen

A Artrite Encefalite Caprina se caracteriza por ser multissistêmica e infecciosa, causada por um lentivírus. O estudo teve como objetivo avaliar a transmissibilidade do Lentivírus Caprino, para fêmeas e sua prole, por meio de sêmen infectado experimentalmente. Para tanto, onze fêmeas livres de CAEV foram inseminadas artificialmente com sêmen de bode livre de CAEV ao qual foi adicionado CAEV-Cork para obter título infectante com carga viral em 105 TCID50/ml. (grupo experimental 1). Destas, seis obtiverem prenhez confirmada, e a sua prole (n=6) constituiu o grupo experimental 2. Duas cabras livres de CAEV foram inseminadas artificialmente com sêmen do mesmo bode, sem o inócuo viral, constituindo-se o grupo controle. O diagnóstico da infecção pelo Lentivírus Caprino, foi realizado por IDGA, cELISA e nested-PCR. As fêmeas foram monitoradas durante 210 dias pós inseminação artificial. Já as proles foram imediatamente separadas das mães após o nascimento, e monitoradas nos momentos hora zero, aos quinze dias de idade e mensalmente, até doze meses de idade. Em relação às cabras, 56,96%(9/158) apresentaram positividade para cELISA, 24,05% (38/158) foram positivas a IDGA e nenhuma para nested-PCR. Em relação aos cabritos, 11,28% (15/133) amostras positivas para nested-PCR, 5,26% (7/133) amostras positivas para IDGA e nenhum para cELISA. As proles do grupo controle apresentaram resultados negativos para as três técnicas. A positividade encontrada em nested-PCR pode indicar grande importância para identificação de animais infectados, porém soronegativos, em situações de soroconversão tardia. De acordo com os resultados, concluiu-se que há a transmissão do Lentivírus caprino para a prole e para as mães pelo sêmen infectado.(AU)

Caprine Arthritis Encephalitis is a multisystemic infectious disease, caused by a lentivirus. The objective of this study was to evaluate the transmissibility of caprine lentivirus to goats and their offspring, through experimentally infected semen. Therefore, eleven free-CAEV goats were artificially inseminated using semen from a free-CAEV buck experimentally infected with CAEV-Cork strain (experimental group one). Pregnancy was confirmed in only six goats and their offspring (n=6) constituted the experimental group two. Two free-CAEV females were artificially inseminated with semen from the same seronegative buck, without viral inoculum to constitute the control group. The diagnosis of caprine lentivirus infection was performed using AGID, cELISA and nested-PCR. All females were monitored for 210 days after artificial insemination. Kids were immediately separated from their mothers after birth, and monitored at zero time, 15 days old and monthly until 12 months old. Regarding goat samples, 56.96% (9/159) were positive in cELISA, 24.05% (38/158) were positive in IDGA and none was positive in nested-PCR. Regarding to the offspring samples, 11.28% (15/133) and 5.26% (7/133) were positive in nested-PCR and IDGA, respectively, while no sample was positive in cELISA. The control group showed no positives in the three techniques. The positivity observed to nested-PCR may show its importance to identify infected, but seronegative animals, in late seroconversion situations. According to results, the transmission of caprine lentivirus to offspring and their mothers through infected semen is possible.(AU)

Soroprevalência de Anaplasma marginale em bovinos da região Centro-Sul do estado do Paraná, Brasil, por um teste imunoenzimático competitivo utilizando proteína recombinante MSP5-PR1 / Seroprevalence of Anaplasma marginale in cattle from Center-South Region of Paraná State, Brazil by a competitive ELISA test with recombinant MSP5-PR1 protein

Foi determinada a prevalência de Anaplasma marginale em 223 soros de bovinos com idade maior ou igual a dois anos, das regiões de Ponta Grossa, Guarapuava e Laranjeiras do Sul, região Centro-Sul do estado do Paraná. O teste imunoenzimático de competição PR1 (cELISA-PR1) foi utilizado para determinar a presença ou ausência de anticorpos anti-A. marginale. Dos 223 soros analisados, 130 (58,74 por cento) foram positivos pelo cELISA-PR1, sugerindo ser essa região de instabilidade de enzoótica, com uma porcentagem significativa de animais susceptíveis à infecção por A. marginale, com risco potencial para desenvolver a anaplasmose. As características de tipo de exploração da propriedade, sistema de criação, manejo e forma de comercialização dos animais foram avaliadas. A análise estatística não demonstrou haver diferença significativa entre as variáveis estudadas e a positividade dos animais.

Anaplasma marginale prevalence was determined in 223 sera samples in 2-year old or older cattle, from the Center- Southern Region of the Paraná State, including Ponta Grossa, Guarapuava and Laranjeiras do Sul municipalities. A survey of antibodies IgG class against Anaplasma marginale was performed through a competitive immune absorbent assay (cELISA-PR1). From the 223 sera examined, 130 (58.74 percent) reacted to cELISA-PR1 test, suggesting an region of enzootic instability, with a significant percentage of animals susceptible to infection by A. marginale and potentially in risk to develop anaplasmosis. The kind of exploration in the property, the breeding and handling system, the presence of other animals (ovine/caprine, horses, wild animals), and means of commercialization of animals were analyzed. The statistical analysis showed that there were no significant differences among the analyzed variables.

Detection of bovine viral diarrhea virus by amplification on polycation-treated cells followed by enzyme immunoassay / Detección del virus de la diarrea viral bovina por amplificación sobre células tratadas con policationes seguida de enzimoinmunoensayo

A bovine viral diarrhea virus (BVDV) amplification method combined with an enzyme immunoassay was developed to detect BVDV antigens in seropositive cattle. Reconstitution assays conducted by adding decreasing amounts of BVDV (Singer strain) to Madin-Darby bovine kidney (MDBK) cells showed that the sensitivity threshold of the combined assay was 10-7 TCID50. BVDV amplification was carried out in polycation (DEAE-Dextran and polybrene)- treated MDBK cells. Treated cells were able to replicate both ether-treated virus and neutralizing antibody-coated virus. Ammonium chloride decreased virus replication in polycation-treated cells, suggesting viral penetration by endocytosis. BVDV detection was tested in leukocytes from 104 seropositive cattle from 2 unvaccinated commercial closed dairy herds with high seroprevalence. Lysates and co-cultures of peripheral blood leukocytes (PBL) were tested, directly or after up to 6 blind passages in normal or polycation-treated cells. BVDV was detected in 10/104 cattle after only one co-culture of PBL in treated cells. No virus was detected in whole blood or plasma samples. BVDV positive and negative cattle were retested three times, achieving consistent results. The finding of immune carriers supports the possibility that these animals may constitute an epidemiological risk.

Se desarrolló un método de detección de antígenos del virus de la diarrea viral bovina (BVDV) combinando amplificación viral con enzimoinmunoensayo. El método combinado presentó una sensibilidad de 10-7 TCID50 en ensayos con diluciones decrecientes de BVDV cepa Singer sobre la línea celular MDBK. La amplificación del título viral se efectuó sobre células MDBK tratadas con policationes Estas células replicaron tanto el BVDV tratado con éter como el unido a anticuerpos. La replicación viral en las células tratadas disminuyó ante la presencia de cloruro de amonio, lo que sugiere la penetración viral por endocitosis. El BVDV se determinó en leucocitos de 104 bovinos seropositivos de dos rodeos en producción, cerrados y con alta seroprevalencia. Los leucocitos de sangre periférica (LSP) fueron lisados y analizados directamente o luego de hasta 6 pasajes ciegos sobre células normales o tratadas con policationes. El BVDV se detectó en 10 de los 104 animales después de solamente un cultivo de LSP en células tratadas. No se pudo detectar presencia viral en las muestras de sangre o plasma. Los estudios se repitieron tres veces en animales BVDV positivos y negativos, con resultados consistentes. El hallazgo de bovinos seropositivos portadores del virus indica la posibilidad de que estos animales puedan significar un riesgo epidemiológico.

Comparação dos testes sorológicos de Imunofluorescência Indireta, Conglutinação Rápida, ELISA indireto e ELISA por competição para a detecção de anticorpos contra o Anaplasma marginale em soros de bovinos de diferentes áreas enzoóticas / Comparison of the serologic tests of Indirect Immunofluorescence,Rapid Conglutination, Indirect ELISA and Competition ELISA fordetection of antibodies against Anaplasma marginale in cattle sera fromdifferent enzootic areas

Os Testes Sorológicos de Conglutinação Rápida (TCR) Imunofluorescência Indireta (IFI) e Imunoenzimáticos Indireto (iELISA) utilizando ELISA por competição (cELISA), como padrão ouro, foram avaliados comparativamente para a detecção de anticorpos contra o Anaplasma marginale. Foram utilizadas 453 amostras de soros sangüíneos de bovinos vacinados e não-vacinados e de áreas de estabilidade e instabilidade enzoótica. O iELISA, IFI e TCR apresentaram respectivamente, índice kappa=0,77 (substancial), 0,57 e 0,49 (moderado), sensibilidade de 90,6, 90,2 e 73,7 e especificidade de 86,6, 62,8, e 79,3. O iELISA apresentou o melhor desempenho e maior especificidade, podendo ser indicado na avaliação do perfil sorológico de rebanhos, na detecção de animais persistentemente infectados e de animais submetidos a programas de vacinação. As técnicas de IFI e TCR, mesmo apresentando desempenho inferior, podem ser recomendadas para a realização de inquéritos epidemiológicos e para o monitoramento de animais em trânsito entre as diferentes regiões geográficas

The serological techniques Rapid Conglutination Test (RCT), Indirect ELISA (iELISA) and IndirectImmunofluorescent Assay (IFA), using the competition ELISA (cELISA) as gold test, were comparativelyevaluated to detect antibodies against Anaplasma marginale. A total of 453 sera from vaccinated andnon vaccinated cattle and, collected from enzootic stability and instability areas were tested. iELISA, IFAand TCR presented kappa index = 0.77 (substantial); 0.57 and 0.49 (moderate), sensibility of 90.6%;90.2% and 73.7% and specificity of 86.6%; 62.8%, and 79.3%, respectively. Therefore, iELISA presentedbetter specificity than IFA and RCT, and can be indicated for more detailed serological investigations,detection of persistently infected animals in cattle herds and for monitorating of vaccination programs.IFA and TCR can be used in prevalence studies and to monitor cattle movement between differentgeographical regions