Fluorescent polarization assay, two versions of indirect and competitive enzyme- linked immunoassay for brucellosis diagnosis in vaccinated buffaloes (Bubalus bubalis) / Teste de polarização fluorescente, duas versões de imunoensaio enzimático indireto e imunoensaio competitivo para diagnóstico de brucelose em búfalos vacinados (Bubalus bubalis)

ABSTRACT: The fluorescence polarization assay (FPA), two variants (V) of the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (I-ELISA) and the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (C-ELISA) were evaluated in buffaloes to detect antibodies against Brucella spp. The V1 of I-ELISA identifies them through the monoclonal (M23) anti-bovine IgG (I-ELISAM23) and the V2 through the ProteinA / G (I-ELISA-A/G). Serum samples of 862 buffaloes (Bubalus bubalis) from the Northeast of Argentina (NEA) were analyzed using the complement fixation test (CFT) as the reference. Receiving Operator Characteristic (ROC) analysis defined for the area under the curve (AUC) determined the cutoff points, sensitivity (Se) and specificity (Sp) for each test. CFT identified 107 positive and 755 negative sera. The best AUC (0.986), Concordance with CFT (96.3%) and kappa value (0.843) was obtained by I-ELISA A/G test. This assay showed the highest Se (95.33%) and C-ELISA the highest Sp (97%). FPA failed to measure the antibodies in 23 (2.65%) serum samples due to unsuccessful reading. I-ELISA M23 proved to be ineffective to diagnose brucellosis in bubaline sera. The four serological tests showed cutoff points lower than those standardized for bovines. As conclusion, I-ELISA A/G, C-ELISA and FPA with its limitations would be effective techniques for the diagnosis of brucellosis in buffaloes in the NEA, requiring an appropriate cut-off point to guarantee their maximum performance in this species.

RESUMO: O ensaio de polarização de fluorescência (FPA), duas variantes (V) do ensaio imunoenzimático indireto (I-ELISA) e o ensaio imunoenzimático competitivo (C-ELISA), foram avaliados em búfalos para detectar anticorpos contra Brucella spp. O V1 do I-ELISA os identifica através do IgG monoclonal (M23) anti-bovino (I-ELISAM23) e o V2 ​​através da Proteína A / G (I-ELISA-A / G). Amostras de soro de 862 búfalos (Bubalus bubalis) do Nordeste da Argentina (NEA) foram analisadas usando o teste de fixação do complemento (CFT) como referência. A análise Receiving Operator Characteristic (ROC) definida pela área sob a curva (AUC) determinou os pontos de corte, sensibilidade (Se) e especificidade (Sp) de cada teste. A CFT identificou 107 soros positivos e 755 soros negativos. Os melhores valores de AUC (0.986), concordância com CFT (96.3%) e kappa (0.843) foram obtidos pelo teste I-ELISA A / G. Este ensaio mostrou a maior Se (95.33%) e C-ELISA a maior Sp (97%). O FPA falhou em medir os anticorpos em 23 (2,65%) amostras de soro devido à falha na leitura. O I-ELISA M23 provou ser ineficaz para o diagnóstico de brucelose em soros bubalinos. Os quatro testes sorológicos mostraram pontos de corte inferiores aos padronizados para bovinos. Em conclusão, I-ELISA A / G, C-ELISA e FPA com suas limitações seriam técnicas eficazes para o diagnóstico de brucelose em búfalos no NEA, exigindo um ponto de corte adequado para garantir seu desempenho máximo nesta espécie.

Occurrence of Leptospira spp. and factors associated with the infection in horses from a military contingent in the Rio Grande do Sul State, Brazil / Ocorrência de Leptospira spp. e fatores associados à infecção em equinos de contingente militar no estado do Rio Grande do Sul, Brasil

The seroprevalence of Leptospira spp. and infection risk factors were investigated in horses from a military contingent in the Rio Grande do Sul State, Brazil. A total of 446 horses were evaluated and categorized into 309 mares, 11 stallions, and 126 horses with an average age of three years. To determine seroprevalence, serum samples from all horses were submitted to the microscopic agglutination test against 12 serovars belonging to nine serogroups, usually circulating in equine populations. To investigate the possible risk factors of infection by Leptospira spp., questionnaires were applied in that military unit. The seroprevalence in the horses with an average age of 3 years, mares, and stallions were 57.94% (73/126), 54.05% (165/309), and 45.45% (5/11), respectively. The main risk factors identified were contact with different water sources, the presence of rodents, and contact with wild and domestic animals. The high seroprevalence of anti­Leptospira spp. antibodies may be associated with the presence of these risk factors. Therefore, the exposure of horses to possible reservoirs of Leptospira spp. should be minimized. Also, the immunoprophylaxis protocol should be reviewed and a shorter interval between vaccinations adopted to control leptospirosis in this herd.(AU)

A soroprevalência de Leptospira spp. e os fatores de risco para infecção foram investigados em cavalos de um contingente militar no Rio Grande do Sul, Brasil. Um total de 446 cavalos foram avaliados e categorizados em 309 éguas, 11 garanhões e 126 cavalos com idade média de três anos. Para determinação da soroprevalência, amostras de soro de todos os equinos foram submetidas ao teste de aglutinação microscópica contra 12 sorovares pertencentes a nove sorogrupos, normalmente circulantes em populações equinas. Para investigar os possíveis fatores de risco da infecção por Leptospira spp., foi aplicado um questionário naquela unidade militar. A soroprevalência nos cavalos com idade média de três anos, éguas e garanhões foi de 57,94% (73/126), 54,05% (165/309) e 45,45% (5/11), respectivamente. Os principais fatores de risco identificados foram o contato com diferentes fontes de água, a presença de roedores e o contato com animais silvestres e domésticos. A alta soroprevalência de anticorpos anti­Leptospira spp. pode estar associada à presença desses fatores de risco. Portanto, a exposição destes equinos aos possíveis reservatórios de Leptospira spp. deve ser minimizada. Além disso, o protocolo de imunoprofilaxia deve ser revisto e, possivelmente, um menor intervalo entre as vacinas deve ser adotado para o controle da leptospirose neste plantel.(AU)

Performance of the Dot-blot test method for detecting antibodies to Sarcocystis spp. in cattle / Desempenho do teste Dot-blot para detecção de anticorpos para Sarcocystis spp. em bovinos

Serological techniques can detect antibodies against Sarcocystis spp., Neospora caninum and Toxoplasma gondii antigens in single or mixed infections. Immunofluorescent antibody tests (IFAT) is considered the gold standard technique for Sarcocystosis diagnostic in cattle serum and a positive IFAT result reflects Sarcocystis spp. infection. Therefore, the aims of the present study were to compare IFAT and Dot-blot for sarcocystosis diagnostic in experimentally infected mice and to investigate serological cross-reactions with N. caninum and T. gondii in these methods. Mice (Mus musculus) were inoculated intraperitoneally with bradizoites of Sarcocystis spp. or tachyzoites of N. caninum or T. gondii. Serum samples were obtained and analyzed by IFAT and Dot-blot for the three protozoa. Serum from N. caninum and T. gondii experimentally infected mice were tested by IFAT and reacted only to N. caninum or T. gondii antigens, respectively. Specific antibodies against Sarcocystis spp. were present in all animals experimentally infected with this protozoan, with IFAT titers from 10 to 800. Serum samples from mice experimentally infected with Sarcocystis spp., N. caninum and T. gondii and tested by Dot-blot demonstrated no cross reaction between protozoa. A Dot-blot using Sarcocystis spp. antigen appears to be a good alternative to IFAT in the serological diagnosis of Sarcocystosis.(AU)

As técnicas sorológicas podem detectar anticorpos contra os antígenos de Sarcocystis spp., Neospora caninum e Toxoplasma gondii em infecções únicas ou mistas. O teste de anticorpos imunofluorescentes (IFAT) é considerado a técnica padrão-ouro para o diagnóstico de sarcocistose no soro de bovinos e um resultado positivo de IFAT reflete Sarcocystis spp. infecção. Portanto, os objetivos do presente estudo foram comparar IFAT e Dot-blot para diagnóstico de sarcocistose em camundongos infectados experimentalmente e investigar reações cruzadas sorológicas com N. caninum e T. gondii nesses métodos. Os camundongos (Mus musculus) foram inoculados intraperitonealmente com bradizoítos de Sarcocystis spp. ou taquizoítos de N. caninum ou T. gondii. As amostras de soro foram obtidas e analisadas por IFAT e Dot-blot para os três protozoários. O soro de N. caninum e T. gondii infectados experimentalmente foram testados por IFAT e reagiram apenas aos antígenos de N. caninum ou T. gondii, respectivamente. Anticorpos específicos contra Sarcocystis spp. estavam presentes em todos os animais experimentalmente infectados com este protozoário, com títulos de IFAT de 10 a 800. Amostras de soro de camundongos infectados experimentalmente com Sarcocystis spp., N. caninum e T. gondii e testadas por Dot-blot não demonstraram reação cruzada entre protozoários. Um Dot-blot usando Sarcocystis spp. O antígeno parece ser uma boa alternativa ao IFAT no diagnóstico sorológico da sarcocistose.(AU)

First serological detection of Borrelia spp. in dogs in western Cuba / Primeira detecção sorológica de Borrelia spp. em cães na região oeste de Cuba

Abstract This study aimed to verify the presence of IgG antibodies against Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l) in domestic dogs in western Cuba. Serum samples were analyzed by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), using crude antigens of a B. burgdorferi strain of North American origin. To verify the presence of Borrelia spp., deoxyribonucleic acid (DNA) extracted from individual blood samples was analyzed by nested-PCR, with markers targeted for amplification of portions of the flagellin B gene (flaB) present in Borrelia spirochetes. Ticks were also collected through inspection of the animals. Sera from 93 of 176 (52.84%) dogs were reactive to the indirect ELISA. Geographic prevalence varied from 54.35% (25/46) in Boyeros, 44.44% (20/45) in Cotorro, 66.67% (22/33) in Habana del Este, and 50% (26/52) in San José de las Lajas. There was no statistical difference between these tested variables. No blood samples analyzed were positive for the Borrelia flaB gene.

Resumo Este estudo teve como objetivo confirmar a presença de anticorpos IgG contra Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l) em cães na região oeste de Cuba. As amostras de soro foram analisadas por ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) indireto, usando-se antígenos brutos de uma cepa de B. burgdorferi de origem norte-americana. Para confirmar a presença de Borrelia spp., o ácido desoxirribonucleico (DNA), extraído de amostras individuais de sangue, foi analisado por PCR, utilizando-se marcadores direcionados para a amplificação de porções do gene da flagelina B (flaB) presente nas espiroquetas de Borrelia. Os carrapatos também foram coletados através da inspeção dos animais. Os soros de 93 de 176 (52,84%) cães foram reativos ao ELISA indireto. A prevalência geográfica variou de 54,35% (25/46) em Boyeros, 44,44% (20/45) em Cotorro, 66,67% (22/33) em Habana del Este e 50% (26/52) em San José de las Lajas. Não houve diferença estatística entre essas variáveis testadas. Nenhuma amostra de sangue analisada foi positiva para o gene Borrelia flaB.

Avaliação de dois testes sorológicos comerciais para diagnóstico das infecções pelo FIV e pelo FeLV / Evaluation of two point-of-care tests to diagnosis of FIV and FeLV infections

FIV e FeLV são retrovírus associados principalmente com neoplasias. Dois testes rápidos são disponibilizados no Brasil para o diagnóstico dessas infecções: um kit de imunocromatografia de fluxo bidirecional (SNAP® Combo IDEXX) e um kit de imunocromatografia de fluxo lateral unidirecional (ALERE/BIONOTE Anigen Rapid). O objetivo deste estudo foi comparar o teste SNAP® com o teste ALERE. Amostras de sangue de 178 gatos foram testadas utilizando-se ambos os kits. A reação em cadeia de polimerase em tempo real (qPCR) foi empregada como método confirmatório para todos os resultados. O teste SNAP® apresentou sensibilidade e especificidade de 100% para FIV; a sensibilidade e a especificidade do teste ALERE foram de 96,15% e 98,68%, respectivamente. A sensibilidade e a especificidade para o FeLV foram de 93,02% e 96,30% para o teste SNAP® e de 90,70% e 97,78% para o teste ALERE. Ainda em relação ao FeLV, três amostras com resultado positivo na qPCR obtiveram resultado falso-negativo em ambos os testes. Não houve diferença estatisticamente significante entre os métodos. Considerando a qPCR como padrão-ouro, o teste SNAP® apresentou maior sensibilidade e especificidade para o FIV, e o teste ALERE apresentou maior especificidade para o FeLV. Os resultados mostraram uma boa correlação entre os testes.(AU)

FIV and FeLV are Retrovirus associated mainly with feline neoplasms. Two point-of-care tests are commercially available in Brazil for diagnosis of these infections: a bidirectional flow immunochromatography kit (IDEXX SNAP ® Combo) and a lateral unidirectional flow immunochromatography kit (ALERE/BIONOTE Anigen Rapid). The aim of this study was to compare SNAP ® and ALERE tests. Blood samples obtained from 178 cats were evaluated using both tests. Quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) was used as confirmatory test for all samples. The sensitivity and specificity of SNAP ® test was 100% for FIV, and for ALERE test was 96.15% and 98.68%, respectively. The sensitivity and specificity for FeLV was 93.02% and 96.30% for SNAP ® test and 90.70% and 97.78% for ALERE test. Three samples with a qPCR positive result for FeLV obtained a false negative result in both SNAP ® and ALERE tests. There was no statistically significant difference between the two methods. Considering qPCR as gold standard method, the SNAP® test showed higher sensitivity and specificity for FIV, and the ALERE test presented higher specificity for FeLV. The results showed good agreement among the tests.(AU)

Epidemiological survey of Neorickettsia risticii in equids from the State of Rio de Janeiro, Brazil / Levantamento epidemiológico de Neorickettsia risticii em equídeos do Estado do Rio de Janeiro

Equine neorickettsiosis (EN), also known as Potomac Horse Fever, is a non-contagious disease caused by the bacterium Neorickettsia risticii of the Anaplasmataceae family. The objectives of this study were to detect the presence of anti-N. risticii antibodies by the indirect immunofluorescence assay (IFA) and of its DNA by qPCR in equids at high and low altitude regions in the State of Rio de Janeiro, Brazil, and to identify factors associated with seropositive equids by multiple logistic regression analysis. The frequency of anti-N. risticii antibodies was 16.05% (n=113/704). The animal age and breeding region were the factors that influenced the seropositivity rate for N. risticii in the equids (p<0.05). Equids from the lowland region had higher seropositivity (p<0.05; OR=5.87) compared to those of the mountain region. The presence of snails on the farm was a factor associated with this result (p<0.05; OR=2.88). In the lowland region, age of the animal and site of breeding were protective factors for the detection of antibodies anti-N. risticii in equids, with lower frequency of seropositivity in younger animals (p<0.05; OR=0.06) and in animals raised in dry areas (p<0.05; OR=0.22). The presence of the target DNA of N. risticii by qPCR was not observed in any of the samples tested. The existence of seropositive equids for N. risticii demonstrates a possible circulation of this agent in the studied area, and that the age related characteristics and equids breeding region are important factors regarding seropositivity in the State of Rio de Janeiro.(AU)

A Neorickettisiose equina (NE), também conhecida como Febre do Cavalo de Potomac, é uma doença não contagiosa causada pela bactéria Neorickettsia risticii da família Anaplasmataceae. Os objetivos deste estudo foram detectar a presença de anticorpos anti-N. risticii através da reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e do DNA dessa bactéria através da qPCR em equídeos de regiões de alta e baixa altitude no Estado do Rio de Janeiro, Brasil; e identificar os fatores associados com a soropositividade dos equídeos através da análise de regressão logística múltipla. A frequência de anticorpos anti-N. risticii foi de 16,05% (n=113/704). Observou-se que a idade e a região de criação foram os fatores que influenciaram a taxa de soropositividade para N. risticii nos equídeos (p<0,05). Equídeos da região de baixada apresentaram maior soropositividade (p<0,05; OR=5,87) quando comparado aos criados em região de montanha. A presença de caramujos na propriedade foi um fator associado a este resultado (p<0,05; OR=2,88). Na região de baixada, animais mais jovens (p<0,05; OR=0,06), criados em áreas secas (p<0,05; OR=0,22) demonstraram serem fatores de proteção na detecção de anticorpos anti-N. risticii. Não foi observada a presença do DNA-alvo de N. risticii através da qPCR em nenhuma das amostras testadas. A existência de equídeos soropositivos para N. risticii demonstra a possível circulação desse agente na área estudada, e as características inerentes a idade e a região de criação dos equídeos são fatores importantes relacionados à soropositividade no estado do Rio de Janeiro.(AU)

Aspectos soroepidemiológicos da leishmaniose visceral no Departamento Regional de Saúde (DRS) XV região de São José do Rio Preto, estado de São Paulo, Brasil, 2008-2012 / Seroepidemiological aspects of visceral leishmaniasis in the Regional Health Department (DRS) XV region of São José do Rio Preto, state of São Paulo, Brazil, 2008 - 2012

O objetivo deste estudo foi descrever as características soroepidemiológicas da leishmaniose visceral (LV) no DRS XV, região de São José do Rio Preto, São Paulo, entre 2008 e 2012. Foram analisados os dados secundários dos casos humanos, presença de vetores e resultados dos inquéritos sorológicos caninos. Desde os primeiros registros da LV na região em 2008, em Jales e Urânia, verificou-se crescente expansão atingindo outros 23 municípios até 2012. Foram notificados 251 casos suspeitos de LV humana (LVH), dos quais, 99 (39,4%) confirmados laboratorialmente, sendo 68 (68,7%) autóctones da região do DRS XV. Houve predomínio pelo sexo masculino, a faixa etária mais acometida foi para menores de 10 anos e maiores de 51 anos de idade...

The aim of this study was to describe the soroepidemiological characteristics of visceral leishmaniasis (VL) in DRS XV, region of São José do Rio Preto, São Paulo, between 2008 and 2012. The secondary data from human cases were analyzed, the presence of vectors and survey results serological canines. From the first records of VL in the region in 2008 in Jales and Urania, there was growing expansion reaching 23 other municipalities by 2012. Were reported 251 suspected cases of human VL (HVL), of which 99 (39.4%) laboratory confirmed, 68 (68.7%) of the autochthonous DRS XV region. There was a predominance of males, the most affected age group was for children under 10 and adults over 51 years old...

Programa de Controle da Doença de Chagas no Estado de São Paulo: aspectos soroepidemiológicos em microrregiões geográficas homogêneas / Chagas disease Control Program in the State of São Paulo, Brazil Seroepidemiological aspects of homogeneous geographic microregions

A infecção chagásica foi averiguada entre moradores de duas microrregiões geográficas homogêneas do Estado de São Paulo, entre os anos de 1976 a 1980. Campos de Itapetininga, na região de Sorocaba e Encosta Ocidental da Mantiqueira Paulista, na região de Campinas, foram áreas de colonização de Triatoma infestans, no passado, tendo permanecido, na primeira, até o início da década de 70, como reduto da espécie no estado. Atualmente as duas áreas são colonizadas por triatomíneos da espécie Panstrongylus megistus. Perfis de títulos sorológicos caracterizaram ambas as microrregiões como áreas de baixa endemicidade; a interrupção da transmissão foi mais precoce na Encosta, com diferença de 17 anos, em média. Em Campos de Itapetininga, a intensa exposição ao vetor é traduzida pela sororreatividade observada nas idades superiores a 20 anos, correspondentes aos nascidos antes de 1956. Dentre os nascidos entre 1972 e 1977, nessa área, permanece uma baixa positividade, podendo, também, associar-se à transmissão congênita. Na Encosta, a média de idade dos sororreagentes corresponde a nascimentos na década de 1930; os níveis de positividade variaram nos municípios que a compõe segundo o desenvolvimento de capital. Após 1984, com a adoção de novos critérios para o uso da sorologia no Programa de Controle, o encontro de sororreagente não tem sido associado estatisticamente a moradores notificantes de domicílios com presença de triatomíneos.

Between the years 1976 and 1980, the American trypanosomiasis was searched for among residents in two geographic microregions of the State of São Paulo: Campos de Itapetininga, in the region of Sorocaba, and Encosta Ocidental da Mantiqueira Paulista, in the region of Campinas. Both areas have in the past been colonized by Triatoma infestans. Campos de Itapetininga remained, until the beginning of the 1970s as a stronghold of this species in the State of São Paulo. Panstrongylus megistus has currently colonized in these areas, now classified as having serological titer profiles characteristic of low endemicity. Transmission of Chagas disease was interrupted earlier in the Encosta Ocidental. Intense exposure to the vector in Campos de Itapetininga can explain the seroreactivity frequencies observed in people born before 1956, aged more than 20 years. Among the residents in this region born between 1972 and 1977, a low positivity rate remains, which might also include cases of congenital transmission. The mean age of seroreagents resident in the Encosta indicates that they must have been born in the 1930s; positivity levels here vary in different municipalities according to their growth in capital goods. After 1984 new criteria were adopted for the use of serology in the Program for the Control of Chagas disease, the detection of seroreagents has not been statistically associated to notification of the occurrence of domestic triatomines in these regions.

Programa de Controle da Doença de Chagas no Estado de São Paulo: aspectos sorológicos e entomológicos de inquéritos entre escolares de ensino fundamental / Chagas disease Control Program in the State of São Paulo, Brazil: serological and entomological aspects of primary school-children surveys

Como parte de avaliação de medidas de controle de vetores, levadas a efeito no Estado de São Paulo, na década de 60, inquéritos sorológicos entre crianças escolares nascidas após sua aplicação foram realizados nos períodos abrangidos entre os anos 1968 e 1970, em todos os municípios do estado, à exceção dos da Grande São Paulo e, anualmente, de 1973 a 1983, em amostra selecionada a partir daqueles com as maiores soroprevalências para a infecção chagásica. No primeiro caso, a metodologia sorológica previu os exames à base da reação de fixação de complemento, em soros e, no segundo, a reação de imunofluorescência indireta, em eluatos de sangue total absorvido em papel-filtro. Presença de triatomíneos e sua condição de infecção por Trypanosoma cruzi, coligidas nos diversos municípios de acordo com o ano dos nascimentos dos escolares e da realização dos inquéritos, permitiram vislumbrar o quadro da infecção chagásica no Estado de São Paulo, naquelas épocas. A região de Sorocaba destacou-se das demais em termos sorológicos, sustentada pela presença do Triatoma infestans até o início da década de 70. Similarmente, a autoctonia dos casos foi aí observada de maneira preponderante, enquanto que em outras regiões do estado manteve-se um equilíbrio entre casos autóctones e importados. A análise dos dados revela que, ainda em 1974, a transmissão vetorial poderia registrar-se no estado. É importante destacar que, mesmo com falhas de cobertura, até o ano de 1997, não se observou mais sororreatividade para infecção chagásica nas idades inferiores a 15 anos, no Programa de Controle do Estado de São Paulo.

Two serological surveys were carried out to evaluate the effectiveness of measures put into effect in the State of São Paulo (Brazil) to control Chagas disease vectors. The first one, during the period from 1968 to 1970; the complement fixation reaction was performed on serum samples from school-children resident in all municipalities of the State of São Paulo, with the exception of the Greater São Paulo. The second one, annually, from 1973 to 1983, involving school-children resident in municipalities with high trypanosomiasis prevalence values; the indirect immuno-fluorescence test was performed on filter paper total blood eluates. Data on the occurrence of triatomines and their infection with Trypanosoma cruzi in each municipality formed the basis of insight into the epidemiological situation associated with the school-children's dates of birth. Most positive serological results, as well as the highest proportion of autochthonous cases associated with Triatoma infestans were observed in the region of Sorocaba until the early 1970s, while the proportions of both autochthonous and imported cases were kept in equilibrium elsewhere. It has been inferred that as recently as 1974, vectorial transmission of Chagas disease could still be observed in the State of São Paulo. We emphasize that, even rather lacking in coverage, no seropositive cases have been observed in people inhabiting the regions included in the Control Program for the State of São Paulo and now aged less than 15 years.

Validação interlaboratorial do teste de polarização fluorescente para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina / Interlaboratorial validation of the fluorescence polarization assay for the serodiagnosis of bovine brucellosis

Esta investigação teve por objetivo validar o teste de polarização fluorescente (TPF) para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina, determinando a sensibilidade (SE) e a especificidade relativas (SP) e verificando a reprodutibilidade do teste em quatro laboratórios no Brasil. Foram selecionadas 1.389 amostras de soro sanguíneo, as quais foram inicialmente submetidas aos testes do antígeno acidificado tamponado (AAT) e mercaptoetanol (2-ME). As mesmas amostras foram submetidas à reação de fixação de complemento (RFC) e ao TPF. Para a avaliação do TPF, foi adotada a combinação dos resultados do AAT, da RFC e do 2-ME, utilizados como população de referência (padrão-ouro). Para a determinação do ponto de corte do TPF que proporciona a melhor combinação de sensibilidade e especificidade, foi usada a análise TG-ROC. A concordância entre os resultados dos quatro laboratórios foi determinada com base no indicador kappa e no coeficiente de correlação de Pearson. Os pontos de corte do TPF situaram-se entre 85,2 e 93,6 mP, conforme o laboratório. A sensibilidade variou de 91,7 a 97,3 por cento, e a especificidade situou-se na faixa de 82,6 a 98,3 por cento. Na comparação entre os resultados do TPF dos quatro laboratórios, o indicador kappa ficou entre 0,69 e 0,95, o que indica, na maioria das situações, reprodutibilidade excelente, e o coeficiente de correlação variou entre 0,76 e 0,99. Os resultados indicaram que o TPF apresentou bom desempenho, na maioria das situações, com sensibilidade e especificidade elevadas. Em comparação com os testes convencionais, o TPF apresenta as vantagens de ser de execução mais rápida e mais fácil e não estar sujeito à ocorrência de prozona, como a RFC e o 2-ME, nem de atividade anticomplementar, como a RFC.

The purpose of this research was the interlaboratorial validation of the polarization fluorescence assay (PFA) for the serodiagnosis of bovine brucellosis, verifying the relative sensitivity, the relative specificity and the reproducibility of the test in four Brazilian laboratories. Serum samples from 1,389 bovines were selected and submitted to the rose Bengal (RBT) and 2-mercaptoethanol tests in one of the laboratories. The same samples were tested by the complement fixation (CFT) test and by the PFA in the four laboratories participating of the research. The reference population (golden standard) used to evaluate the PFA was the combination of the results of RBT, CFT and 2-ME. TG-ROC analysis was used to obtain the cut-off that provided the best combination of sensitivity and specificity. The agreement between laboratories was obtained by the kappa statistic and Pearson correlation coefficient (r). The PFA cut-off values were from 85.2 to 93.6. The sensitivity of the PFA assay varied from 91.7 percent to 97.3 percent, and the specificity values varied from 82.6 percent to 98.3 percent. When comparing PFA results from the four laboratories, the kappa values was between 0.69 and 0.95, which indicates, in most situations, excellent reproducibility, and the correlation coefficient varied from 0.76 to 0.99. The results showed that the PFA had a good performance, with high sensitivity and specificity. Compared to the conventional tests, the PFA has the advantages of being easy and quick to perform, and it is not prone to the occurrence of prozone, as the CFT or the 2-ME, nor to the occurrence of anti-complementary effect, as the CFT.

Avaliação de testes sorológicos de triagem para diagnóstico da brucelose bubalina / Evaluation of screening serological tests for brucellosis diagnosis in buffaloes

The study compared the performance of three screening serological tests: buffered plate antigen (BPA), Rose-Bengal produced with 1119-3 Brucella abortus strain (RB1119-3), and Rose-Bengal produced with 99 Brucella abortus strain (RB99). Sera from 696 adult female animals were submitted to BPA, RB1119-3, RB99, 2-mercaptoethanol test (ME), and complement fixation test (FC). The gold standard was the combination of CF and ME. The Kappa values for BPA, RB99, and RB1119-3 were 0.82, 0.74, and 0.70, respectively. The relative sensitivity and specificity for the same tests were 0.98 and 0.96, 0.92 and 0.94, and 0.95 and 0.92, respectively. These results indicate that BPA is a better screening test than RB for buffalo, regardless of the B. abortus strain in RB.

Estudo comparativo entre os testes adotados pelo PNCEBT para o diagnóstico sorológico da brucelose em bovinos / Comparative study of serological tests for bovine brucellosis diagnosis adopted by the Brazilian Program for animal brucellosis and tuberculosis control and eradication

Avaliaram-se comparativamente as provas do antígeno acidificado tamponado (AAT), a combinação das provas de soroaglutinação lenta e 2-mercaptoetanol (2-ME) e a reação de fixação de complemento (RFC), provas preconizadas pelo Programa Nacional de Controle e Erradicação de Brucelose Tuberculose (PNCEBT). Para tanto, foram alisadas 1.061 amostras de soros bovinos. Os dados foram analisados pelo indicador kappa, adotando-se como ponto de corte o título 25 no 2-ME e 4 na RFC. Constatou-se sensibilidade relativa de 99,6%, 98,8% e 91,1%, respectivamente, para o AAT, a 2-ME e a RFC, e especificidade relativa de 83,9%, 96,2% e 100,0%. A comparação entre os testes adotados pelo programa apontou concordância boa entre o teste de triagem (AAT) e os testes confirmatórios (kappa: 2-ME = 0,80; e RFC = 0,73) e concordância ótima quando os testes confirmatórios foram comparados entre si (kappa = 0,86). No entanto foram encontrados soros com título elevado em um dos testes confirmatórios e resultado negativo no outro, o que reforça a ideia de que o diagnóstico sorológico da brucelose é mais confiável quando obtido por meio dos resultados de vários testes.

Serum samples from 1,061 bovine were analyzed by serological diagnostic techniques adopted by the Brazilian Program for Animal Brucellosis and Tuberculosis Control and Eradication in order to compare, as a screening test, the rose Bengal plate test (RBPT), and as confirmatory tests, the 2-mercaptoethanol plus standard tube agglutination test (2-ME), and the complement fixation test (CFT). Relative sensitivity of 99.6%, 98.8% and 91.1% were observed, respectively, for RBPT, 2-ME and CFT, and relative specificity of 83.9%, 96.2% and 100.0%. The agreement between tests was analyzed by the kappa statistic (2-ME cut-off = titer 25, and CFT cutoff = titer 4). RBPT showed a substantial agreement (kappa: 2-ME = 0.80; and RFC = 0.73) with the confirmatory tests, and excellent agreement between the confirmatory tests (kappa = 0.86) was observed. However sera with a negative result in one of the confirmatory tests and a high titer in the other were observed, reinforcing that the serological diagnosis of bovine brucellosis is more reliable when based on the results of several tests.

Estudo comparativo de três métodos de diagnóstico para detecção de anticorpos anti-Theileria equi em eqüinos de áreas endêmicas do estado do Rio de Janeiro / Comparative studies of three methods for detection Theileria equi antibody in endemic areas horses from Rio de Janeiro state

Este trabalho teve o objetivo de avaliar a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), ensaio imunoenzimático (ELISA) e a reação de fixação do complemento (RFC) no diagnóstico de Theileria equi em amostras de soro de 79 equinos na Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro(UFRRJ), Seropédica, RJ, Brasil. Houve reação positiva para Theileria equi em 74,7, 75,9 e 60,8% das amostras testadas pela RIFI, ELISA eRFC, respectivamente. Observou-se discrepância em 16,45% (n=13) das amostras de soro testadas pelo ELISA indireto e RIFI. Quando comparado a RIFI e a RFC, a discrepância observada entre os soros testados foi de 36,70% (n=29). O teste ELISA indireto e a RFC apresentaram discordância em 37,97% (n=30) das amostras de soros. Os resultados do presente estudo sugerem que a melhor alternativa para o diagnóstico sorológico de T. equi em eqüinos portadores é aassociação dos testes de RIFI e ELISA indireto, especialmente para a realização de estudos soroepidemiológicos

This study was carried out to evaluate indirect fluorescent antibody test (IFAT), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and complement fixation test (CFT) of Theileria equi diagnosis in sera samples of 79 horses at Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro(UFRRJ), Seropédica, RJ, Brazil were tested. Positive reaction was obtained in 74.7, 75.9 and 60.8% of samples tested by IFAT, indirect ELISA and CFT, respectively. Discrepancy was observed in 16.45%(n=13) of serum samples tested by ELISA and IFAT. While IFAT and CFT were compared, the discrepancy observed among the samples tested were 36.71% (n=29). Indirect ELISA and CFT test presented disagreement in 37.97% (n=30) of serum samples tested. Results of present study suggests that the best alternative for serological diagnosis T. equi in carriers horses is the combined use of IFAT and indirect ELISA test, especially for accomplishment of seroepidemiological studies.

Avaliação rotineira de prova de execução rápida (ELISA - ImmunoComb II Chagas Ab) para diagnóstico sorológico da doença de Chagas / An evaluation of a quick test for the serological diagnosis of Chagas disease (ELISA - ImmunoComb II Chagas Ab) in routine work

Objetivo. Avaliar, em atividade rotineira, o desempenho de prova rápida (ELISA - ImmunoComb II Chagas Ab - EIC) para o diagnóstico sorológico da doença de Chagas. Métodos. Foi realizada comparação com outros testes habitualmente utilizados: hemaglutinação indireta - HI; imunofluorescência indireta - IFI; ELISA. Quatro grupos de soros compuseram a casuística: de pessoas com com doença de Chagas confirmada sorológica e parasitologicamente; de pessoas sem doença de Chagas, conforme verificação sorológica; correspondentes a resultados tidos como indeterminados quando efetuadas HI, IFI e ELISA; de pessoas com leishmaniose visceral, para apreciação de especificidade. Resultados. Os indicados por EIC mostraram-se totalmente iguais, em termos de positividade ou negatividade, aos obtidos por HI, IFI e ELISA quanto aos soros dos dois grupos primeiro citados. Em relação a indeterminados e a pacientes com leishmaniose visceral, com o EIC sucederam menos duvidosos ou falsos-positivos, mas algumas inadequações ainda persistiram, mantendo obstáculos à obtenção de diagnóstico plenamente aceitável. Conclusões: A prova EIC propiciou resultados absolutamente idênticos aos derivados de HI, IFI e ELISA quando analisados soros de pessoas com doença de Chagas ou não, de acordo com apreciações sorológicas ou confirmatórias da presença de infecção pelo Trypanosoma cruzi. Contudo, considerando os indeterminados e os de pacientes com leishmaniose visceral, o EIC não eliminou inadequações, apesar de tê-las comprovado com menores prevalências.

Avaliação de um teste imunoenzimático competitivo no diagnóstico sorológico da brucelose em búfalos (Bubalus bubalis)

The competitive enzyme immunoassay (CEIA) for the serological diagnosis of brucellosis in buffaloes (Bubalus bubalis) was evaluated by comparing its results with those obtained by the complement fixation test (CFT) and rose Bengal test (RBT). Four hundred and seventy-seven sera were tested by CEIA and RBT, and 465 of these were tested by CFT. Sera with a titre equal to or higher than 1/4 in CFT and CEIA were considered as positive. To determine the relative sensitivity and specificity of CEIA, animals with a positive result to RBT and to CFT were considered as diseased, and animals with a negative result to both of those tests were considered as non diseased. Sera with disagreeing results for both of these tests were excluded from the analysis. The results showed an agreement of 97.42% between CEIA and CFT and an agreement of 95.39% between CEIA and RBT. The relative sensitivity of CEIA was 100% and its relative specificity 98.55%. These data show that the performance of CEIA little differed from the one of the other two tests, suggesting that CEIA may be an useful tool for the serological diagnosis of brucellosis in buffaloes.

O trabalho teve por objetivo avaliar o teste imunoenzimático competitivo (CEIA) para uso no diagnóstico sorológico da brucelose em búfalos (Bubalus bubalis), comparando seus resultados com aqueles obtidos na reação de fixação de complemento (CFT) e no teste rosa Bengala (RBT). Foram examinados 477 soros por meio do CEIA e do RBT e 465, desses mesmos soros, por meio da CFT. Na CFT e no CEIA, soros com títulos maiores ou iguais a 1/4 foram considerados positivos. Para a determinação da sensibibilidade e da especificidade relativas do CEIA, foram considerados como doentes os animais com resultados positivos no RBT e na CFT e sãos os animais com resultados negativos nesses dois testes. Soros com resultados discordantes nesses duas provas foram eliminados da análise. Os resultados apontaram uma concordância de 97,42% entre o CEIA e a CFT e uma concordância de 95,39% entre o CEIA e o RBT. A sensibilidade relativa do CEIA foi de 100% e a especificidade relativa do teste foi de 98,55%. Esses dados mostram que o desempenho do CEIA diferiu pouco do desempenho dos outros dois testes, sugerindo que o mesmo pode constituir um recurso útil para o diagnóstico sorológico da brucelose em búfalos.

Pneumonia infantil por Chlamydia trachomatis: diagnóstico sorológico específico / Childhood Chlamydia trachomatis pneumonia: specific serological diagnosis

No período de março de 1985 a março de 1988, soros de 125 crianças com quadro clínico de infecção pulmonar foram submetidas a exame sorológico para pesquisa de anticorpos para Chlamydia trachomatis pela reação de imunofluorescência indireta; 18 soros (14,4%) foram positivos com título de anticorpos IgM>1:32. Se considerarmos apenas aquelas crianças com pneumonia intersticial, i.e. 80 crianças, 17 (21,3%) foram positivas. Somente uma (2,5%) das 45 crianças sem quadro de pneumonia apresentou título de anticorpos IgM>1:32. Analisou-se a sensibilidade e especificidade da reação de imunofluorescência indireta para pesquisa de anticorpos anticlamídia em casos de pneumonia (AU).