Evaluation of antibacterial activity of vitamin C against human bacterial pathogens / Avaliação da atividade antibacteriana da vitamina C contra patógenos bacterianos humanos

Now a day’s multidrug resistance phenomenon has become the main cause for concern and there has been an inadequate achievement in the development of novel antibiotics to treat the bacterial infections. Therefore, there is an unmet need to search for novel adjuvant. Vitamin C is one such promising adjuvant. The present study was aimed to elucidate the antibacterial effect of vitamin C at various temperatures (4°C, 37°C and 50°C) and pH (3, 8, and 11), against Gram-positive and Gram-negative bacteria at various concentrations (5-20 mg/ml) through agar well diffusion method. Growth inhibition of all bacterial strains by vitamin C was concentration-dependent. Vitamin C significantly inhibited the growth of Gram-positive bacteria: Bacillus licheniformis (25.3 ± 0.9 mm), Staphylococcus aureus (22.0 ± 0.6 mm), Bacillus subtilis (19.3 ± 0.3 mm) and Gram-negative bacteria: Proteus mirabilis (27.67 ± 0.882 mm), Klebsiella pneumoniae (21.33±0.9 mm), Pseudomonas aeruginosa (18.0 ± 1.5 mm) and Escherichia coli (18.3 ± 0.3 mm). The stability of vitamin C was observed at various pH values and various temperatures. Vitamin C showed significant antibacterial activity at acidic pH against all bacterial strains. Vitamin C remained the stable at different temperatures. It was concluded that vitamin C is an effective and safe antibacterial agent that can be used in the future as an adjunct treatment option to combat infections in humans.

Agora, a resistência antimicrobiana de um dia em patógenos aos antibióticos tornou-se a principal causa de preocupação e houve uma realização inadequada no desenvolvimento de novos antibióticos para tratar infecções bacterianas. Portanto, há uma necessidade de pesquisar um novo adjuvante, e a vitamina C é um desses adjuvantes promissores. O objetivo do presente estudo foi elucidar o efeito antibacteriano da vitamina C em diferentes temperaturas (4 °C, 37 °C e 50 °C) e pH (3, 8 e 11), contra Gram-positivos e Gram-cepas bacterianas negativas em várias concentrações (5-20 mg / ml) através do método de difusão em ágar bem. A inibição do crescimento de todas as cepas bacterianas pela vitamina C era dependente da concentração. A vitamina C inibiu significativamente o crescimento de bactérias Gram-positivas: Bacillus licheniformis (25,3 ± 0,9 mm), Staphylococcus aureus (22,0 ± 0,6 mm), Bacillus subtilis (19,3 ± 0,3 mm) e bactérias Gram- negativas: Proteus mirabilis (27,7 ± 0,9 mm), Klebsiella pneumoniae (21,3 ± 0,9 mm), Pseudomonas aeruginosa (18,0 ± 1,5 mm) e Escherichia coli (18,3 ± 0,3 mm). A estabilidade da vitamina C foi observada em vários valores de pH e várias temperaturas. A vitamina C mostrou atividade antibacteriana significativa em pH ácido contra todas as cepas bacterianas. A estabilidade da vitamina C permaneceu nas mesmas diferentes temperaturas (4 °C, 37 °C e 50 °C). Concluímos que a vitamina C é um agente antibacteriano eficaz e seguro que pode ser usado no futuro como uma opção de tratamento auxiliar para combater infecções em humanos, pois pode apoiar o sistema imunológico diretamente.

Evaluation of antibacterial activity of vitamin C against human bacterial pathogens

Abstract Now a days multidrug resistance phenomenon has become the main cause for concern and there has been an inadequate achievement in the development of novel antibiotics to treat the bacterial infections. Therefore, there is an unmet need to search for novel adjuvant. Vitamin C is one such promising adjuvant. The present study was aimed to elucidate the antibacterial effect of vitamin C at various temperatures (4°C, 37°C and 50°C) and pH (3, 8, and 11), against Gram-positive and Gram-negative bacteria at various concentrations (5-20 mg/ml) through agar well diffusion method. Growth inhibition of all bacterial strains by vitamin C was concentration-dependent. Vitamin C significantly inhibited the growth of Gram-positive bacteria: Bacillus licheniformis (25.3 ± 0.9 mm), Staphylococcus aureus (22.0 ± 0.6 mm), Bacillus subtilis (19.3 ± 0.3 mm) and Gram-negative bacteria: Proteus mirabilis (27.67 ± 0.882 mm), Klebsiella pneumoniae (21.33±0.9 mm), Pseudomonas aeruginosa (18.0 ± 1.5 mm) and Escherichia coli (18.3 ± 0.3 mm). The stability of vitamin C was observed at various pH values and various temperatures. Vitamin C showed significant antibacterial activity at acidic pH against all bacterial strains. Vitamin C remained the stable at different temperatures. It was concluded that vitamin C is an effective and safe antibacterial agent that can be used in the future as an adjunct treatment option to combat infections in humans.

Resumo Agora, a resistência antimicrobiana de um dia em patógenos aos antibióticos tornou-se a principal causa de preocupação e houve uma realização inadequada no desenvolvimento de novos antibióticos para tratar infecções bacterianas. Portanto, há uma necessidade de pesquisar um novo adjuvante, e a vitamina C é um desses adjuvantes promissores. O objetivo do presente estudo foi elucidar o efeito antibacteriano da vitamina C em diferentes temperaturas (4 °C, 37 °C e 50 °C) e pH (3, 8 e 11), contra Gram-positivos e Gram-cepas bacterianas negativas em várias concentrações (5-20 mg / ml) através do método de difusão em ágar bem. A inibição do crescimento de todas as cepas bacterianas pela vitamina C era dependente da concentração. A vitamina C inibiu significativamente o crescimento de bactérias Gram-positivas: Bacillus licheniformis (25,3 ± 0,9 mm), Staphylococcus aureus (22,0 ± 0,6 mm), Bacillus subtilis (19,3 ± 0,3 mm) e bactérias Gram- negativas: Proteus mirabilis (27,7 ± 0,9 mm), Klebsiella pneumoniae (21,3 ± 0,9 mm), Pseudomonas aeruginosa (18,0 ± 1,5 mm) e Escherichia coli (18,3 ± 0,3 mm). A estabilidade da vitamina C foi observada em vários valores de pH e várias temperaturas. A vitamina C mostrou atividade antibacteriana significativa em pH ácido contra todas as cepas bacterianas. A estabilidade da vitamina C permaneceu nas mesmas diferentes temperaturas (4 °C, 37 °C e 50 °C). Concluímos que a vitamina C é um agente antibacteriano eficaz e seguro que pode ser usado no futuro como uma opção de tratamento auxiliar para combater infecções em humanos, pois pode apoiar o sistema imunológico diretamente.

Desenvolvimento de métodos microbiológicos rápidos (MMRs) para avaliação da potência de agentes antimicrobianos e suas incertezas de medição / Development of rapid microbiological methods (RMMs) for evaluation of potency of antimicrobial agents and their measurement uncertainties

O método de difusão em ágar tem sido utilizado na avaliação da atividade antimicrobiana desde a descoberta da penicilina. Apesar disso, pouco avanço ocorreu no sentido de reduzir o tempo necessário para a determinação dos halos de inibição de crescimento. O objetivo deste projeto foi desenvolver, otimizar e validar métodos microbiológicos rápidos (MMRs) para a avaliação da potência de agentes antimicrobianos, além de identificar, quantificar e avaliar as principais fontes de incerteza associadas à determinação da potência. O projeto foi dividido em quatro etapas: 1) influência da composição do meio de cultura na formação dos halos de inibição; 2) estudo da incerteza de medição associada à determinação da potência de agentes antimicrobianos; 3) desenvolvimento, otimização e validação de métodos microbiológicos rápidos (MMRs) para determinação da potência de agentes antimicrobianos e 4) determinação dos parâmetros envolvidos na formação dos halos de inibição de crescimento e estudo dos mecanismos de difusão e crescimento microbiano. Os resultados deste projeto possibilitaram a redução do tempo necessário para a determinação do tamanho dos halos de inibição. Adicionalmente, contribuiu com a elucidação dos mecanismos de difusão e crescimento microbiano, possibilitando identificar e quantificar as principais fontes de incerteza de medição associadas à formação dos halos de inibição

Agar diffusion method has been used in the evaluation of antimicrobial activity since the discovery of penicillin. Nevertheless, little progress has occurred in order to reduce the time required for the determination of growth inhibition zones. The goal of this project was to develop, optimize and validate rapid microbiological methods (RMMs) for evaluation of potency of antimicrobials, as well as to identify, quantify and assess the main sources of uncertainty associated with potency. The project was divided into four steps: 1) influence of culture medium composition on inhibition zones; 2) study of measurement uncertainty associated with antimicrobials potencies; 3) development, optimization and validation of rapid microbiological methods (RMMs) for the determination of antimicrobials potencies and 4) determination of the parameters involved in the formation of inhibition zones and study of mechanisms of diffusion and microbial growth. The results of this project allowed the reduction of the time required for the determination of inhibition zone sizes. Additionally, it contributed to the elucidation of the mechanisms of diffusion and microbial growth, making it possible to identify and quantify the main sources of measurement uncertainty associated with formation of inhibition zone sizes

Comparação de métodos para avaliação da atividade antimicrobiana e determinação da concentração inibitória mínima (cim) de extratos vegetais aquosos e etanólicos / Comparison of methods for evaluation of antimicrobial activity and determination of minimum inhibitory concentration (mic) of aqueous and ethanol plant extracts

Vários estudos estão sendo conduzidos para a descoberta de novos agentes antimicrobianos provenientes de plantas, para que possam ser utilizados em produtos farmacêuticos, cosméticos e na indústria alimentícia. A ausência de padronização de métodos utilizados para a avaliação de extratos vegetais com potencial antimicrobiano dificulta a comparação de resultados. Considerando a necessidade de estabelecer um método com resultados consistentes para avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos vegetais, este trabalho propôs-se a avaliar a atividade antimicrobiana e determinar a concentração mínima inibitória de extratos de plantas da família Myrtaceae sobre diferentes micro-organismos, utilizando três métodos para avaliação de antimicrobianos. Os métodos empregados foram microdiluição em caldo e difusão em ágar por disco e poço. Foram avaliados os extratos de Psidium guajava, Myrciaria cauliflora e Syzygium cumini sobre bactérias Gram-positivas, negativas e levedura. Em geral, a inibição promovida pelos extratos no teste de difusão em ágar por poço foi maior do que os valores obtidos por disco, independentemente do extrato vegetal testado. Contudo, a atividade inibitória de todos os micro-organismos só pôde ser determinada com o método de microdiluição em caldo, que também apresentou os resultados mais reprodutíveis, e mostrou-se o mais econômico e confiável para se avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais quando comparado aos outros métodos.(AU)

Several studies have been conducted to discover new antimicrobial agents from plants to be used in pharmaceuticals, cosmetics and in the food industry. The lack of standardized methods for the evaluation of plant extracts with antimicrobial potential complicates the comparison of results. Taking into consideration the need to establish a method with consistent results to evaluate the antimicrobial activity of plant extracts, this study aimed to evaluate the antimicrobial activity of extracts of some plants from the Myrtaceae family on different micro-organisms based on a comparative assay with three methods that are commonly used for the assess antimicrobials. The methods used were broth microdilution, and agar diffusion by disc and well. The evaluated extracts were those of Psidium guajava, Myrciaria cauliflora, and Syzygium cumini for Gram-positive and negative bacteria and yeast. In general, inhibition extracts promoted by the agar diffusion test by well was higher than the values ​​obtained by disc, regardless of the plant extracts tested. However, the inhibitory activity of all micro-organisms was only possible to be determined with the microdilution broth method, which also presented the more reproducible results, and proved to be the most economic and reliable way to evaluate the antimicrobial activity of plant extracts in contrast with other methods.(AU)

Clonagem e análise da expressão de genes de proteínas de mamão papaia com atividade inibitória sobre poligalacturonases fúngicas / Cloning and expression analysis of papaya genes encoding proteins with inhibitory activity against fungal polygalacturonases

As proteínas inibidoras de poligalacturonases (PGIPs) presentes na parede celular são capazes de limitar o potencial destrutivo da poligalacturonase (PG) fúngica e, assim, constituem um tipo importante dentre os diversos sistemas de defesa do tecido vegetal frente à infecção fúngica. No mamão, o ataque fitopatogênico é o principal causador de danos pós-colheita, e sua alta susceptibilidade pode estar relacionada com a baixa eficácia ou pouca abundância dos meios de defesa anti-fitopatogênica. Uma vez que isso pode estar relacionado com as PGIPs e nada se conhece sobre o papel dessas proteínas nesse fruto, o objetivo do trabalho foi clonar os genes das PGIPs de mamoeiro e definir seu padrão de expressão em diferentes órgãos e tecidos e ao longo do amadurecimento. Para tanto, foram identificadas no genoma do mamoeiro, a partir de critérios que definem a identidade de uma PGIP, duas prováveis sequências dentre 13 candidatas iniciais. Ambas foram clonadas a partir das sequências genômicas e de cDNA, sequenciadas e sua identidade confirmada, sendo denominadas Cppgip4 e Cppgip6. As análises de expressão relativa em diversos tecidos e idades fisiológicas do mamoeiro demonstraram que os dois genes apresentaram diminuição da expressão com o desenvolvimento dos frutos, sendo que com a polpa apresentou redução dos níveis de expressão relativa de Cppgip4 em até 18 vezes dos 30 dias pós-antese (DPA) ao 9 dias pós-colheita (DPC). Na casca também houve redução significativa da expressão com o desenvolvimento. Para a expressão absoluta, nos frutos, sementes, caules, raízes e folhas, o número de cópias de ambos os transcritos decresceu com o desenvolvimento, sendo cerca de cem mil vezes mais abundante para Cppgip6 que para Cppgip4. As tentativas de expressão de proteínas recombinantes em Pichia pastoris não geraram resultado positivo, provavelmente em virtude das condições ideais de indução ainda não terem sido estabelecidas corretamente para o ensaio. A atividade de PGIPs extraídas diretamente do tecido foi medida por análise de difusão em ágar empregando pectinase de Aspergillus niger e revelou uma tendência à diminuição da porcentagem de inibição à medida que os frutos se desenvolveram, em concordância com os resultados da análise por qPCR. O conjunto de resultados sugere que a expressão varia com o estádio de desenvolvimento do fruto e é tecido-específica, possivelmente em resposta à diferente susceptibilidade dos tecidos ao ataque fitopatogênico, indicando que menores níveis de transcritos e atividade no amadurecimento, período de maior susceptibilidade, poderiam sinalizar para a regulação do processo degradativo marcando o início da senescência

Polygalacturonase inhibiting proteins (PGIPs) present in plant cell walls are able to inhibit the destructive action of fungal polygalacturonase (PG). In this way, they constitute an important type of plant defense system against fungal infections. In papaya fruit, the pathogenic attack is the main cause of post harvesting loss, and its high susceptibility may be related to the low efficiency or low abundance of anti-phytopathogenic defense. Since this fact could be related to PGIPs expression and little is known about the response of these proteins in the fruit, the aim of the present work was to clone the genes of PGIPs papaya fruit and set their expression pattern in different organs and tissues throughout fruit ripening. Thus, two probable PGIP sequences among 13 initial candidates were identified in the papaya genome by using specific criteria. Both sequences were cloned from cDNA and genomic samples, sequenced and confirmed its identity, and then being named Cppgip4 and Cppgip6. Analysis of relative expression in various tissues at different physiological stages demonstrated that both genes were down regulated during fruit development. The relative expression levels of Cppgip4 in papaya pulp was reduced by 18 times from the 30 days post-anthesis (DPA) to the 9 days post-harvest (DPH). Similarly, gene expression in papaya peel was significant down regulated during fruit development. Absolute expression analysis revealed gene expressions in the fruit pulp, seed, stem, root and leaf were also down regulated within development. Moreover, Cppgip6 gene expression was a hundred thousand times more abundant than Cppgip4. The recombinant protein expression in Pichia pastoris did not result positive, probably because of the ideal conditions of induction have not been properly established the yet. The activity of PGIPs extracted directly from the tissue was measured by the agar diffusion assay using pectinase from Aspergillus niger and showed decrease of inhibition during fruit developed in accordance with the results of the qPCR analysis. Based on the results it is possible to suggest the expression of these genes varies temporally with the developmental stage of the fruit and is tissue-specific, possibly in response to the different susceptibility of tissues to pathogenic attack. In addition, the lowest levels of PGIP expression were achieved at the fruit ripening, when the susceptibility to fungal infection is high and could signal for regulating the degradation process characterized by the onset of senescence

Development and validation of a microbiological assay for determination of chlorhexidine digluconate in aqueous solution

Chlorhexidine (CHX) is a broad-spectrum antiseptic that is used in many topical pharmaceutical formulations. Because there is no official microbiological assay reported in the literature that is used to quantify CHX, this paper reports the development and validation of a simple, sensitive, accurate and reproducible agar diffusion method for the dosage of chlorhexidine digluconate (CHX-D) in an aqueous solution. The assay is based on the inhibitory effect of CHX-D upon the strain of Staphylococcus aureus ATCC 25923, which is used as the test microorganism. The design 3x3 parallel-line model was used. The results were treated statistically by analysis of variance (ANOVA), and they were excellent in terms of linearity (r = 0.9999), presenting a significant regression between the zone diameter of growth inhibition and the logarithm of the concentration within the range of 0.5 to 4.5%. The results obtained were precise, having relative standard deviations (RSD) for intra-day and inter-day precision of 2.03% and 2.94%, respectively. The accuracy was 99.03%. The method proved to be very useful and appropriate for the microbiological dosage of CHX-D in pharmaceutical formulations; it might also be used for routine drug analysis during quality control in pharmaceutical industries.

Clorexidina (CHX) é um antisséptico com amplo espectro de ação utilizada em muitos tipos de preparações farmacêuticas para uso tópico. Uma vez que não há na literatura ensaio microbiológico oficial para quantificar a clorexidina, este trabalho objetivou o desenvolvimento e validação de um ensaio microbiológico simples, sensível, exato e reprodutível, por difusão em ágar, para doseamento de digliconato de clorexidina (CHX-D) em solução aquosa. O ensaio é baseado no efeito da inibição de Staphylococcus aureus ATCC 25923, utilizado como microorganismo teste, pela CHX-D. Utilizou-se o delineamento 3x3. Os resultados foram verificados estatisticamente pela análise de variância (ANOVA) e apresentaram excelente linearidade (r = 0,9999), demonstrando que o método segue o modelo linear com regressão significativa entre o diâmetro da zona de inibição e o lagaritmo da concentração no intervalo de 0,5 a 4,5%. Os resultados obtidos foram precisos apresentando desvio padrão relativo (DPR) para precisão intra-dia de 2,03% e DPR para precisão inter-dias de 2,94%. A exatidão foi 99,03%. O método provou ser muito útil e apropriado para doseamento microbiológico da CHX-D em formas farmacêuticas e pode ser empregado para análise desta substância no controle de qualidade em indústrias farmacêuticas.

Development of agar diffusion method for dosage of gramicidin / Desenvolvimento do método de difusão em agar para dosagem de gramicidina

Gramicidin, an antimicrobial peptide active against Gram positive bacteria, is commonly used in pharmaceutical preparations for topical use. Considering that only the turbidimetric method has been described in the literature, the present study sought to develop and validate an agar diffusion method for the dosage of gramicidin. The method was developed and validated using the Kocuria rhizophila ATCC 9341 as a test microorganism. Two designs were used: a 3x3 parallel-line model, and a 5x1 standard curve. The validation demonstrated that the method follows the linear model (r²= 0.994), presenting a significant regression between the zone diameter of growth inhibition and the logarithm of the concentration within the range of 5 to 25.3 µg/mL. The results obtained for both designs were precise, having a relative standard deviation (R.S.D.) for intra-day precision of 0.81 for the 3x3 assay and 1.90 for the 5x1 assay. For the inter-day precision, the R.S.D. was 1.35 for the 3x3 and 2.64 for the 5x1. The accuracy was verified and results confirmed to be accurate, having a tolerance interval of 95 percent, which lay within permitted limits and appropriate trueness. In addition, the method was considered selective, with limit of detection and upper and lower limits of quantification of 2.00, 5.00 and 25.3 µg/mL, respectively. No difference in precision between the designs used in the agar diffusion method was evident (p>0.05). The method proved to be appropriate for the microbiological dosage of the raw material gramicidin.

A gramicidina, um peptídeo antimicrobiano ativo contra bactérias Gram positivo, é utilizada em preparações farmacêuticas de uso tópico. Neste trabalho procurou-se desenvolver e validar outro método para o doseamento de gramicidina tendo em vista que somente o método turbidimétrico é descrito. O método de difusão em ágar foi desenvolvido e validado utilizando como microrganismo teste Kocuria rhizophila ATCC 9341. Foram utilizados dois delineamentos: retas paralelas 3x3 e curva padrão 5x1. A validação demonstrou que o método segue o modelo linear (r²= 0,994) havendo regressão significativa entre o diâmetro dos halos de inibição e o logaritmo da concentração na faixa de 5,00 a 25,3 µg/mL. Os resultados obtidos por ambos os delineamentos foram precisos apresentando desvio padrão relativo (DPR) para precisão intra-dia de 0,81 para ensaio 3x3 e de 1,90 para ensaio 5x1. Para a precisão inter-dias o DPR foi de 1,35 para 3x3 e de 2,64 para 5x1. A exatidão foi verificada e os resultados foram exatos apresentando intervalo de tolerância a 95 por cento dentro dos limites permitidos e veracidade adequada. O método foi seletivo com limites de detecção e quantificação inferior e superior iguais a 2,00, 5,00 e 25,3 µg/mL, respectivamente. Não foi observada diferença entre a precisão dos delineamentos empregados no método de difusão em ágar (p>0.05). O método se mostrou adequado para a dosagem microbiológica de gramicidina matéria-prima.

Prevalência e susceptibilidade in vitro a Itraconazol e Anfotericina B de isolados clínicos de Candida / Prevalence and in vitro susceptibility to Itraconazole and Amphotericin B of clinical Candida isolates

Foram avaliadas 58 cepas de Cândida spp. Recuperada de sangue e cateter de pacientes hospitalizados admitidos em dois hospitais terciários na cidade do Rio de Janeiro, Brasil, num período de três anos. Os isolados foram identificados empregando-se técnicas micológicas de rotina e apresentaram a seguinte distribuição: Cândida parasilosis (47,1%), C. albicans (38,0%), C. tropicalis (6,9%), C. guilliermondii (6,9%), C. iamata (3,4%) e C. globrata (1,7%). Um método de disco-difusão em Agar para estudo de susceptibilidade e antifúngicos foi analisado. Discos de papel com itraconaazol (10g) e anfotericina B (100g) foram depositados sobre o Agar Mueller-Hinton com 2% de glicose e 0,5g/mL de azul de metilene para os ensaios de susceptibilidade. AS cepas foram classificadas como susceptíveis, intermediárias e resistentes pela mensuração dos diâmetros dos halos de inibição. O percentual de susceptibilidade encontrado foi o seguinte: itraconazol, susceptíveis: 91,4% e intermediárias: 8,6%; anfotericina B, susceptíveis: 100%. Cepas resistentes não foram detectadas por este método.

Estudo comparativo da atividade antifúngica de cimentos endodônticos e do agregado de trióxido mineral (MTA) / Comparative study of the antifungal activity of endodontic sealers and mineral trioxide aggregate (MTA)

O objetivo deste estudo in vitro, foi avaliar a atividade antifúngica do ProRoot MTA (agregado de trióxido mineral) e de sete cimentos endodônticos contra as seguintes espécies: Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis e Saccharomyces cerevisiae. O teste de difusão em ágar foi o método utilizado. Placas de Petri contendo o meio triptcase-soja ágar foram inoculadas com cada espécie de fungo testada ou com saliva humana, representativa de uma cultura microbiana mista. Os resultados permitiram classificar os cimentos testados em ordem decrescente de eficácia antifúngica: Intrafil, AH Plus, Kerr Pulp Canal Sealer, Epiphany, MTA, Sealer 26, Acroseal e Roeko Seal. Nenhum material foi eficaz contra todas as espécies testadas.

Métodos para avaliação da atividade antimicrobiana e determinação da Concentração Mínima Inibitória (CMI) de plantas medicinais / Methods for evaluation of the antimicrobial activity and determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of plant extracts

Várias pesquisas vêm sendo desenvolvidas e direcionadas no descobrimento de novos agentes antimicrobianos provenientes de extratos de plantas e outros produtos naturais, para serem aplicados em produtos farmacêuticos e cosméticos. Atualmente, existem vários métodos para avaliar a atividade antibacteriana e antifúngica dos extratos vegetais. Os mais conhecidos incluem método de difusão em ágar, método de macrodiluição e microdiluição. A proposta dessa revisão é apresentar diferentes métodos comumente utilizados na pesquisa de novos agentes antimicrobianos, provenientes de extratos vegetais, e elucidar os principais fatores interferentes. Dessa maneira, contribuir como fonte de pesquisa para o desenvolvimento de futuros trabalhos relacionado ao estudo de atividade antimicrobiana de produtos naturais.

Several researches have been developed to search for new antimicrobial agents from extracts of plants and other natural products to be used in pharmaceutical and cosmetic products. Nowadays there are many methods to evaluate the antibacterial and antifungal activity of the plant extracts. The most known assays have been based on diffusion in agar; and micro and macrodilution methods. The purpose of this review is to describe the different methods commonly used for the determination of new antimicrobial agents from the plants extracts and elucidate the main interference factors. Moreover, this contributes as research source for future development of investigations related to the study of antimicrobial activity from natural products.