ABSTRACT
Los genes marcadores de la selección son ampliamente utilizados para la transformación eficiente de diferentes cultivos, sin embargo, existen muy pocas referencias sobre el desarrollo de métodos de selección temprana en campo de plantas supuestamente transformadas con marcador de selección tipo herbicidas. La presente investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto del glufosinato de amonio a partir del herbicida Finale en los fragmentos de hojas de plantas de campo cultivados in vitro, para la selección de líneas transformadas de banano cv. Grande naine (Musa spp. AAA), con una construcción que porta como marcador de selección el gen bar. A partir del método desarrollado con el empleo de fragmentos de hojas de plantas procedentes de campo, cultivados in vitro en el medio de cultivo agar al 1% más agua y 30,0 g/l-1 de glufosinato de amonio se logró diferenciar las dos líneas transformadas del control no transformado, a partir de la expresión del gen bar. Ambas líneas fueron positivas en el análisis molecular de PCR. Estos resultados permiten disponer de una herramienta útil y simple como parte de un protocolo de transformación genética para el cultivo del banano, siendo el primer informe de este resultado a nivel internacional.
Selector marker genes are widely used for the efficient transformation of different crops; however, there are very few references on the development of early selection methods in the fields of potentially transformed plants for herbicides. The objective of this research was to evaluate the effect of ammonium gluphosinate from the herbicide Finale in leaf fragments from in vitro plants grown in the fields for the selection of putative transformed lines of banana cv. Grande naine (Musa spp. AAA), with a construction that has the bar gene as the selector marker gene. Since the method developed with the use of leaf fragments from field plants culture in vitro in the agar at 1% more water and 30.0 gl-1 ammonium gluphosinate did differentiate the two transformed lines untransformed control, from the bar gene expression. Both lines were positive in the PCR molecular analysis. These results were a useful tool and form a part of a protocol of genetic transformation for banana, being the first reported result.
Subject(s)
Polymerase Chain Reaction , Reverse Transcriptase Polymerase Chain ReactionABSTRACT
Se evaluó la sensibilidad de distintos explantes (callo embriogénico, secciones foliares, embriones somáticos en estadio torpedo y células en suspensión) de Coffea arabica cv. Catimor al herbicida glufosinato de amonio (0,5; 1; 5 y 10 mg/L), con el fin de conocer la concentración óptima a utilizar de este agente selectivo en subsiguientes experimentos de transformación genética. Se determinó que, tanto en explantes foliares como en callo y en embriones somáticos, la inhibición del crecimiento se produce a partir de 1 mg/L del herbicida. Las células en suspensión presentaron una mayor resistencia al agente de selección, ya que la concentración inhibitoria del crecimiento fue de 5 mg/L.